U-73343

Negative control for U-73122

虽然U73343对K+-pNPPase或H+,K+-ATPase活性没有抑制作用，但它可以有效减少酸分泌。 U73343 以剂量依赖性方式抑制组胺 (Hist)、卡巴胆碱 (CCh) 和 dbcAMP 刺激的氨基比林在胃腺中的积累 [1]。

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在 UMR-106 大鼠成骨样骨肉瘤细胞中，用高达 8 μM 的 U-73343 预处理 3 分钟，在 1.8 mM 含钙培养基中测量时，不抑制 100 nM 内皮素-1 (ET-1) 诱导的细胞内钙瞬变。 [2]
类似地，用高达 8 μM 的 U-73343 预处理 3 分钟，在 1.0 mM 含钙培养基中不抑制 100 nM 甲状旁腺激素 (PTH) 诱导的细胞内钙瞬变。 [2]
用 8 μM U-73343 预处理 UMR-106 细胞 3 分钟，未显著抑制 ET-1 (100 nM, 1 分钟) 刺激的肌醇磷酸盐 (IP1, IP2, IP3) 生成。数据表明 U-73343 不影响激动剂诱导的磷脂酰肌醇周转。 [2]

内皮素-1（ET-1）和甲状旁腺激素（PTH）增加啮齿动物成骨细胞中的钙瞬变。为了研究磷脂酶C（PLC）在这些激素刺激的钙信号中的作用，测定了已报道的PLC抑制剂U-73122（1-[6-[[17β-3-甲氧基雌甾-1,3,5（10）-三烯-17基]氨基]己基]-1H-吡咯-2,5-二酮）及其非活性类似物U-73343（1-[6[[17α-3-甲氧基雌甾-1,3.5（10）三烯-17-基]氨基]-1H-吡啶-2,5-二酮）的作用。用荧光指示剂fluo-3测量UMR-106细胞中的细胞内钙瞬变。在正常含钙培养基中，预先暴露于U-73122（3分钟）以剂量依赖性（0.2-10微M）的方式抑制ET-1和PTH刺激的钙瞬变，IC50为1.5-1.8微M。需要6-8微M的浓度才能完全抑制对100nM ET-1或PTH的反应。U-73343在该浓度范围内没有产生任何影响。在通过添加EGTA将外部钙减少到小于1微M的细胞中，ET-1信号被4-6微M U-73122完全抑制，IC50为0.8微M。在低外部钙培养基中，PTH反应被2微M U-73122消除（IC50=0.5微M）。U-73122，8 microM，在3分钟时显著（P<0.01）抑制了ET-1对肌醇三磷酸产生的影响，而U-73343则没有。百日咳毒素（100ng/ml）同样显著抑制了ET-1对磷酸肌醇代谢和细胞内钙浓度的影响。总之，这些结果支持了PLC在ET-1和PTH引发的钙瞬变中起作用的假设，并且ET-1部分通过百日咳毒素敏感的G蛋白偶联受体传递其信号。此外，他们认为U-73122可用于研究成骨细胞中PLC介导的过程。

为了阐明磷脂酶C（PLC）在胃酸分泌中的作用，我们使用了受体介导的PLC的常用特异性抑制剂U73122及其阴性对照U73343。尽管10μM U73122抑制了U46619诱导的兔血小板[Ca++]i的增加，但组胺和卡巴胆碱诱导的兔壁细胞中的Ca++瞬变对抑制剂都有抗性。U73122增强了组胺、卡巴胆碱和dbcAMP刺激的离体胃腺的酸分泌，可能是通过其对细胞内钙储存的间接钙释放作用。U73122能有效抑制K+-对硝基苯磷酸酶，而不影响H+，K+-ATP酶的整体活性。另一方面，阴性对照U73343强烈抑制了所有受试激动剂刺激的酸分泌。对洋地黄皂苷透性腺体和胃小泡的质子梯度也有明显的抑制作用。U73343本身不是质子泵抑制剂，因此它被认为是一种质子球。总之，广泛使用的PLC抑制剂U73122及其阴性对照U73343都不能作为分析PLC在兔壁细胞中作用的工具。前者对胃PLC无效，可作为细胞内钙释放剂，后者可作为原蛋白。[1]

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细胞内钙测量： UMR-106 细胞通过胰蛋白酶/EDTA 处理收集，在加载缓冲液中用 2 μM fluo-3 AM 在室温下负载 30 分钟，洗涤并重悬。细胞悬液在荧光比色皿中连续搅拌。为测试 U-73343 的效果，在刺激前用不同浓度（例如 8 μM）的 U-73343 预处理细胞 3 分钟。测量荧光（激发 505 nm，发射 530 nm），校准后计算细胞内钙浓度。8 μM 的 U-73343 不抑制任一动剂诱导的钙瞬变。 [2]
肌醇磷酸盐生成实验： UMR-106 细胞接种并用 [³H]肌醇孵育 48 小时以标记磷脂。细胞用 5 mM LiCl 预处理 10 分钟，然后用 8 μM U-73343 处理 3 分钟，再用 100 nM ET-1 刺激 1 分钟。反应用三氯乙酸 (TCA) 终止。肌醇磷酸盐 (IP1, IP2, IP3) 通过使用甲酸铵梯度的阴离子交换 FPLC 分离，并通过液体闪烁计数测量各馏分的放射性。U-73343 未显著抑制 ET-1 刺激的肌醇磷酸盐生成。 [2]

该研究指出，与活性类似物U-73122和溶剂DMSO类似，当向细胞悬液中加入高浓度的U-73343时，有时会观察到荧光强度的瞬时峰值（可能反映非特异性干扰），但这并不影响后续的激动剂反应。[2]

[1]. The putative phospholipase C inhibitor U73122 and its negative control, U73343, elicit unexpected effects on the rabbit parietal cell. J Pharmacol Exp Ther. 1997 Sep;282(3):1379-88.

[2]. U-73122, a phospholipase C antagonist, inhibits effects of endothelin-1 and parathyroid hormone on signal transduction in UMR-106 osteoblastic cells. Biochim Biophys Acta. 1994 Dec 30;1224(3):575-82.

为了阐明磷脂酶C (PLC) 在胃酸分泌中的作用，我们使用了常用的受体介导PLC特异性抑制剂U73122及其阴性对照U73343。虽然10 μM U73122抑制了U46619诱导的兔血小板内[Ca++]i升高，但组胺和卡巴胆碱诱导的兔壁细胞内Ca++瞬变均不受该抑制剂的影响。U73122增强了组胺、卡巴胆碱和dbcAMP刺激的离体胃腺的胃酸分泌，这可能是通过其对细胞内钙库的间接Ca++释放作用实现的。U73122强效抑制K+-对硝基苯磷酸酶，但不影响整体H+,K+-ATP酶活性。另一方面，阴性对照U73343强烈抑制了所有受试激动剂刺激的胃酸分泌。在经洋地黄皂苷透化的腺体和胃囊的质子梯度上也观察到了抑制作用。U73343 本身并非质子泵抑制剂，因此被认为是一种质子载体。总之，广泛使用的 PLC 抑制剂 U73122 及其阴性对照 U73343 均不能作为分析 PLC 在兔壁细胞中作用的工具。前者对胃 PLC 无效，并作为细胞内钙释放剂发挥作用；后者则作为质子载体发挥作用。[1]

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内皮素-1 (ET-1) 和甲状旁腺激素 (PTH) 可增加啮齿动物成骨细胞中的钙瞬变。为了研究磷脂酶C (PLC) 在这些激素刺激的钙信号中的作用，我们测定了已报道的PLC抑制剂U-73122 (1-[6-[[17β-3-甲氧基雌甾-1,3,5(10)-三烯-17-基]氨基]己基]-1H-吡咯-2,5-二酮)及其非活性类似物U-73343 (1-[6[[17β-3-甲氧基雌甾-1,3,5(10)-三烯-17-基]氨基]己基]-1H-吡咯烷-2,5-二酮)的作用。使用荧光指示剂fluo-3在UMR-106细胞中测量了细胞内钙瞬变。在正常含钙培养基中，预先暴露于 U-73122（3 分钟）可剂量依赖性地（0.2-10 μM）抑制 ET-1 和 PTH 刺激的钙瞬变，IC50 为 1.5-1.8 μM。完全抑制 100 nM ET-1 或 PTH 的反应需要 6-8 μM 的浓度。U-73343 在此浓度范围内未产生任何作用。在通过添加 EGTA 将细胞外钙浓度降低至 1 μM 以下的细胞中，4-6 μM 的 U-73122 可完全抑制 ET-1 信号，IC50 为 0.8 μM。在低钙培养基中，2 μM 的 U-73122 可消除 PTH 反应（IC50 = 0.5 μM）。 U-73122（8 μM）在 3 分钟时显著抑制了 ET-1 对肌醇三磷酸生成的影响（P < 0.01），而 U-73343 则无此作用。百日咳毒素（100 ng/ml）同样显著抑制了 ET-1 对磷脂酰肌醇周转以及细胞内钙离子浓度的影响。总之，这些结果支持以下假设：PLC 在 ET-1 和 PTH 诱导的钙瞬变中发挥作用，并且 ET-1 的部分信号传递是通过百日咳毒素敏感的 G 蛋白偶联受体实现的。此外，他们还指出 U-73122 可用于研究成骨细胞中 PLC 介导的过程。[2]

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U-73343 (1-[6-[[17β-3-甲氧基雌甾-1,3,5(10)-三烯-17-基]氨基]己基]-1H-吡咯烷-2,5-二酮) 是氨基甾类 PLC 抑制剂 U-73122 的结构类似物。关键的结构差异在于，U-73343 含有吡咯烷-2,5-二酮部分，而活性化合物 U-73122 含有吡咯-2,5-二酮部分。[2]
在本研究中，U-73343 作为重要的阴性对照化合物。在U-73122表现出强效抑制作用（IC50 ~0.5-1.8 μM）的浓度下，U-73343缺乏活性，这有助于证实观察到的U-73122对ET-1和PTH信号通路的抑制作用是其对PLC通路特异性作用的结果，而非非特异性或细胞毒性作用所致。[2]
该研究得出结论，U-73343不抑制ET-1刺激的钙瞬变、PTH刺激的钙瞬变或ET-1刺激的肌醇磷酸生成，证实了其在该细胞环境中为非活性类似物。[2]

C29H42N2O3

466.65538

466.319

142878-12-4

114825

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

641.5±55.0 °C at 760 mmHg

341.8±31.5 °C

0.0±1.9 mmHg at 25°C

1.578

5.49

58.64

1

4

9

34

725

5

C[C@]12CC[C@H]3[C@H]([C@@H]1CC[C@@H]2NCCCCCCN4C(=O)CCC4=O)CCC5=C3C=CC(=C5)OC

CJHWFIUASFBCKN-ZRJUGLEFSA-N

InChI=1S/C29H42N2O3/c1-29-16-15-23-22-10-8-21(34-2)19-20(22)7-9-24(23)25(29)11-12-26(29)30-17-5-3-4-6-18-31-27(32)13-14-28(31)33/h8,10,19,23-26,30H,3-7,9,11-18H2,1-2H3/t23-,24-,25+,26+,29+/m1/s1

1-(6-(((8R,9S,13S,14S,17S)-3-methoxy-13-methyl-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-decahydro-6H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl)amino)hexyl)pyrrolidine-2,5-dione

U73343; u-73343; u73343; U 73343; S2C4J8704C; 1-[6-[[(8R,9S,13S,14S,17S)-3-methoxy-13-methyl-6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-decahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl]amino]hexyl]pyrrolidine-2,5-dione; 1-(6-(((8R,9S,13S,14S,17S)-3-methoxy-13-methyl-7,8,9,11,12,13,14,15,16,17-decahydro-6H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl)amino)hexyl)pyrrolidine-2,5-dione; 1-(6-(((17beta)-3-methoxyestra-1,3,5(10)-trien-17-yl)amino)hexyl)-2,5-Pyrrolidinedione; U-73343; U 73343

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~3.33 mg/mL (~7.14 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。