| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The target of PSI-7409 is the hepatitis C virus (HCV) NS5B protein, an RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) that serves as the core enzyme for HCV genome replication. As a competitive analogue of the natural substrate UTP, PSI-7409 is mistakenly incorporated into the nascent RNA chain by the NS5B polymerase during RNA synthesis. Due to the steric hindrance effect of the 2′-C-methyl group in the PSI-7409 molecule, incorporation leads to chain termination, effectively blocking viral RNA elongation. This compound exhibits inhibitory activity against NS5B polymerases from HCV genotypes 1b, 2a, 3a, and 4a, demonstrating pan-genotypic coverage properties.
PSI-7409 targets the HCV NS5B RNA-dependent RNA polymerase, an enzyme essential for viral RNA replication. As a uridine nucleotide analog triphosphate, PSI-7409 acts as a competitive inhibitor of the NS5B polymerase. It is incorporated into the growing RNA chain, causing chain termination and inhibition of viral replication. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外酶活性测定表明，PSI-7409 对重组 HCV NS5B 聚合酶具有剂量依赖性抑制作用。其对基因型 1b (GT 1b_Con1)、2a (GT 2a_JFH1)、3a 和 4a NS5B 聚合酶的 IC50 值分别为 1.6 μM、2.8 μM、0.7 μM 和 2.6 μM。值得注意的是，PSI-7409 对人 DNA 聚合酶的抑制作用较弱：对 DNA 聚合酶 α 的 IC50 值为 550 μM，即使浓度高达 1 mM，对 DNA 聚合酶 β 和 γ 也无抑制活性，表明其对病毒聚合酶具有高度选择性。此外，在 500 μM PSI-7409 存在的情况下，约 85% 的 RNA 产物合成仍然存在。作为 HCV NS5B 聚合酶抑制剂，PSI-7977 对 HCV RNA 复制的抑制活性比 PSI-7976 更强，EC50 分别为 92 nM 和 1.07 μM，EC90 分别为 0.29 μM 和 2.99 μM。这与克隆 A 细胞与 PSI-7977 孵育后产生的 PSI-7409 浓度高于克隆 A 细胞与 PSI-7976 孵育后的浓度相一致。PSI-7977 是 CatA 的有效底物，可生成 PSI-352707，其效力比 PSI-7976 高 18-30 倍。然而，与 GS-7976 不同，CES1 介导的 PSI-7977 水解并不随时间进行。 NS5B聚合酶S282T突变（而非S96T突变）赋予细胞对PSI-7977的耐药性，EC90值从0.42 μM增加至7.8 μM。在为期8天的细胞毒性试验中，即使浓度高达100 μM，PSI-7977对Huh7、HepG2、BxPC3和CEM细胞也未显示出细胞毒性。PSI-7977处理HepG2细胞14天后，对线粒体DNA（mtDNA）和核糖体DNA（rDNA）的抑制IC90值分别为72.1 μM和68.6 μM。PSI-7977对基因型（GT）1a、1b和2a（JFH-1株）复制子以及含有GT 2a（J6株）、2b和3a NS5B聚合酶的嵌合复制子均表现出强效活性。 JFH-1 NS5B区域的序列分析表明，在S282T突变出现之前和之后，均会选择其他氨基酸改变，包括T179A、M289L、I293L、M434T和H479P，这些改变是赋予病毒对PSI-7977耐药性所必需的。体外实验表明，PSI-7409对HCV基因型1b、2a、3a和4a的NS5BΔ21聚合酶的酶活性具有抑制作用，IC50值分别为1.6 μM、2.8 μM、0.7 μM和2.6 μM。它对DNA聚合酶α的抑制作用较弱（IC50 = 550 μM）。1 mM PSI-7409对DNA聚合酶β和γ没有抑制作用。在A克隆细胞中，PSI-7409水平在48小时内逐渐升高至约25 μM的峰值。在原代人肝细胞中，PSI-7409的形成速度要快得多，在4小时内达到约100 μM的细胞内最大浓度，并保持该浓度48小时。
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| 体内研究 (In Vivo) |
作为一种细胞内活性代谢物，PSI-7409 的体内活性主要体现在索非布韦给药后观察到的抗病毒疗效上。在丙型肝炎病毒 (HCV) 感染患者中，口服索非布韦后，药物在肝脏中经羧酸酯酶 1 (CES1) 和组织蛋白酶 A (CatA) 等酶的逐步酶促转化生成 PSI-7409。在肝细胞内，PSI-7409 的浓度达到足以有效抑制 NS5B 聚合酶的水平，从而实现持续的病毒抑制。临床研究表明，基于索非布韦的治疗方案在各种 HCV 基因型中均能达到超过 90% 的持续病毒学应答 (SVR) 率。PSI-7409 的代谢不涉及细胞色素 P450 酶，因此降低了药物相互作用的风险。
在接受 440 mg/kg/d 和 44 mg/kg/d 剂量 PSI-7977 治疗的人源化肝脏小鼠中，平均血浆 ALT 水平低于正常上限，且与接受载体治疗的人源化肝脏小鼠的 ALT 水平无显著差异。接受任一剂量 PSI-7977 治疗的小鼠、对照组小鼠以及人源化肝脏小鼠的血浆乳酸水平均未升高。 在体内，PSI-7409 是 HCV 核苷酸前药索非布韦的药理活性 5′-三磷酸代谢物。口服索非布韦后，它在肝细胞内代谢为 PSI-7409，并在肝细胞内发挥抗病毒活性。索非布韦是一种临床批准用于治疗慢性 HCV 感染的药物，这证明了其活性代谢物 PSI-7409 的体内疗效。 |
| 酶活实验 |
1. 酶源制备：表达并纯化来自不同基因型（1b、2a、3a、4a）的重组HCV NS5B聚合酶（Δ21截短形式，去除C端21个氨基酸以提高溶解度）。2. 反应混合物配制：在含有50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、5 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.5 mg/mL BSA、0.5 U/μL RNase抑制剂、100 μM NTP（ATP、CTP、GTP）和1 μM [³H]-UTP的反应缓冲液中，加入系列稀释的PSI-7409（0.1-1000 μM）。 3. 聚合酶反应：加入 NS5B 聚合酶（终浓度 20 nM）启动反应，并在 37°C 下孵育 1 小时。4. 产物检测：加入 EDTA 终止反应，将反应混合物点样至 DE81 阴离子交换滤纸上，洗涤后使用液体闪烁计数器测量掺入的放射性。5. 数据分析：计算不同浓度下的抑制率，生成浓度-抑制曲线，并通过非线性回归拟合确定 IC50 值。PSI-7409 的 NS5B 聚合酶抑制试验包括将该化合物与重组 HCV NS5B 聚合酶、合成 RNA 模板和核苷酸底物（包括 [³H]-UTP）一起孵育。反应在聚合酶测定缓冲液中于 37°C 下进行指定时间。通过闪烁计数测量 [³H]-UTP 掺入到正在生长的 RNA 链中的量。 IC50 值由剂量反应曲线计算得出。
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| 细胞实验 |
1. 细胞培养：将HCV复制子细胞系（例如，转染Con1亚基因组复制子的Huh-7细胞）在含有10%胎牛血清和0.5 mg/mL G418的DMEM培养基中，于37°C、5% CO₂条件下培养。2. 化合物处理：将细胞接种于96孔板（约8×10³个/孔），培养24小时后，用不同浓度的索非布韦（PSI-7977，0.001-100 μM）处理48-72小时，PSI-7409是其在细胞内产生的活性代谢物。3. RNA提取：使用RNA提取试剂盒提取总RNA。4. 定量检测：使用实时定量RT-PCR检测HCV RNA拷贝数，以GAPDH作为内参基因。 5. 活性评估：计算 EC50 和 EC90 值。研究表明，用索非布韦处理 A 克隆细胞后，PSI-7409 的浓度在 48 小时内逐渐升高至约 25 μM。在原代人肝细胞中，PSI-7409 的形成速度更快，在 4 小时内达到约 100 μM 的最大细胞内浓度，并维持该浓度 48 小时。将 Huh7、HepG2、BxPC3 和 CEM 细胞暴露于不同浓度的 PSI-7409 中 8 天。在培养期结束时，向每个孔中加入 CellTiter 96 AQueous One Solution 细胞增殖检测试剂盒中的 MTS 染料，并将培养板继续孵育 2 小时。使用 Victor3 酶标仪在 490 nm 处读取吸光度，并以仅含二甲基吡咯烷酮的对照孔作为空白对照。 50%抑制值（IC50）是通过比较含有细胞和PSI-7977的孔与未处理的细胞对照孔的吸光度来确定的。
为了评估PSI-7409的细胞活性，将HCV复制子细胞（例如含有HCV亚基因组复制子的Huh-7细胞）接种于96孔板中，并用索非布韦处理，索非布韦在细胞内代谢为PSI-7409。处理48-72小时后，通过定量RT-PCR检测病毒RNA水平。计算HCV复制抑制的EC50值。细胞内PSI-7409水平可通过LC-MS/MS测定。 |
| 动物实验 |
1. 动物模型：使用人源化肝嵌合小鼠模型（例如，移植了人肝细胞的uPA/SCID小鼠或FRG小鼠），其中人肝细胞占小鼠肝脏的70%以上。2. 病毒感染：通过尾静脉注射HCV阳性患者血清建立HCV感染模型。3. 给药方案：确认病毒感染后，每日一次灌胃给予索非布韦（PSI-7977），剂量范围为44-440 mg/kg/天，持续2-4周；对照组给予溶剂对照。4. 采样和分析：定期采集血样，检测血浆HCV RNA水平和ALT水平。 5. 疗效评价：研究表明，在44 mg/kg/天和440 mg/kg/天的治疗组中，人源化肝小鼠的血浆ALT水平低于正常上限，与对照组无显著差异，且血浆乳酸水平未升高，表明该药物在此剂量范围内具有良好的安全性。
PSI-7409的体内疗效通过在动物模型和临床研究中给予其前药索非布韦进行评估。在HCV感染患者中，口服索非布韦可导致肝细胞内PSI-7409的生成，从而有效抑制HCV复制并提高治愈率。药代动力学研究测量了PSI-7409在血浆和外周血单核细胞中的生成情况。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
PSI-7409本身是一种细胞内活性代谢物，不作为直接治疗药物口服给药；其药代动力学特征取决于母体药物索非布韦的代谢。口服后，索非布韦被迅速吸收，并在肝脏中经羧酸酯酶1 (CES1) 和组织蛋白酶A (CatA) 催化水解，随后经过三个连续的磷酸化步骤（单磷酸化、二磷酸化和三磷酸化）生成PSI-7409。在原代人肝细胞中，PSI-7409的细胞内浓度在4小时内达到约100 μM，并维持该水平48小时。在A克隆细胞（一种人肝癌细胞系）中，PSI-7409的水平在48小时内逐渐升高至约25 μM。PSI-7409具有较长的细胞内半衰期，支持每日一次给药。终末代谢物经肾脏排泄。由于其代谢途径不依赖于CYP450酶系统，索非布韦/PSI-7409药物相互作用的风险较低。
PSI-7409是索非布韦的活性5'-三磷酸代谢物。其分子量为500.16，分子式为C10H16FN2O14P3。其水溶性为50 mg/mL (99.97 mM)。通常以固体粉末形式储存于-20°C，保质期长达1年。作为索非布韦的活性代谢物，其药代动力学特性已通过临床研究得到充分阐明。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
PSI-7409 的毒理学特征主要通过索非布韦的研究进行评估。体外细胞毒性试验表明，PSI-7409 对人细胞系（包括 Huh7、HepG2、BxPC3 和 CEM 细胞）的细胞毒性较低，在最高测试浓度 100 μM 下未观察到明显的细胞毒性、线粒体毒性或骨髓毒性。关于对 DNA 聚合酶的选择性，PSI-7409 对线粒体 DNA 聚合酶 γ (Pol γ) 没有抑制作用（即使在 1 mM 浓度下也没有抑制作用），这归因于其结构中缺乏天然的 3′-羟基，这也解释了此类药物在临床上观察到的线粒体毒性风险较低的原因。在临床应用中，索非布韦/PSI-7409 的耐受性通常良好，常见不良反应包括疲劳、头痛和恶心，严重不良事件发生率低。临床前研究表明，在人源化肝脏小鼠模型中，每日 44-440 mg/kg 剂量的索非布韦治疗不会引起 ALT 或乳酸水平异常升高。
索非布韦的耐受性通常良好，常见不良反应包括疲劳、头痛和恶心。作为活性代谢物，PSI-7409 是索非布韦抗病毒活性的主要来源。临床试验已对索非布韦的安全性进行了广泛评估，结果表明其在治疗慢性丙型肝炎病毒感染方面具有良好的安全性。处理该化合物时应遵循标准安全预防措施。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
PSI-7409是索非布韦（PSI-7977/GS-7977）的活性5'-三磷酸代谢物。它能抑制HCV NS5B聚合酶，对基因型1b、2a、3a和4a的IC50值分别为1.6 μM、2.8 μM、0.7 μM和2.6 μM。它对DNA聚合酶α的抑制作用较弱，且不抑制DNA聚合酶β和γ。它是临床批准药物索非布韦的药理活性代谢物。
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| 分子式 |
C10H16FN2O14P3
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|---|---|
| 分子量 |
500.16
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| 精确质量 |
499.979
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| 元素分析 |
C, 24.01; H, 3.22; F, 3.80; N, 5.60; O, 44.78; P, 18.58
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| CAS号 |
1015073-42-3
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| 相关CAS号 |
PSI-7409 tetrasodium;1621884-22-7
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| PubChem CID |
23725128
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
2.0±0.1 g/cm3
|
| 折射率 |
1.601
|
| LogP |
-4.81
|
| tPSA |
273.57
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
6
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
15
|
| 可旋转键数目(RBC) |
8
|
| 重原子数目 |
30
|
| 分子复杂度/Complexity |
891
|
| 定义原子立体中心数目 |
4
|
| SMILES |
P(=O)(O[H])(OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O[H])OC([H])([H])C1([H])C([H])([C@](C([H])([H])[H])(C([H])(N2C([H])=C([H])C(N([H])C2=O)=O)O1)F)O[H]
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| InChi Key |
NSUQNLUFOSKATN-SRAYDXMQSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C10H16FN2O14P3/c1-10(11)6(15)7(24-8(10)13-4-3-5(14)12-9(13)16)25-30(22,23-2)27-29(20,21)26-28(17,18)19/h3-4,6-8,15H,1-2H3,(H,20,21)(H,12,14,16)(H2,17,18,19)/t6-,7-,8-,10-,30?/m1/s1
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| 化学名 |
[[(2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-Dioxopyrimidin-1-yl)-4-fluoro-3-hydroxy-4-methyloxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate
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| 别名 |
PSI-7409; PSI 7409; GS-461203; UNII-T90A75S60M; T90A75S60M; PSI7409.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O : ~50 mg/mL (~99.97 mM)
DMF : < 1 mg/mL DMSO : < 1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9994 mL | 9.9968 mL | 19.9936 mL | |
| 5 mM | 0.3999 mL | 1.9994 mL | 3.9987 mL | |
| 10 mM | 0.1999 mL | 0.9997 mL | 1.9994 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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