M2 protein

研究人员报告了离子通道抑制剂金刚烷胺、美金刚和金刚乙胺（Rimantadine）对严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）的体外效力。在VeroE6细胞中，金刚乙胺效力最强，其次是美金刚和金刚烷胺（50%有效浓度分别为36、80和116 µM）。金刚乙胺还显示出最高的选择性指数，其次是金刚烷胺和美金刚（分别为17.3、12.2和7.6）。在人肝癌Huh7.5和肺癌A549-hACE2细胞中观察到类似结果。这些抑制剂与瑞德西韦的相互作用方式相似且均为拮抗作用，对病毒逃逸的屏障也相似。金刚乙胺主要在病毒进入后阶段发挥作用，部分在病毒进入阶段发挥作用。基于这些结果，金刚乙胺显示出治疗SARS-CoV-2的最大潜力。[3]

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金刚烷胺、美金刚和金刚乙胺在体外对SARS-CoV-2显示活性[3]
为确定金刚烷衍生物对SARS-CoV-2的效力，我们基于SARS-CoV-2刺突蛋白免疫染色定量感染细胞，进行了96孔板短期浓度-反应实验。实验在非洲绿猴VeroE6细胞（评估抗SARS-CoV-2药物活性的原型细胞系）、人肝癌Huh7.5和人肺癌A549-hACE2细胞中进行。所用抑制剂浓度未导致细胞活力降低（相对细胞活力>90%），如图S2-S4所示。所有细胞类型中均获得类似结果，EC50值在微摩尔范围内。金刚乙胺效力最强，在VeroE6、Huh7.5和A549-hACE2细胞中的EC50分别为36、26和70 µM。美金刚显示中等效力（EC50为80、86和70 µM），金刚烷胺效力最低（EC50为116、118和80 µM）（图1，表1）。在最高使用浓度下，所有抑制剂在VeroE6和A549-hACE2细胞中均能完全抑制SARS-CoV-2，而在Huh7.5细胞中抑制效果略低（图1）。金刚烷胺的细胞毒性低于美金刚和金刚乙胺（表1，图S2-S4）。然而，由于其相对较高的效力，金刚乙胺在所有三种细胞系中具有最高的选择性指数（SI），而美金刚的SI最低（表1）。

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金刚烷胺、美金刚和金刚乙胺与瑞德西韦的相互作用方式相似且均为拮抗作用[3]
为研究离子通道抑制剂与瑞德西韦的相互作用，进行了96孔板联合处理实验。SARS-CoV-2感染的VeroE6细胞分别用离子通道抑制剂单药、与瑞德西韦联用或单用瑞德西韦处理。抑制剂浓度根据先前确定的EC50值选择：离子通道抑制剂的EC50见表1，瑞德西韦的EC50为2.5 µM，如先前报道。对于所有三种离子通道抑制剂，联合处理的效果未超过单药处理的效果（图2，补充结果，表S1）。使用CompuSyn软件中Chou和Talalay方法进行的分析（补充方法中描述）显示，离子通道抑制剂与瑞德西韦之间主要为拮抗相互作用（补充结果，图S5、S6和表S2）。

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金刚烷衍生物对病毒逃逸的屏障无显著差异[3]
为比较离子通道抑制剂在治疗条件下防止SARS-CoV-2传播的能力，我们根据抑制剂细胞毒性（图S2），使用金刚烷胺、美金刚和金刚乙胺在最高可能等效浓度（3倍EC50）下对感染的VeroE6细胞进行了长期处理。所有抑制剂处理均导致感染后第1天早期病毒传播动力学的类似延迟，而到第3-5天≥80%的培养细胞被感染，与未处理的对照培养物相当（图3）。然而，与未处理和美金刚处理的培养物相比，金刚烷胺和金刚乙胺处理的培养物中观察到细胞病变效应略有减轻。因此，总体而言，三种抑制剂在病毒逃逸屏障方面未显示重大差异。金刚乙胺的有利SI使其能够以7倍EC50进行处理，导致第3-5天额外的病毒抑制，而到第7天≥80%的培养细胞被感染。为研究是否获得替代可能促进病毒逃逸，对图3所示所有培养物在感染高峰期获得的病毒进行了NGS分析。在美金刚和金刚乙胺处理的培养物中，检测到未在未处理培养物中发现的替代，但无明显替代热点（表S3）。因此，抑制剂只能暂时抑制SARS-CoV-2。

金刚烷胺和金刚乙胺是口服抗病毒药物，可用于预防和治疗甲型流感病毒感染。本文综述了这些药物的药理学、抗病毒活性和作用机制、药代动力学、毒性、疗效和临床应用。当以等效剂量（每天200mg）给药时，金刚乙胺的预防效果与金刚烷胺相当，但产生不良反应的可能性较低。尽管结构相似，但这些药物的药代动力学存在显著差异，这些差异可能解释了金刚乙胺更有利的毒性特征。如果在无并发症的流感早期服用这两种药物，都能提供治疗益处，目前正在进行研究，以确定口服金刚乙胺在预防或治疗甲型流感病毒感染的严重并发症方面的有效性。[1]

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以前没有研究过使用利曼他定治疗儿童流感以及与治疗相关的临床分离株的潜在耐药性发展。我们在一项针对91名流感样疾病儿童的对照双盲研究中比较了金刚乙胺和对乙酰氨基酚治疗。在69名确诊感染甲型H3N2流感的儿童中，37名接受了金刚乙胺治疗，32名接受了对乙酰氨基酚治疗，为期五天。在最初的三天里，接受金刚乙胺治疗的儿童发烧明显减少，症状和疾病严重程度的每日评分也有所改善。在头两天内，病毒脱落也显著减少，但随后增加，因此到第6天和第7天，金刚乙胺组中脱落病毒的儿童比例以及脱落的病毒数量显著增加。在为期七天的研究中，在金刚乙胺组的22名儿童中，有10名（45.5%）有耐药菌株，而对乙酰氨基酚组有2名（12.5%）有耐药性菌株（P小于.03）。因此，在金刚乙胺组的37名儿童中，27%的儿童被发现有耐药性，而接受对乙酰氨基酚治疗的总组为6%（P小于.04）。此外，在金刚乙胺组中，金刚乙胺的平均抑制浓度随时间增加（r=0.4，P=0.002），但在对乙酰氨基酚组中没有。因此，在改善儿童流感的临床体征和症状方面，利曼他定治疗似乎比对乙酰氨基酚更有效。金刚乙胺治疗还与停药后病毒脱落增加以及临床分离株耐药性的发展有关，其意义尚不清楚。[2]

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在儿童中，利曼他定（RMT）在治疗的第三天有效地缓解了发烧。金刚烷胺（AMT）显示出对甲型流感感染的预防作用。AMT和RMT与不良反应发生率的增加无关。RMT也被认为对老年人具有良好的耐受性，但没有显示出预防作用。不同剂量在预防老年人流感以及报告不良反应方面具有可比性。在老年人中，扎那米韦比RMT更有效地预防甲型流感。 作者结论：AMT可有效预防儿童甲型流感。由于混杂因素可能影响了我们的研究结果，在考虑哪些患者应该服用这种预防药物时应该谨慎。我们关于这两种抗病毒药物治疗儿童甲型流感的有效性的结论仅限于RMT在治疗第三天退热方面的有效性。由于可用研究数量较少，我们无法就AMT的安全性或RMT在预防儿童和老年人流感方面的有效性得出明确结论[4]。

Rimantadine添加实验时间[3]
将96孔板中的VeroE6细胞接种MOI为0.01的严重急性呼吸系统综合征冠状病毒-2，感染期为2小时，并在接种后的不同时间点用230μM金刚乙胺处理。对于进入治疗，在接种后0小时将Rimantadine/金刚乙胺与病毒一起加入，并在2小时病毒感染阶段结束时将其清除。对于入组后治疗，接种后2、4或6小时加入金刚乙胺。在6个重复中测试了处理条件。治疗板包括12个感染的未治疗井和12个未感染的未处理井。孵育46-50小时后，对细胞进行严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型刺突蛋白免疫染色。数据点用SEM表示为抑制百分比。抑制百分比确定为100%–%的残余感染性（见前一节）。

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96孔板短期治疗和添加时间实验的免疫染色和评估[3]
短期治疗板用1:5000稀释的第一抗体严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型刺突嵌合单克隆抗体、第二抗体F（ab'）2-山羊抗人IgG Fc交叉吸附的第二抗体、HRP或山羊F（ab'）2抗人IgG–Fc（HRP）、1:2000稀释的预吸附抗体和DAB底物BrightDAB试剂盒染色。使用ImmunoSpot系列5紫外线分析仪自动计数单个严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型刺突蛋白阳性细胞。感染治疗井的计数与感染非治疗井的平均计数相关，以计算单一抑制剂治疗的残余感染率百分比，此外，还计算联合治疗的抑制率百分比和添加时间实验。

背景：虽然金刚烷胺 (AMT) 和利马他定 (RMT) 可用于缓解或治疗健康成人甲型流感症状，但对于这些抗病毒药物在预防和治疗儿童及老年人甲型流感方面的有效性和安全性知之甚少。目的：本综述旨在系统地评估 AMT 和 RMT 在预防和治疗儿童及老年人甲型流感方面的有效性和安全性证据。检索策略：我们检索了 Cochrane 对照试验中心注册库 (CENTRAL)（Cochrane 图书馆，2007 年第 3 期）、MEDLINE（1966 年至 2007 年 7 月）和 EMBASE（1980 年至 2007 年 7 月）。纳入标准：比较 AMT 和/或 RMT 与安慰剂、对照组、其他抗病毒药物在儿童和老年人中的疗效，或比较不同剂量或给药方案的 AMT 和/或 RMT 与无干预措施的随机或半随机试验。数据收集与分析：两位评价员独立筛选纳入试验并评估方法学质量。如有分歧，则通过协商一致解决。除一项比较外，所有比较中，儿童和老年人的试验均分别进行分析。数据分析和报告均使用 Cochrane Review Manager 4.2 软件。[4]

吸收、分布和排泄
口服后吸收良好，片剂和糖浆剂型的吸收率相同。
口服后，金刚烷胺在肝脏中广泛代谢，不到25%的剂量以原形药物形式经尿液排出。
蛋白结合率：中等（约40%）。
分布：分布容积 - 成人：17至25升/公斤。儿童：平均289升。鼻黏液中的浓度平均比血浆中的浓度高50%。
吸收良好；片剂和糖浆口服后吸收效果相同。
达峰时间：1至4小时。
有关利曼他定（共11种）的更多吸收、分布和排泄（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

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代谢/代谢物
口服后，利曼他定在肝脏中广泛代谢，不到25%的剂量以原形药物形式经尿液排出。葡萄糖醛酸化和羟基化是主要的代谢途径。
盐酸利曼他定在肝脏中广泛代谢为至少3种羟基化代谢物。这些代谢物被命名为结合型和非结合型3-、4a-和4β-羟基化代谢物。此外，还鉴定出一种利曼他定的葡萄糖醛酸苷结合物。
在肝脏中广泛代谢；葡萄糖醛酸化和羟基化是主要的代谢途径。

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生物半衰期
青年人（22至44岁）为25至30小时。老年人（71至79岁）和慢性肝病患者约为32小时。儿童（4至8岁）约为13至38小时。
青年人（22至44岁）：25至30小时。老年人（71至79岁）和慢性肝病患者：约32小时。儿童（4至8岁）：13至38小时。

肝毒性
尽管广泛使用，但几乎没有证据表明口服金刚烷胺会导致肝损伤，无论是血清酶升高还是临床上明显的肝病。
可能性评分：E（不太可能导致临床上明显的肝损伤）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于哺乳期使用金刚烷胺的信息。生产商声明，哺乳期妇女不应使用该药物。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
比典型血浆浓度高约 40%。

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相互作用
健康成人同时服用单剂量金刚烷胺和西咪替丁可使金刚烷胺清除率降低 18%；目前认为其临床意义甚微。
由于抗流感病毒药物会降低流感病毒的复制，因此在停用金刚烷胺至少 48 小时后方可进行鼻内流感活疫苗接种，且在鼻内接种流感活疫苗至少 2 周后方可再次使用金刚烷胺。西咪替丁
金刚烷胺与对乙酰氨基酚或阿司匹林合用会使金刚烷胺的血清峰浓度降低约 11%；目前认为其临床意义甚微。

[1]. Tominack, R.L. and F.G. Hayden, Rimantadine hydrochloride and amantadine hydrochloride use in influenza A virus infections. Infect Dis Clin North Am, 1987. 1(2): p. 459-78.

[2]. Children with influenza A infection: treatment with rimantadine. Pediatrics, 1987. 80(2): p. 275-82.

[3]. Efficacy of Ion-Channel Inhibitors Amantadine, Memantine and Rimantadine for the Treatment of SARS-CoV-2 In Vitro. Viruses. 2021 Oct 15;13(10):2082.

[4]. Amantadine and rimantadine for influenza A in children and the elderly. Cochrane Database Syst Rev. 2008 Jan 23:(1):CD002745.

1-(1-金刚烷基)乙胺是一种烷基胺。
它是一种RNA合成抑制剂，可用作抗病毒药物，用于预防和治疗流感。
金刚烷胺是一种甲型流感病毒M2蛋白抑制剂。金刚烷胺的作用机制是作为M2蛋白抑制剂。
金刚烷胺是一种用于治疗甲型流感的抗病毒药物。金刚烷胺尚未发现与临床上明显的肝损伤相关。
金刚烷胺是金刚烷胺的环状胺和α-甲基衍生物，具有抗病毒活性。尽管金刚烷胺的确切作用机制尚不完全清楚，但该药物似乎是通过干扰病毒M2蛋白跨膜结构域的功能来发挥其抗甲型流感病毒的作用，从而阻止病毒脱壳，进而阻止感染性病毒核酸释放到感染细胞的细胞质中。
一种RNA合成抑制剂，用作预防和治疗流感的抗病毒药物。
另见：盐酸金刚烷胺（有盐形式）。

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适应症
用于预防和治疗成人由各种甲型流感病毒株引起的疾病。
FDA标签

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作用机制
金刚烷胺的作用机制尚未完全阐明。金刚烷胺似乎在病毒复制周期的早期发挥其抑制作用，可能抑制病毒脱壳。甲型流感病毒M2基因编码的蛋白质可能在金刚烷胺的敏感性中发挥重要作用。
金刚烷胺被认为在病毒复制周期的早期发挥抑制作用，可能是通过阻断或显著减少宿主细胞内病毒RNA的脱壳来实现的。遗传学研究表明，M2蛋白跨膜部分的单个氨基酸改变即可完全消除甲型流感病毒对金刚烷胺的敏感性。
金刚烷胺与金刚烷胺类似，通过干扰甲型流感病毒的M2蛋白（一种整合膜蛋白）来抑制病毒复制。甲型流感病毒的M2蛋白作为离子通道发挥作用，在病毒复制的至少两个方面至关重要：感染性病毒颗粒的解体和转运途径离子环境的调节。金刚烷胺通过干扰M2蛋白的离子通道功能，抑制甲型流感病毒复制周期的两个阶段。在病毒复制周期的早期，金刚烷胺抑制病毒颗粒的脱壳，这可能是通过抑制酸介导的病毒核酸和蛋白质的解离实现的，从而阻止病毒基因组物质的核转运。在复制周期的后期，金刚烷胺还能通过促进甲型流感病毒血凝素在细胞内转运过程中pH诱导的构象变化，抑制某些甲型流感病毒株（例如H7株）的成熟。金刚烷胺似乎不影响病毒的细胞吸附和细胞穿透。此外，金刚烷胺不干扰病毒成分的合成（例如，RNA指导的RNA聚合酶活性）。

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治疗用途
金刚烷胺适用于预防成人和儿童由甲型流感病毒引起的呼吸道感染，以及治疗成人由甲型流感病毒引起的呼吸道感染。/美国产品标签包含/
预防多种甲型流感病毒株的感染

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药物警告
猪流感（H1N1）病毒包含独特的基因片段组合，这些基因片段此前未在美国或其他地区的猪流感或人流感病毒中报道过。 H1N1病毒对金刚烷胺和利马他定耐药，但对奥司他韦或扎那米韦不耐药。
老年患者，尤其是长期护理机构中的老年患者，比年轻成人或儿童更容易出现与利马他定相关的不良反应，主要表现为中枢神经系统（CNS）和胃肠道副作用。
FDA妊娠风险等级：C/风险无法排除。目前缺乏充分、对照良好的人体研究，动物研究也未显示对胎儿的风险或缺乏相关数据。妊娠期间服用该药可能对胎儿造成伤害；但潜在获益可能大于潜在风险。/
与金刚烷胺相比，利马他定常用剂量下出现中枢神经系统不良反应（例如，紧张、焦虑、注意力不集中、头晕）的情况较少见，这可能部分是由于两种药物的药代动力学差异所致。在一项为期 6 周的研究中，健康成年人每日服用 200 毫克预防剂量的盐酸金刚烷胺或盐酸金刚烷胺，结果显示，分别有约 6% 或 13% 的患者因中枢神经系统不良反应而停止治疗，而安慰剂组的这一比例约为 4%。虽然服用金刚烷胺的患者曾出现神经精神症状（例如谵妄、显著的行为改变）或精神运动功能障碍，但服用金刚烷胺的患者尚未报告此类不良反应。
有关金刚烷胺（共 13 条）的更多药物警告（完整）数据，请访问 HSDB 记录页面。

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药效学
金刚烷胺是一种环状胺，是一种合成抗病毒药物，与金刚烷胺一样，是金刚烷的衍生物。金刚烷胺对从人体分离出的三种甲型流感病毒抗原亚型（H1N1、H2H2 和 H3N2）的体外复制均有抑制作用。金刚烷胺对乙型流感病毒几乎没有活性。金刚烷胺似乎不会干扰灭活甲型流感疫苗的免疫原性。

C12H21N

179.30184

179.167

13392-28-4

Rimantadine hydrochloride;1501-84-4;Rimantadine-d4 hydrochloride;350818-67-6

5071

Colorless to light yellow liquid

1.033

248ºC

375°C(lit.)

99ºC

0.0249mmHg at 25°C

1.539

4.052

26.02

1

1

1

13

180

0

CC(C1(C[C@H](C2)C3)C[C@H]3C[C@H]2C1)N

UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C12H21N/c1-8(13)12-5-9-2-10(6-12)4-11(3-9)7-12/h8-11H,2-7,13H2,1H3

1-(1-adamantyl)ethanamine

rimantadine; 13392-28-4; 1-(1-Adamantyl)ethanamine; Rimantadina; Rimantadinum; alpha-Methyl-1-adamantanemethylamine; Remantadine; alpha-Methyladamantanemethylamine;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。