STF-118804

Nicotinamide Phosphoribosyl Transferase (NAMPT): STF-118804 is a highly specific inhibitor of NAMPT, a rate-limiting enzyme in the nicotinamide adenine dinucleotide (NAD⁺) biosynthesis salvage pathway. For MV411 cells, the IC₅₀ of STF-118804 is not explicitly given as a single value, but it inhibits cell viability with nanomolar potency (e.g., 100 nM induces significant apoptosis and NAD⁺ reduction) [1]

体外活性：STF-118804 降低含有 MLL 染色体翻译的 B-ALL 细胞系的活力，IC50 值在低纳摩尔范围内。此外，五名儿童 ALL 患者的白血病样本也对低纳摩尔范围内的 STF-118804 敏感。 STF-118804 诱导白血病 MV411 细胞凋亡，而没有事先的细胞周期停滞。激酶测定：NAMPT 和 NMNAT 的酶活性使用体外试剂盒并按照制造商的说明使用两步法进行测量。将化合物、NAMPT 和/或 NMNAT 酶及其底物混合并在 30°C 下孵育 1 小时。然后添加指示剂反应试剂 (Wst-1)，并在 Tecan Infinite M100 多模式酶标仪上于 30°C 下每 5 分钟读取 450 nm 处的吸光度。细胞测定：将人细胞系或谱系阴性脐带血细胞接种到96孔板中（每毫升6×105个细胞）。以逐渐增加的浓度添加化合物，并将细胞在 37°C/5% CO2 下孵育 72 小时。为了检测活力，以 1:10 稀释度添加 CellTiter-Blue 试剂，并将板在 37°C/5% CO2 下孵育 4 小时，然后在 Flexstation II 384 或 Synergy H1 读数器上以 555 nm 激发波长进行读数和590 nm的发射检测。细胞活力也可以通过 CellTiter-Fluor 来测量。以 1:2 稀释度添加细胞可渗透的荧光肽底物 GF-AFC 试剂，并将板在 37°C/5% CO2 下孵育 30 分钟，然后在 Synergy H1 读数器上以 380 nm 激发和发射进行读数505 nm 检测。在血细胞计数器上对脐带血细胞进行计数，并用台盼蓝排除染料评估细胞活力。使用 Prism 软件计算抑制浓度 (IC50)。将主要患者样本置于 96 孔板中，并在 37°C、5% CO2 下用浓度递增的 STF-118804 处理 48 小时。将 WST-1 试剂添加到培养基中（1:10 稀释），并使用 Bio-Rad 680 型酶标仪在 450 nm 处测量吸光度。

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抗白血病细胞活力抑制：STF-118804 对人 B 型急性淋巴细胞白血病（B-ALL）细胞系表现出纳摩尔级抑制活性。MV411 细胞经 STF-118804 处理 72 小时后，活力呈剂量依赖性降低（通过基于刃天青的 CellTiter-Blue 实验和基于活细胞蛋白酶活性的 CellTiter-Fluor 实验检测），在纳摩尔浓度下即可观察到显著抑制效果。STF-118804 的结构类似物活性降低或无活性，证实了构效关系（SAR）的特异性——例如，关键化学基团经修饰的类似物无法像 STF-118804 那样有效抑制 MV411 细胞活力 [1]
- 无细胞周期阻滞的凋亡诱导：100 nM STF-118804 可诱导 MV411 细胞凋亡，且无提前的细胞周期阻滞。流式细胞术分析（annexin V-FITC/碘化丙啶染色）显示，晚期凋亡细胞（双阳性）随时间依赖性增加，48~72 小时时显著积累。碘化丙啶染色显示，48 小时时出现亚 G₀ 群体（提示凋亡细胞），但 S/G₂/M 期细胞无减少（而异环磷酰胺会导致细胞周期阻滞）。Western blot 分析证实，MV411 和 SEM 白血病细胞经 100 nM STF-118804 处理 24~36 小时后，可检测到切割型 PARP（89 kDa，凋亡标志物）[1]
- NAMPT 靶点验证：通过 shRNA 敲低 NAMPT 可提高 MV411 细胞对 STF-118804 的敏感性。表达 NAMPT shRNA（4 种不同序列）的 MV411 细胞，其 STF-118804 IC₅₀ 低于空载体或海肾荧光素酶 shRNA（对照）转染细胞。qPCR 证实 shRNA 转染细胞中 NAMPT 转录本水平降低。相反，在 HEK293T 细胞中过表达野生型（wt）NAMPT 可挽救 STF-118804 介导的活力抑制，而无活性的突变型 NAMPT 则无法挽救，进一步证实 NAMPT 是 STF-118804 的特异性靶点 [1]
- NAD⁺ 生物合成抑制：STF-118804 在体外可特异性抑制 NAMPT 介导的 NAD⁺ 生成。在偶联酶实验（NAMPT + NMNAT）中，STF-118804 以剂量依赖性方式降低 NAD⁺ 形成（通过 450 nm 处 Wst-1 甲臜吸光度间接检测）。它不抑制 NAD⁺ 生物合成下游的 NMNAT 酶，也不抑制实验中其他无关酶（ADH、黄递酶）。烟酰胺酸（10 μM，可通过 Preiss-Handler 途径绕过 NAMPT）可挽救 STF-118804 处理后的 MV411 细胞活力，但无法挽救异环磷酰胺处理的细胞，证实 STF-118804 通过消耗 NAD⁺ 发挥作用 [1]

STF-118804（25 mg/kg，每天两次，皮下注射）可提高高危急性淋巴细胞白血病原位异种移植模型的存活率，并有效消除白血病起始细胞

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高危 ALL 原位异种移植模型：对 NOD scid gamma（NSG）小鼠进行亚致死剂量照射（2.5 Gy），随后移植表达萤火虫荧光素酶的 MV411 细胞（5×10⁶ 个）。移植后 2 周，将小鼠随机分为两组：（1）STF-118804 组（n=7）：皮下注射 50 mg/kg 分剂量 STF-118804，持续 20 天（第 14~34 天）；（2）溶剂组（n=5）：皮下注射溶剂，持续 20 天。STF-118804 显著延长小鼠生存期——治疗组比溶剂组平均多存活 34 天（P<0.001，对数秩检验）。生物发光成像显示，到第 36 天，STF-118804 治疗组小鼠无可检测到的肿瘤，且停药后疾病抑制至少持续 18 天，部分小鼠无复发 [1]
- 白血病干细胞（LSC）靶向作用：第 35 天时，有限稀释二次移植实验显示，STF-118804 治疗组小鼠的 LSC 频率（1/11744，95% CI：1/4480~1/30784）比溶剂对照组（1/1411，95% CI：1/600~1/3320）降低 8.3 倍。将 STF-118804 治疗组小鼠的骨髓接种到不含细胞因子的人甲基纤维素培养基（不支持小鼠祖细胞生长）中，白血病集落形成细胞数量显著少于溶剂组（P=0.03，Student’s t 检验）[1]

NAMPT-NMNAT 偶联酶 NAD⁺ 生成实验：实验体系包含 NAMPT（催化烟酰胺→烟酰胺单核苷酸 NMN）和 NMNAT（催化 NMN + ATP→NAD⁺）。向体系中加入不同浓度的 STF-118804，孵育后通过乙醇脱氢酶（ADH）将 NAD⁺ 转化为 NADH，NADH 进一步还原 Wst-1 生成甲臜，通过 450 nm 吸光度检测甲臜量，间接反映 NAD⁺ 生成量。与溶剂对照相比，吸光度降低表明 STF-118804 抑制 NAMPT 活性。为验证特异性，单独使用 NMNAT（以 NMN 为底物）重复实验，证实 STF-118804 - shRNA 介导的靶点验证实验：将超复杂 shRNA 慢病毒文库转染野生型 MV411 细胞，转染后的细胞经四轮 STF-118804 处理或传代（未处理对照）。通过高通量测序量化处理组与未处理组中 shRNA 的频率，发现 NAMPT shRNA 在 STF-118804 处理组中显著耗竭（与阴性对照 shRNA 相比），表明 NAMPT 敲低可增强细胞对 STF-118804 的敏感性。Mann-Whitney U 检验证实，两个独立重复实验中 NAMPT shRNA 耗竭具有统计学意义 [1]

白血病细胞活力实验：将人 B-ALL 细胞系（MV411、SEM 等）接种到 96 孔板中，用 STF-118804（0~1000 nM）或其类似物处理 72 小时。采用两种方法检测细胞活力：（1）CellTiter-Blue 实验（刃天青还原为荧光试卤灵，荧光法检测）；（2）CellTiter-Fluor 实验（活细胞蛋白酶活性，荧光法检测）。基于三次独立重复的三复孔实验数据，绘制剂量-效应曲线并计算 IC₅₀。阳性对照异环磷酰胺（25 nM）的活力检测方法相同 [1]
- 凋亡与细胞周期分析：用 100 nM STF-118804 或 25 nM 异环磷酰胺处理 MV411 细胞 0~72 小时。凋亡检测：用 annexin V-FITC（结合磷脂酰丝氨酸）和碘化丙啶（标记死细胞）染色细胞，流式细胞术量化早期（annexin V⁺/PI⁻）和晚期（annexin V⁺/PI⁺）凋亡细胞。细胞周期检测：固定、透化细胞后，用碘化丙啶（结合 DNA）染色，流式细胞术分析 G₀/G₁、S、G₂/M 期及亚 G₀（凋亡）群体 [1]
- 凋亡标志物 Western Blot 实验：用 100 nM STF-118804（24~36 小时）或 25 nM 异环磷酰胺（24 小时）处理 MV411 或 SEM 细胞，裂解细胞后通过 SDS-PAGE 分离蛋白质。用抗切割型 PARP（89 kDa，凋亡标志物）抗体和内参抗体（如 GAPDH）孵育印迹，化学发光法检测信号，量化条带强度以证实凋亡诱导 [1]
- NAMPT 挽救实验：将空载体、野生型 NAMPT 或突变型 NAMPT 构建体转染 HEK293T 细胞，转染后的细胞用 STF-118804（0~1000 nM）处理 72 小时。通过 CellTiter-Blue 或 CellTiter-Fluor 实验检测细胞活力，野生型 NAMPT 转染细胞（与空载体或突变型 NAMPT 相比）的活力恢复，证实 NAMPT 是 STF-118804 的靶点 [1]

20% [w/v] [2-羟丙基]-γ-环糊精/5% [v/v] DMSO；25 mg/kg，每日两次；皮下注射
移植MV411细胞的ALL原位异种移植模型

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MV411 ALL细胞原位异种移植：NSG小鼠接受2.5 Gy亚致死剂量照射以抑制免疫功能。一天后，小鼠静脉注射5×10⁶个稳定表达萤火虫荧光素酶的MV411细胞（用于生物发光成像）。移植后两周，根据基线生物发光强度将小鼠随机分为两组（以确保肿瘤负荷平衡）：（1）载体组（n=5）：皮下注射载体（配方未指定），持续20天（第14-34天）； (2) STF-118804组 (n=7)：皮下注射50 mg/kg STF-118804（分次给药，给药频率未指定），持续20天。每周进行生物发光成像以监测肿瘤生长。当小鼠出现疾病症状（例如体重减轻、嗜睡）时，对其进行安乐死，并记录存活情况。对于二次移植：从初次治疗小鼠（第35天）中采集骨髓，并将有限稀释度（1×10³–1×10⁶个细胞）注射到新的NSG小鼠体内。根据肿瘤植入情况，通过泊松统计计算LSC频率[1]
- 白血病集落形成试验：在初次移植后第35天，从STF-118804治疗组 (n=8) 和载体治疗组 (n=6) 小鼠中采集骨髓。将全骨髓接种于人骨髓培养液（不含细胞因子，以排除小鼠祖细胞生长）中，培养14天。计数集落，并使用学生t检验比较各组小鼠白血病集落形成细胞的数量[1]。

[1]. Next-generation NAMPT inhibitors identified by sequential high-throughput phenotypic chemical and functional genomic screens. Chem Biol. 2013 Nov 21;20(11):1352-63.

STF-118804是通过对小分子库进行连续高通量表型化学筛选和超复杂shRNA筛选（以验证靶点）而发现的。表型筛选鉴定出STF-118804是一种针对ALL细胞的细胞毒性化合物，而shRNA筛选证实NAMPT是其作用机制靶点[1]
- NAMPT是NAD⁺补救途径中的关键酶，该途径对NAD⁺依赖性生化过程（例如能量代谢、DNA修复）至关重要。 STF-118804 通过抑制 NAMPT 耗竭细胞内 NAD⁺，导致 ALL 细胞凋亡，尤其针对白血病干细胞，这些干细胞通常对传统化疗耐药 [1]。STF-118804 对 NAMPT 具有高度特异性：它不抑制 NAD⁺ 生物合成中的其他酶（例如 NMNAT）或无关酶（ADH、二氢黄酶），并且其细胞毒性可被烟酸（可绕过 NAMPT）逆转。这种特异性使其成为研究癌症中 NAMPT 依赖性通路的重要工具 [1]。

C25H23N3O4S

461.53

461.14

894187-61-2

20916937

White to light yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

1.609

3.08

110.54

1

6

7

33

739

0

DLFCEZOMHBPDGI-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H23N3O4S/c1-17-5-11-22(12-6-17)33(30,31)16-23-18(2)32-25(28-23)21-9-7-20(8-10-21)24(29)27-15-19-4-3-13-26-14-19/h3-14H,15-16H2,1-2H3,(H,27,29)

4-[5-methyl-4-[(4-methylphenyl)sulfonylmethyl]-1,3-oxazol-2-yl]-N-(pyridin-3-ylmethyl)benzamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。