| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
cytidine deaminase (CDA)[1]
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
四氢尿苷 (THU) 是一种特殊的胞苷脱氨酶 (CDA) 抑制剂，可抑制细胞毒性脱氧胞苷类似物（例如吉西他滨和 ara-C）分解代谢过程中的脱氨作用。联合疗法用于检查四氢尿苷对吉西他滨介导的肺癌和胰腺细胞抗肿瘤活性的影响。正如预期的那样，经过 100 µM 四氢尿苷处理后，BxPC-3 和 H441 中 CDA 表达升高，从而导致吉西他滨敏感性增加。 BxPC-3 和 H441 细胞系的灵敏度分别提高了 2.1 倍和 4.4 倍。相反，H1299和MIAPaCa-2细胞出乎意料地表现出CDA表达减少和吉西他滨敏感性增加。 MIAPaCa-2 和 H1299 细胞中的 IC50 分别变化 2.2 和 2.3 倍。然而，Panc-1 和 H322 细胞的药物敏感性没有明显差异。这些发现表明，与 CDA 表达水平无关，四氢尿苷可以使一些肺癌和胰腺癌细胞对吉西他滨诱导的细胞死亡敏感。四氢尿苷抑制 S 期，但不会引起细胞凋亡[1]。
四氢尿苷（THU）是一种有效的胞苷脱氨酶（CDA）抑制剂。高表达的CDA催化胞苷类似物并使其失活，最终导致吉西他滨耐药性增加。因此，四氢大麻素和吉西他滨的联合治疗被认为是治疗高表达CDA肿瘤的一种有潜力和前景的治疗方法。在本研究中，我们发现THU具有一种不依赖于CDA表达的抑制细胞生长的机制。三种不同的癌细胞系（MIAPaCa-2， H441和H1299）在单独给药THU后表现出细胞增殖下降，而敲除CDA则不受影响。为探讨thu诱导的细胞生长抑制机制，采用流式细胞术进行细胞周期分析。分析表明，THU使g1期发生率升高，而s期发生率降低。同样，Ki-67染色进一步支持THU降低细胞增殖。我们还发现THU通过抑制E2F1在G1/S检查点调节细胞周期进程。因此，THU和吉西他滨联合治疗胰腺癌可能比以前认为的更有效，因为THU作为CDA抑制剂，以及某些类型胰腺癌细胞的细胞生长抑制剂。［１］ |
| 体内研究 (In Vivo) |
当给予 167 mg/kg 四氢尿苷 (THU) 和 1.0 mg/kg DAC 时，一只雄性动物和八只雌性动物死亡。存活到预定终止时间的动物通常没有症状，并且对于动物进行高达 1.0 mg/kg 的 DAC 与 167 mg/kg 四氢尿苷的治疗，在体重、食物消耗、临床化学方面没有发现与治疗相关的变化，或尿液分析[2]。
Decitabine (5-aza-2脱氧胞苷;DAC)联合四氢尿苷（THU）是一种治疗镰状细胞病和β-地中海贫血的潜在口服疗法。在小鼠中进行了一项研究，以评估这种联合治疗的安全性，方法是在DAC前1小时口服DAC和THU，连续2天/周，持续9周，然后恢复28天，以支持其临床试验长达9周的持续时间。四氢尿苷，胞苷脱氨酶的竞争性抑制剂，被用于联合提高DAC的口服生物利用度。剂量为167 mg/kg THU，随后是0,0.2,0.4或1.0 mg/kg DAC；THU载药后加入1.0 mg/kg DAC；或者车辆本身。评估的终点是临床观察、体重、食物消耗、临床病理、大体/组织病理、骨髓微核和毒性动力学。在体重、食物消耗、血清化学或尿液分析参数方面没有发现与治疗相关的影响。血浆DAC水平的剂量和性别依赖性变化在1小时内达到Cmax。在测试的1mg /kg剂量下，与单独使用DAC相比，THU增加了DAC的血浆浓度（~ 10倍）。接受高剂量1 mg/kg DAC + THU的女性出现严重毒性，需要在第5周停止治疗。显微镜检查结果的严重程度和发生率呈剂量依赖性增加；结果包括骨髓细胞减少（伴随相应的血液学改变，白细胞、红细胞、血红蛋白、红细胞压积、网状细胞、中性粒细胞和淋巴细胞减少）、胸腺/淋巴细胞减少、肠上皮细胞凋亡和睾丸变性。骨髓微核分析证实骨髓细胞毒性，抑制红细胞生成和遗传毒性。在恢复期之后，观察到这些影响完全或有缓解的趋势。总之，联合治疗导致DAC毒性敏感性增加，与DAC血浆水平相关，女性比男性更敏感。[2] |
| 酶活实验 |
Ki-67染色[1]
为了进行免疫细胞化学（ICC），将细胞以20-30%的合流度接种在室内载玻片中。孵育12 h后，加入100µM tetrahydrouridine (THU)孵育4 d。用4%多聚甲醛将细胞样品固定在PBS中15分钟后，进行ICC程序。为了使样品具有渗透性，将样品在含有0.3% Triton X-100的PBS中孵育10分钟。细胞用含有1% BSA的PBS阻断液处理60分钟。样品与Ki-67抗体在阻断缓冲液中孵育90分钟，然后用山羊抗兔二级抗体孵育60分钟。载玻片用链亲和素-生物素复合物试剂处理30分钟，用0.4%二氨基联苯胺(DAB)/H2O2孵育。染色过程的所有阶段都在室温下进行，载玻片在PBS中洗涤。停止DAB反应后，将载玻片安装在光镜下分析。在全细胞面积400倍放大下，计数1000个细胞中所有阳性反应，评价ICC染色效果。 胞苷脱氨酶-siRNA [1] 瞬时转染 为了降低CDA在MIAPaCa-2、H441和H1299细胞中的表达，将所有细胞以70-80%的合流度接种于6孔板中。两个胞苷脱氨酶和一个阴性对照sirna从商业上购买。用Lipofectamine 2000在每个细胞系中分别转染所有sirna，最终浓度为每孔60 nM。为了测量mRNA水平，将细胞孵育48小时，然后收获用于实时PCR分析。转染12小时后，按照上述程序大纲测定细胞生长情况。我们还使用增殖试验测试了CDA抑制加tetrahydrouridine (THU)处理是否超过THU单独处理的效率。转染后的细胞在96孔板中接种过夜，加入100µM的THU。如上所述，在第0、2、4天测量OD。 免疫印迹分析[1] 为了评估tetrahydrouridine (THU)是否在蛋白水平上影响细胞周期相关因子，我们进行了western blotting。加入100µM THU或PBS作为对照4天后，用含有蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液从细胞颗粒中提取蛋白质。采用Bio-Rad蛋白测定液测定蛋白浓度。在还原条件下，用SDS-PAGE凝胶分离等量的总蛋白。然后将蛋白质转移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上，然后在TBS-Tween中用5%脱脂牛奶阻断。然后用抗E2F1和β-肌动蛋白的一抗按1∶1000稀释孵育膜。采用辣根过氧化物酶（HRP）偶联二抗，稀释倍数为1∶5000。使用SuperSignal West化学发光溶液实现可视化。 |
| 细胞实验 |
吉西他滨化学敏感性tetrahydrouridine (THU) [1]
药物敏感性试验基本上按照以前的报告所述进行。细胞接种于96孔板中，2500 ~ 5000个细胞/孔，一式三次。孵育12小时后，用4倍连续稀释的吉西他滨（从100µM开始）处理细胞，在37℃加或不加THU孵育96小时，以25%戊二醛在室温下固定30分钟，然后用200µl 0.05%亚甲基蓝染色20分钟，以0.33 M HCl搅拌洗脱染料20分钟，测定细胞活力。在598 nm处用酶标仪测定吸光度。计算50%细胞生长抑制浓度（IC50）。 细胞生长试验[1] 采用亚甲基蓝比色法在96孔板中以5000个细胞/孔的密度进行胰腺癌和肺癌细胞系的细胞生长。细胞分别暴露于或未暴露于tetrahydrouridine (THU)，前12小时为第0天。从三个不同的井中分三次计算平均值，持续四天。 流式细胞术分析细胞周期[1] 为了用流式细胞术分析细胞周期，将细胞以60%的合流度接种在10厘米的培养皿中。12 h后，每个培养皿中加入100µMtetrahydrouridine (THU)，连续3天。然后用胰蛋白酶- edta(胰蛋白酶0.25%；EDTA 0.02%)在37℃下静置2 ~ 5min，转移至15ml管中，PBS洗涤三次。然后将细胞在4°C 70%乙醇中固定过夜，然后用PBS再次洗涤，并在PBS-triton- x100（0.1%）中重悬。同时用RNaseA处理细胞，并用碘化丙啶染色。使用FACS口径流式细胞仪测定细胞周期状态，并使用FlowJo-887软件进行分析。 |
| 动物实验 |
实验设计[2] 如表1所示，小鼠被随机分为四个剂量组和一个溶剂对照组。在给予四氢尿苷（THU）或其溶剂（剂量为10 mL/kg）后1小时±5分钟，小鼠灌胃给予地西他滨（5-氮杂-2'-脱氧胞苷；DAC）或其溶剂。DAC剂量的选择基于一项剂量范围探索研究，该研究中小鼠能够耐受每周两次、每次两次的0.1、0.2和0.4 mg/kg DAC，并同时接受固定剂量167 mg/kg的四氢尿苷（THU）。THU的固定剂量（500 mg/m²）以及THU和DAC给药之间的最佳时间间隔（60分钟）的选择基于既往研究11。将小鼠体表面积剂量（毫克/平方米）转换为每公斤体重剂量（毫克/公斤）是基于美国食品药品监督管理局（FDA）发布的指南中小鼠的米氏常数（km）值。简而言之，将小鼠体表面积剂量（毫克/平方米，500 mg/m²）除以km值3，即可转换为每公斤体重剂量（毫克/公斤，167 mg/kg）。该指南中小鼠的工作体重范围为11-34克；本研究中使用的小鼠体重范围为24-38克。毒代动力学[2] 在每个采集日之前，向每个样本采集管中加入10 μL/管浓度为10 mg/mL的四氢尿苷（THU）溶液。在研究第1天（第2至5组）和第58天（除第4组雌性外，第2至5组），对未禁食、麻醉的毒物动力学动物进行心脏穿刺，分别于给药后15、30、60、90、120和180分钟采集血样（约0.5 mL）。每个时间点，每组每性别各取3只动物（雌雄各半）进行采集。由于第4组雌性动物死亡，在研究第38天对前5只存活动物进行尸检，并于给药后15、30和120分钟，从每组3只雌性动物中采集血样。所有样本均在目标时间点后5分钟内采集。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
犬 LD 未报告 >1 克/千克，《药物化学杂志》，10(423)，1976
猴 LD 未报告 >1 克/千克，《药物化学杂志》，10(423)，1976 犬 LD 静脉注射 >1 克/千克，《国家技术信息服务》，PB211-590 |
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
四氢尿苷已被用于多种疾病的治疗试验，包括肺癌、乳腺肿瘤、镰状细胞病和头颈癌等。
四氢尿苷是一种具有生物调节活性的合成嘧啶核苷类似物。四氢尿苷通过抑制脱氧胞苷单磷酸（dCMP）脱氨酶，防止细胞氯代谢物5-氯-2'-脱氧胞苷单磷酸（CldCMP）过早脱氨生成5-氯-2'-脱氧尿苷单磷酸（CldUMP），从而提高放射增敏剂细胞氯（5-氯-2'-脱氧胞苷）的疗效；进而增加肿瘤中CldUMP的浓度，CldUMP随后被进一步代谢并以CldU（5-氯-2'-脱氧尿苷）的形式选择性地掺入肿瘤DNA中。 (NCI04) 核苷酸代谢抑制剂。 晚期胰腺癌的二线化疗方案是亟待解决的临床相关问题。本研究表明，四氢尿苷 (THU) 对某些肿瘤细胞系具有双重作用：A) 独立发挥细胞毒性；B) 通过 E2F1 增强吉西他滨的细胞毒性，无论 CDA 高表达还是低表达。因此，四氢尿苷 (THU) 至少可以提高部分吉西他滨耐药细胞对吉西他滨的敏感性，而与 CDA 表达无关。重要的是，四氢尿苷 (THU) 已应用于临床，安全性已得到证实，且价格比新开发的分子靶向药物更合理。未来需要开展更多研究，以确定哪些细胞类型适合使用 THU 治疗来控制细胞增殖。由于THU在体内稳定性提高，联合治疗可能比现有治疗方案更可行、更有效，尤其适用于晚期胰腺癌。[1] 总之，与单独使用DAC治疗相比，联合治疗提高了对DAC诱导毒性的敏感性，且与DAC血浆浓度相关。所有DAC治疗组的DAC Cmax均在预期引起细胞毒性的范围内（> 0.5 μM）。雌性小鼠的Cmax更高，且比雄性小鼠更敏感。此外，血液学效应似乎是最敏感的安全性生物标志物，适用于临床试验中的监测。治疗相关效应在恢复期结束时完全消退或呈现消退趋势。这种联合疗法的口服给药途径似乎有望用于镰状细胞病和β-地中海贫血的临床评估。因此，目前对 CD-1 小鼠的研究获得了与四氢尿苷 (THU) 和 DAC 联合口服疗法在人类治疗应用相关的重要的毒性参数。[2] |
| 分子式 |
C9H20N2O8
|
|---|---|
| 相关CAS号 |
Tetrahydrouridine;18771-50-1
|
| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
|
| LogP |
-1.85
|
| tPSA |
130.33
|
| InChi Key |
UCKYOOZPSJFJIZ-XVKVHKPRSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C9H16N2O6/c12-3-4-6(14)7(15)8(17-4)11-2-1-5(13)10-9(11)16/h4-8,12-15H,1-3H2,(H,10,16)/t4-,5?,6-,7-,8-/m1/s1
|
| 化学名 |
1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)-4-hydroxytetrahydropyrimidin-2(1H)-one dihydrate
|
| 别名 |
THU dihydrate; NSC-112907 dihydrate
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :≥ 100 mg/mL (~351.79 mM)
H2O :~50 mg/mL (~175.90 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
CJC-1295 With DAC
黄嘌呤钠盐
四乙酰核糖
钨酸钠二水合物
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
