Reversine   中文名称: 逆转素

Aurora A ( IC50 = 400 nM ); Aurora B ( IC50 = 500 nM ); Aurora C ( IC50 = 400 nM )

体外活性：Reversine 诱导肌源性谱系定向细胞成为多能间充质祖细胞，增殖并再分化为骨和脂肪细胞。 Reversine 作为 A3 腺苷受体拮抗剂，可竞争性抑制稳定转染的中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞中毛喉素刺激的 cAMP 产生。 Reversine 抑制 HCT116 细胞中众所周知的 Aurora 靶点组蛋白 H3 的磷酸化。此外，Reversine 可有效阻止多种肿瘤细胞类型的增殖，并诱导细胞死亡。在原发性人类肿瘤样本中，Reversine 还可以抑制白血病细胞的集落形成。当联合治疗时，逆转辛和阿司匹林可协同抑制宫颈癌细胞的生长并诱导细胞凋亡。激酶测定：A3 AR 竞争性结合测定中的每管含有 100 μL 膜悬浮液（20 μg 蛋白质）、50 μL [125I]4-氨基-3-碘苄基）腺苷-5'-N-甲基脲酰胺（0.5 nM） ）和 50 μL 浓度递增的测试配体，溶于含有 10 mM MgCl2 和 1 mM EDTA 的 Tris-HCl 缓冲液（50 mM，pH 7.4）。使用缓冲液中的 10 mM 5'-N-乙基甲酰胺腺苷测定非特异性结合。将混合物在 25°C 下孵育 60 分钟。使用 MT-24 细胞收集器在减压下通过 Whatman GF/B 过滤器过滤来终止结合反应。用 9 mL 冰冷的缓冲液洗涤过滤器 3 次。使用贝克曼γ计数器测定放射性，并计算抑制百分比。细胞测定：使用 ATPlite 1step 评估不同肿瘤细胞系（HL-60、A375、HeLa、HCT-116、T47D 和 MCF-7 细胞系）的细胞活力。简而言之，将每孔 2 × 104 个细胞接种到 96 孔板中，并加入新月形量的逆氨酸。 72小时后，回收板并向每孔添加100μL ATPlite溶液。将板以 700 rpm 摇动 2 分钟，并使用 EnVision Multilabel 读板器测量发光。每个样品一式三份进行分析。

在接种 U14 肿瘤的小鼠中，与对照药物相比，Reversine（10 mg/kg ip）和阿司匹林导致肿瘤重量和肿瘤体积进一步减小。

在 A3 AR 竞争性结合测定中，每管含有 50 μL [¹²⁵I]4-氨基-3-碘苄基)腺苷-5'-N-甲基脲酰胺 (0.5 nM)、100 μL 膜悬浮液（20 μg 蛋白质），以及 50 μL 浓度递增的测试配体 Tris-HCl 缓冲液（50 mM，pH 7.4），其中含有 10 mM MgCl₂ 和 1 mM EDTA。含有 10 mM 5'-N-乙基甲酰胺腺苷的缓冲液用于测量非特异性结合。将混合物在 25°C 下孵育 60 分钟。使用 MT-24 细胞收集器，在较低压力下操作时，通过 Whatman GF/B 过滤器过滤来停止结合反应。使用9毫升冰冷的缓冲液清洗过滤器3次。 Beckman γ 计数器用于测量放射性，并计算抑制百分比。

通过 ATPlite 1step 评估各种肿瘤细胞系的活力。简而言之，当将 2 × 10⁴ 细胞接种到 96 孔板的每孔中时，会出现新月形数量的逆转录酶。 72 小时后，将 100 μL ATPlite 溶液添加到回收板的每个孔中。将板以 700 rpm 的速度摇动两分钟后，使用 EnVision Multilabel 读板器进行发光测量。我们对每个样品分析三次。

[1]. J Am Chem Soc . 2004 Jan 21;126(2):410-1.

[2]. J Med Chem . 2005 Jul 28;48(15):4910-8.

[3]. Mol Cancer Ther . 2008 May;7(5):1140-9.

[4]. Cytotechnology . 2013 Aug;65(4):643-53.

C21H27N7O

393.23

393.23

C, 64.10; H, 6.92; N, 24.92; O, 4.07

656820-32-5

White solid powder

C1CCC(CC1)NC2=NC(=NC3=C2NC=N3)NC4=CC=C(C=C4)N5CCOCC5

ZFLJHSQHILSNCM-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H27N7O/c1-2-4-15(5-3-1)24-20-18-19(23-14-22-18)26-21(27-20)25-16-6-8-17(9-7-16)28-10-12-29-13-11-28/h6-9,14-15H,1-5,10-13H2,(H3,22,23,24,25,26,27)

6-N-cyclohexyl-2-N-(4-morpholin-4-ylphenyl)-7H-purine-2,6-diamine

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Note: Listed below are some common formulations that may be used to formulate products with low water solubility (e.g. < 1 mg/mL), you may test these formulations using a minute amount of products to avoid loss of samples.

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Injection Formulation 1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (i.e. 100 μL DMSO stock solution → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH ₂ O to obtain a clear solution.
Injection Formulation 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (i.e. 100 μL DMSO → 400 μLPEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
Injection Formulation 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (i.e. 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
Example: Take the Injection Formulation 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) as an example, if 1 mL of 2.5 mg/mL working solution is to be prepared, you can take 100 μL 25 mg/mL DMSO stock solution and add to 900 μL corn oil, mix well to obtain a clear or suspension solution (2.5 mg/mL, ready for use in animals).

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Injection Formulation 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in saline = 10 : 90 [i.e. 100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in saline)]
*Preparation of 20% SBE-β-CD in Saline (4°C，1 week): Dissolve 2 g SBE-β-CD in 10 mL saline to obtain a clear solution.
Injection Formulation 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (i.e. 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin → 500 μL Saline)
Injection Formulation 6: DMSO : PEG300 : castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (i.e. 50 μL DMSO → 100 μLPEG300 → 200 μL castor oil → 650 μL Saline)
Injection Formulation 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (i.e. 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
Injection Formulation 8: Dissolve in Cremophor/Ethanol (50 : 50), then diluted by Saline
Injection Formulation 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (i.e. 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
Injection Formulation 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (i.e. 100 μL EtOH → 400 μLPEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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Oral Formulation 1: Suspend in 0.5% CMC Na (carboxymethylcellulose sodium)
Oral Formulation 2: Suspend in 0.5% Carboxymethyl cellulose
Example: Take the Oral Formulation 1 (Suspend in 0.5% CMC Na) as an example, if 100 mL of 2.5 mg/mL working solution is to be prepared, you can first prepare 0.5% CMC Na solution by measuring 0.5 g CMC Na and dissolve it in 100 mL ddH2O to obtain a clear solution; then add 250 mg of the product to 100 mL 0.5% CMC Na solution, to make the suspension solution (2.5 mg/mL, ready for use in animals).

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Oral Formulation 3: Dissolved in PEG400
Oral Formulation 4: Suspend in 0.2% Carboxymethyl cellulose
Oral Formulation 5: Dissolve in 0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose
Oral Formulation 6: Mixing with food powders

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Note: Please be aware that the above formulations are for reference only. InvivoChem strongly recommends customers to read literature methods/protocols carefully before determining which formulation you should use for in vivo studies, as different compounds have different solubility properties and have to be formulated differently.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。