| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The target of PSI-7409 is the hepatitis C virus (HCV) NS5B protein, an RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) that serves as the core enzyme for HCV genome replication. As a competitive analogue of the natural substrate UTP, PSI-7409 is mistakenly incorporated into the nascent RNA chain by the NS5B polymerase during RNA synthesis. Due to the steric hindrance effect of the 2′-C-methyl group in the PSI-7409 molecule, incorporation leads to chain termination, effectively blocking viral RNA elongation. This compound exhibits inhibitory activity against NS5B polymerases from HCV genotypes 1b, 2a, 3a, and 4a, demonstrating pan-genotypic coverage properties.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在体外酶学实验中，PSI-7409对重组HCV NS5B聚合酶表现出剂量依赖性的抑制作用。其对基因1b型（GT 1b_Con1）、2a型（GT 2a_JFH1）、3a型和4a型NS5B聚合酶的IC50值分别为1.6 μM、2.8 μM、0.7 μM和2.6 μM。值得注意的是，PSI-7409对人源DNA聚合酶的抑制作用较弱：对DNA聚合酶α的IC50为550 μM，对DNA聚合酶β和γ在高达1 mM浓度下仍未表现出抑制活性，显示出对病毒聚合酶的高选择性。此外，在500 μM PSI-7409存在下，RNA产物合成仍保持约85%的活性。
体外活性：作为 HCV NS5B 聚合酶抑制剂，PSI-7977 对 HCV RNA 复制表现出比 PSI-7976 更有效的抑制活性，EC50 为 92 nM vs 1.07 μM，EC90 为 0.29 μM vs 2.99 μM，与孵育克隆 A 细胞一致与 PSI-7977 孵育相比，与 PSI-7976 孵育的克隆 A 细胞相比，PSI-7409 浓度更高。 PSI-7977 是 CatA 形成 PSI-352707 的有效底物，其效力是 PSI-7976 的 18-30 倍。然而，与 GS-7976 不同的是，CES1 介导的 PSI-7977 水解并不以时间依赖性方式进行。 S282T NS5B 聚合酶突变而非 S96T 突变赋予 PSI-7977 抗性，EC90 从 0.42 μM 增加至 7.8 μM。在 8 天细胞毒性测定中进行评估时，即使浓度高达 100 μM，PSI-7977 对 Huh7、HepG2、BxPC3 和 CEM 细胞也没有显示出细胞毒性。 PSI-7977 处理 14 天显示，在 HepG2 细胞中抑制 mtDNA 和 rDNA 的 IC90 分别为 72.1 μM 和 68.6 μM。 PSI-7977 对基因型 (GT) 1a、1b 和 2a（菌株 JFH-1）复制子以及含有 GT 2a（菌株 J6）、2b 和 3a NS5B 聚合酶的嵌合复制子表现出有效的活性。 JFH-1 NS5B 区域的序列分析表明，在 S282T 出现之前和之后选择了额外的氨基酸变化，包括 T179A、M289L、I293L、M434T 和 H479P，这是赋予 PSI-7977 抗性所必需的。细胞测定：将细胞（Huh7、HepG2、BxPC3 和 CEM）暴露于不同浓度的 PSI-7977 中 8 天。在生长期结束时，将来自 CellTiter 96 AQueous One Solution 细胞增殖测定试剂盒的 MTS 染料添加到每个孔中，并将板再孵育 2 小时。使用仅培养基对照孔作为空白，用 Victor3 读板器读取 490 nm 处的吸光度。通过比较含有细胞和 PSI-7977 的孔与未处理的细胞对照孔中的吸光度来确定 50% 抑制值 (IC50)。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
PSI-7409本身作为细胞内活性代谢物，其体内活性主要体现在索磷布韦给药后的抗病毒效果。在感染HCV的患者中，口服索磷布韦后，药物在肝脏中经过羧酸酯酶（CES1）和组织蛋白酶A（CatA）等酶的作用，逐步代谢转化为PSI-7409。在肝细胞内，PSI-7409的浓度可达到足以有效抑制NS5B聚合酶的水平，从而实现持久的病毒抑制。临床研究表明，以索磷布韦为基础的治疗方案在各类HCV基因型患者中均可达到90%以上的持续病毒学应答率（SVR）。细胞色素P450酶系不参与PSI-7409的代谢，这降低了药物相互作用的风险
440 mg/kg/d 治疗组和 44 mg/kg/d 治疗组的人源化肝脏小鼠的平均血浆 ALT 水平低于正常上限，并且与媒介物治疗的人源化肝脏小鼠中测量的结果没有显着差异。在接受任一剂量的 PSI-7977 的对照小鼠或具有人源化肝脏的小鼠中，血浆乳酸水平也没有升高。 |
| 酶活实验 |
1. 酶源制备：表达并纯化重组HCV NS5B聚合酶（Δ21截短形式，去除C末端21个氨基酸以提高溶解性），来自不同基因型（1b、2a、3a、4a）。2. 反应体系配制：在含有50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、5 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.5 mg/mL BSA、0.5 U/μL RNase抑制剂、100 μM各种NTPs（ATP、CTP、GTP）和1 μM [³H]-UTP的反应缓冲液中，加入系列稀释的PSI-7409（0.1-1000 μM）。3. 聚合酶反应：加入NS5B聚合酶（终浓度20 nM）启动反应，37°C孵育1小时。4. 产物检测：加入EDTA终止反应，将反应混合物点样到DE81阴离子交换滤纸上，洗涤后用液体闪烁计数器测定掺入的放射性。5. 数据分析：计算不同浓度下的抑制率，绘制浓度-抑制曲线，通过非线性回归拟合计算IC50值。
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| 细胞实验 |
1. 细胞培养：培养HCV复制子细胞系（如Con1亚基因组复制子转染的Huh-7细胞），在含10%胎牛血清、0.5 mg/mL G418的DMEM培养基中，37°C、5% CO₂条件下培养。2. 药物处理：将细胞接种于96孔板（密度约8×10³/孔），培养24小时后，加入不同浓度索磷布韦（PSI-7977，0.001-100 μM）处理48-72小时，PSI-7409作为细胞内活性代谢物在细胞中生成。3. RNA提取：使用RNA提取试剂盒提取总RNA。4. 定量检测：采用实时定量RT-PCR检测HCV RNA拷贝数，以GAPDH作为内参基因。5. 活性评价：计算EC50和EC90值。研究显示，索磷布韦处理克隆A细胞后，PSI-7409浓度在48小时内逐渐升高至约25 μM。在原代人肝细胞中，PSI-7409形成速度更快，4小时即达到约100 μM的细胞内最大浓度并维持48小时。
将细胞（Huh7、HepG2、BxPC3 和 CEM）暴露于不同浓度的 PSI-7977 中 8 天。在生长期结束时，将来自 CellTiter 96 AQueous One Solution 细胞增殖测定试剂盒的 MTS 染料添加到每个孔中，并将板再孵育 2 小时。使用仅培养基对照孔作为空白，用 Victor3 读板器读取 490 nm 处的吸光度。通过比较含有细胞和 PSI-7977 的孔与未处理的细胞对照孔中的吸光度来确定 50% 抑制值 (IC50)。 |
| 动物实验 |
1. 动物模型：使用人源化肝脏嵌合小鼠模型（如uPA/SCID小鼠或FRG小鼠移植人肝细胞），这些小鼠的肝脏中人类肝细胞占比超过70%。2. 病毒感染：通过尾静脉注射HCV阳性患者血清建立HCV感染。3. 给药方案：确认病毒感染后，通过口服灌胃给予索磷布韦（PSI-7977），剂量范围为44-440 mg/kg/天，每日一次，持续2-4周；对照组给予等体积溶媒。4. 采样与分析：定期采集血液样本检测血浆HCV RNA水平和ALT水平。5. 疗效评估：检测表明，在44 mg/kg/天和440 mg/kg/天治疗组中，人源化肝脏小鼠的血浆ALT水平均低于正常上限，与对照组相比无显著差异，血浆乳酸水平也未升高，表明药物在该剂量范围内具有良好的安全性。
具有非人源化（对照）或人源化肝脏的 TK-NOG 小鼠 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
PSI-7409本身是细胞内活性代谢物，不直接口服给药，其药代动力学特征由母药索磷布韦的代谢决定。索磷布韦口服后快速吸收，在肝脏中经羧酸酯酶CES1和组织蛋白酶A（CatA）催化水解，随后经单磷酸化、二磷酸化和三磷酸化三步磷酸化反应生成PSI-7409。在原代人肝细胞中，PSI-7409的细胞内浓度在4小时内达到约100 μM，并能维持该水平48小时。在克隆A细胞（人肝癌细胞系）中，PSI-7409在48小时内逐渐升高至约25 μM。PSI-7409的细胞内半衰期较长，支持每日一次的给药频率。代谢终产物经肾脏排出体外。由于代谢途径不依赖CYP450酶系，索磷布韦/PSI-7409的药物相互作用风险较低。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
PSI-7409的毒理学特征主要通过对索磷布韦的研究来评估。体外细胞毒性实验显示，PSI-7409对人源细胞系（包括Huh7、HepG2、BxPC3和CEM细胞）的细胞毒性较低，在最高测试浓度100 μM下未观察到显著的细胞毒性、线粒体毒性或骨髓毒性。在对DNA聚合酶的选择性方面，PSI-7409对线粒体DNA聚合酶γ（Pol γ）无抑制作用（1 mM浓度下仍无抑制），这与其结构中不含天然3′-羟基有关，解释了该类药物临床中观察到的低线粒体毒性风险。临床应用中，索磷布韦/PSI-7409的总体耐受性良好，常见不良反应包括疲劳、头痛、恶心等，严重不良事件发生率较低。有临床前研究显示，在人源化肝脏小鼠模型中，44-440 mg/kg/天剂量的索磷布韦治疗未引起ALT或乳酸水平的异常升高。
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| 参考文献 |
| 分子式 |
C10H16FN2O14P3
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|---|---|
| 分子量 |
500.16
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| 精确质量 |
499.979
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| 元素分析 |
C, 24.01; H, 3.22; F, 3.80; N, 5.60; O, 44.78; P, 18.58
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| CAS号 |
1015073-42-3
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| 相关CAS号 |
PSI-7409 tetrasodium;1621884-22-7
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| PubChem CID |
23725128
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
2.0±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.601
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| LogP |
-4.81
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| tPSA |
273.57
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| 氢键供体(HBD)数目 |
6
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
15
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
30
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| 分子复杂度/Complexity |
891
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| 定义原子立体中心数目 |
4
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| SMILES |
P(=O)(O[H])(OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O[H])OC([H])([H])C1([H])C([H])([C@](C([H])([H])[H])(C([H])(N2C([H])=C([H])C(N([H])C2=O)=O)O1)F)O[H]
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| InChi Key |
NSUQNLUFOSKATN-SRAYDXMQSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C10H16FN2O14P3/c1-10(11)6(15)7(24-8(10)13-4-3-5(14)12-9(13)16)25-30(22,23-2)27-29(20,21)26-28(17,18)19/h3-4,6-8,15H,1-2H3,(H,20,21)(H,12,14,16)(H2,17,18,19)/t6-,7-,8-,10-,30?/m1/s1
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| 化学名 |
[[(2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-Dioxopyrimidin-1-yl)-4-fluoro-3-hydroxy-4-methyloxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate
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| 别名 |
PSI-7409; PSI 7409; GS-461203; UNII-T90A75S60M; T90A75S60M; PSI7409.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O : ~50 mg/mL (~99.97 mM)
DMF : < 1 mg/mL DMSO : < 1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9994 mL | 9.9968 mL | 19.9936 mL | |
| 5 mM | 0.3999 mL | 1.9994 mL | 3.9987 mL | |
| 10 mM | 0.1999 mL | 0.9997 mL | 1.9994 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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