Pyridoclax (MR29072)

Mcl-1
Pyridoclax exerts its biological activity by directly binding to Mcl-1, a member of the pro-survival Bcl-2 protein family that inhibits apoptosis by sequestering pro-apoptotic BH3-only proteins. Overexpression of Mcl-1 is a common mechanism by which cancer cells evade apoptosis and develop resistance to chemotherapy and targeted therapies, including inhibitors of other Bcl-2 family members like Bcl-xL. Pyridoclax binds directly to Mcl-1 with high affinity and specificity, effectively neutralizing its anti-apoptotic function. However, because cancer cells often co-express multiple pro-survival proteins, inhibiting Mcl-1 alone is not sufficient to trigger cell death. The key to Pyridoclax's efficacy lies in its ability to synergize with Bcl-xL inhibition. When Bcl-xL is simultaneously inhibited, either through genetic knockdown (siRNA) or pharmacological agents like ABT-737/ABT-263, the cell's survival network is critically compromised. This dual inhibition releases a flood of pro-apoptotic BH3-only proteins that overwhelm the remaining anti-apoptotic defenses, leading to the activation of Bax and Bak, permeabilization of the mitochondrial outer membrane, and ultimately, apoptosis. This combined effect is highly synergistic, resulting in massive apoptosis in cancer cells that are otherwise resistant to single-agent therapies. The selectivity of Pyridoclax for Mcl-1 over other Bcl-2 family members is crucial for its utility as a research tool, allowing scientists to dissect the specific contribution of Mcl-1 to cancer cell survival and to explore the therapeutic potential of combining Mcl-1 inhibition with other targeted agents.

吡啶克拉可直接与 Mcl-1 结合。当与靶向 Bcl-xL 的 siRNA 或 ABT-737 联合使用时，吡啶克拉可诱导卵巢癌、肺癌和间皮瘤细胞凋亡，但单独使用时无细胞毒活性[1]。吡啶克拉直接与 Mcl-1 结合，使卵巢癌细胞对靶向 Bcl-xL 的疗法更为敏感。当与靶向 Bcl-xL 的分子（如 ABT-737 或其口服衍生物 ABT-263）联合使用时，吡啶克拉可诱导卵巢癌、肺癌和间皮瘤细胞凋亡[2]。体外研究表明，吡啶克拉是一种强效且选择性的 Mcl-1 抑制剂，但其活性严格依赖于具体情况。作为单一药物，吡啶克拉（Pyridoclax）对包括卵巢癌、肺癌和间皮瘤在内的多种癌细胞系均无细胞毒活性。这证实了单独抑制Mcl-1不足以诱导细胞凋亡，因为癌细胞依赖于抗凋亡蛋白网络。该化合物的真正潜力体现在与靶向Bcl-xL的策略联合使用时。当吡啶克拉与靶向Bcl-xL的siRNA或小分子抑制剂（如ABT-737或其口服衍生物ABT-263）联合使用时，可观察到显著的协同效应。这种联合用药可显著诱导卵巢癌、肺癌和间皮瘤细胞凋亡。这种协同作用非常显著，即使在不使用传统化疗药物的情况下也能引发大量细胞死亡，凸显了Bcl-2家族在癌细胞存活中的关键作用。进一步的体外研究表明，吡啶克拉能特异性地增强卵巢癌细胞对Bcl-xL靶向治疗的敏感性，为其在联合治疗中的应用提供了机制上的解释。这些发现确立了吡啶克拉作为研究Mcl-1生物学以及验证Mcl-1和Bcl-xL联合靶向治疗是克服癌症细胞凋亡抵抗的有效策略这一概念的重要工具。

由于吡啶克拉（Pyridoclax）主要用作体外研究的工具，因此其体内活性数据有限。现有信息表明，吡啶克拉拟与其他药物联合用于体内疗效研究。其体内应用原理与体外相同：同时抑制Mcl-1（通过吡啶克拉）和Bcl-xL（通过相容性药物，如ABT-263），从而诱导肿瘤细胞凋亡。对于此类研究，吡啶克拉可能配制成合适的载体，例如DMSO、PEG300、Tween 80和生理盐水的混合物，用于动物模型给药。其疗效将在已知依赖于Mcl-1的癌症异种移植模型中进行评估，例如卵巢癌、肺癌和间皮瘤。研究终点包括肿瘤生长抑制、细胞凋亡诱导（通过TUNEL或cleaved caspase-3检测）和生存分析。然而，标准产品说明书中并未详细说明具体的体内实验方案和结果，例如给药方案、给药途径和药代动力学参数。该化合物的稳定性（粉末在-20°C下可保存3年，溶剂在-80°C下可保存1年）足以满足长期研究用途。总体而言，虽然吡啶克拉作为体内概念验证研究工具展现出一定的潜力，但目前仍缺乏全面的体内数据，而这些数据将由研究人员通过探索其治疗潜力来获得。

将 HeLa 细胞接种于 12 孔板中，并用 200 ng/孔的 BRET 供体质粒 pRluc-BimL 和递增浓度的 BRET 受体质粒 peYFP-Mcl-1（或 pCMV-Mcl-1 作为对照）进行转染，以进行供体饱和实验。细胞经胰蛋白酶消化后，重新接种于 96 孔白色平底板中，并在转染后 24 小时进行测量，在此之前再培养一天。药物处理实验采用单一的供体/受体比例 (200/800)。重新接种后，细胞接受 16 小时的吡啶克拉 (Pyridoclax) 处理。在加入终浓度为 5 μM 的荧光素酶底物腔肠素 H 后，使用 Mithras LB 940 荧光发光检测器连续测量 485 nm 和 530 nm 处的发光强度。计算 BRET 比值[1]。

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吡啶克拉的体外酶/受体结合试验旨在确认其与 Mcl-1 的直接结合，并测定其亲和力和选择性。生物发光共振能量转移 (BRET) 试验是研究吡啶克拉与 Mcl-1 相互作用的关键技术。在典型的BRET检测中，细胞（例如HeLa细胞）被转染两个质粒：一个质粒编码促凋亡BH3结构域蛋白Bim的Renilla荧光素酶（Rluc）融合蛋白（Rluc-BimL），作为BRET供体；另一个质粒编码Mcl-1的黄色荧光蛋白（YFP）融合蛋白（YFP-Mcl-1），作为BRET受体。当Rluc-BimL与YFP-Mcl-1结合时，供体和受体之间的距离会拉近，加入Rluc底物腔肠素H后，会发生能量转移，从而产生可测量的BRET信号。为了确定吡啶克拉的结合情况，将表达单一供体/受体比例的细胞用递增浓度的吡啶克拉处理一段时间，通常为16小时。如果吡啶克拉与 Rluc-BimL 竞争结合 Mcl-1，则 BRET 信号会以剂量依赖的方式降低。处理后，加入腔肠素 H，并使用微孔板读数仪测量 485 nm（Rluc）和 530 nm（YFP）处的发光强度。然后计算 BRET 比值（530 nm 处的发射强度/485 nm 处的发射强度）。BRET 比值的降低表明吡啶克拉正在将 Rluc-BimL 从 Mcl-1 上置换下来，证实了其直接结合。该检测方法能够灵敏且定量地测量化合物在细胞环境中与其靶标的相互作用。

体外细胞实验对于评估吡啶克拉（Pyridoclax）的生物活性及其与其他化合物的协同作用至关重要。评估吡啶克拉功能的主要方法是处理癌细胞系，例如卵巢癌、肺癌和间皮瘤细胞系。通常，将细胞接种于多孔板中，并在合适的培养基中培养。然后，分别用不同浓度的吡啶克拉、Bcl-xL靶向药物（例如ABT-737或ABT-263）或二者联合处理细胞。经过设定的孵育时间（例如48-72小时）后，评估细胞活力和凋亡情况。细胞活力通常使用MTT、XTT或CellTiter-Glo等方法进行测定，这些方法可以定量代谢活跃的细胞。细胞凋亡的检测方法包括检测磷脂酰丝氨酸外翻（Annexin V染色）、caspase-3/7激活（使用荧光底物）或DNA片段化（TUNEL检测）。这些实验的关键发现是，虽然单独使用吡啶克拉或Bcl-xL抑制剂可能效果甚微，但二者联合使用可显著增加细胞凋亡，表现出强烈的协同效应。这些检测方法还证实，联合用药可导致促凋亡的BH3结构域蛋白的释放和线粒体凋亡途径的激活。这些实验对于阐明Mcl-1和Bcl-xL抑制剂联合用药的作用机制及其治疗潜力至关重要。

Pyridoclax 的体内动物实验主要用于评估其与 Bcl-xL 抑制剂联合用于肿瘤模型的疗效。典型的实验方案包括：通过皮下注射已知对 Mcl-1 和 Bcl-xL 共抑制敏感的人类癌细胞系（例如卵巢癌、肺癌或间皮瘤细胞），在免疫缺陷小鼠（例如裸鼠或 NSG 小鼠）体内建立异种移植瘤模型。待肿瘤达到可触及的大小后，将动物随机分组。这些分组通常包括：溶剂对照组、单独使用 Pyridoclax 的组、单独使用 Bcl-xL 抑制剂（例如 ABT-263）的组以及 Pyridoclax 与 Bcl-xL 抑制剂联合用药的组。Pyridoclax 为注射剂，通常使用 DMSO、PEG300、Tween 80 和生理盐水的混合物作为溶剂。给药途径和给药方案取决于化合物的稳定性和药代动力学。通过游标卡尺测量肿瘤尺寸并计算肿瘤体积来监测肿瘤生长。同时监测体重，作为毒性指标。研究结束时，收集肿瘤组织进行细胞凋亡分析（例如，通过TUNEL或cleaved caspase-3染色）以及靶点调控验证（例如，通过Mcl-1和Bcl-xL的Western blotting检测）。关键终点是比较联合用药组与单药组或对照组的肿瘤生长抑制率和生存率。虽然具体方案未公开，但这些标准的体内疗效研究对于验证基于吡啶克拉的联合疗法的治疗潜力至关重要。

公开文献中对吡啶克拉的药代动力学 (PK) 特性描述尚不充分。然而，一些基本信息仍可推断。吡啶克拉的分子量为 426.51 g/mol，分子式为 C29H22N4。它在 DMSO 中的溶解度为 20 mg/mL (46.89 mM)。体内给药时，吡啶克拉需要配制成合适的溶剂以确保其溶解度和生物利用度。此类化合物的常用配制方法包括 10% DMSO、40% PEG300、5% Tween 80 和 45% 生理盐水的混合物。吡啶克拉的储存稳定性已明确：粉末在 -20°C 下可稳定保存长达 3 年，溶液在 -80°C 下可稳定保存 1 年。运输时，通常使用蓝冰或常温保存。然而，诸如半衰期 (t1/2)、清除率 (Cl)、分布容积 (Vd)、口服生物利用度和血浆蛋白结合率等详细参数尚未见报道。该化合物的亲脂性（预测相对密度为 1.192 g/cm³）提示其可能具有中等至较高的膜渗透性，但其吸收、分布、代谢和排泄 (ADME) 特征仍需进一步阐明。需要开展更多研究，包括在啮齿动物中静脉和口服给药后测定血浆浓度-时间曲线，以确定其完整的药代动力学特征。

标准产品说明书中并未提供吡啶克拉的详细毒性数据。然而，其生物活性谱中的一项关键观察结果为我们深入了解其潜在毒性提供了重要线索。吡啶克拉作为单一药物给药时，未显示出细胞毒活性。这表明，在体外测试的浓度下，吡啶克拉在没有Bcl-xL抑制剂的情况下，本身对细胞没有毒性。这种单药活性缺失意味着它不会引起非特异性细胞死亡或一般毒性，这对于药物而言是一项有利特性。其毒性具有情境依赖性，仅在与Bcl-xL抑制剂联合使用，且在依赖Mcl-1和Bcl-xL才能存活的细胞中才会显现。这是一种靶向毒性，即化合物通过其预期的作用机制发挥作用。在体内研究中，吡啶克拉与Bcl-xL抑制剂的联合用药预计可诱导肿瘤细胞凋亡，但也可能影响依赖这些蛋白维持生存的正常组织。由于其对Mcl-1具有选择性，因此脱靶毒性的可能性被认为较低。然而，仍需进行全面的毒理学研究，包括在动物模型中进行急性和慢性毒性研究，以充分评估其安全性和潜在副作用。

[1]. First evidence that oligopyridines, α-helix foldamers, inhibit Mcl-1 and sensitize ovarian carcinoma cells to Bcl-xL-targeting strategies. J Med Chem. 2015 Feb 26;58(4):1644-68.

[2]. Comparison of 2 strategies to enhance Pyridoclax solubility: Nanoemulsion delivery system versus salt synthesis. Eur J Pharm Sci. 2017 Jan 15;97:218-226.

Pyridoclax 是一种研究性化合物，尚未获准用于任何临床用途。它是一种专门用于研究 Mcl-1 在癌症生物学中的作用以及验证 Mcl-1 和 Bcl-xL 联合靶向治疗理念的研究工具。其作用机制揭示了一种克服癌细胞凋亡耐药性的复杂策略。Pyridoclax 通过直接结合并抑制 Mcl-1，使癌细胞对 Bcl-xL 抑制剂的作用更加敏感。Pyridoclax 与 ABT-737 或 ABT-263 等 Bcl-xL 靶向药物联合使用，可诱导对单药治疗耐药的癌细胞发生大量凋亡。这项研究为 Mcl-1 和 Bcl-xL 在癌细胞存活中不可替代的功能提供了重要的见解。该化合物有多种包装规格（例如 2 mg）可供研究使用，其高纯度（通常 >98%）和明确的储存条件确保了实验的可重复性。作为一种工具化合物，吡啶克拉（Pyridoclax）被广泛应用于学术和制药研究中，用于研究Mcl-1依赖性癌症、探索耐药机制以及筛选更有效、更具成药性的Mcl-1抑制剂。吡啶克拉的研发标志着在理解和靶向Bcl-2家族方面取得了重大进展，它将继续成为肿瘤学研究中的宝贵资源。

C29H22N4

426.51

426.184

C, 81.66; H, 5.20; N, 13.14

1651890-44-6

1651890-44-6

92042827

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

663.6±55.0 °C at 760 mmHg

288.5±24.5 °C

0.0±1.9 mmHg at 25°C

1.676

5.64

51.6

0

4

5

33

615

0

CC1=CC(C2=NC=C(C3=CC=CN=C3)C=C2/C=C/C4=CC=CC=C4)=CN=C1C5=CC=CN=C5

WGGSYXQFYRWBEC-VAWYXSNFSA-N

InChI=1S/C29H22N4/c1-21-15-27(20-32-28(21)25-10-6-14-31-18-25)29-23(12-11-22-7-3-2-4-8-22)16-26(19-33-29)24-9-5-13-30-17-24/h2-20H,1H3/b12-11+

(E)-3'-methyl-3''-styryl-3,2'

Pyridoclax; MR29072; MR 29072; MR29072

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~20 mg/mL (~46.9 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。