UNC0006

β-arrestin-biased dopamine D2 receptor
UNC0006 targets the dopamine D2 receptor (D2R), a G protein-coupled receptor that plays a critical role in dopaminergic signaling in the central nervous system. D2R is the primary target of antipsychotic drugs and is involved in the regulation of mood, cognition, and motor function. UNC0006 acts as a β-arrestin-biased D2R ligand, meaning it preferentially promotes β-arrestin-2 recruitment over Gi-mediated cAMP inhibition. The compound functions as an antagonist of Gi-regulated cAMP production and a partial agonist of D2R/β-arrestin-2 interaction. This biased signaling profile is distinct from classical D2R antagonists.

UNC9975、UNC0006 和 UNC9994 作为部分激动剂诱导 D2 受体介导的 β-arrestin-2 转位。[1]
为了评估这些化合物对 β-arrestin-2 募集至 D2 受体的影响，我们使用了一种对 β-arrestin-2 募集高度敏感的 D2 受体介导的 β-arrestin-2 转位 Tango 检测方法。在该检测中，UNC9975、UNC0006 和 UNC9994 是强效（EC50 < 10 nM）的 β-arrestin-2 募集至 D2 受体的部分激动剂，与阿立哌唑类似（图 2B）。 UNC9975 (Emax = 43%) 和 UNC0006 (Emax = 47%) 的疗效低于阿立哌唑 (Emax = 73%)，而 UNC9994 (Emax = 91%) 的疗效高于阿立哌唑，且接近完全激动剂喹吡罗的活性。典型抗精神病药物氟哌啶醇（以及所有其他测试的典型和非典型抗精神病药物）均未激活 D2 受体介导的 β-arrestin-2 易位。由于本实验使用了转染了D2V2-TCS-tTA构建体的HTLA细胞（一种稳定表达tTA依赖性荧光素酶报告基因和β-arrestin-2-TEV融合蛋白的HEK293衍生细胞系），我们同时在转染了V2-TCS-tTA构建体的HTLA细胞中测试了这些化合物，以探究观察到的效应是否是由于化合物通过V2尾部或其他非受体介导的arrestin通路发挥作用所致。正如预期的那样，UNC9975、UNC0006、阿立哌唑和喹吡罗（D2的阳性对照）在表达V2受体的细胞中没有活性，而精氨酸加压素（V2的阳性对照）则是一种完全激动剂（图S2A）。这些结果表明，在表达D2V2受体的细胞中观察到的UNC9975、UNC0006、UNC9994和阿立哌唑的作用是由于这些化合物通过D2受体发挥作用，而非作用于V2尾部。
体外实验表明，UNC0006是一种β-arrestin偏向性D2R配体，它拮抗Gi调节的cAMP生成，并作为D2R/β-arrestin-2相互作用的部分激动剂。该化合物的偏向性信号传导谱已通过基于细胞的信号传导分析进行了表征。UNC0006在D2R上表现出活性，并特异性地偏向于β-arrestin-2的募集。其调节cAMP生成和β-arrestin-2募集的效力和功效已在体外进行了定量分析。此外，还评估了该化合物对D2R相对于其他多巴胺受体亚型的选择性。

UNC9975 和 UNC0006 可诱导 β-arrestin-2 基因敲除小鼠出现僵直，但对野生型小鼠无此作用。[1]
为了比较 UNC9975、UNC0006 和阿立哌唑潜在的锥体外系副作用，我们使用野生型和 β-arrestin-2 基因敲除小鼠，在标准的药物诱导僵直模型中评估了这些化合物以及氟哌啶醇（作为阳性对照）。如图 5A 和 5B 所示，UNC9975、UNC0006 或阿立哌唑（5.0 mg/kg）在给药后 30 分钟或 60 分钟均未能显著诱导野生型小鼠出现僵直，而氟哌啶醇（2.0 mg/kg）在两个时间点均能显著诱导僵直。与野生型动物的结果显著不同，β-arrestin偏向性多巴胺D2受体配体UNC9975和UNC0006在β-arrestin-2基因敲除小鼠中，于给药后60分钟显著诱发僵直。相比之下，激活Gi偶联通路和β-arrestin介导通路的阿立哌唑，在β-arrestin-2基因敲除小鼠或野生型小鼠中均未诱发僵直。综上所述，这些结果表明β-arrestin的募集和信号传导对运动副作用具有保护作用。[1]值得注意的是，UNC9975在体内C57BL/6近交系小鼠中表现出强效的抗精神病样活性，且未诱发运动副作用。 β-arrestin-2基因缺失可同时减弱UNC9975的抗精神病作用，并使其转变为一种典型的抗精神病药物，且具有较高的诱发僵直倾向。类似地，UNC9994（一种极度偏向β-arrestin的D(2)R激动剂）在野生型小鼠中表现出的抗精神病样活性，在β-arrestin-2基因敲除小鼠中完全消失[1]。
在体内，UNC0006的潜在抗精神病活性已被研究。其偏向性信号通路可能使其在治疗效果和锥体外系症状、代谢紊乱等副作用之间取得优于传统抗精神病药物的优势。然而，目前来自动物模型的详细体内疗效数据有限。需要进一步的研究来全面表征其抗精神病潜力和行为效应。

体外生化分析。[1]
一般步骤。表1所列GPCR（包括D1、D3、D4、D5、5HT2A、5HT2B、5HT2C、5HT1A和H1）的二级放射性配体结合和功能（FLIPR）分析的实验步骤可通过精神活性药物筛选项目（PDSP）网站在线获取：http://pdsp.med.unc.edu/。PDSP分析方案手册可从以下网址免费获取：http://pdsp.med.unc.edu/UNC-CH%20Protocol%20Book.pdf。5HT1A的cAMP生物传感器分析（表1）的操作方法与下述步骤类似，只是数据以血清素而非喹吡罗进行标准化。多巴胺D2放射性配体结合、cAMP生物传感器、β-arrestin募集Tango、β-arrestin募集DiscoveRx、生物发光共振能量转移（BRET）、D2受体内化和pERK检测的实验方案详述如下。除BRET检测外，其他检测均使用人D2L受体，而BRET检测则使用小鼠D2L受体。

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CHO-D2细胞膜制备和放射性配体结合实验。[1]
CHO-D2细胞膜制备。将稳定表达D2L受体的细胞（CHO-D2L）接种于15 cm培养皿中（DMEM培养基含10% FBS），培养至90%汇合度。然后，用pH 7.4的PBS缓冲液洗涤细胞，并用刮刀刮取细胞收集于pH 7.4的PBS缓冲液中。收集的细胞以 1,000 × g 离心 10 分钟，然后用冰冷的 50 mM Hepes、1% BSA、pH 7.4 的缓冲液进行低渗裂解。以 21,000 × g 离心 20 分钟分离细胞膜。去除上清液，将膜沉淀物储存在 −80 °C，直至用于放射性配体结合实验。 [1]
将按上述方法制备的膜重悬至 1 μg 蛋白/μL（使用 BSA 作为标准通过 Bradford 法测定），并将 50 μL 重悬液加入到含有 50 μL 缓冲液（20 mM Hepes、10 mM MgCl2、1 mM EDTA、1 mM EGTA、100 mM N-甲基-D-葡萄糖酸，pH 7.4）、50 μL 1.5 nM [3 H]N甲基螺哌隆（终浓度 0.3 nM）和浓度范围为 50 pM 至 50 μM 的参考配体或 D2 测试配体（终浓度范围为 10 pM 至 10 μM，每种 D2 测试配体浓度均进行三次重复测定）的聚丙烯 96 孔板的每个孔中。在室温下避光孵育 1.5 小时后，将反应物收集到浸有 0.3% PEI 的 Filtermax GF/A 滤膜上，并使用 Perkin-Elmer Filtermate 96 孔收集器，用冰冷的 50 mM Tris (pH 7.4) 洗涤三次。随后将滤膜干燥，置于加热板 (100 °C) 上，并滴加 Melitilex-A 闪烁液。之后将滤膜从加热板上取下，使其冷却。使用 Wallac TriLux 微型 β 计数器对滤膜进行计数（每孔 3 分钟）。将滤膜上残留的 [3H]N-甲基螺哌隆结合量绘制成 log [参考] 或 log [D2 测试配体] 的函数，并使用 Prism 4.0 内置的单一位点竞争模型对数据进行回归分析。

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D2 介导的 cAMP 测定。 [1] 将共表达 cAMP 生物传感器 GloSensor-22F 和 hD2L 受体的 HEK293T 细胞（10,000 个细胞/20 μL/孔）接种于白色透明底组织培养板中，培养基为 HBSS、10% FBS、20 mM Hepes，pH 7.4。培养 1 至 2 小时后，用 10 μL 3 倍浓度的测试药物或参比药物（溶于 HBSS、10% FBS、20 mM Hepes，pH 7.4）处理细胞。30 分钟后，用 10 μL 1,200 nM (4 倍浓度) 异丙肾上腺素（溶于 8% (4 倍浓度) GloSensor 试剂）处理细胞。使用 Wallac TriLux 微量酶标仪读取每孔每秒的发光值。数据以异丙肾上腺素反应（100%）和喹吡罗诱导的最大抑制率（0%）进行标准化，并使用GraphPad Prism 4.0内置的S型剂量反应函数进行回归分析。值得注意的是，平行检测了仅表达GloSensor-22F（不含hD2）的HEK293T细胞，结果显示，喹吡罗或测试化合物均未抑制异丙肾上腺素刺激的cAMP，这表明在表达hD2L的细胞中观察到的效应是由于化合物通过重组受体发挥作用所致。

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D2 β-arrestin募集测定。[1]
使用先前描述的“Tango”型测定方法进行β-arrestin向激动剂刺激的D2L受体的募集。简而言之，将稳定表达β-arrestin-TEV蛋白酶和四环素转录激活因子驱动的荧光素酶的HTLA细胞接种于含10% FBS的DMEM培养基中的15 cm培养皿中。用磷酸钙法将20 μg D2V2-TCS-tTA构建体转染至细胞中。次日，将细胞接种于白色透明底384孔板中（每孔10,000个细胞，50 μL/孔），培养基为含1%透析FBS的DMEM。再过一天，向细胞中加入10 μL/孔的参考激动剂（6 μM）或D2测试配体（6 μM），或加入用HBSS、20 mM Hepes（pH 7.4）和18% DMSO配制的参考激动剂（最终配体浓度为1 μM，最终DMSO浓度为3%）。 18 小时后，移除培养基并替换为 1× BriteGlo 试剂，使用 TriLux 酶标仪读取每个孔的发光值（1 秒/孔）。数据以载体 (0%) 和喹吡罗 (100%) 对照组进行标准化，并使用 GraphPad Prism 4.0 内置的 S 型剂量反应函数进行回归分析。

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D2 β-Arrestin 募集 DiscoveRx 检测。[1]
使用 DiscoveRx D2L CHO-K1 PathHunter Express 细胞的检测严格按照制造商的说明进行。简而言之，将细胞解冻，重悬于提供的培养基中，并接种于提供的培养板中。两天后，用 10 倍稀释的激动剂（用 PBS 配制）刺激细胞 90 分钟或 20 小时。接下来，将检测试剂复溶，按适当比例混合，并加入细胞中。60 分钟后，使用 TriLux 酶标仪测量每个孔的发光值。数据以载体 (0%) 和喹吡罗 (100%) 对照组进行标准化，并使用 GraphPad Prism 4.0 内置的 S 型剂量反应函数进行回归分析。

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BRET 检测。[1]
BRET 检测按照先前描述的方法进行，并稍作修改。简而言之，使用磷酸钙转染法将 HEK293T 细胞分别转染相同固定浓度的 D2LR-RLuc（用于基础 BRET 测量）、饱和浓度的 β-arrestin 2-YFP9 以及过表达 GRK2 的 D2LR-RLuc/β-arrestin 2 YFP。转染24小时后，将细胞以10万个/孔的密度接种于聚赖氨酸包被的白色96孔板中，培养基为不含酚红的MEM培养基，并添加2%胎牛血清（FBS）。接种24小时后进行BRET检测。将化合物溶解于DMSO中，并用添加了钙镁离子的PBS进行系列稀释。向细胞中加入终浓度为5 μM的腔肠素，随后加入化合物。孵育10分钟后，使用Mithras LB940仪器测量YFP（515–555 nm）与RLuc（465–505 nm）的比值。扣除基础BRET值后，所有结果均以喹吡罗（10⁻⁶ M）的最大响应值进行标准化。所有数据均为6至9次独立实验的平均值±标准误差（SEM）。使用 Graphpad Prism 5 测定 EC50 和 Emax 值。
UNC0006 的体外酶/受体结合（非细胞）测定包括测量其与多巴胺 D2 受体的结合亲和力。使用表达 D2R 的细胞膜制备物，进行放射性配体结合测定，使用放射性标记的 D2R 拮抗剂（例如 [³H]-螺哌隆或 [³H]-雷氯必利）和不同浓度的 UNC0006。通过竞争性置换放射性标记配体来测定结合亲和力 (Ki)。进行针对其他多巴胺受体亚型和非靶受体的选择性分析以评估特异性。

D2受体内吞作用的流式细胞术分析。[1]
HEK293细胞经FLAG标记的D2R（SF-D2R）、GRK2和β-arrestin-2（Arr3）三重转染。在最后一次药物处理前24小时，向细胞中加入终浓度为1 μg/mL的四环素以诱导GRK2和Arr3的表达。将细胞与终浓度为1 μM的每种药物在37 °C下孵育60分钟以诱导D2R内吞作用。对照组细胞用溶剂处理。处理后，将细胞置于冰上冷却，并用冰冷的PBS洗涤。首先用小鼠抗FLAG M2抗体染色细胞，然后用Alexa Fluor-647标记的兔抗小鼠抗体染色。使用Accuri C6流式细胞仪定量分析细胞表面D2R的表达。 D2R 内化定义为药物处理细胞与对照细胞相比，D2R 表面表达的降低。使用 Graphpad Prism 5.0 软件，采用单因素方差分析 (ANOVA) 和 Tukey 多重比较事后检验分析结果的统计学意义。喹吡罗诱导了 33% 的内化。数据已根据喹吡罗诱导的内化进行标准化。

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D2 p-ERK 报告基因检测。[1]
将 HEK293T 细胞接种于 10 cm 培养皿（每皿 400 万个细胞）中，转染编码 SRE-luc2P 的质粒以监测 MAPK 通路，以及编码指定蛋白的表达载体。次日，将细胞接种于白色、玻璃底、聚赖氨酸包被的 384 孔板中，培养基为含 1% FBS 的 DMEM（每孔 15,000 个细胞）。24 小时后，更换为无血清 DMEM。将细胞在无血清培养基中培养 2-4 小时，然后用指定浓度的参考化合物（喹吡罗）和测试化合物刺激。培养 4 小时后，移除培养基并加入 1× BriteGlo 试剂。使用 TriLux 酶标仪测量发光值。值得注意的是，转染了 SRE-荧光素酶和 pcDNA3.0 的 HEKT 细胞对喹吡罗或测试化合物均无反应。使用 GraphPad Prism 4.0 内置的三参数逻辑方程对浓度-反应曲线进行回归分析。对于每种条件（转染组），使用喹吡罗的最佳拟合（全局）底部和顶部值对数据进行标准化（尺度：0-100%）。

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pERK 免疫荧光分析。[1]
细胞培养。 [1]
稳定表达hD2L多巴胺受体的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞培养于添加10%胎牛血清（FBS）、100单位/mL青霉素、100 μg/mL链霉素和0.5 μg/mL G418的Ham's F-12培养基中。在实验第1天，将细胞接种于黑色透明底组织培养处理过的96孔板中。在实验第2天，用无血清培养基（Ham's F-12，青霉素和链霉素）洗涤细胞，并在100 μL无血清培养基中过夜培养。

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免疫荧光。[1]
使用自动多通道移液器进行液体处理，使用多通道真空歧管进行抽吸。每个测试浓度通常进行三重复或四重复测量。浓度曲线采用半对数稀释。药物稀释液用刺激培养基（无血清培养基，含100 mg/L抗坏血酸）配制。多巴胺（100 μM）和佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯（PMA，1 μM）用作阳性对照。仅使用培养基作为阴性对照。用10 μM拮抗剂螺哌隆预处理5分钟，并在野生型CHO细胞实验中验证了反应的特异性。在第3天，将50 μL平衡的3倍药物稀释液快速加入细胞中，在组织培养箱中孵育5分钟以刺激细胞。将培养板置于冰上，吸出培养基，并向每个孔中加入100 μL新鲜配制的冰冷固定缓冲液（4%甲醛和0.5 mM CaCl2的PBS溶液）。室温固定30分钟后，用350 μL/孔PBS/Ca（0.5 mM CaCl₂溶于PBS）洗涤细胞，然后用100 μL/孔含0.3% Triton X-100的PBS/Ca溶液透化20分钟。将细胞置于100 μL/孔封闭缓冲液（PBS/Ca，5%山羊血清，0.1% Triton X-100）中室温孵育1小时，再置于含兔抗磷酸化Thr202/p-Tyr204-ERK抗体（Cell Signaling 9101）的封闭缓冲液中，4℃孵育过夜（抗体稀释度为1:1000）。最后，用250 μL/孔洗涤缓冲液（PBS/Ca，0.03% Triton X-100）洗涤细胞3次，每次5-10分钟。将培养板与 50 μL/孔 Alexa-594 标记的山羊抗兔 IgG（1:250 稀释）、5 μg/mL Hoechst 33342 核染料和 25 μg/mL 刀豆蛋白-Alexa488 偶联物 (ConA; Invitrogen) 在封闭缓冲液中于室温孵育 2 小时。用 250 μL/孔洗涤缓冲液洗涤培养板 3 次，用固定缓冲液后固定 10 分钟，再用 250 μL PBS/Ca 洗涤，最后加入 200 μL/孔 PBS/Ca，用透明胶封板膜密封，并储存于 4 °C。

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显微镜观察和图像分析。[1]
使用高内涵自动显微镜系统扫描培养板，采用 20× 物镜和 2 × 2 图像拼接设置。 Alexa594 光路用于靶信号，Alexa488 用于全细胞染色，Hoechst 用于核染色。使用 CellProfiler 软件分析图像。将平均后的单细胞测量结果导出至 Excel，并从全细胞强度中减去无细胞背景强度。使用 GraphPad Prism 分析浓度曲线，方法是将曲线拟合为 S 形剂量反应模型，并以多巴胺曲线进行归一化。
体外细胞实验使用表达多巴胺 D2 受体的细胞（例如 HEK-293 或 CHO 细胞）进行 UNC0006 的实验。用不同浓度的 UNC0006 处理细胞，并使用 cAMP 检测试剂盒（例如 HTRF、ELISA）测量 cAMP 水平，以评估 Gi 介导的 cAMP 抑制。使用 BRET（生物发光共振能量转移）或其他基于邻近效应的检测方法测量 β-arrestin-2 的募集。通过比较该化合物对 cAMP 和 β-arrestin-2 募集的影响，可以表征该化合物的偏向性信号传导特征。

僵直症测试。[1]
在此实验范式中，小鼠首先腹腔注射（ip）载体（0.9%生理盐水/0.2%醋酸）；或分别注射5 mg/kg的阿立哌唑、UNC0006或UNC9975；或注射2 mg/kg的氟哌啶醇，然后放回笼中。分别在给药后30、60、90和120分钟评估小鼠的运动潜伏期，并在给药后60分钟观察小鼠运动潜伏期的最大值。因此，我们将所有药物引起的僵直症研究集中于这60分钟时间点。将小鼠直立放置在45°倾斜的屏幕上。记录小鼠四肢活动所需的时间（最多5分钟），以秒为单位，并将其作为运动潜伏期。在倾斜屏幕测试中，自主移动延迟时间延长提示药物诱导的僵直。数据以平均值±标准误（SEM）表示。僵直数据采用单因素方差分析（ANOVA）进行分析，随后进行Newman-Keuls多重比较检验，使用Graphpad Prism 5.0软件。

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小鼠体内研究。[1]
C57BL/6J野生型和β-arrestin-2基因敲除小鼠饲养于标准条件下：12小时光照/黑暗循环，食物和水自由摄取。所有行为学测试均使用成年、年龄匹配的雄性和雌性野生型和β-arrestin-2基因敲除且未接受过药物治疗的小鼠。在标准化的环境条件下，于21×21厘米的有机玻璃箱中评估小鼠的运动活性，光束间距为2.5厘米/秒，具体方法如前所述。小鼠腹腔注射（ip）赋形剂（0.9%生理盐水/0.2%醋酸）、阿立哌唑（0.1、0.25、0.50或2.0 mg/kg）或UNC9975（0.25、0.50或2.0 mg/kg），然后放入开放场。在SR46349B和氯氮平的研究中，小鼠腹腔注射赋形剂（0.9%生理盐水/50 mM酒石酸）、SR46349B（1.0 mg/kg）或氯氮平（1.0 mg/kg），然后放入开放场。30分钟后，分别给予小鼠d-安非他明（3 mg/kg）或苯环利定（6.0 mg/kg），并立即将小鼠放回开放场。在整个实验过程中监测小鼠的活动情况。水平活动以总运动距离（厘米）来衡量。运动反应的平均值±标准误（SEM）使用Graphpad Prism 5.0进行分析。为了估算半数最大抑制浓度（ED50），绘制了d-安非他明或苯环利定给药后90分钟内总运动活性的剂量反应曲线，并使用非线性回归单相衰减方程确定最佳拟合衰减曲线。
UNC0006的体内动物实验在精神病和其他神经系统疾病的啮齿动物模型中进行。该化合物通过口服或腹腔注射给药，并进行行为学测试（例如，运动活性、前脉冲抑制、条件性回避反应）以评估其抗精神病样活性。然而，详细的体内疗效数据有限。需要进一步的研究来评估该化合物的治疗潜力。

在小鼠药代动力学 (PK) 研究中，UNC9975（UNC0006 的类似物）和阿立哌唑均显示出较高的脑暴露量和优异的中枢神经系统穿透性。尽管 UNC9975 的脑暴露量约为阿立哌唑的三分之一，但其在脑内的半衰期更长，且 24 小时内的脑/血浆浓度比更高。UNC9975 优异的体内药代动力学参数使其成为体内药效学研究的理想选择。
UNC0006 是一种小分子（分子量 462.41，分子式 C24H29Cl2N3O2），具有适合研究用途的理化性质。该化合物可溶于 DMSO。现有文献中关于其详细药代动力学参数的信息有限。其分子特性表明，它可能具有良好的口服生物利用度和中枢神经系统穿透性。

UNC0006 的临床前毒理学数据有限。该化合物仅供实验室研究使用。作为一种具有偏向性信号传导的多巴胺 D2 受体配体，应考虑其对运动功能、认知和内分泌功能的潜在影响。

[1]. Discovery of β-arrestin-biased dopamine D2 ligands for probing signal transduction pathways essential for antipsychotic efficacy. Proc Natl Acad Sci U S A. 2011 Nov 8;108(45):18488-93.

阐明对精神药物疗效和副作用至关重要的关键信号转导通路，对于开发更安全有效的疗法至关重要。近期研究表明，由β-arrestin介导的非经典多巴胺D₂受体（D₂R）信号模式对抗精神病药物和抗躁狂药物的治疗效果具有重要意义。因此，我们致力于开发通过β-arrestin信号通路表现出信号偏向性的独特D₂R激动剂。通过对阿立哌唑（1）骨架进行稳健且多样化的定向修饰，我们发现了三种前所未有的β-arrestin偏向性D₂R配体：UNC9975（2）、UNC0006（3）和UNC9994（4）。这些化合物也是前所未有的Gi偶联G蛋白偶联受体（GPCR）的β-arrestin偏向性配体。值得注意的是，UNC9975、UNC0006 和 UNC9994 同时拮抗 G(i) 蛋白调节的 cAMP 生成，并部分激活了 D(2)R/β-arrestin-2 相互作用。更重要的是，UNC9975 在 C57BL/6 近交系小鼠体内表现出强效的抗精神病样活性，且未诱发运动副作用。β-arrestin-2 基因敲除同时减弱了 UNC9975 的抗精神病作用，使其转变为一种典型的抗精神病药物，并具有较高的诱发肌强直倾向。同样，UNC9994（一种高度偏向 β-arrestin 的 D(2)R 激动剂）在野生型小鼠中表现出的抗精神病样活性在 β-arrestin-2 敲除小鼠中完全消失。总之，我们的结果表明，β-arrestin 信号传导和募集可能在增强抗精神病药物疗效和预防运动副作用方面发挥关键作用。这些功能选择性的、β-arrestin偏向性D(2)R配体是研究健康和疾病状态下D(2)R信号传导的宝贵化学探针。[1]
UNC0006也称为UNC-0006和UNC 0006。它是一种研究化合物，主要用于研究多巴胺D2受体的复杂药理学特性，以及开发具有更佳副作用特征的新型抗精神病药物。其偏向性信号传导特征使其成为解析G蛋白依赖性和β-arrestin依赖性信号通路在抗精神病药物疗效和副作用中所起作用的宝贵工具。该化合物尚未获准用于临床。

C24H29CL2N3O2

462.415

461.16

C, 62.34; H, 6.32; Cl, 15.33; N, 9.09; O, 6.92

1354030-14-0

56597938

Typically exists as solid at room temperature

5

44.8Ų

1

4

7

31

581

0

O=C1NC2=C(C=CC(OCCCCN3CCN(C4=CC=CC(Cl)=C4Cl)CCC3)=C2)CC1

NGCKUAWDNUFNBB-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H29Cl2N3O2/c25-20-5-3-6-22(24(20)26)29-13-4-12-28(14-15-29)11-1-2-16-31-19-9-7-18-8-10-23(30)27-21(18)17-19/h3,5-7,9,17H,1-2,4,8,10-16H2,(H,27,30)

7-[4-[4-(2,3-dichlorophenyl)-1,4-diazepan-1-yl]butoxy]-3,4-dihydro-1H-quinolin-2-one

UNC0006; CHEMBL2165126; 1354030-14-0; SCHEMBL253164; GTPL7651; NGCKUAWDNUFNBB-UHFFFAOYSA-N; BDBM50395587; AKOS040749714;UNC-0006; UNC 0006

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。