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Diethyl-Lodoxamide

别名: LODOXAMIDE ETHYL; 53882-13-6; Lodoxamide Diethyl Ester; Lodoxamide ethyl [USAN]; U-42718; U-42,718; ethyl 2-[2-chloro-5-cyano-3-[(2-ethoxy-2-oxoacetyl)amino]anilino]-2-oxoacetate; TQY1B8145B;
目录号: V94107
COA 产品数据 产品说明书 SDS
二乙基洛多沙胺是一种高效的GPR35激动剂，具有抑制炎症性肠病的潜力。
Diethyl-Lodoxamide CAS号: 53882-13-6
产品类别: Others 16
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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产品描述
二乙基洛多沙胺是一种高效的GPR35激动剂，具有抑制炎症性肠病的潜力。二乙基洛多沙胺在人、小鼠和大鼠中均可激活GPR35，EC50值相近。二乙基洛多沙胺在小鼠模型中可缓解DSS诱发的炎症性肠病的临床症状，且效果优于传统药物5-ASA。二乙基洛多沙胺的药物性质经过优化，使其更符合药物设计的要求。
生物活性&实验参考方法
靶点
GPR35
体外研究 (In Vitro)
鉴于酯化的羧酸基团有效地提高了cLogP并保持了激动活性，将最佳化合物4的羧酸基团与不同的烷基酯化，得到化合物13-17（表3）。值得注意的是，与4b/Diethyl-Lodoxamide相比，用甲酯取代二羧基（13）导致所有三种直系同源物的EC50值较低，但Emax在一定程度上有所下降。为了进一步提高亲脂性，随后尝试了几种环状和较大的烷基（化合物14-17）。不幸的是，这些取代基被证明至少在三种直系同源物中的一种中不利于激动活性。在所有合成的化合物中，4b表现出最佳的性能，包括在GPR35的三个直系同源物中具有高效力和等效效力、高E max值和适当的亲脂性。因此，选择化合物4b在DSS诱导的结肠炎小鼠模型中进行体内评估，以检查其治疗IBD的潜力[1]。
体内研究 (In Vivo)
化合物4b/Diethyl-Lodoxamide在DSS诱导的结肠炎小鼠模型中的体内疗效[1]
与初治组相比，DSS治疗导致体重显著减轻、大便硬度变化和直肠出血，表明活动性结肠炎（图2）。5-ASA是一种目前上市的抗IBD药物，被用作阳性对照。与赋形剂组相比，5-ASA（200mg/kg）或化合物4b（20mg/kg）治疗减轻了患病小鼠的结肠炎症状，包括体重减轻、粪便变稀、直肠出血和总体DAI评分（体重减轻、大便硬度和直肠出血评分之和）（图2A-D）。
化合物4b治疗还显著减少了结肠缩短（图3A，B）。在第7天，赋形剂组的结肠长度为5.1±0.3cm。每天口服20mg/kg化合物4b显著改善了结肠长度（6.2±0.3cm）。结肠组织的组织病理学分析显示，化合物4b还减少了炎性细胞浸润、隐窝损失和粘膜损伤，导致组织学评分降低（图3C，D）。
结肠炎可导致促炎细胞因子或趋化因子的产生增加。化合物4b治疗显著降低了结肠组织中的促炎细胞因子，如IL-6、IL-1β和趋化因子，包括CXCL1、CXCL2和CCL2（图4A、B）。这表明化合物4b可以降低结肠组织中炎症和炎性细胞浸润的程度。
这些结果证实，GPR35激动剂化合物4b可以改善结肠炎小鼠的临床症状和结肠组织损伤，对肠道炎症具有保护作用。
细胞实验
钙动员试验[1]
将人、小鼠或大鼠的GPR35基因亚克隆到载体pcDNA3.0中，并通过DNA测序验证序列。HEK293细胞在添加了10%（v/v）胎牛血清的1x DMEM中培养，并在37°C下在5%CO2中孵育。在随后的瞬时转染中，约2×106个细胞与2μg质粒在200μL转染缓冲液中混合。用Scientz-2C电穿孔装置进行电穿孔。
将表达GPR35和Gα16的HEK293细胞以3×104个细胞/孔的密度接种在96孔板中，并培养过夜。然后将细胞与2μmol/L Fluo-4 AM在HBSS（5.4 mmol/L KCl、0.3 mmol/L Na2HPO4、0.4 mmol/L KH2PO4、4.2 mmol/L NaHCO3、1.3 mmol/L CaCl2、0.5 mmol/L MgCl2、0.6 mmol/L MgSO4、137 mmol/L NaCl、5.6 mmol/L d-葡萄糖和250μmol/L亚磺吡喃酮，pH 7.4）中在37°C下孵育45分钟。彻底洗涤后，加入50μL HBSS。在室温下孵育10分钟后，使用FlexStation III微孔板读数器将25μL激动剂分配到孔中，并在485 nm的激发波长和525 nm的发射波长下记录细胞内钙的变化。每条曲线的EC50和Emax值由Prism 5.0软件计算。
动物实验
葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导小鼠结肠炎模型[1]
小鼠DSS诱导结肠炎模型的建立方法如前所述22, 23。本研究中，小鼠饮用水中添加2.5% (w/v) DSS，连续5天，之后改为饮用不含DSS的水2天。每日记录标准参数（包括体重、腹泻和血便）来评估结肠炎的严重程度。疾病活动指数（DAI）的测定方法参照文献24。药物治疗方面，从DSS处理第1天开始，小鼠每日灌胃一次，分别给予赋形剂（CMCNa，0.5% w/v）、化合物4b/二乙基-洛度沙酰胺（20 mg/kg）或5-氨基水杨酸（5-ASA，阳性对照，200 mg/kg），连续7天。对照组小鼠给予水作为阴性对照。在第7天，取出所有处死小鼠的整个结肠，测量并记录结肠长度。每个结肠样本被分成两部分。一部分用于组织学分析，另一部分用于定量实时（qRT）-PCR检测。
药代性质 (ADME/PK)
我们还尝试评估了化合物 4b/二乙基洛度沙胺的药代动力学特征。然而，在小鼠口服 20 mg/kg 剂量的化合物 4b 后，无法从小鼠血浆样本中检测到该化合物。随后使用分离的小鼠血浆进行的体外试验发现，化合物 4b 非常不稳定，与血浆孵育后几分钟内就会消失。这些结果表明，化合物 4b 可能在被吸收入血液循环之前，先在局部肠道组织中发挥作用。[1]
参考文献

[1]. Discovery of a novel GPR35 agonist with high and equipotent species potency for oral treatment of IBD. Bioorg Med Chem. 2023 Dec 15:96:117511.
其他信息
G蛋白偶联受体35 (GPR35) 已被确定为炎症性肠病 (IBD) 治疗的潜在靶点。然而，由于缺乏对人和小鼠GPR35均具有高效且等效作用的激动剂，限制了在IBD小鼠模型中对GPR35激动剂的体内研究。本研究通过对洛度沙胺进行结构修饰，获得了一系列对人、小鼠和大鼠GPR35均具有高效且等效作用的激动剂。这些分子消除了包括洛度沙胺在内的GPR35激动剂普遍存在的对人、小鼠和大鼠同源物的物种选择性。此外，还优化了cLogP性质，使化合物更符合类药性规则，最终得到二乙基-洛度沙胺/化合物4b (cLogP = 2.41)，该化合物对人、小鼠和大鼠GPR35的EC50值分别为76.0 nM、63.7 nM和77.8 nM。口服化合物 4b（20 mg/kg）可缓解小鼠 DSS 诱导的 IBD 临床症状，其疗效略优于 5-ASA（200 mg/kg）。总之，该化合物可作为开发更有效且无物种差异的 GPR35 激动剂治疗 IBD 的新起点，值得进一步研究。[1]
自 GPR35 发现以来，人们已经鉴定并合成了多种高效激动剂结构，但这些分子均无法等效地激活人、小鼠和大鼠的 GPR35。我们对洛度沙胺的结构进行了修饰，获得了一系列体外活性高且等效的分子，可作为工具化合物。通过将洛度沙胺的氰基替换为三氟甲基，获得了最佳化合物 4。这是首个对人、小鼠和大鼠 GPR35 的 EC50 值均小于 100 nM 的分子。然而，化合物 4 的 cLogP 值为 -1.01。我们进一步用亲脂性酯基取代了该分子的二羧基，得到了具有优化亲脂性的二乙基洛多沙酰胺化合物 4b 和 13-17。这些分子的 cLogP 值提高到 2-5 的范围内，同时保持了对人和小鼠 GPR35 的高活性和等效活性。最佳化合物 4b 对人、小鼠和大鼠 GPR35 的 EC50 值分别为 76.0 nM、63.7 nM 和 77.8 nM；Emax 值在 80-105% 范围内，cLogP = 2.41。我们选择二乙基洛多沙胺/化合物4b，通过口服给药的方式，探索其在IBD小鼠体内的疗效。既往研究表明，腹腔注射100 mg/kg帕莫酸可有效缓解DSS诱导的小鼠结肠炎症状。然而，目前尚无文献报道口服GPR35激动剂对IBD小鼠的影响。我们首次报道，口服GPR35激动剂化合物4b/二乙基洛多沙胺可减轻DSS诱导的小鼠IBD的严重程度。20 mg/kg剂量的化合物4b不仅显著降低了疾病活动指数（DAI）评分，而且增加了结肠长度，减轻了组织损伤和炎症，其疗效略优于200 mg/kg的5-氨基水杨酸（5-ASA）。化合物 4b 代表了一类新型的中性酯类 GPR35 激动剂，与酸性洛度沙胺截然不同，因此为发现和开发更有效的、无种属差异的 GPR35 激动剂用于治疗 IBD 提供了一个新的起点。然而，考虑到 4b 在血浆中的不稳定性，未来仍需进行大量的结构修饰工作。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C15H14CLN3O6
分子量
367.74
CAS号
53882-13-6
PubChem CID
40915
外观&性状
Typically exists as solids at room temperature
密度
1.43g/cm3
折射率
1.571
LogP
1.361
tPSA
134.59
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
7
可旋转键数目(RBC)
8
重原子数目
25
分子复杂度/Complexity
545
定义原子立体中心数目
0
SMILES
CCOC(=O)C(=O)NC1=CC(=CC(=C1Cl)NC(=O)C(=O)OCC)C#N
别名
LODOXAMIDE ETHYL; 53882-13-6; Lodoxamide Diethyl Ester; Lodoxamide ethyl [USAN]; U-42718; U-42,718; ethyl 2-[2-chloro-5-cyano-3-[(2-ethoxy-2-oxoacetyl)amino]anilino]-2-oxoacetate; TQY1B8145B;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.7193 mL 13.5966 mL 27.1931 mL
5 mM 0.5439 mL 2.7193 mL 5.4386 mL
10 mM 0.2719 mL 1.3597 mL 2.7193 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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