NMDA Receptor

Ro 25-6981是含有NR2B亚基的NMDA受体的选择性和活性依赖性阻断剂。它在结构上与非苯丙地尔相关，对非竞争性拮抗剂如苯环利定或MK-801的已知结合位点没有亲和力Fischer等，1997，Lynch等，2001，Mutel等，1998。在转染了编码NR1C和NR2B亚基的cDNA混合物的爪蟾卵母细胞中，Ro 25-6981可作为有效的拮抗剂。相比之下，在转染NR2A亚基的卵母细胞中，其拮抗NMDA反应的效力几乎低了四个数量级（Fischer et al., 1997）。［１］

Ro 25-6981 Hydrochronide (0.39-12.5 mg/kg; ip) 不会刺激正常大鼠的运动，但会引起 6-羟基多巴胺 (6-OHDA) 损伤的大鼠的反向旋转 [1]。大鼠产后早期发育受到 Ro 25-6981 Hydrochronide（1.3 mg/kg；腹腔注射）的年龄和激活依赖性抗惊厥作用的影响 [2]。 Ro 25-6981 Hydrochronide（800 µg；鞘内注射）可显着减轻瑞芬太尼引起的术后痛觉过敏，并对大鼠切口痛具有较强的镇痛作用[3]。

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n -甲基- d -天冬氨酸（NMDA）受体拮抗剂在帕金森病（PD）动物模型中具有抗运动和抗运动障碍作用。然而，非选择性抑制NMDA受体在整个中枢神经系统可能导致不希望的影响，如共济失调和精神病。因此，我们研究了Ro 25-6981，一种NMDA受体的活性依赖性拮抗剂，含有NR2B亚基，主要在纹状体中表达。Ro 25-6981诱导6-羟多巴胺（6- ohda）损伤大鼠的对抗性旋转，而不刺激正常大鼠的运动，并逆转1-甲基-4-苯基-1,2,3,6，-四氢吡啶（MPTP）治疗的普通狨猴的帕金森症状。由于绒猴数量较少，Ro 25-6981与载虫之间的差异不显著，但有显著的差异趋势，由Page检验可知。此外，Ro 25-6981增强了左旋多巴在两种动物中的作用，并减弱了长期服用左旋多巴的6- ohda损伤大鼠的最大左旋反应，但不降低总体反应。Ro 25-6981还能增强多巴胺受体激动剂阿波啡、A68930和喹匹罗对6- ohda损伤大鼠的作用。目前的观察结果表明，nr2b选择性NMDA受体拮抗剂在帕金森病的治疗中具有治疗潜力。[1]

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Ro 25-6981是含有NR2B亚基（NR2B/NMDARs）的NMDA嗜离子型谷氨酸受体的高选择性和活性依赖性拮抗剂。本研究旨在探讨Ro 25-6981给药对发育大鼠生理（单脉冲和成对脉冲皮层半球间诱发电位）和癫痫性脑活动（皮质放电后放电（ADs））的影响。在出生后(P) P12、P18和P25进行硬膜外电极植入动物的电生理实验。该药物以1或3mg/kg的剂量腹腔注射。对照动物注射生理盐水（1ml/kg）。用0.5 ms双相脉冲（强度从0.4 ~ 5mA增加）诱发单半球间反应，用两倍阈值强度诱发双脉冲反应。在8赫兹频率下，通过一系列15秒的1毫秒脉冲来激发ad。首先，采用6次稳定的超过阈值强度的刺激，每隔30分钟重复一次，以确定Ro 25-6981对P12动物ADs的作用时间过程。其次，在所有年龄组的动物中进行了类似的实验，但间隔20分钟，以及进一步的实验，使用从0.2到15 mA的10分钟间隔逐步增加的刺激强度。预处理3 mg/kg（不低于3 mg/kg）的ro25 -9681可显著降低P12和P18动物在高刺激强度下的单次反应幅度。两种剂量都影响P25动物的反应，只有1 mg/kg剂量比3 mg/kg剂量更有效。在任何年龄组中，任何剂量的Ro 25-6981均未影响配对脉冲反应。Ro 25-9681仅对P12动物的ad持续时间有明显影响。1 mg/kg剂量不改变ad持续时间，而3 mg/kg剂量通过反复刺激抑制ad持续时间延长。即使在药物注射后110分钟，这种效果仍然存在。ADs的修改，即逐步增加强度的刺激（间隔10分钟）被用来证明可能对活动的依赖性。在4-mA刺激后立即给予Ro 25-6981（即当大鼠平均经历6次ad时）。3mg /kg剂量可使P12在高刺激强度后ADs缩短。在老年动物中没有显着影响，仅在P25大鼠中观察到ad缩短的趋势。总之，我们的研究结果表明，作为NR2B/NMDARs的选择性拮抗剂，Ro 25-6981在出生后早期表现出年龄依赖性和激活依赖性的抗惊厥作用。相反，ro25 -6981对感觉运动皮层单脉冲刺激引起的生理兴奋性的影响不依赖于年龄。因此，这种化合物可能是一种有用的抗癫痫药，因为它对ad延长的作用可以在单次给药后110分钟观察到。[2]

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背景：NR2B亚单位（NMDA受体2B亚单位）在疼痛的产生和形成疼痛的中枢致敏中起重要作用。Ro 25-6981是近年来备受关注的一种高选择性NR2B拮抗剂。本研究采用大鼠切口痛模型，通过鞘内给药Ro 25-6981预处理，研究瑞芬太尼术后镇痛效果及术后痛感的改变。
方法：采用鞘内注射Ro 25-6981后的足部退足机械阈值和足部退足热潜伏期评价大鼠行为变化。Western blot检测脊髓背角酪氨酸磷酸化NR2B的表达情况。
结果：鞘内注射Ro 25-6981可显著提高术后足部退足机械阈值和足部退足热潜伏期。鞘内注射Ro 25-6981 800.0 μg及术后2h斜拉试验度及BBB评分发生显著变化。Ro 25-6981预处理可降低模型大鼠脊髓背角中酪氨酸磷酸化NR2B的高水平表达。
结论：鞘内注射Ro 25-6981对大鼠切口疼痛有明显的镇痛作用，可有效减轻瑞芬太尼术后引起的痛觉过敏。[3]

动物/疾病模型： 6-OHDA 损伤大鼠 [1]
剂量： 0.39-12.5 mg/kg
给药途径： 腹腔注射 (ip)
实验结果： 剂量依赖性地诱导相反方向的紧密鼻尾旋转和微弱的同向旋转反应，表明轻微的非特异性刺激化合物的作用。

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动物/疾病模型： Wistar 品系雄性白化大鼠 [2]
剂量： 1、3 mg/kg
给药途径： 腹腔注射
实验结果： 在 3 mg/kg 的较高刺激强度下，N1-P2 波幅显著降低，并在出生后早期发育阶段表现出年龄和激活依赖性的抗惊厥作用。

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\n\nMPTP 暴露 23 个月后，一组四只动物分别接受赋形剂或三种剂量的 Ro 25-6981 之一或左旋多巴联合两种剂量的 Ro 25-6981 之一的治疗。在这些实验中，我们采用拉丁方设计进行治疗分配。实验之间间隔一周的恢复期。这些动物此前分别接受了为期25天的选择性D1受体激动剂治疗，以及为期30天的单胺阻滞剂联合左旋多巴/卡比多巴治疗。两次实验治疗之间的停药间隔分别为9个月和12个月。这些治疗并未导致运动障碍的发生。[1]

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\n\n每个年龄组均由接受生理盐水治疗的对照组动物和两个接受不同剂量Ro 25-6981治疗的组组成。每个年龄组和剂量组均包含8只动物。\n\n在每次实验开始前，将Ro 25-6981马来酸盐（(αR, βS)-α-(4-羟基苯基)-β-甲基-4-(苯甲基)-1-哌啶丙醇马来酸盐）新鲜溶解于生理盐水中（1 mg/ml）。药物以1或3 mg/kg的剂量腹腔注射给药。[2]单脉冲诱发电位[2]施加强度从0.4 mA递增至5.0 mA（0.4、0.6、0.8、1.0、1.4、1.8、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5和5.0 mA）的1 ms单脉冲。第一个刺激周期为对照周期，然后注射Ro 25-6981或生理盐水，20分钟后开始第二个刺激周期。软件自动平均连续5次反应（在13种不同的电流强度下），并测量N1（第一个负波）和P2（第二个正波）波峰之间的振幅（图1a）。由于第一个正波常受刺激伪迹干扰而无法使用。\n

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\n\n成对脉冲诱发电位[2]
\n确定每只动物的阈值刺激强度，并以该强度的两倍诱发脉冲间隔为50至1000毫秒的成对反应。再次进行两个周期的刺激：第一个周期在给药前，第二个周期在给予Ro 25-6981或生理盐水后20分钟。再次测量N1（第一个负波）和P2（第二个正波）波峰之间的第一个（A1）和第二个（A2）反应的振幅（图1b）。计算每个时间间隔的 A2/A1 比值。\n

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\n\n皮层后放电 (ADs) [2]
\n以 8 Hz 的频率施加一系列 1 ms 的双相矩形脉冲，持续 15 秒（参见图 2 中的 ADs 记录示例）。使用超阈值电流强度进行刺激重复 6 次。在 P18 和 P25 大鼠中，3.0 mA 的强度足以可靠地达到超阈值；由于神经回路尚未成熟，P12 动物需要更高的刺激强度（高达 5.0 mA）（Mares 等，2002）。两次刺激之间的间隔为 20 分钟。在第一次 AD 发生后 10 分钟（即在给药前对照刺激后），始终注射 Ro 25-6981 或生理盐水。在12日龄大鼠中，以30分钟为间隔进行额外系列实验，以确定Ro 25-6981的作用持续时间。\n\nRo 25-6981溶解于5%二甲基亚砜（DMSO）中，体积为25 μl。瑞芬太尼（0.04 mg/kg）溶解于0.9%生理盐水（NaCl）中，体积为0.4 ml。在足底切口前30分钟进行Ro 25-6981的鞘内注射。使用输液泵，在30分钟内皮下输注0.4 ml瑞芬太尼（0.04 mg/kg）。输注速率为0.8 ml/h。对照组动物在相同条件下接受等体积的生理盐水。\n

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\n\n药物给药和实验分组[3]
\n所有大鼠均使用鼻罩吸入七氟烷进行麻醉。Ro 25-6981溶于5% DMSO。盐酸瑞芬太尼（0.04 mg/kg）溶于0.9%氯化钠溶液中，配制成0.4 ml的溶液。\n根据给药剂量，将54只SD大鼠随机分为9组（n = 6）（表1）。实验前两周，每天将大鼠放入实验室2小时，使其适应各种实验装置。在手术切口前，将药物Ro 25-6981鞘内注射。剂量详情见表1。所有大鼠均采用鞘内注射（it），注射部位为脊髓L4-L5节段之间的椎间隙，具体方法参照Hylden和Wilcox（1980）所述。使用连接50 μl Hamilton微量注射器的28号1/2英寸不锈钢针头，将25 μl的Ro 25-6981（溶于5% DMSO）注入大鼠体内。注射前，对动物进行轻度约束以固定针头位置。通过大鼠轻微甩尾来判断硬膜穿刺成功。由于鞘内注射5% DMSO溶剂对大鼠行为无影响（Qu等，2009），为保持一致性，所有大鼠均接受5% DMSO溶剂的鞘内注射。除C组外，所有组均在右后爪切口疼痛后进行鞘内注射，建立大鼠模型。M组、(R + M)1组、(R + M)2组和(R + M)3组在手术切口时，使用输液泵皮下输注瑞芬太尼（0.04 mg/kg，0.4 ml），持续30分钟；C组、I组、R1组、R2组和R3组在相同条件下皮下输注0.9%生理盐水（0.4 ml），持续30分钟。行为学研究中，测试了大鼠的爪缩回机械阈值（PWMT）和爪缩回热刺激潜伏期（PWTL）。分别在鞘内注射前24小时以及术后2小时、6小时、24小时和48小时测量大鼠的行为变化（n = 6）。同时，在相同时间点也检测了运动功能指标（倾斜拉力试验和BASSO、BEATTIE和BRESNAHAN (BBB)评分）。根据疼痛行为指标的变化，分别于术后2小时、6小时和48小时采集各组标本（n = 4）进行Western blot分析。

[1]. Antiparkinsonian activity of Ro 25-6981, a NR2B subunit specific NMDA receptor antagonist, in animal models of Parkinson's disease. Exp Neurol. 2004 May;187(1):86-93.

[2]. Different action of a specific NR2B/NMDA antagonist Ro 25-6981 on cortical evoked potentials and epileptic afterdischarges in immature rats. Brain Res Bull. 2015 Feb;111:1-8.

[3]. Antinociception and prevention of hyperalgesia by intrathecal administration of Ro 25-6981, a highly selective antagonist of the 2B subunit of N-methyl-D-aspartate receptor. Pharmacol Biochem Behav. 2013 Nov;112:56-63.

Ro 25-6981 是一种哌啶类化合物，其结构为 4-苄基哌啶在 1 位被 3-羟基-3-(4-羟基苯基)-2-甲基丙基取代（1R,2S-立体异构体）。它是 N-甲基-D-天冬氨酸 (NMDA) 受体 GluN2B 亚基的强效拮抗剂。它具有 NMDA 受体拮抗剂、抗惊厥药、抗抑郁药和神经保护剂等多种药理作用。它属于哌啶类、酚类、仲醇类、叔胺类和苯类化合物。 Ro 25-6981(1+) 是一种共轭碱。Ro 25-6981 是一种活性依赖性 NMDA 受体拮抗剂，其受体包含 NR2B 亚基，在两种相关的帕金森病动物模型中均显示出抗帕金森病活性。Ro 25-6981 可诱导 6-OHDA 损伤大鼠出现对侧旋转，但不会刺激正常大鼠的运动活性。此外，Ro 25-6981 可增加 MPTP 处理的狨猴的运动活性并减轻其残疾程度。更重要的是，Ro 25-6981 在两种模型中均能增强左旋多巴的作用，并提高 6-OHDA 损伤大鼠中阿扑吗啡以及 D1 和 D2 选择性多巴胺受体激动剂的疗效。此外，Ro 25-6981 减弱了长期接受左旋多巴治疗的 6-OHDA 损伤大鼠的左旋多巴峰值反应，但并未降低总体反应。Ro 25-6981 未导致任何明显的运动障碍。因此，Ro 25-6981 的抗帕金森病作用优于任何传统的竞争性和非竞争性 NMDA 受体拮抗剂，因为它结合了内在的抗帕金森病活性以及与左旋多巴和 D1、D2 受体激动剂协同作用的能力。相反，传统的NMDA受体拮抗剂在缺乏多巴胺能刺激的情况下不具有抗帕金森病作用，并且选择性地与亚型特异性激动剂相互作用（Klockgether和Turski，1990；Löschmann等人，1997；Morelli等人，1992）。
有许多理由推测纹状体介导了Ro 25-6981的抗帕金森病作用。原位杂交研究表明，NR2B亚基在纹状体中的表达水平高于其他基底神经节核团（Kosinski等人，1998）。相应地，与外侧苍白球相比，[3H]Ro 25-6981在大鼠纹状体中的结合率较高（Fischer等人，1997）。此外，纹状体内局部注射NMDA可使大鼠出现帕金森症，而纹状体内注射另一种对NR2B亚基NMDA受体具有优先性的拮抗剂伊芬普罗地尔，可逆转6-OHDA损伤狨猴的帕金森症（Klockgether和Turski，1993；Mitchell等人，1995）。
目前帕金森病的发病机制模型认为，投射到苍白球外侧的纹状体神经元（间接通路）在多巴胺耗竭后变得过度活跃，而直接投射到基底神经节输出核的纹状体神经元（直接通路）的活性则降低（Albin等人，1989）。由于NR2B受体位于纹状体投射神经元上（Landwehrmeyer等人，1995；Standaert等人，1999），Ro 25-6981的作用很可能是由于其阻断了投射至苍白球外侧部的纹状体神经元上的NR2B受体所致。这一假设意味着Ro 25-6981对间接通路具有选择性抑制作用，而对（活性不足的）直接通路几乎没有影响。这种选择性最好地解释为Ro 25-6981作用的活性依赖性。Ro 25-6981仅与激活的受体具有高亲和力结合，而对未激活的受体几乎没有影响（Fischer等人，1997）。事实上，研究表明，在多巴胺耗竭后，伊芬普罗地尔（Ro 25-6981 的结构类似物）抑制纹状体中 NMDA 通道阻滞剂 MK-801 结合的能力增强了四倍（Nash 等，1999）。Ro 25-6981 增强了 D1 受体激动剂 A68930 和 D2 受体激动剂喹吡罗的抗帕金森病作用。相反，MK-801 增强了 D1 受体激动剂 SKF 38393 诱导的旋转行为，但减弱了喹吡罗诱导的旋转行为（Morelli 等，1992）。另一方面，条件性位置偏好（CPP）增强了喹吡罗诱导的旋转行为，但对 A68930 诱导的旋转行为没有影响（Löschmann 等，1997）。我们提出，Ro 25-6981 对喹吡罗诱导旋转的增强作用是由于两种化合物对间接通路具有协同抑制作用。相反，D1 受体激动剂 A68930 和 Ro 25-6981 的协同作用最好解释为 A68930 激活直接通路和 Ro 25-6981 抑制间接通路的共同作用。
传统 NMDA 受体拮抗剂作为抗帕金森病药物的用途受到限制，因为它们容易引起运动失调和共济失调，这是由于这些化合物作用于小脑中的 NMDA 受体所致（Löscher 和 Honack，1991）。由于NR2B亚基在小脑中的表达水平较低或缺失（Standaert等人，1994），因此NR2B选择性NMDA受体拮抗剂预计不会像传统NMDA拮抗剂那样产生共济失调的副作用。事实上，在小鼠中，腹腔注射Ro 25-6981剂量高达100 mg/kg时，并未引起运动障碍（Boyce等人，1999）。该剂量比产生抗帕金森病作用所需的剂量高约一个数量级。因此，Ro 25-6981在啮齿动物和灵长类动物中未诱发共济失调和运动障碍，可能是其即使在高剂量下仍能保持抗帕金森病活性的原因之一。
其他对含NR2B亚基的NMDA受体具有优先作用的拮抗剂在帕金森病动物模型中也表现出类似的良好效果。伊芬普罗地尔可刺激利血平治疗的大鼠、双侧6-羟基多巴胺损伤的狨猴以及MPTP治疗的狨猴的运动活性（Mitchell等，1995；Nash等，1999；Nash等，2000）。然而，一项针对帕金森病患者的小型临床试验结果为阴性（Montastruc等，1992）。另一种NR2B拮抗剂CP 101,106可减轻MPTP治疗的非人灵长类动物和氟哌啶醇治疗的大鼠的肌强直和运动不能（Steece-Collier等，2000）。观察到几种结构不相关的拮抗剂都对含有NR2B亚基的NMDA受体具有亲和力，且均具有强效的抗帕金森病作用，这使得Ro 25-6981的作用不太可能是由于其作用于其他受体，特别是多巴胺受体所致。事实上，结合实验表明，Ro 25-6981对多巴胺受体的亲和力极低（Mutel等人，1998）。鉴于化合物Ro 25-6981能诱发对侧旋转，其多巴胺释放作用的可能性不大。
虽然化合物诱发6-OHDA损伤大鼠对侧旋转的能力通常被认为反映了其抗帕金森病活性（Kaakkola和Teravainen，1990），但大量观察表明，重复和间歇性给予左旋多巴会导致行为敏感化，表现为反应增强和反应时间缩短，这可以作为帕金森病患者长期左旋多巴治疗后出现运动障碍和药效减退现象的模型（Papa等，1994）。尽管这些大鼠不会出现明显的运动障碍，但长期左旋多巴治疗后出现的反应改变与晚期帕金森病患者的反应波动相似。该模型的有效性得到了其预测NMDA受体拮抗剂金刚烷胺抗运动障碍作用能力的支持（Papa等，1995；Verhagen等，1998）。由于6-OHDA损伤大鼠左旋多巴反应的可塑性改变与纹状体NR2B亚基的异常磷酸化存在因果关系，我们有兴趣研究Ro 25-6981在该模型中的作用。如本系列实验所示，慢性左旋多巴治疗导致旋转反应峰值增加，但旋转反应持续时间并未缩短。这一结果与Papa等（1994）发表的结果存在差异，可能是因为我们未使用左旋多巴甲酯。此外，我们采用了更为宽松的选择程序，使用了更高剂量的阿扑吗啡（0.1 mg/kg 对比 0.05 mg/kg），这可能导致纳入了部分 6-OHDA 损伤的大鼠（Papa 等，1994）。Ro 25-6981 降低了长期左旋多巴治疗的 6-OHDA 损伤大鼠的旋转反应峰值，表明 Ro 25-6981 对左旋多巴诱导的运动障碍和反应波动具有有益作用。
基于目前的结果，选择性拮抗含有 NR2B 亚基的 NMDA 受体足以在两种相关的帕金森病动物模型中诱导抗帕金森病效应。NR2B 拮抗剂（如 Ro 25-6981）可能对帕金森病患者有益，可单独使用或与标准多巴胺能药物联合用于帕金森病的治疗。 [1]

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似乎有可能，在P25动物中，随着刺激强度的增加，突触前NR2B/NMDAR的自身受体功能可以恢复，正如在癫痫成年患者中观察到的那样（Yang等人，2006）。因此，受NR2B/NMDAR调节的GABA释放活性（可能由高强度刺激恢复）可能无法被较低剂量（1 mg/kg）的Ro 25-6981完全阻断；因此，它可能导致单次诱发电位幅度的降低。此外，由于NR2B亚基在成年动物中主要表达于前脑（Loftis和Janowsky，2003），因此Ro 25-6981很可能在出生后第三周和第四周的大鼠中影响纯粹的皮层活动。
遗憾的是，目前我们尚无法解释Ro 25-6981对双脉冲刺激诱导的皮层增强或抑制完全没有影响的原因。原因可能在于刺激强度相对较低（两倍阈值）；相比之下，对单脉冲反应的影响主要在高刺激强度下观察到。
总之，我们的结果表明，选择性NR2B/NMDAR拮抗剂Ro 25-6981仅在出生后第二周的大鼠中对癫痫后放电（肌阵挛性癫痫模型）表现出明显的激活依赖性抗惊厥作用。因此，我们可以推断，在老年动物中，含有NR2B亚基的受体并不参与该模型中癫痫发作的发生。因此，Ro 25-6981或其他NR2B拮抗剂可能成为治疗未成熟大脑癫痫活动的有效药物。
该药物还能显著降低单脉冲刺激感觉运动皮层诱发的生理兴奋性，且这种作用与年龄无关，并且不影响双脉冲刺激诱发的皮层兴奋性。目前，我们尚无法完全解释Ro 25-6981的这种体内作用机制，需要进行进一步的实验。然而，含有NR2B亚基的NMDAR的激活水平及其定位可能在Ro 25-6981对皮层兴奋性的影响中发挥作用。 [2]NR2B亚基在疼痛和中枢敏化过程中发挥着重要作用（LoGrasso和McKelvy，2003）。NR2B亚基胞质C端有7个酪氨酸磷酸化位点，其中Tyr-1472是主要位点。其磷酸化对突触可塑性的改变和长时程增强（LTP）的发生具有显著影响。LTP和阿片类药物诱导的痛觉过敏（OIH）具有共同的药理学和信号转导通路（Drdla等，2009；Nakazawa等，2001）。许多研究表明，脊髓背角NR2B在Tyr-1472位点的酪氨酸磷酸化促进了神经病理性疼痛模型（Abe等，2005）和炎症性疼痛模型（Guo等，2002）中痛觉过敏的发生。因此，我们不仅观察到大鼠的行为变化，而且发现Ro 25-6981在切口疼痛和痛觉过敏的大鼠模型中具有镇痛作用。Western blot分析显示，鞘内注射Ro 25-6981可降低脊髓背角NR2B酪氨酸磷酸化水平，并减轻痛觉过敏。Ro 25-6981作为NR2B亚基的特异性拮抗剂，可能通过NR2B通路缓解切口疼痛和瑞芬太尼诱导的痛觉过敏。总之，行为学测试和Western blot分析表明，鞘内注射Ro 25-6981可显著减轻大鼠切口疼痛，并有效预防瑞芬太尼诱导的术后痛觉过敏。这些结果可能与抑制大鼠脊髓浅层NR2B的酪氨酸磷酸化有关。Ro 25-6981对大鼠运动功能的影响随剂量和药物代谢的不同而变化。尽管Ro 25-6981目前正在进行动物实验研究，但尚未进行临床应用。这些药物的作用机制可能为寻找更有效的切口疼痛和痛觉过敏的临床治疗方法提供思路。总之，我们的研究探讨了靶向NR2B在大鼠切口疼痛模型中的镇痛效果。我们的数据表明，靶向脊髓中的NR2B可能是一种治疗临床疼痛的新策略。[3]

C22H30CLNO2

375.937

375.197

C, 70.29; H, 8.04; Cl, 9.43; N, 3.73; O, 8.51

919289-58-0

Ro 25-6981 Maleate;1312991-76-6;Ro 25-6981;169274-78-6

11957690

Typically exists as solid at room temperature

4.756

43.7

3

3

6

26

366

2

Cl.C(C1CCN(CC(C)C(C2C=CC(O)=CC=2)O)CC1)C1C=CC=CC=1

MKTZWXWTQQOMSH-OTCZLQCGSA-N

InChI=1S/C22H29NO2.ClH/c1-17(22(25)20-7-9-21(24)10-8-20)16-23-13-11-19(12-14-23)15-18-5-3-2-4-6-18;/h2-10,17,19,22,24-25H,11-16H2,1H3;1H/t17-,22+;/m0./s1

4-[(1R,2S)-3-(4-benzylpiperidin-1-yl)-1-hydroxy-2-methylpropyl]phenol;hydrochloride

Ro 25-6981 HCl; Ro 25 6981 HCl; Ro 25-6981 hydrochloride; 635-602-8; 919289-58-0; Ro 25 6981 HCl; RO25-6981hydrochloride; Ro 25-6981 (hydrochloride); Ro 25 6981 hydrochloride hydrate; 4-[(1R,2S)-3-(4-benzylpiperidin-1-yl)-1-hydroxy-2-methylpropyl]phenol;hydrochloride; Ro 256981 HCl

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。