FSK hydrochloride   中文名称: FSK盐酸盐

FSK is a latent bioreactive unnatural amino acid designed to form covalent bonds with nucleophilic amino acid residues (Lys, His, Tyr) in proximity via Sulfur(VI) Fluoride Exchange (SuFEx) chemistry. It does not target a specific protein but rather serves as a covalent bonding tool incorporated into proteins of interest. [1]

- FSK 被成功引入大肠杆菌中的多种蛋白质，包括泛素（第6位）、eGST（第65、86、97、103位）、sfGFP和纳米抗体7D12（第31位）。通过荧光、Western blot和质谱法确认了引入。展示了高引入保真度，泛素(6FSK)的完整质量实测为9590.1 Da，与理论值9589.9 Da相符。[1]
- FSK 能够在FSY无法达到的距离实现蛋白质间交联。在eGST同源二聚体中，引入到第65位（目标残基Lys93、Tyr100、Lys132、Tyr135距离Cα为9.2-13.3 Å）的FSK诱导了显著的二聚体交联，而相同位点的FSY则不能。相反，在距离较短（距His106为7.8 Å，距Lys107为6.0 Å）的第103位，FSY诱导了交联而FSK不能。[1]
- 通过突变研究证实，FSK可与Lys、His和Tyr残基反应。在sGST中，第97位的FSK与Lys44以及His44、Tyr44突变体发生交联，但不与Ala44、Ser44或Thr44突变体反应。这表明其具有与FSY相似的多靶点能力。[1]
- FSK 实现了泛素内的分子内交联。泛素(18FSK)的质谱分析显示一个主要峰（强度75%）质量减少了20 Da，对应于FSK18与Lys29之间发生交联并失去HF。串联质谱分析确认了交联肽段，显示FSK18特异性与Lys29反应。[1]
- 引入到纳米抗体7D12第31位的FSK 能够在体外与EGFR发生共价交联。SDS-PAGE和Western blot显示，与7D12(31FSK)孵育后，EGFR条带几乎完全上移，而7D12(WT)或7D12(109FSK)则不能。串联质谱确认了7D12的FSK31与EGFR的His359之间发生了交联，与晶体结构预测一致（距离12.7 Å）。[1]
- 引入到硫氧还蛋白第62位的FSK 能够与大肠杆菌裂解液中的多个潜在底物蛋白发生交联，通过Western blot可视化。随后的质谱分析鉴定出12个被FSK交联的底物蛋白，交联发生在Lys、His或Tyr残基上。[1]

- FSK 成功引入哺乳动物细胞蛋白质中。在转染了pNEU-FSKRS的HeLa-EGFP(182TAG)报告细胞中，仅当向培养基中添加1 mM FSK时，才观察到强烈的EGFP荧光。Western blot证实，仅在添加FSK的细胞中产生了全长EGFP。[1]
- FSK 实现了哺乳动物细胞中的蛋白质交联。将pNEU-FSKRS与pcDNA3.1-ecGST(86TAG)或其突变体共转染至HEK293T细胞。细胞裂解液的Western blot显示FSK介导的eGST二聚体交联，当目标残基Tyr92突变为Ala时，交联显著减少。[1]
- 引入FSK的纳米抗体7D12(31FSK)与A431癌细胞表面的天然EGFR发生共价交联。孵育后细胞裂解液的Western blot显示交联效率随时间（1-8小时）增加，而7D12(WT)则未显示交联。[1]
- FSK被用于活大肠杆菌中的遗传编码化学交联，以捕获和鉴定Trx底物蛋白。表达在第62位引入FSK的Trx的大肠杆菌细胞中，交联自发发生。交联复合物被拉下、胰蛋白酶消化并通过串联质谱分析。鉴定出12个底物蛋白，包括已知的Trx底物如AHPC、TPX、SDHA、HPTG、CH10和DNAK，交联发生在Lys、His或Tyr残基上。[1]

- 未进行传统的酶抑制实验，因为FSK不是酶抑制剂，而是一种用于共价键合的工具。研究侧重于其在折叠蛋白环境中通过SuFEx化学与亲核残基的反应性。[1]

- HeLa细胞引入实验：使用转染试剂将pNEU-FSKRS质粒转染至HeLa-EGFP(182TAG)报告细胞中。细胞在含10% FBS的DMEM培养基中培养，添加或不添加1 mM FSK。48小时后，通过共聚焦显微镜成像观察EGFP荧光。制备细胞裂解液，使用抗EGFP抗体进行Western blot分析，以GAPDH作为上样对照。[1]
- HEK293T交联实验：将pNEU-FSKRS与编码eGST(WT)、eGST(86TAG)或eGST(86TAG/92A)的pcDNA3.1质粒共转染至HEK293T细胞。细胞在含1 mM FSK的培养基中生长。48小时后，裂解细胞，使用抗His抗体对裂解液进行Western blot分析以检测eGST及其交联二聚体。GAPDH用作参考。[1]
- A431细胞表面交联实验：将A431人表皮样癌细胞与纯化的纳米抗体7D12(WT)或7D12(31FSK)在37°C下孵育1、2、4或8小时。然后洗涤细胞，裂解，并使用抗His抗体通过Western blot分析检测与EGFR交联的纳米抗体。[1]
- 大肠杆菌GECX实验：表达在第59或62位引入FSK（带C端His6标签）的Trx的大肠杆菌细胞生长，交联在活细胞中自发发生。裂解细胞，使用Ni-NTA树脂拉下交联复合物。拉下的蛋白质用胰蛋白酶消化，并通过串联质谱分析以鉴定交联肽段和底物蛋白。[1]

- No toxicity data (LD50, organ toxicity, protein binding, drug-drug interactions) were reported for FSK. However, the study notes that aryl fluorosulfate groups like that in FSK have "exceptional biocompatibility" and do not indiscriminately react with non-interacting proteins. [1]

[1]. A Genetically Encoded Fluorosulfonyloxybenzoyl-l-lysine for Expansive Covalent Bonding of Proteins via SuFEx Chemistry. J Am Chem Soc. 2021 Jul 14;143(27):10341-10351.

- FSK (fluorosulfonyloxybenzoyl-L-lysine) is a genetically encoded unnatural amino acid containing an aryl fluorosulfate group. It was designed to overcome the limitations of the previously developed FSY, which has a shorter and more rigid side chain. FSK features a longer and more flexible side chain (13.8 Å from Cα to F atom vs. 9.0 Å for FSY), allowing it to reach and react with nucleophilic residues at greater distances. [1]
- FSK is incorporated into proteins in response to the TAG codon using an engineered orthogonal tRNA/synthetase pair (FSKRS), evolved from Methanomethylophilus alvus PyIRS. Incorporation is site-specific and requires supplementation of FSK in the growth media. [1]
- The reactivity of FSK is based on SuFEx chemistry, where the aryl fluorosulfate group reacts with nucleophilic residues (Lys, His, Tyr) only when they are in close proximity, enabling proximity-dependent covalent bond formation both intra- and intermolecularly. [1]
- FSK and FSY were shown to be complementary tools. FSK is effective for longer-distance cross-linking, while FSY is better suited for shorter distances. Together, they expand the range of targetable sites on proteins, which is valuable for engineering covalent protein drugs (e.g., nanobodies) to potentially overcome mutational drug resistance. [1]
- FSK (and FSY) enable Genetically Encoded Chemical Cross-linking (GECX) in live cells, allowing capture and identification of weak/transient protein-protein interactions by cross-linking to residues other than Cys (Lys, His, Tyr). This significantly expands the scope of GECX compared to previous systems that targeted only Cys. [1]

C13H18CLFN2O6S

384.81

384.0558133

3033987-42-4

171663452

Solid powder ; White to off-white

144 Ų

4

8

9

24

499

1

C1=CC(=CC=C1C(=O)NCCCC[C@@H](C(=O)O)N)OS(=O)(=O)F.Cl

WDAPBEYTBHLADN-MERQFXBCSA-N

InChI=1S/C13H17FN2O6S.ClH/c14-23(20,21)22-10-6-4-9(5-7-10)12(17)16-8-2-1-3-11(15)13(18)19;/h4-7,11H,1-3,8,15H2,(H,16,17)(H,18,19);1H/t11-;/m0./s1

(2S)-2-amino-6-[(4-fluorosulfonyloxybenzoyl)amino]hexanoic acid;hydrochloride

FSK (hydrochloride); FSK HCl;; 3033987-42-4

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ~62.5 mg/mL (~162.42 mM; with ultrasonication)
DMSO: ~200 mg/mL (519.7 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。