| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Cationic fluorescent dye; Mitochondrial membrane potential (mtMP); TMRM is a fluorescent probe that accumulates in mitochondria in response to negative membrane potential. [2][3]
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| 体外研究 (In Vitro) |
1. TMRM 工作液的配制
1.1 储备液的配制 将 1 mg TMRM 溶解于 339 µL DMSO 中，配制成 5 mM 储备液。 1.2 工作液的配制 使用无血清细胞培养基或 PBS 稀释上述储备液，获得浓度为 1–20 µM 的 TMRM 工作液。 注意：工作液的具体浓度可根据实验需要进行调整。 2. 细胞染色流程 2.1 悬浮细胞染色（以 6 孔板为例） a. 收集细胞悬液，于 4℃ 条件下以 1000g 离心 3–5 分钟，弃上清； b. 使用 PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟，最终调整细胞密度至 1×10⁶/mL； c. 加入 1 mL TMRM 工作液，室温避光孵育 5–30 分钟； d. 4℃ 下以 400g 离心 3–4 分钟，弃上清； e. 再次使用 PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟； f. 使用无血清培养基或 PBS 重悬细胞，随后进行荧光显微镜或流式细胞仪检测。 2.2 贴壁细胞染色 a. 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上； b. 取出盖玻片，吸除多余培养基； c. 加入 100 µL TMRM 工作液，轻摇使其均匀覆盖细胞，室温避光孵育 30–60 分钟； d. 使用培养基洗涤两次，每次 5 分钟； e. 直接置于荧光显微镜下观察，或消化重悬后进行流式细胞术分析。 注：如采用流式细胞仪检测，需先将细胞消化并重悬为单细胞悬液，再进行染色。 - 在分离的大鼠皮质线粒体中，TMRM（2 μM）可使用Oroboros Oxygraph-2K同时测量耗氧率和线粒体膜电位。与无染料对照相比，TMRM使偶联呼吸降低约27%。最大非偶联呼吸（使用FCCP）不受TMRM影响。 [2] - 在培养的大鼠海马神经元中，TMRM（50–500 nM）选择性染色线粒体，并显示出自发的线粒体荧光波动。FCCP（1 μM）诱导线粒体荧光丧失和相应的胞质荧光增加。 [3] - 较高浓度的TMRM（1–25 μM）可更快地染色线粒体（5–10分钟内达到平台）。暴露45–60分钟后，部分神经元出现自发的细胞荧光大幅增加，随后出现缓慢的振荡（周期5–20分钟）和传播的荧光波。胶质细胞未显示这些反应。 [3] - 单光子比例成像（546和573 nm激发）显示，FCCP诱导573/546比值增加，表明TMRM从淬灭（疏水）区室向非淬灭（亲水）区室移动。在自发性荧光振荡期间观察到类似的比例变化。 [3] - TMRM振荡在预先用FCCP（1–100 μM）或毒胡萝卜素（10 μM）处理的神经元中持续存在，表明功能性线粒体不是这些反应所必需的。 [3] - TMRM振荡与细胞内Ca²⁺变化（用Fluo-3测量）不相关。降低细胞外Ca²⁺或细胞内EGTA透析可抑制振荡，但Ca²⁺峰独立于TMRM振荡发生。 [3] - 荧光寿命成像显示，在高荧光和低荧光状态之间TMRM荧光存在显著的相位偏移，与染料在疏水和亲水区室之间的移动一致。 [3] |
| 酶活实验 |
- 耗氧率测量：将分离的线粒体或组织匀浆重悬于富KCl缓冲液（80 mM KCl，10 mM Tris/HCl，3 mM MgCl₂，1 mM EDTA，5 mM磷酸钾，pH 7.4）中。依次加入底物（谷氨酸、丙酮酸、苹果酸、琥珀酸）、ADP、寡霉素、FCCP、鱼藤酮和抗霉素A。使用配备荧光LED2模块的Oroboros Oxygraph-2K在37°C测量耗氧率。 [2]
- 线粒体膜电位测量：使用番红O（2.5 μM）或TMRM（2 μM）作为荧光探针。Oroboros系统同时记录荧光信号（激发/发射：番红O 495/587 nm；TMRM 530/592 nm）和耗氧率。 [2] - 单光子比例成像：使用单色仪以546和573 nm（带宽5 nm）顺序激发细胞。在620/60 nm处检测发射光。每200毫秒形成一次比例图像（573/546）。 [3] - 荧光寿命成像：使用810 nm双光子激发。使用FastFLIM模块收集相位和调制图像。使用相量图法分析荧光寿命。 [3] |
| 细胞实验 |
- 分离的大鼠皮质线粒体：通过差速离心从大鼠脑皮质分离线粒体。使用Bradford法测定蛋白含量。对于耗氧率/线粒体膜电位测量，使用200–300 μg线粒体蛋白。 [2]
- 原代大鼠海马神经元培养：从胚胎第18天大鼠海马制备培养物，在胶质饲养层上生长12–30天。将TMRM以50 nM至25 μM的浓度加入浴液中。在室温下进行成像。 [3] - 凋亡实验：将培养物在37°C下暴露于TMRM 1小时，然后后孵育18小时。用Hoechst 33258（2 μg/mL）染色细胞20分钟。凋亡细胞在紫外激发下鉴定为明亮的荧光核。细胞存活率计算为活细胞的百分比。 [3] - 钙成像：用Fluo-3 AM（5 μM）在37°C下加载细胞1小时，然后后孵育1小时。使用双光子显微镜进行Fluo-3和TMRM的双探针成像。 [3] |
| 动物实验 |
所提供的文献中未报告任何关于TMRM的动物实验方案。神经元培养物来源于大鼠胚胎，脑切片取自小鼠，但未描述TMRM的体内给药情况。[3]
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| 参考文献 |
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| 分子式 |
C25H25CLN2O7
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|---|---|
| 分子量 |
500.9282
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| 精确质量 |
500.135
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| 元素分析 |
C, 59.94; H, 5.03; Cl, 7.08; N, 5.59; O, 22.36
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| CAS号 |
115532-50-8
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| 相关CAS号 |
TMRM;115532-49-5
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| PubChem CID |
11755725
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| 外观&性状 |
Green to dark green solid powder
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| 熔点 |
274–276℃
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| LogP |
4.303
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| tPSA |
119.96
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
35
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| 分子复杂度/Complexity |
868
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
PFYWPQMAWCYNGW-UHFFFAOYSA-M
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H25N2O3.ClHO4/c1-26(2)16-10-12-20-22(14-16)30-23-15-17(27(3)4)11-13-21(23)24(20)18-8-6-7-9-19(18)25(28)29-5;2-1(3,4)5/h6-15H,1-5H3;(H,2,3,4,5)/q+1;/p-1
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| 化学名 |
[6-(dimethylamino)-9-(2-methoxycarbonylphenyl)xanthen-3-ylidene]-dimethylazanium;perchlorate
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| 别名 |
115532-50-8; T-668; Tetramethylrhodamine methyl ester perchlorate; T668; RefChem:897364; 634-218-8; TMRM Perchlorate;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~41.67 mg/mL (~83.19 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9963 mL | 9.9814 mL | 19.9629 mL | |
| 5 mM | 0.3993 mL | 1.9963 mL | 3.9926 mL | |
| 10 mM | 0.1996 mL | 0.9981 mL | 1.9963 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT02650154 | Completed | Trauma | The Hospital for Sick Children | 2013-08 | ||
| NCT03415503 | Completed | Drug: Medox® Anthocyanin capsules | Dyslipidemias | Sun Yat-sen University | 2018-10-01 | Phase 3 |
| NCT05071391 | Completed | Procedure: Roux-en-Y gastric bypass | Obesity | Milagros Rocha Barajas | 2017-01-01 |
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