Tetrahydrouridine (THU; NSC-112907)

别名: THU, NSC 112907; NSC-112907; TETRAHYDROURIDINE; 18771-50-1; 3,4,5,6-Tetrahydrouridine; NSC-112907; 0NIZ8H6OL8; Uridine, 3,4,5,6-tetrahydro-; NSC-112907-D; U 23284; NSC112907. 四氢尿苷
目录号: V5133 纯度: ≥98%
四氢尿苷是一种合成的嘧啶核苷类似物,是一种新型、有效的胞苷脱氨酶 (CDA) 抑制剂,具有生物调节活性,它比内在胞苷更有效地竞争性阻断酶的活性位点。
Tetrahydrouridine (THU; NSC-112907) CAS号: 18771-50-1
产品类别: New7
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纯度: ≥98%

产品描述
四氢尿苷是一种合成的嘧啶核苷类似物,是一种新型高效的胞苷脱氨酶 (CDA) 抑制剂,具有生物调节活性。它比胞苷更有效地竞争性阻断该酶的活性位点。四氢尿苷通过抑制脱氧胞苷单磷酸 (dCMP) 脱氨酶,防止胞苷代谢物 5-氯-2'-脱氧胞苷单磷酸 (CldCMP) 过早脱氨生成 5-氯-2'-脱氧尿苷单磷酸 (CldUMP),从而提高放射增敏剂胞苷 (5-氯-2'-脱氧胞苷) 的疗效;进而提高肿瘤中 CldUMP 的浓度,CldUMP 随后被进一步代谢并以 CldU (5-氯-2'-脱氧尿苷) 的形式选择性地掺入肿瘤 DNA 中。四氢尿苷(THU;NSC-112907),CAS号18771-50-1,是一种合成的嘧啶核苷类似物,可作为胞苷脱氨酶(CDA)的强效抑制剂。它能比胞苷更有效地竞争性阻断该酶的活性位点。THU具有生物调节活性,可通过抑制其他核苷类似物(例如地西他滨)的脱氨作用来提高其疗效。该化合物的分子式为C9H16N2O6,分子量为248.24。
生物活性&实验参考方法
靶点
CDA/Cytidine deaminase
The primary target of Tetrahydrouridine is cytidine deaminase (CDA). CDA is an enzyme that catalyzes the deamination of cytidine and its nucleoside analogs, converting them to inactive uridine derivatives. THU is a potent inhibitor of CDA, with Ki values of 54 nM for the human enzyme and 240 nM for the E. coli enzyme. By inhibiting CDA, THU prevents the metabolism of cytidine analogs, thereby increasing their bioavailability and efficacy.
体外研究 (In Vitro)
当吉西他滨和阿糖胞苷等细胞毒性脱氧胞苷类似物被代谢时,胞苷脱氨酶(CDA)的特异性抑制剂四氢尿苷(THU)可阻止脱氨作用。本研究采用联合治疗方案,探讨四氢尿苷对吉西他滨介导的肺癌细胞和胰腺癌细胞抗癌作用的影响。正如预期,经100 µM四氢尿苷处理后,BxPC-3和H441细胞中CDA表达升高,导致吉西他滨敏感性增强。BxPC-3和H441细胞系的敏感性分别提高了2.1倍和4.4倍。然而,尽管CDA表达水平极低,MIAPaCa-2和H1299细胞却表现出令人惊讶的高吉西他滨敏感性。MIAPaCa-2和H1299细胞的IC50值分别提高了2.2倍和2.3倍。然而,Panc-1 和 H322 细胞的药物敏感性并未表现出任何显著改变。这些结果表明,四氢尿苷(THU)能够增强某些肺癌和胰腺癌细胞对吉西他滨诱导的细胞死亡的敏感性,且这种增强作用独立于 CDA 的表达水平。四氢尿苷在不诱导细胞凋亡的情况下抑制 S 期[1]。四氢尿苷 (THU) 是一种特性明确且强效的胞苷脱氨酶 (CDA) 抑制剂。高表达的 CDA 可催化并灭活胞苷类似物,最终导致吉西他滨耐药性增加。因此,THU 与吉西他滨的联合疗法被认为是治疗 CDA 高表达肿瘤的一种潜在且有前景的疗法。在本研究中,我们发现 THU 具有一种独立于 CDA 表达的抑制细胞生长的替代机制。三种不同的癌细胞系(MIAPaCa-2、H441 和 H1299)在单独使用 THU 后均表现出细胞增殖减少,而敲低 CDA 则不受影响。为了研究 THU 诱导细胞生长抑制的机制,我们进行了流式细胞术细胞周期分析。该分析显示,THU 导致 G1 期细胞比例增加,而 S 期细胞比例减少。同样,Ki-67 染色进一步证实了 THU 抑制细胞增殖。我们还发现,THU 通过抑制 E2F1 来调控 G1/S 期细胞周期检查点的进程。因此,由于 THU 既能抑制 CDA 又能抑制某些类型胰腺癌细胞的生长,THU 联合吉西他滨的治疗方案可能比之前认为的更有效。 [1]
四氢尿苷是胞苷脱氨酶的强效抑制剂,对人源酶的Ki值为54 nM,对大肠杆菌酶的Ki值为240 nM。它比胞苷本身更有效地竞争性阻断酶的活性位点。四氢尿苷可用作生物调节剂,通过抑制胞苷类似物(如地西他滨)的脱氨作用并提高其细胞内浓度,从而增强这些药物的疗效。
体内研究 (In Vivo)
一只雄性动物和八只雌性动物在接受 167 mg/kg 四氢尿苷 (THU) 后,又接受了 1.0 mg/kg 地西他滨 (DAC) 治疗后死亡。在计划终止实验后存活的动物大多无症状,且在接受高达 1.0 mg/kg DAC 和 167 mg/kg 四氢尿苷联合治疗的动物中,体重、食物消耗量、临床化学指标或尿液分析均未观察到变化 [2]。地西他滨(5-氮杂-2'-脱氧胞苷;DAC)联合四氢尿苷 (THU) 是一种潜在的镰状细胞病和 β-地中海贫血口服疗法。一项小鼠研究评估了该联合疗法的安全性,该研究采用灌胃法,在给予 DAC 前 1 小时给予 THU,每周连续 2 天,持续长达 9 周,随后进行 28 天的恢复期,以支持其长达 9 周的临床试验。四氢尿苷(THU)是一种胞苷脱氨酶的竞争性抑制剂,本研究将其与DAC联合使用,以提高DAC的口服生物利用度。给药方案包括:先给予167 mg/kg THU,随后分别给予0、0.2、0.4或1.0 mg/kg DAC;先给予THU赋形剂,随后给予1.0 mg/kg DAC;或仅给予赋形剂。评估的终点指标包括临床观察、体重、食物消耗量、临床病理学、大体/组织病理学、骨髓微核以及毒代动力学。未观察到与治疗相关的体重、食物消耗量、血清生化指标或尿液分析参数的变化。血浆DAC水平的变化与剂量和性别相关,并在1小时内达到峰值浓度(Cmax)。在所测试的1 mg/kg剂量下,与单独使用DAC相比,THU使血浆DAC浓度升高约10倍。接受高剂量(1 mg/kg)DAC + THU治疗的雌性动物出现严重毒性反应,需在第5周停止治疗。显微镜下观察到的病变严重程度和发生率呈剂量依赖性增加;病变包括骨髓细胞减少(伴有相应的血液学改变,包括白细胞、红细胞、血红蛋白、血细胞比容、网织红细胞、中性粒细胞和淋巴细胞减少)、胸腺/淋巴细胞耗竭、肠道上皮细胞凋亡和睾丸退化。骨髓微核分析证实了骨髓细胞毒性、红细胞生成抑制和遗传毒性。恢复期后,观察到这些影响完全消退或趋于消退。总之,联合疗法导致对地西他滨(DAC)毒性的敏感性增加,且与DAC血浆浓度相关,女性比男性更敏感。[2]
在体内,四氢尿苷(THU)抑制地西他滨(5-氮杂-2'-脱氧胞苷)的代谢,地西他滨是一种用于癌症治疗的胞苷类似物。THU通过抑制胞苷脱氨酶,阻止地西他滨的脱氨作用,从而提高血浆浓度并改善疗效。该化合物已被用于提高肿瘤细胞对放射疗法的敏感性。现有文献中未提供动物模型中具体的体内疗效数据。
酶活实验
Ki-67染色[1]
进行免疫细胞化学(ICC)时,将细胞以20-30%的汇合度接种于腔室载玻片上。孵育12小时后,加入100 µM四氢尿苷(THU),持续4天。ICC实验步骤在用4%多聚甲醛PBS溶液固定细胞15分钟后进行。为进行细胞膜通透化,将样品用含0.3% Triton X-100的PBS溶液孵育10分钟。然后用含1% BSA的PBS溶液封闭细胞60分钟。在用二抗(羊抗兔抗体)孵育60分钟前,将样品与Ki-67抗体在封闭缓冲液中孵育90分钟。将玻片用链霉亲和素-生物素复合物试剂处理30分钟,然后用0.4%二氨基联苯胺(DAB)/H₂O₂显色。染色过程的所有步骤均在室温下进行,玻片用PBS缓冲液洗涤。DAB反应终止后,将玻片封片,并在光学显微镜下进行分析。ICC染色的评估方法是在400倍放大倍率下,对整个细胞区域内1000个细胞的所有阳性反应进行计数。
胞苷脱氨酶-siRNA的瞬时转染[1]
为了敲低MIAPaCa-2、H441和H1299细胞中CDA的表达,将所有细胞以70-80%的汇合度接种于6孔板中。两种胞苷脱氨酶siRNA和一种阴性对照siRNA均购自商业渠道。所有siRNA均使用Lipofectamine 2000以每孔60 nM的终浓度分别转染至各细胞系中。为检测mRNA水平,细胞培养48小时后收集,进行实时PCR分析。转染12小时后,按照上述步骤测定细胞生长情况。我们还通过增殖实验检测了CDA抑制剂联合四氢尿苷(THU)处理是否优于单独使用THU。将转染细胞接种于96孔板中过夜,并加入100 µM THU。如上所述,分别于第0、2和4天测量OD值。免疫印迹分析[1]
为了评估四氢尿苷(THU)是否在蛋白水平上影响细胞周期相关因子,我们进行了蛋白质印迹实验。加入 100 µM THU 或 PBS(作为对照)四天后,使用含蛋白酶抑制剂的 RIPA 缓冲液从细胞沉淀中提取蛋白质。使用 Bio-Rad 蛋白测定试剂盒测定蛋白质浓度。等量的总蛋白在还原条件下通过 SDS-PAGE 凝胶进行分离。然后将蛋白质转移至聚偏二氟乙烯 (PVDF) 膜上,并用 5% 脱脂奶粉(溶于 TBS-Tween)封闭。随后,将膜与稀释度为 1:1000 的 E2F1 和 β-actin 一抗孵育。之后,使用稀释度为 1:5000 的辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的二抗进行孵育。使用 SuperSignal West 化学发光溶液进行显色。
四氢尿苷的 CDA 抑制试验包括将该化合物与重组人或大肠杆菌胞苷脱氨酶在底物(例如胞苷或 [³H]-胞苷)存在下孵育。反应在针对 CDA 优化的缓冲液中进行。孵育后,使用高效液相色谱法 (HPLC) 或放射性测定法定量脱氨产物(尿苷)的量。使用适当的酶动力学模型,根据抑制曲线计算 Ki 值。
细胞实验
吉西他滨化疗敏感性与四氢尿苷 (THU) 的比较 [1]
药物敏感性测定基本按照先前报道的方法进行。将细胞以 2,500~5,000 个细胞/孔的密度接种于 96 孔板中,每个浓度设置三个复孔。孵育 12 小时后,用吉西他滨(起始浓度为 100 µM)进行 4 倍系列稀释,并在 37°C 下孵育 96 小时,同时加入或不加入 THU,以此测定细胞活力。为评估细胞活力,所有细胞均用 25% 戊二醛在室温下固定 30 分钟,然后用 200 µl 0.05% 亚甲蓝染色 20 分钟。用 0.33 M HCl 洗脱染料 20 分钟并振荡。使用酶标仪在 598 nm 波长处测量吸光度。计算细胞生长50%抑制浓度(IC50)。
细胞生长测定[1]
采用亚甲蓝比色法,在96孔板中以5000个细胞/孔的密度进行胰腺癌和肺癌细胞系的细胞生长测定。细胞分别暴露于或不暴露于四氢尿苷(THU),以最初12小时为第0天。连续四天,每个处理重复三次,取三个不同孔的平均值。
流式细胞术细胞周期分析[1]
进行流式细胞术细胞周期分析时,将细胞以60%汇合度接种于10 cm培养皿中。12小时后,向每个培养皿中加入100 µM四氢尿苷(THU),持续三天。随后,使用胰蛋白酶-EDTA(0.25%胰蛋白酶;0.02% EDTA)在37°C下消化2至5分钟,将细胞解离,转移至15 mL离心管中,并用PBS洗涤三次。之后,将细胞在4°C下用70%乙醇固定过夜,再次用PBS洗涤,并重悬于PBS-Triton X-100(0.1%)溶液中。同时,用RNaseA处理细胞,并用碘化丙啶染色。使用FACS Calibur流式细胞仪测定细胞周期状态,并使用FlowJo-887软件进行分析。
为了评估四氢尿苷对胞苷类似物疗效的影响,将细胞(例如癌细胞系)单独或与四氢尿苷联合用胞苷类似物(例如地西他滨)处理。72小时后,使用MTT或SRB法检测细胞活力。 THU对胞苷类似物细胞毒性的增强作用以敏感性倍数增加表示。也可测定核苷类似物活性磷酸化形式的细胞内水平来验证其作用机制。
动物实验
实验设计[2] 如表1所示,小鼠被随机分为四个剂量组和一个溶剂对照组。在给予四氢尿苷(THU)或其溶剂(剂量为10 mL/kg)后1小时±5分钟,小鼠灌胃给予地西他滨(5-氮杂-2'-脱氧胞苷;DAC)或其溶剂。DAC剂量的选择基于一项剂量范围探索研究,该研究中小鼠能够耐受每周两次、每次两次的0.1、0.2和0.4 mg/kg DAC,并同时接受固定剂量167 mg/kg的四氢尿苷(THU)。THU的固定剂量(500 mg/m²)以及THU和DAC给药之间的最佳时间间隔(60分钟)的选择基于既往研究11。将小鼠体表面积剂量(毫克/平方米)转换为每公斤体重剂量(毫克/公斤)是基于美国食品药品监督管理局(FDA)发布的指南中小鼠的米氏常数(km)值。简而言之,将小鼠体表面积剂量(毫克/平方米,500 mg/m²)除以km值3,即可转换为每公斤体重剂量(毫克/公斤,167 mg/kg)。该指南中小鼠的工作体重范围为11-34克;本研究中使用的小鼠体重范围为24-38克。毒代动力学[2] 在每个采集日之前,向每个样本采集管中加入10 μL/管浓度为10 mg/mL的四氢尿苷(THU)溶液。在研究第1天(第2至5组)和第58天(除第4组雌性外,第2至5组),通过心脏穿刺从未禁食、麻醉的毒物动力学动物中采集血样(约0.5 mL)。分别于给药地西他滨(5-氮杂-2'-脱氧胞苷;DAC)后15、30、60、90、120和180分钟采集血样,每个时间点每组每性别各3只动物。由于第4组雌性动物死亡,在研究第38天对前5只存活动物进行尸检,并在给药DAC后15、30和120分钟分别从每组3只雌性动物中采集血样。所有样本均在目标时间点后5分钟内采集。
现有文献中未详细描述四氢尿苷的具体体内动物实验方案。然而,在动物模型中,该化合物通常与胞苷类似物联合使用。典型的研究包括向荷瘤小鼠施用THU和/或胞苷类似物,并测量肿瘤生长抑制情况。同时评估该化合物增强胞苷类似物疗效的能力。
药代性质 (ADME/PK)
现有资料中未提供四氢尿苷的具体药代动力学数据。该化合物是一种小分子,分子量为248.24。标准的药代动力学研究通常包括给动物服用该化合物,并使用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定其血浆浓度随时间的变化,以确定关键的药代动力学参数。四氢尿苷常与其他药物联合使用,其药代动力学特性也可在此背景下进行研究。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
犬LD50:未报道 >1 g/kg,《药物化学杂志》,10(423),1976。
猴LD50:未报道 >1 g/kg,《药物化学杂志》,10(423),1976。
犬LD50:静脉注射 >1 g/kg,美国国家技术信息服务中心,PB211-590。
现有资料中未提供四氢尿苷的具体毒性数据。作为一种研究化合物,它仅供实验室使用,未获准作为单一药物用于人类治疗。然而,它已在临床上与其他药物联合使用,表明其具有良好的安全性。处理该化合物时应遵循标准安全预防措施。
参考文献

[1]. Tetrahydrouridine inhibits cell proliferation through cell cycle regulation regardless of cytidine deaminase expression levels. PLoS One. 2012;7(5):e37424.

[2]. Subchronic oral toxicity study of decitabine in combination with tetrahydrouridine in CD-1 mice. Int J Toxicol. 2014 Mar-Apr;33(2):75-85.

其他信息
四氢尿苷已用于多种疾病的治疗试验,包括肺癌、乳腺癌、镰状细胞病和头颈癌。四氢尿苷是一种生物调节合成嘧啶核苷类似物。它通过抑制脱氧胞苷单磷酸(dCMP)脱氨酶,增强放射增敏剂细胞氯(5-氯-2'-脱氧胞苷)的疗效,从而防止细胞氯代谢物5-氯-2'-脱氧胞苷单磷酸(CldCMP)过早脱氨生成5-氯-2'-脱氧尿苷单磷酸(CldUMP)。这反过来会增加肿瘤中CldUMP的浓度,CldUMP随后进一步代谢并以CldU(5-氯-2'-脱氧尿苷)的形式选择性地掺入肿瘤DNA中。(NCI04)核苷酸代谢抑制剂。晚期胰腺癌的二线化疗方案是一个亟待解决的紧迫临床问题。本研究表明,四氢尿苷 (THU) 对某些肿瘤细胞系具有双重作用:A) 它本身具有细胞毒性;B) 无论 CDA 表达水平高低,它都能通过 E2F1 增强吉西他滨的细胞毒性。因此,无论 CDA 表达水平如何,四氢尿苷 (THU) 至少可以提高某些吉西他滨耐药细胞对吉西他滨的敏感性。重要的是,四氢尿苷 (THU) 已应用于临床,其安全性已得到证实,且价格比新开发的分子靶向药物更合理。需要进一步研究以确定哪些细胞类型适合使用 THU 治疗来控制细胞增殖。由于 THU 在体内稳定性更高,联合治疗可能比现有治疗方案更可行、更有效,尤其适用于晚期胰腺癌。[1] 总之,与单独使用 DAC 相比,联合治疗可提高对 DAC 诱导毒性的敏感性,这与 DAC 的血浆浓度有关。所有DAC治疗组的DAC Cmax均在预期引起细胞毒性的范围内(> 0.5 μM)。雌性小鼠的Cmax高于雄性小鼠,且对DAC更敏感。此外,血液学效应似乎是临床试验中最敏感的安全性生物标志物,适合进行监测。治疗相关效应在恢复期结束时要么完全消退,要么呈现消退趋势。这种联合疗法的口服给药途径似乎有望用于镰状细胞病和β-地中海贫血的临床评估。因此,目前在CD-1小鼠中的研究获得了与四氢尿苷(THU)和DAC联合口服疗法在人体治疗应用相关的重要毒性参数。[2]四氢尿苷也称为THU和NSC-112907。它是一种合成的嘧啶核苷类似物,也是胞苷脱氨酶(CDA)的强效抑制剂。它比胞苷更有效地竞争性阻断该酶的活性位点。 THU具有生物调节活性,可用于提高其他核苷类似物的疗效。该化合物的CAS号为18771-50-1,纯度≥98%,仅供研究用途。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C9H16N2O6
分子量
248.23314
精确质量
248.1
元素分析
C, 43.55; H, 6.50; N, 11.29; O, 38.67
CAS号
18771-50-1
相关CAS号
Tetrahydrouridine dihydrate;Tetrahydrouridine-d3
PubChem CID
29243
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.6±0.1 g/cm3
沸点
668.6±55.0 °C at 760 mmHg
闪点
358.2±31.5 °C
蒸汽压
0.0±4.6 mmHg at 25°C
折射率
1.632
LogP
-1.85
tPSA
130.33
氢键供体(HBD)数目
5
氢键受体(HBA)数目
6
可旋转键数目(RBC)
2
重原子数目
17
分子复杂度/Complexity
301
定义原子立体中心数目
4
SMILES
C1CN(C(=O)NC1O)[C@H]2[C@@H]([C@@H]([C@H](O2)CO)O)O
InChi Key
UCKYOOZPSJFJIZ-XVKVHKPRSA-N
InChi Code
InChI=1S/C9H16N2O6/c12-3-4-6(14)7(15)8(17-4)11-2-1-5(13)10-9(11)16/h4-8,12-15H,1-3H2,(H,10,16)/t4-,5?,6-,7-,8-/m1/s1
化学名
1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)-4-hydroxytetrahydropyrimidin-2(1H)-one
别名
THU, NSC 112907; NSC-112907; TETRAHYDROURIDINE; 18771-50-1; 3,4,5,6-Tetrahydrouridine; NSC-112907; 0NIZ8H6OL8; Uridine, 3,4,5,6-tetrahydro-; NSC-112907-D; U 23284; NSC112907.
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 4.0285 mL 20.1426 mL 40.2852 mL
5 mM 0.8057 mL 4.0285 mL 8.0570 mL
10 mM 0.4029 mL 2.0143 mL 4.0285 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
Rational EpigenetiC Immunotherapy for SEcond Line Therapy in Patients With NSCLC: PRECISE Trial
CTID: NCT02664181
Phase: Phase 2
Status: Completed
Date: 2024-09-03
To Study the Oral Bioavailability of a New Combination Formation of Decitabine and Tetrahydrouridine in Healthy Males
CTID: NCT05816356
Phase: Phase 1
Status: Recruiting
Date: 2023-09-07
Oral Decitabine and Tetrahydrouridine as Epigenetic Priming for Pembrolizumab-Mediated Immune Checkpoint Blockade in Patients With Inoperable, or Unresectable Locally Advanced or Metastatic Non-Small Cell Lung Cancers and Esophageal Carcinomas
CTID: NCT03233724
Phase: Phase 1/Phase 2
Status: Terminated
Date: 2023-05-31
Imaging Study for FdCyd and THU Cancer Treatment
CTID: NCT01479348
Phase: Early Phase 1
Status: Terminated
Date: 2020-06-02
A Multi-Histology Phase II Study of 5-Fluoro-2'-Deoxycytidine With Tetrahydrouridine (FdCyd + THU)
CTID: NCT00978250
Phase: Phase 2
Status: Completed
Date: 2019-12-27
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