Resazurin

别名: Azoresorcin; Diazoresorcinol; Resazurin 7-羟基-10-氧化物-3H-吩恶嗪-3-酮
目录号: V13682 纯度: ≥98%
Resazurin (Diazoresorcinol) 是一种水溶性(H2O-可溶)、无毒、稳定、可透膜/可透过的蓝色非荧光染料(荧光较弱)。
Resazurin CAS号: 550-82-3
产品类别: New1
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格
500mg
1g
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Other Forms of Resazurin:

  • 刃天青钠盐
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产品描述
Resazurin (Diazoresorcinol) 是一种水溶性(H2O-可溶)、无毒、稳定、可透膜/可透过的蓝色非荧光染料(荧光较弱)。作为一种氧化还原指示剂,刃天青可以在活细胞中被还原为粉红色、高荧光试卤灵(Ex=530-560 nm,Em=590 nm),从而可用于细胞(人类、动物、植物、细菌和真菌)的检测活力、毒性、增殖、迁移和侵袭。
生物活性&实验参考方法
靶点
non-fluorescent dye; redox indicator
体外研究 (In Vitro)
实验方案(这是我们建议的方案,可根据您的具体实验要求进行调整)
细胞活力:
1.Resazurin/刃天青溶液应在37°C水浴中解冻。
2.将细胞加入96孔板后,用PBS洗涤(避光)。
3.去除PBS洗涤液后,加入500μL刃天青溶液(1μg/mL)。
4.将培养板孵育30分钟(孵育期的长度取决于细胞的类型和数量)。
5.Resorufan荧光可以使用微孔板读数器测量(Ex=530-560nm,Em=590nm)。
酶活实验
化验化学与氧化还原原理[2]
Alamar Blue监测活细胞的还原环境。活性成分是resazurin/刃天青(IUPAC名称:7-羟基-10-氧化吩恶嗪-10-碘-3-酮),也称为重氮间苯二酚、偶氮间苯二酚、刃天青,resazurin,它是水溶性的,在培养基中稳定,无毒且可透过细胞膜。因此,允许对培养中的细胞进行连续监测<1929年,Pesch和Simmert首次使用刃天青来评估牛奶中的细菌或酵母污染。它是一种蓝色非荧光染料,被还原为粉红色、高荧光的间苯二酚Resazurin溶液根据Kreft的二色性指数(DI)具有高度二色性。染料在电子传输链中充当中间电子受体,不受电子正常转移的干扰。在pH 7.0、25°C的条件下,Alamar Blue的氧化还原电位为+380 mV。因此,Alamar Blue可以被NADPH(Eo=320 mV)、FADH(Eo=220 mV),FMNH(Eo=210 mV)、NADH(Eo=32 0 mV)以及细胞色素(Eo=290 mV至+80 mV)还原。当指示染料接受电子时,它会从氧化的非荧光蓝色状态变为还原的荧光粉红色状态。除了线粒体还原酶外,位于细胞质和线粒体中的其他酶(如黄递酶(EC 1.8.1.4,二氢脂肪胺脱氢酶)、NAD(P)H:醌氧化还原酶(EC 1.6.99.2)和黄素还原酶(EC 1.6.99.1)可能能够还原阿拉玛蓝。因此,Alamar Blue减少可能意味着细胞代谢受损,不一定是电子传递中断和线粒体功能障碍的特异性表现。从氧化状态到还原状态的这种变化允许检测的灵活性,其中测量可以是定量的,如比色和/或荧光读数(后者更敏感),也可以是定性的,如颜色的可见变化,指示活细胞的存在或不存在。分光光度吸光度在两个波长(570和600 nm或540和630 nm,但也可以使用其他滤光片,并在计算中加入校正因子)。吸光度值将根据微量滴定板(平底或圆形和制造商)而变化。荧光信号在530-560 nm的激发波长和590 nm的发射波长下测量。
细胞实验
鉴定快速、可靠和高度可重复的生物测定方法,这些方法可以标准化并常规用于临床前试验,是降低药物发现成本和时间的有前景的方法。本单元详细介绍了一种串联、快速、可靠的细胞存活率方法,用于化合物的初步筛选。该测定使用双Resazurin/刃天青/磺基罗丹明B测定法测量同一细胞样本中的代谢活性和细胞质量,消除了在跨板测试不同细胞样本的测定中与细胞接种和过度操作相关的变化。该程序还减少了所需的细胞、测试化合物和试剂的量,以及传统测试中花费的时间,从而更可靠地预测了测试化合物的毒性阈值。[1]
任何稳健的筛查制度都需要准确预测测试化合物对生命系统的不利影响,检测毒性阈值,并扩展实验数据集以包括多重毒性终点分析。Alamar Blue是一种重要的氧化还原指示剂,用于评估代谢功能和细胞健康。在过去的50年里,Alamar Blue生物测定已被用于评估一系列生物和环境系统以及多种细胞类型(包括细菌、酵母、真菌、原生动物和培养的哺乳动物和鱼类细胞)中的细胞活力和细胞毒性。与其他代谢指标和其他细胞毒性测定相比,它具有几个优势。然而,与任何生物测定一样,必须确定每种应用和细胞模型的适用性。本综述旨在强调除潜在陷阱外,分析使用和设计中涉及的许多重要考虑因素[2]。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
大鼠口服LDLo 500 mg/kg 美国国家科学院、国家研究委员会、化学-生物协调中心,《评论》,5(24),1953
小鼠静脉注射LDLo 179 mg/kg 《毒理学与应用药理学》,44(225),1978 [PMID:79242]
参考文献

[1]. Determination of Metabolic Viability and Cell Mass Using a Tandem Resazurin/Sulforhodamine B Assay. Curr Protoc Toxicol. 2016 May 4;68:2.24.1-2.24.15.

[2]. Rampersad SN. Multiple applications of Alamar Blue as an indicator of metabolic function and cellular health in cell viability bioassays. Sensors (Basel). 2012;12(9):12347-60.

其他信息
刃天青是一种吩恶嗪类化合物。它可用作pH指示剂、检测次亚硫酸盐以及用于食品研究(还原酶试验)。
指示剂和试剂
用于检测、鉴定、分析等化学、生物或病理过程或状况的物质。指示剂是指在化学滴定终点或接近终点时(例如,在酸碱转换过程中)物理外观(例如颜色)发生变化的物质。试剂是指用于通过化学或显微镜手段(尤其是分析)检测或测定另一种物质的物质。试剂的类型包括沉淀剂、溶剂、氧化剂、还原剂、助熔剂和比色试剂。
刃天青可引起氧化应激,导致HL-60和Jurkat白血病细胞产生活性氧(ROS)并损伤线粒体,从而诱导自噬和细胞死亡。该染料本身可抑制白血病细胞增殖,这对于毒性和化疗耐药性筛选具有重要意义。这强调了对检测方法进行阳性和阴性对照实验的重要性,以确保不存在非特异性相互作用效应。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C12H7NO4
分子量
229.19
精确质量
251.019
CAS号
550-82-3
相关CAS号
Resazurin sodium;62758-13-8
PubChem CID
11077
外观&性状
Typically exists as solid at room temperature
密度
1.57g/cm3
沸点
477.2ºC at 760mmHg
闪点
242.4ºC
折射率
1.74
LogP
2.47
tPSA
78.73
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
4
可旋转键数目(RBC)
0
重原子数目
17
分子复杂度/Complexity
463
定义原子立体中心数目
0
SMILES
C1=CC2=C(C=C1O)OC3=CC(=O)C=CC3=[N+]2[O-]
InChi Key
PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C12H7NO4/c14-7-1-3-9-11(5-7)17-12-6-8(15)2-4-10(12)13(9)16/h1-6,14H
化学名
7-hydroxy-10-oxidophenoxazin-10-ium-3-one
别名
Azoresorcin; Diazoresorcinol; Resazurin
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 4.3632 mL 21.8160 mL 43.6319 mL
5 mM 0.8726 mL 4.3632 mL 8.7264 mL
10 mM 0.4363 mL 2.1816 mL 4.3632 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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