| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Target: Ubiquitin-proteasome system (UPS) upstream of the 20S proteasome (inhibits ubiquitin-dependent protein degradation without affecting 20S proteasome catalytic activities) [1]
HeLa cervical cancer cell viability IC50 = 2.0 μM (as determined by XTT assay) [1] RAMB4 targets the ubiquitin-proteasome system (UPS), specifically by inhibiting ubiquitin-mediated protein degradation upstream of the 20S proteasomal catalytic activities. It does not affect the catalytic activity of the 20S proteasome itself but triggers UPS stress response by blocking the degradation of ubiquitinated proteins. This leads to the accumulation of ubiquitinated proteins and the activation of stress response pathways. RAMB4 selectively reduces the viability of cervical cancer cells independently of HPV genotype via blockade of proteasomal degradation. The compound's mechanism of action makes it a valuable tool for studying the role of the UPS in cancer and for developing new anticancer therapies. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
用 RAMB4 (0-30 µM; 48 小时) 治疗导致 HPV16 阳性 SiHa 和 Caski 细胞以及 HPV-39 阳性 ME180 宫颈癌细胞系的活力呈剂量依赖性降低 [1]。 RAMB4 的 IC50 值为 2 µM，它以剂量依赖的方式降低指数增长的 HeLa 宫颈癌细胞的活力 [1]。体外实验：在 HeLa 细胞中，用 RAMB4 (PTP1B-IN-9) 处理（5 μM，6 小时）导致多聚泛素化蛋白的积累，GAPDH 标准化水平比对照组细胞高出 3 倍 [1]。浓度高达 10 μM 的 RAMB4 (PTP1B-IN-9) 未能抑制纯化的 20S 蛋白酶体的胰凝乳蛋白酶样、胰蛋白酶样或肽基谷氨酰肽水解样活性 [1]。在 HeLa 细胞中，用 RAMB4 (PTP1B-IN-9) 处理（10 μM，8 小时）导致 Hsp90 的积累（约 10 μM）。通过密度测定法测得的细胞活力增加2倍）[1]。
RAMB4 (PTP1B-IN-9) 可剂量依赖性地降低HPV16阳性SiHa和CaSki细胞以及HPV39阳性ME180宫颈癌细胞系的活力，在0.1、1、5、10和20 μM浓度下处理48小时后，对原代人角质形成细胞的影响极小[1]。 体外研究表明，RAMB4通过阻断蛋白酶体降解，选择性地降低宫颈癌细胞的活力，且与HPV基因型无关。用RAMB4（0-30 µM；48小时）处理可剂量依赖性地降低HPV16阳性细胞的活力。RAMB4抑制20S蛋白酶体催化活性上游的泛素介导的蛋白质降解，而不影响蛋白酶体本身的催化活性。这些体外实验结果证实了该化合物作为泛素-蛋白酶体系统（UPS）应激剂的作用机制。RAMB4对宫颈癌细胞的选择性使其成为研究UPS在癌症生物学中作用的宝贵工具。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
关于 RAMB4 的体内研究有限，但该化合物已在临床前模型中展现出抗癌活性。作为一种泛素-蛋白酶体系统（UPS）应激剂，RAMB4 可通过诱导 UPS 应激并促进癌细胞凋亡，从而在体内抑制肿瘤生长。然而，RAMB4 的具体体内数据，包括其在肿瘤模型中的疗效和药代动力学参数，在公开资料中尚未得到充分记录。研究级 RAMB4 仅供实验室使用。需要开展进一步研究以全面表征其体内疗效和安全性。RAMB4 主要用作研究泛素-蛋白酶体系统的工具。
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| 酶活实验 |
酶活性测定：纯化的20S蛋白酶体预先用浓度递增至10 μM的RAMB4 (PTP1B-IN-9)处理或不处理，于37°C孵育30分钟。处理后，加入三种特异性催化活性的荧光底物：Suc-LLVY-AMC用于胰凝乳蛋白酶样活性，Boc-LRR-AMC用于胰蛋白酶样活性，Ac-YVAD-AMC用于肽基谷氨酰肽水解样活性。反应在含有50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、5 mM MgCl₂和1 mM DTT的缓冲液（终体积100 μL）中于37°C进行45分钟。反应用1% SDS终止，并在激发波长380 nm和发射波长440 nm处测定荧光强度。与硼替佐米不同，RAMB4 (PTP1B-IN-9)在浓度高达10 μM时均未能抑制三种蛋白酶体活性中的任何一种[1]。
为了测定活细胞中的蛋白酶体活性，将处于指数生长期的CaSki宫颈癌细胞用浓度高达20 μM的RAMB4 (PTP1B-IN-9)处理4小时。细胞裂解液在NP-40裂解缓冲液（0.1% NP-40、50 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、5%甘油、1 mM DTT）中制备。通过添加Suc-LLVY-Glo底物并测量发光值来确定残余的胰凝乳蛋白酶样活性。 RAMB4 (PTP1B-IN-9) 处理在浓度高达 20 μM 时未能抑制蛋白酶体活性 [1]。 RAMB4 的非细胞检测通常涉及使用纯化组分测量泛素-蛋白酶体系统的活性。这些检测可能使用纯化的泛素、E1、E2 和 E3 酶以及底物蛋白，以评估 RAMB4 对泛素化和蛋白酶体降解的影响。该化合物在不同浓度下进行测试，以确定其对蛋白质降解的影响。或者，可以使用纯化的 20S 蛋白酶体和荧光肽底物进行检测，以确认 RAMB4 不影响蛋白酶体本身的催化活性。这些检测对于表征 RAMB4 作为 UPS 应激因子的作用机制至关重要。 |
| 细胞实验 |
细胞活力检测[1]
细胞类型： 角质形成细胞、SiHa、CaSki 和 ME180 细胞 测试浓度： 5、10、15、20、25、30 µM 孵育时间： 48 小时 实验结果： HPV16 阳性 SiHa 和 Caski 细胞以及 HPV-39 阳性 ME180 宫颈癌细胞系的活力均呈剂量依赖性下降，对原代人角质形成细胞的活力影响甚微，IC50 值与 HeLa 细胞相似。 细胞检测：采用 XTT 法测定细胞活力。将宫颈癌细胞（HeLa、SiHa、CaSki、ME180）或原代人角质形成细胞以每孔1000个细胞的密度接种于96孔板中，并用指定浓度（0.1、1、5、10、20 μM）的RAMB4 (PTP1B-IN-9)处理48小时。处理后，将细胞与XTT标记混合物孵育4小时。使用分光光度计在450 nm处测量吸光度来定量甲臜染料。RAMB4 (PTP1B-IN-9)以剂量依赖的方式降低宫颈癌细胞的活力，但对角质形成细胞的影响很小[1]。 为了进行泛素化蛋白的免疫印迹分析，将HeLa细胞用5 μM的RAMB4 (PTP1B-IN-9)处理6小时。将总细胞蛋白（10-20 μg）通过 SDS-PAGE 电泳分离，转移至 PVDF 膜，并用抗泛素抗体进行检测。GAPDH 用作上样对照。RAMB4 (PTP1B-IN-9) 处理导致多聚泛素化蛋白明显积累，与对照组细胞相比 [1]。 为了进行 Hsp90 的免疫印迹分析，将 HeLa 细胞用 10 μM RAMB4 (PTP1B-IN-9) 处理 8 小时，并用抗 Hsp90 抗体通过 Western blot 检测 Hsp90 的表达水平，以 GAPDH 进行标准化。 RAMB4 (PTP1B-IN-9) 诱导 Hsp90 积累约 2 倍 [1]。 在 4X 泛素-荧光素酶降解子检测中，将 HeLa 细胞转染 Ub-FL 或对照 CMV-FL 质粒。转染细胞用 20 μM 的 RAMB4 (PTP1B-IN-9) 处理 6 小时，并测量荧光素酶活性。RAMB4 (PTP1B-IN-9) 诱导的 Ub-FL 报告基因稳定性较弱，与硼替佐米或 RA-1 相比 [1]。 RAMB4 的体外细胞检测通常使用宫颈癌细胞系，例如 HPV16 阳性或 HPV 阴性细胞，以评估该化合物对细胞活力和泛素-蛋白酶体系统的影响。将细胞培养于适宜的培养基中，并用不同浓度（0-30 µM）的 RAMB4 处理特定时间（例如 48 小时）。采用 MTT 或类似方法评估细胞活力。使用抗泛素抗体通过蛋白质印迹法检测泛素化蛋白的积累。采用 Annexin V/PI 双染流式细胞术或检测 caspase 活化来评估细胞凋亡。RAMB4 通常溶于 DMSO，并用培养基稀释，同时设置 DMSO 对照以校正溶剂效应。 |
| 动物实验 |
RAMB4的体内动物研究通常会采用癌症小鼠模型，例如宫颈癌异种移植模型，以评估该化合物的抗肿瘤疗效。荷瘤小鼠将接受不同剂量的RAMB4治疗，通常采用腹腔注射或静脉注射。研究期间将监测肿瘤体积、生存期和体重。然而，目前已发表的RAMB4体内研究数据并不多见。该化合物主要用作研究泛素-蛋白酶体系统及其在癌症生物学中作用的工具。需要开展进一步的研究来验证其体内疗效。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
公开资料中关于 RAMB4 的药代动力学数据有限。该化合物的分子量为 339.39 g/mol，分子式为 C19H13Cl4NO。作为一种小分子，RAMB4 预计会被吸收并分布到组织中。然而，诸如半衰期、Cmax、AUC 和生物利用度等详细的药代动力学参数尚未得到充分报道。该化合物的溶解度和稳定性是其用于体外和体内研究的重要因素。研究级 RAMB4 仅供实验室使用。需要进一步的药代动力学研究来全面表征该化合物的吸收、分布、代谢和排泄。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
RAMB4 的毒理学数据有限。作为一种研究化合物，RAMB4 仅供实验室使用，不得用于人体。临床开发需要进行标准的毒理学评估，包括急性毒性和慢性毒性研究。然而，这些数据尚未公开。体外研究表明，RAMB4 可在有效诱导泛素-蛋白酶体系统 (UPS) 应激并降低癌细胞活力的浓度下使用，而不会对正常细胞造成显著毒性。该化合物的体内安全性尚未得到充分表征。与所有研究用化学品一样，处理 RAMB4 时应采取适当的安全预防措施。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
补充信息：RAMB4 (PTP1B-IN-9) 是一种不含氨基酸成分的查尔酮衍生物，其含有一个α,β-不饱和羰基系统，该系统被认为是抑制蛋白酶体上游泛素介导的蛋白质降解的分子决定因素。它能选择性地杀死宫颈癌细胞（HPV阳性），而不影响正常角质形成细胞，且不受HPV基因型（HPV16、HPV18、HPV39）的影响。其作用机制涉及多聚泛素化蛋白的积累，但并不直接抑制20S蛋白酶体的催化活性，从而导致未折叠蛋白反应，包括聚集体形成和Hsp90稳定。 RAMB4 (PTP1B-IN-9)在浓度高达10 μM时，不抑制纯化的20S蛋白酶体的胰凝乳蛋白酶样、胰蛋白酶样或PGPH样活性，这使其与硼替佐米[1]有所区别。
RAMB4 (PTP1B-IN-9)是一种具有抗癌活性的泛素-蛋白酶体系统(UPS)应激剂。其分子式为C19H13Cl4NO，CAS号为145888-79-5。RAMB4抑制20S蛋白酶体上游的泛素介导的蛋白质降解，而不影响其催化活性。它能选择性地降低宫颈癌细胞的活力。RAMB4尚未获准用于临床，目前仅作为研究泛素-蛋白酶体系统的化合物。 |
| 分子式 |
C19H13CL4NO
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|---|---|
| 分子量 |
413.119
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| 精确质量 |
410.975
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| 元素分析 |
C, 55.24; H, 3.17; Cl, 34.32; N, 3.39; O, 3.87
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| CAS号 |
145888-79-5
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| 相关CAS号 |
(E,E)-RAMB4;919091-61-5
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| PubChem CID |
5388806
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
6.268
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| tPSA |
29.1
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
2
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
| 重原子数目 |
25
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| 分子复杂度/Complexity |
516
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C\1NC/C(=C\C2=CC(=C(C=C2)Cl)Cl)/C(=O)/C1=C/C3=CC(=C(C=C3)Cl)Cl
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| InChi Key |
GJPXGFGIFQWUOC-ACFHMISVSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H13Cl4NO/c20-15-3-1-11(7-17(15)22)5-13-9-24-10-14(19(13)25)6-12-2-4-16(21)18(23)8-12/h1-8,24H,9-10H2/b13-5+,14-6+
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| 化学名 |
(3E,5E)-3,5-Bis(3,4-dichlorobenzylidene)piperidin-4-one
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| 别名 |
PTP1B-IN-9 PTP1B-IN 9 PTP1B-IN9 RAMB4 RAMB-4 RAMB 4
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~5 mg/mL (~12.10 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4206 mL | 12.1030 mL | 24.2060 mL | |
| 5 mM | 0.4841 mL | 2.4206 mL | 4.8412 mL | |
| 10 mM | 0.2421 mL | 1.2103 mL | 2.4206 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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