| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
VHL (von Hippel-Lindau E3 ubiquitin ligase) – binding IC50 = 0.54 ± 0.06 μM (determined by fluorescence polarization assay) [1]
HaloTag7 fusion proteins (e.g., GFP-HaloTag7, HaloTag7-ERK1, HaloTag7-MEK1) – degradation DC50 for GFP-HaloTag7 = 19 ± 1 nM, maximal degradation = 90 ± 1% at 625 nM [1] Protein degrader 1 TFA targets the Von Hippel-Lindau (VHL) protein, which is the substrate-recognition component of an E3 ubiquitin ligase complex. By binding to VHL, it serves as a "handle" to recruit the ubiquitin-proteasome system to a protein of interest when incorporated into a PROTAC molecule. It is specifically designed to degrade HaloTag7 fusion proteins. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
蛋白质降解剂 1 TFA (HaloPROTAC3) 在 625 nM 浓度下作用 24 小时，可使 HEK293 细胞中稳定表达的 GFP-HaloTag7 降解 90 ± 1%，DC50 = 19 ± 1 nM。[1]
连接子长度优化结果表明，三个乙二醇单元（如 HaloPROTAC3）为最佳长度；较短的连接子 (HaloPROTAC5-7) 导致降解率低于 20%，而较长的连接子 (HaloPROTAC4,8) 虽然显示出显著的基因敲低效果，但效力较低。[1] 通过异噁唑取代降低 VHL 结合亲和力 (HaloPROTAC9) 可将降解率降低至最大降解率的 45%；丙氨酸取代 (HaloPROTAC10) 可获得相似的最大降解率，但效力略有降低 (DC50 = 36 ± 4 nM)。 [1] ent-HaloPROTAC3（含D-氨基酸的对映体，不与VHL结合）未诱导显著降解，证实了VHL依赖性。[1] 过量ent-HaloPROTAC3预处理阻断了HaloPROTAC3介导的降解，表明其与HaloTag7存在竞争性结合。[1] 蛋白酶体抑制剂环氧霉素（300 nM，4 h）预处理完全阻止了降解，证实了蛋白酶体依赖性。[1] 与过量游离VHL配体VL285共同处理显著降低了降解至约50%，进一步表明VHL参与其中。[1] HaloPROTAC3比疏水标签HyT36更有效（HyT36的DC50 = 134 ± 7 nM，最大降解率为56 ± 1%）。 [1] 动力学：GFP-HaloTag7 在处理 4 至 8 小时内降解 50%。[1] 洗脱实验：HaloPROTAC3 处理 24 小时后，洗脱 24 小时可显著恢复 GFP-HaloTag7 蛋白水平。[1] HaloPROTAC3 (500 nM，24 小时) 可使 HEK293T 细胞中的 HaloTag7-ERK1 和 HaloTag7-MEK1 几乎完全降解，而内源性 ERK 和 MEK 不受影响。[1] 荧光显微镜证实，625 nM HaloPROTAC3 处理 24 小时后 GFP 荧光强度显著降低，而 ent-HaloPROTAC3 处理则未观察到此现象。 [1] HaloPROTAC3 显示出低毒性（补充图 3），且不影响内源性 HIF（缺氧诱导因子）的稳定性，表明其具有选择性。[1] 蛋白质降解剂 1 TFA 不具有直接的酶抑制活性或受体调节作用。其体外活性体现在其与 VHL 蛋白的高亲和力结合能力上。当以 HaloPROTAC3 的形式使用时，它能以浓度依赖的方式诱导 HaloTag7 融合蛋白的降解。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
蛋白质降解剂1 TFA并非治疗剂，也不具有直接的体内生物活性。其体内活性取决于包含该配体的PROTAC分子。当以HaloPROTAC3的形式使用时，它可以诱导靶蛋白在体内降解。
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| 酶活实验 |
VHL结合亲和力采用荧光偏振法测定，方法如前所述（Buckley等，2012）。该方法测定了蛋白降解剂1 TFA（HaloPROTAC3）从VHL上置换荧光标记的HIF-1α肽的能力。IC50计算值为0.54 ± 0.06 μM。[1]
蛋白降解剂1 TFA的体外结合实验通常采用表面等离子共振（SPR）或等温滴定量热法（ITC）来测定其与VHL蛋白的亲和力。VHL蛋白被固定，不同浓度的配体溶液流过蛋白表面。KD值由结合等温线计算得出。 |
| 细胞实验 |
流式细胞术：将稳定表达 GFP-HaloTag7 的 HEK293 Flp-In 细胞用 蛋白降解剂 1 TFA (HaloPROTAC3) 处理 24 小时。用胰蛋白酶消化细胞，重悬于 DMEM 培养基中，并在 FACSCalibur 流式细胞仪的 FL1 通道上测量细胞内 EGFP 荧光强度。使用 CellQuest 软件量化平均荧光强度，并以 DMSO 对照组（设为 1）进行标准化，使用 Prism 5.0 软件确定 DC50 值。所有实验重复 3-5 次。[1]
免疫印迹：将细胞裂解于含有蛋白酶抑制剂的 RIPA 裂解缓冲液（1% Triton X-100、0.1% SDS、0.5% 脱氧胆酸钠、150 mM NaCl、25 mM Tris pH 8）中。裂解液经BCA法标准化后，每个样品取20 μg蛋白上样至10% Bis-Tris凝胶进行SDS-PAGE电泳。蛋白转移至硝酸纤维素膜，用5%脱脂奶粉/TBST封闭，并用抗ERK1（1:2000）、抗MEK-1（1:1000）或抗HA（1:5000）抗体进行孵育。[1] 洗脱实验：处理后，移除培养基，更换为不含化合物的新鲜培养基，孵育30分钟，然后再次更换培养基以去除残留化合物。[1] 体外细胞实验中，使用表达HaloTag7融合蛋白的细胞进行蛋白降解剂1 TFA的降解活性检测。将细胞培养于合适的培养基中，并用不同浓度的蛋白降解剂1 TFA处理。通过Western blot检测HaloTag7融合蛋白的降解情况。采用MTT法检测细胞活力。 |
| 动物实验 |
针对蛋白质降解剂 1 TFA 的体内动物研究，使用的是包含该配体的 PROTAC 分子，而非单独的配体。典型的实验方案包括通过静脉注射、腹腔注射或口服途径向小鼠给药 PROTAC。通过蛋白质印迹法检测组织中靶蛋白的降解情况。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
由于蛋白质降解剂 1 TFA 是一种研究工具而非治疗药物，因此其具体的药代动力学特性尚未得到充分表征。它可溶于 DMSO，通常作为 PROTAC 的一部分配制用于体内给药。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
该研究报告称，蛋白质降解剂1 TFA (HaloPROTAC3) 的毒性较低（如图3所示），但未提供定量毒性数据（例如LD50、特异性细胞毒性值）。此外，它不影响内源性缺氧诱导因子 (HIF) 的稳定性，而HIF是VHL的内源性靶点（如图4所示），表明其具有选择性。[1] 蛋白质降解剂1 TFA的全面毒理学数据在公开文献中并不常见。作为一种研究化合物，它仅供实验室使用，不得用于人体治疗。处理该化合物时应遵循标准安全预防措施。其纯度≥98%。
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| 参考文献 |
ACS Chem Biol.2015 Aug 21;10(8):1831-7.
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| 其他信息 |
蛋白质降解剂 1 TFA (HaloPROTAC3) 是一种化学遗传工具，能够高效、高选择性地条件性敲低 HaloTag7 融合蛋白。它与 Shield1 系统（用于稳定突变型 FKBP12）的功能相反。与 Shield1 不同，HaloPROTAC3 诱导的是降解而非稳定。含有与超过 20,000 个人类基因融合的 HaloTag7 的质粒已实现商业化，使得该系统适用于大规模筛选应用。HaloPROTAC3 不影响内源性 VHL 靶标（例如 HIF），进一步证实了其特异性。[1]
蛋白质降解剂 1 TFA 是 VHL 的小分子配体。它也被称为 VH032-NH2 TFA、VHL 配体 1 TFA 和 HaloPROTAC3。它能够条件性敲低 HaloTag7 融合蛋白。本产品仅供研究使用。 |
| 分子式 |
C24H31F3N4O5S
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|---|---|---|
| 分子量 |
544.586955308914
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| 精确质量 |
544.196
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| 元素分析 |
C, 52.93; H, 5.74; F, 10.47; N, 10.29; O, 14.69; S, 5.89
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| CAS号 |
1631137-51-3
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| 相关CAS号 |
1448297-52-6;1631137-51-3 (TFA);
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| PubChem CID |
133053568
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| 外观&性状 |
Solid powder
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| tPSA |
174
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
11
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
37
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| 分子复杂度/Complexity |
701
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| 定义原子立体中心数目 |
3
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| SMILES |
CC1=C(SC=N1)C2=CC=C(C=C2)CNC(=O)[C@@H]3C[C@H](CN3C(=O)[C@H](C(C)(C)C)N)O.C(=O)(C(F)(F)F)O
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| InChi Key |
SGNZARGJXDPTDJ-MSSRUXLCSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H30N4O3S.C2HF3O2/c1-13-18(30-12-25-13)15-7-5-14(6-8-15)10-24-20(28)17-9-16(27)11-26(17)21(29)19(23)22(2,3)4;3-2(4,5)1(6)7/h5-8,12,16-17,19,27H,9-11,23H2,1-4H3,(H,24,28);(H,6,7)/t16-,17+,19-;/m1./s1
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| 化学名 |
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8362 mL | 9.1812 mL | 18.3624 mL | |
| 5 mM | 0.3672 mL | 1.8362 mL | 3.6725 mL | |
| 10 mM | 0.1836 mL | 0.9181 mL | 1.8362 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Schematic depiction of a bifunctional HaloPROTAC containing chloroalkane (which binds HaloTag7 fusion proteins) and a hydroxyproline derivative which binds VHL.
Synthesis of HaloPROTACs containing Degradation Inducing Moiety A and Degradation Inducing Moiety B.ACS Chem Biol.2015 Aug 21;10(8):1831-7. |
The average fluorescence per cell compared to vehicle control was measured by flow cytometry after 24 hour treatment with the indicated compounds and concentrations.ACS Chem Biol.2015 Aug 21;10(8):1831-7. |
A) A study of linker length with Degradation Inducing Moiety B shows that three ethylene glycol units are optimal for the degradation of GFP-HaloTag7. B) Structures of HaloPROTACs that have weaker affinity for VHL. C) Reducing the affinity for VHL attenuates their ability to induce degradation of GFP-HaloTag7, although the effect is not necessarily linear.ACS Chem Biol.2015 Aug 21;10(8):1831-7. |
A) The enantiomers of HaloPROTACs (containing D-amino acid residues) which do not bind VHL do not induce degradation of GFP-HaloTag7, supporting the necessity of VHL binding for activity. B) Pre-treatment with excessent-HaloPROTAC3 (1 hour) prevents degradation of GFP-HaloTag7 by HaloPROTAC3 after 24 hours. C) Pre-treatment with epoxomicin (4 hours) prevents degradation of GFP-HaloTag7 by HaloPROTAC3 after 20 hours. D)Treatment with VL285 attenuates the ability of HaloPROTAC3 to induce the degradation of GFP-HaloTag7. E) Structure of VL285. All error bars depict SEM.ACS Chem Biol.2015 Aug 21;10(8):1831-7. |
A) Comparison of HaloPROTAC3 (quintuplicate) to Hyt36 (triplicate) shows that HaloPROTAC3 is significantly more potent and efficacious. B) HaloPROTAC3 leads to 50% degradation of GFP-HaloTag7 within 4 to 8 hours. C) Significant recovery from 24 hour treatment with HaloPROTAC3 is observed after a 24 hour washout.ACS Chem Biol.2015 Aug 21;10(8):1831-7. |
Immunoblotting confirms that nearly complete degradation of A) GFP-HaloTag7 is observed after 24 hour treatment with 500 nM HaloPROTAC3, with significant degradation at 50 nM HaloPROTAC3. HaloPROTAC3 can lead to degradation of other HaloTag7 fusion proteins such as B) HaloTag7-ERK1 and HaloTag7-MEK1. As expected, endogenous ERK and MEK are not degraded.ACS Chem Biol.2015 Aug 21;10(8):1831-7. |
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