Antiviral; SARS-CoV-2; RSV; deuterated form of GS-621763

三异丁酸酯VV116还可以抑制RSV复制（EC50=1.20±0.32μM，CC50=95.92±9.27μM，SI=80，EC90=3.08±1.253μM），这表明VV116的酯部分易被细胞酶水解以释放母体核苷。这些化合物的抗RSV活性也在HEp-2和NHBE细胞中得到证实，HEp-2细胞和NHBE是RSV的其他许可细胞。[1]

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药物化合物包括碳、氢和其他元素的稳定重同位素，主要作为影响药物开发过程中测量的示踪剂。药物的药代动力学和功能范围可能导致人们对突变的担忧[1]。延迟生成的化合物的潜在好处包括：（1）延迟生成的化合物可能能够扩展化合物的药代动力学特征，从而延长化合物的安全性、耐受性并改善耐受性； (2)延迟生成的化合物可以扩大肠道生物利用度。氘代化合物可能能够减少结肠和肠壁所需的首过代谢量，这将使更高比例的药物达到高生物利用度水平，这决定了其在低剂量下的疗效和更好的耐受性。 (3)增强新陈代谢功能。药物安全性、药物代谢 (4) 以及危险或反应性代谢物减少都是代谢物的潜在好处。氘代化学物质是无害的，并且有可能减轻或完全消除药物的负面影响。 (5)保存药用品质。根据早期的研究，氘代分子应保持与同类氢化合物相似的生物化学性质。

Mindeudesivir（VV116）（25、50和100 mg/kg；口服；每日两次，持续4天）显示出更强的活性，并将病毒滴度降至50 mg/kg的检测限以下，还可以减少呼吸道合胞病毒感染后的肺损伤[1]。VV116（25、50和100mg/kg；口服；单剂量）具有良好的PK特性和良好的安全性[1]。VV116（JT001）在Balb/c小鼠体内的药代动力学参数[1]。口服（25mg/kg）口服（50mg/kg）口服（100mg/kg）的Tmax（h）为0.42±0.14 0.42±0.12±0.14 Cmax（ng/mL）5360±560 11617±3443 24017±6521 AUC0-t（ng/mL·h）11461±1013 24594±1059 47799±6545 AUC0-∞（ng/mL-·h）11534±992 24739±1028 48014±6696 MRT0-∞（ng/mL·h）2.25±0.32 2.15±0.26 2.28±0.53 Tmax（小时）2.30±1.10 3.27±1.92 4.25±0.53动物模型：Balb/c小鼠[1]剂量：25、50和100mg/kg给药：口服；单剂量（药代动力学分析）结果：表现出良好的PK特性和良好的安全性。动物模型：Balb/c小鼠（6-8周；鼻内感染4×10^6 FFU的呼吸道合胞病毒）[1]剂量：25、50和100 mg/kg给药：口服；结果：在50mg/kg的剂量下，表现出更强的活性，病毒滴度降至检测限以下，也减少了呼吸道合胞病毒感染后的肺损伤。

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考虑到Mindeudesivir（VV116）在体外抑制RSV的强效作用，我们在小鼠模型中进一步测试了VV16对RSV的影响。利巴韦林是临床上用于治疗呼吸道合胞病毒的标示外药物，被用作对照。为此，每只6-8周龄的Balb/c小鼠经鼻感染4×106 FFU的呼吸道合胞病毒（第0天），然后用VV116（25、50和100 mg/kg）或利巴韦林（50和100毫克/千克）双in die（b.i.d.）治疗（补充图S3）。我们之前的研究表明，在感染后第4天（p.i.），RSV感染的小鼠的病毒载量和病理学都达到了很高的水平，因此在这个时间点，小鼠被杀死，肺部被取出。用定量RT-PCR测量肺中的病毒RNA水平，用免疫斑点试验测量病毒颗粒载量（图1e）。值得注意的是，低剂量的VV116（25mg/kg）显示出与100mg/kg利巴韦林相当的抗病毒效果，分别将病毒RNA拷贝数和感染滴度降低了约1.5log10和约2.0log10（图1e）。中等剂量（50mg/kg）的VV116表现出更强的活性，并将病毒滴度降至检测限以下（图1e）。我们还通过组织化学分析评估了受攻击小鼠的肺部病理。呼吸道合胞病毒感染后，用赋形剂治疗的小鼠表现出严重的炎症，并出现肺泡炎性斑块。相比之下，在用VV116治疗的小鼠中只观察到轻微的肺浸润，表明VV116治疗可以减少呼吸道合胞病毒感染后的肺损伤[1]。

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Balb/c小鼠的PK研究表明，在25至100mg/kg的剂量范围内，Mindeudesivir（VV116）具有线性PK曲线（图1c，补充表S6）。由于酯酶敏感前药的首过代谢，即使在100℃时，小鼠血浆中也未检测到VV116 口服给药后，母体核苷X1的血液浓度在0.5小时内迅速达到Cmax，在25mg/kg的剂量下，平均Cmax达到5360ng/ml（18.4µM，图1c，补充表S6、S7），远高于体外EC90值。X1的消除半衰期较短（2.3-4.25小时，补充表S6），支持每日两次给药方案。VV116的酯前药形式不仅旨在改善口服吸附，而且旨在规避核苷磷酰胺前药的肝脏靶向问题。临床前组织分布研究表明，X1在SD大鼠组织中广泛分布，5在Balb/c小鼠中也观察到X1的良好分布，X1在肺部的浓度约为肝脏的一半（图1d，补充表S8）。关于VV116的治疗窗口，大鼠14天重复给药口服毒性研究显示，无观测不良反应水平（NOAEL）为200mg/kg，此时X1的AUC0-t达到85151 ng h/ml（补充表S9），约为小鼠50mg/kg剂量的3.5倍。[1]

抗病毒活性和细胞毒性测定[1]
将A549、HEp-2或NHBE细胞接种到48孔板中并孵育过夜。在达到80%的细胞融合后，在细胞与不同浓度的药物孵育1小时后，将细胞感染RSV A2（A549中的MOI为2，HEp-2中的MOI0.5，NHBE细胞中的MOI/1）2小时。然后，去除病毒-药物混合物，用含药物的培养基培养细胞。接种后48小时，从细胞中提取总RNA，然后使用带有gDNA橡皮擦的PrimeScript RT试剂盒进行逆转录。为了确定病毒拷贝数，使用TB Green®Premix Ex TaqTM II进行了绝对定量RT-PCR。RSV A2 F片段用引物5'-CGAGCACAGAGAGAACTACCA-3'定量；以及5'-CCTTCTAGGTGCAGGACCTTA-3'.
在96孔板中进行细胞存活率测定，每种浓度取三份。所有药物在维持培养基（含2%FBS的DMEM）中以500微摩尔开始，用9个梯度稀释2倍。孵育48小时后，去除上清液，并在培养基中加入10μL WST-8（2-（2-甲氧基-4-（苯基）-3-（4-（苯基）-5（2,4-磺基苯）-2h-四唑鎓单钠盐）的维持培养基。孵育2小时后，使用分光光度计（BioTek）在450nm波长下测量板，并计算细胞存活率。

细胞活力测定
细胞类型： A549（感染 RSV）[1]
测试浓度： 0-1000 μM
孵育时间：48小时
实验结果：抑制A549细胞中RSV复制，EC50为1.20±0.32 μM，CC50为95.92。 ± 9.27 μM，选择性指数 (SI) 80。

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细胞和病毒[1]
本研究中使用的所有细胞均在37℃、5%CO2的加湿培养箱中培养。人喉表皮样癌（HEp-2）细胞、Vero E6细胞和A549细胞在添加了10%胎牛血清的Dulbocco的Medified Eagle培养基（DMEM；Gibco）中生长。正常人支气管上皮（NHBE）细胞在支气管上皮细胞生长培养基（BEGM）中维持，并在BulletKit中提供所有补充剂。 RSV A2株在HEp-2细胞中生长。感染后3或4天，从感染细胞中收集病毒。简而言之，将RSV感染的细胞重复冷冻和解冻3次，然后在4℃下以1000rpm离心10分钟。然后，收集上清液并在-80℃下储存直至使用。如前所述，通过免疫斑点试验测定Vero E6细胞中RSV A2的病毒滴度1。所有RSV A2感染实验均在生物安全二级（BSL-2）实验室进行。

敏德西韦 (VV116) 在小鼠体内抗呼吸道合胞病毒 (RSV) 的疗效 [1]
6-8 周龄的无特定病原体 (SPF) 雌性 Balb/c 小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。小鼠饲养于 SPF 级环境中，并遵循标准饲养条件。所有小鼠实验均经中国科学院武汉病毒研究所伦理委员会批准（批准号：WIVA25202113）。30 只小鼠（每组 5 只，共 6 组）用异氟烷麻醉后，经鼻内接种 4×10⁶ FFU 的 RSV A2 病毒。小鼠采用灌胃给药。治疗于感染后 1 小时开始，持续 4 天。对照组小鼠给予溶剂（40% PEG 400 + 10% HS 15 + 50% 超纯水 (v:v:v)）。攻毒后第4天处死小鼠，收集肺组织。每日记录小鼠体重。
左肺用组织固定液固定，包埋，切片，并进行苏木精-伊红染色，以观察肺组织的病理变化。称量右肺后，向试管中加入400μL PBS，用研磨器研磨。一部分研磨组织用于测定病毒滴度，另一部分用于使用病毒DNA/RNA提取试剂盒（TaKaRa，9766）从组织上清液中提取RNA，以测定病毒拷贝数。病毒滴度的测定和后续RNA处理方法与上述相同。

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在ICR小鼠、Balb/c小鼠和SD大鼠中对Mindeudesivir (VV116)进行药代动力学研究[1]
ICR小鼠（每组n=3，雄性）在给药前禁食12小时（仅用于口服给药）。将Mindeudesivir (VV116)溶于DMSO-乙醇-PEG300-生理盐水（5/5/40/50，v/v/v/v）中，分别以5.0 mg/kg的剂量静脉注射，或以25 mg/kg的剂量口服给药。给药后 5 分钟、0.25 小时、0.5 小时、1.0 小时、2.0 小时、4.0 小时、6.0 小时、8.0 小时和 24 小时，分别从颈静脉或颌下静脉采集血样至 EDTA-K2 抗凝管中，并立即与乙腈混合（20 μL 血液 + 80 μL 乙腈）。采用 LC-MS/MS 分析血液中分析物的浓度。
共 9 只 Balb/c 小鼠（每组 3 只，均为雄性）被分为三组，并在给药前禁食 12 小时。三组受试者分别口服25 mg/kg、50 mg/kg和100 mg/kg的Mindeudesivir (VV116)，该药物溶于40%PEG400+10% Kolliphor® HS15+50%超纯水中。给药后5分钟、0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时和24小时，分别从颈静脉或颌下静脉采集血样至EDTA-K2抗凝管中，并立即与乙腈混合（20 μL血液+80 μL乙腈）。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）分析血液中分析物的浓度。
SD大鼠（每组3只，雄性）在给药前禁食12小时（仅口服给药）。测试化合物（Mindeudesivir (VV116) 或 VV116-H）以5.0 mg/kg的剂量静脉注射，溶于DMSO-乙醇-PEG300-生理盐水（5/5/40/50，v/v/v/v）中；以30 mg/kg的剂量口服，溶于40%PEG400+10% Kolliphor® HS15+50%超纯水中。给药后 5 分钟、0.25 小时、0.5 小时、1.0 小时、2.0 小时、4.0 小时、6.0 小时、8.0 小时和 24 小时，从颈静脉采集血样至 EDTA-K2 抗凝管中。按照常规程序获取血清样本，并用 LC-MS/MS 分析上清液中分析物的浓度。

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Mindeudesivir (VV116) 在 Balb/c 小鼠中的组织分布研究 [1]
共 30 只 Balb/c 小鼠被分为 5 组（每组 3 只雌雄小鼠）。VV116 以 100 mg/kg 的剂量，溶于 40%PEG400+10% Kolliphor® HS15+50% 的溶液中，经灌胃给药。分别于给药后0（未给药）、0.25、2、6和24小时，对五组小鼠进行麻醉。采集血液样本，并取出包括肝脏和肺脏在内的组织。组织样本分别进行匀浆处理，血液样本的处理方法与上述相同。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）分析肝脏、肺脏和血液中X1的浓度。

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遗传毒性试验[1]
根据国家药品监督管理局（NMPA）和国际人用药品注册技术协调会（ICH）指南进行Ames试验、大鼠微核试验和染色体畸变试验。
采用组氨酸依赖型鼠伤寒沙门氏菌（TA97a、TA98、TA100、TA1535）和色氨酸依赖型大肠杆菌（WP2）进行Ames试验，以确定Mindeudesivir (VV116)的致突变性。该实验在-S9非代谢和+S9代谢活化条件下，采用平板渗透法进行。针对Mindeudesivir (VV116)，设置了6个剂量组（每种条件下每皿5、50、150、500、1500和5000 µg），并设置了阴性对照（DMSO）和阳性对照（ICR191、2-硝基芴、叠氮化钠、2-氨基芴和甲磺酸甲酯）。在-S9和+S9条件下，各菌株阳性对照组的回复突变菌落平均数至少是阴性对照组的两倍。所有VV116剂量组中各菌株的回复突变菌落数均小于阴性对照组的两倍，且未显示出剂量依赖性增加。结果表明，VV116 对组氨酸依赖型鼠伤寒沙门氏菌和色氨酸依赖型大肠杆菌均无致突变性。
通过测定 -S9 和 +S9 条件下染色体畸变率（不包括染色体间隙），进行染色体畸变试验，以评估 Mindeudesivir (VV116) 是否能诱导中国仓鼠肺 (CHL) 细胞的染色体损伤。将 CHL 细胞暴露于浓度分别为 10、20、35、40、43、45 和 48 μg/mL 的 Mindeudesivir (VV116) 中 4 小时（-S9/4h 组），或暴露于浓度分别为 5、10、20、25、30、35 和 40 μg/mL 的 Mindeudesivir (VV116) 中 24 小时（-S9/24h 组）。在 S9 混合物存在的情况下，将 CHL 细胞暴露于浓度分别为 10、25、50、100 和 150 μg/mL 的 VV116 中 4 小时（+S9/4h 组）。同时，设置阴性对照组（DMSO）和阳性对照组（丝裂霉素 C 和环磷酰胺一水合物）。基于VV116的细胞毒性，选取每组三个剂量进行染色体畸变分析。与阴性对照组相比，阳性化合物均能明显诱导染色体畸变。VV116 -S9/4h组在20、35和40 µg/mL浓度下的染色体畸变率分别为0.0%、0.3%和0.0%；-S9/24h组在10、25和30 µg/mL浓度下的染色体畸变率分别为1.0%、0.3%和0.3%；+S9/4h组在20、50和150 µg/mL浓度下的染色体畸变率分别为1.3%、0.7%和0.3%。所有Mindeudesivir (VV116)组的染色体畸变率均在背景范围内，与阴性对照组相比无统计学差异。结果表明，VV116对经典霍奇金淋巴瘤（CHL）细胞无诱导染色体畸变的作用。
为了评估Mindeudesivir (VV116)是否会增加大鼠骨髓中多染性微核红细胞的数量，我们进行了大鼠微核试验。将雄性和雌性SD大鼠（每组5只）分别口服0（溶剂对照组）、100（低剂量组）、200（中剂量组）和500 mg/kg/d（高剂量组）的VV116，连续给药14天。末次给药后24小时内处死动物。制备骨髓涂片，用于检测多染性红细胞/（多染性红细胞+正染性红细胞）比值（PCE/（PCE+NCE））和多染性红细胞微核率（MnPCE/PCE）。结果显示，载体组、低剂量组、中剂量组和高剂量组雌性动物的PCE/（PCE+NCE）比值分别为0.65、0.57、0.58和0.58；雄性动物的相应比值分别为0.62、0.64、0.66和0.60。VV116在大鼠中未显示出明显的骨髓毒性。该检测方法有效，因为载体组中雌性大鼠和雄性大鼠的平均微核率分别为1.4‰和0.7‰，均在历史范围内。三个VV116处理组中雌性动物的微核率分别为1.2‰、1.0‰和0.7‰，雄性动物的微核率分别为0.3‰、0.7‰和0.3‰。与阴性对照组相比，任何剂量的VV116均未对微核率产生影响。在 14 天内，剂量高达 500 mg/kg/d 的 VV116 并未诱导大鼠骨髓中微核多染性红细胞的增加。

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SD 大鼠中 Mindeudesivir (VV116) 的毒代动力学研究 [1]
将雄性和雌性 SD 大鼠分组（每组 4 只，每性别），连续 14 天口服 Mindeudesivir (VV116)（溶于 40% PEG400+10% Kolliphor® HS15+50% 超纯水），剂量分别为 100（低剂量）、200（中剂量）和 500 mg/kg/d（高剂量）。在第 1 天和第 14 天，于给药后不同时间点从颈静脉采集血样至 EDTA-K2 抗凝管中。按照常规程序采集血浆样本，并采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）分析样本中分析物的浓度。

VV116 (JT001) 是一种针对 SARS-CoV-2 的口服核苷类似物候选药物。三项 I 期研究旨在评估健康受试者单次和多次递增口服剂量 VV116 的安全性、耐受性和药代动力学，以及食物对 VV116 药代动力学和安全性的影响。三项研究依次启动：研究 1（单次递增剂量研究，SAD）、研究 2（多次递增剂量研究，MAD）和研究 3（食物影响研究，FE）。共有 86 名健康受试者入组。受试者按照方案要求服用 VV116 片剂或安慰剂。在预定的时间点采集血样进行药代动力学分析。在血浆中检测到 VV116 的代谢物 116-N1，并计算其浓度用于药代动力学参数的计算。在单次给药（SAD）中，剂量范围为25-800 mg时，AUC和Cmax呈近似剂量比例增加。T1/2在4.80-6.95小时内。在多次给药（MAD）中，Cmax和AUC的累积比率表明，重复给药VV116后药物略有累积。在标准餐（FE）中，标准餐对VV116的Cmax和AUC无影响。研究中未发生严重不良事件，也没有受试者因不良事件退出研究。因此，VV116在健康受试者中表现出令人满意的安全性和耐受性，这支持继续在COVID-19患者中研究VV116。[2]

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在Balb/c小鼠中进行的药代动力学研究表明，在25至100 mg/kg剂量范围内，Mindeudesivir (VV116)具有线性药代动力学特征（图1c，补充表S6）。由于酯酶敏感的前药VV116存在首过代谢，即使剂量高达100 mg/kg，也未在小鼠血浆中检测到。口服给药后，母体核苷X1的血药浓度在0.5小时内迅速达到Cmax，在25 mg/kg剂量下，平均Cmax达到5360 ng/ml（18.4 µM，图1c，补充表S6、S7），远高于体外EC90值。X1的消除半衰期较短（2.3–4.25 h，补充表S6），支持每日两次给药方案。VV116酯类前药的设计不仅旨在提高口服吸收率，而且旨在规避核苷磷酰胺类前药的肝脏靶向性问题。临床前组织分布研究表明，X1广泛分布于SD大鼠组织中⁵，在Balb/c小鼠中也观察到X1的良好分布，肺部X1浓度约为肝脏的一半（图1d，补充表S8）。关于VV116的治疗窗口，大鼠14天重复给药口服毒性研究显示，其NOAEL（未观察到不良反应剂量）为200 mg/kg，此时X1的AUC_0-t达到85151 ng·h/ml（补充表S9），约为小鼠50 mg/kg剂量下的3.5倍^[1]。

安全性[2]
在三项研究中，未报告死亡、严重不良事件 (SAE)、3 级或以上不良事件 (AE) 或导致药物停用/中断的不良事件。所有不良事件均无需任何治疗或干预即可恢复。
研究 1：单次递增剂量研究
25、200、400、800 和 1200 mg 剂量组以及安慰剂组中发生不良事件的受试者人数（发生率）分别为 2 例 (50%)、3 例 (50%)、3 例 (50%)、3 例 (50%)、0 例 (0%) 和 5 例 (50%)（表 7）。未观察到不良事件发生与剂量相关。在单次递增剂量研究中，接受 Mindeudesivir (VV116) 治疗的受试者不良事件发生率低于接受安慰剂的受试者（39.3% vs. 50%）。除1例2级中性粒细胞减少症外，所有不良事件的严重程度均为CTCAE 1级。剂量递增期间未达到剂量递增终止标准。最常见的药物相关不良事件为窦性心动过缓、心电图PR间期缩短和血胆红素升高。
研究2：多次递增剂量研究
200 mg、400 mg、600 mg剂量组和安慰剂组中发生不良事件的受试者人数（发生率）分别为3例（33.3%）、5例（55.6%）、6例（66.7%）和5例（55.6%）（表8）。接受Mindeudesivir (VV116)治疗的受试者不良事件发生率与接受安慰剂治疗的受试者相当（51.9% vs. 55.6%）。不良事件的发生与剂量相关。除安慰剂组1例受试者出现3例2级恶心外，不良事件的严重程度总体较轻（CTCAE 1级）。最常见的药物相关不良事件为血尿酸升高、口干、尿结晶和恶心。400 mg剂量组2例受试者出现1级转氨酶升高（丙氨酸氨基转移酶升高、天冬氨酸氨基转移酶升高和γ-谷氨酰转移酶升高），共3例。转氨酶升高为短暂性，可自行恢复。
研究3：食物影响研究
空腹、进食标准餐和进食高脂餐后出现不良事件的受试者人数（发生率）分别为0例（0%）、2例（16.7%）和4例（33.3%）。两名受试者在摄入标准餐后出现一度房室传导阻滞，而四名受试者在摄入高脂餐后出现尿细菌检测阳性、尿结晶、血压升高和一度房室传导阻滞。所有不良事件的严重程度均为CTCAE 1级。
其他安全性评估
研究3中400 mg剂量组仅有一名受试者出现短暂的轻度促甲状腺激素升高，无需治疗即可自行恢复。性激素检测、眼科检查和甲状腺B超检查均未发现具有临床意义的异常。

[1]. Oral remdesivir derivative VV116 is a potent inhibitor of respiratory syncytial virus with efficacy in mouse model. Signal Transduct Target Ther. 2022;7(1):123. Published 2022 Apr 16.

[2]. Safety, tolerability, and pharmacokinetics of VV116, an oral nucleoside analog against SARS-CoV-2, in Chinese healthy subjects. Acta Pharmacol Sin. 2022;1-9.

[3]. Impact of Deuterium Substitution on the Pharmacokinetics of Pharmaceuticals. Ann Pharmacother. 2019 Feb;53(2):211-216.

[4]. Therapeutic efficacy of an oral nucleoside analog of remdesivir against SARS-CoV-2 pathogenesis in mice. bioRxiv [Preprint]. 2021 Sep 17:2021.09.13.460111.

[5]. Design and development of an oral remdesivir derivative VV116 against SARS-CoV-2. Cell Res. 2021 Sep 28;31(11):1212–1214.

核苷类抗病毒药物由于靶向病毒聚合酶高度保守的催化中心，因此具有较高的耐药性遗传屏障。VV116已被证实对多种SARS-CoV-2变种有效。其良好的药代动力学特性和安全性使其成为治疗COVID-19的一种极具前景的口服抗病毒药物。本研究中的体内疗效也为VV116治疗RSV感染的潜在疗效提供了强有力的证据。应考虑开展VV116的临床研究以减轻RSV感染。[1] 明德西韦（VV116）是一种核苷类似物的前药，用于治疗COVID-19。利福平（RDV）是首个获得FDA批准用于治疗COVID-19的药物，它也是一种核苷类似物。与RDV相比，VV116表现出更好的体外抗病毒活性和选择性。此外，VV116 可口服给药，且具有良好的口服生物利用度，比静脉注射 RDV 更方便 COVID-19 患者。[2]
明德西韦 (VV116) 口服后迅速水解为代谢物 116-N1。在血浆中检测到的是 116-N1 而非原型药物 VV116，并以此计算药代动力学参数。口服后，血浆中 116-N1 的峰浓度迅速达到（中位 Tmax 为 1.00–2.50 小时）。在单次递增剂量研究中，AUC 和 Cmax 在 25–800 mg 的剂量范围内呈近似剂量比例增加。然而，剂量从 800 mg 增加到 1200 mg 时，各项参数并未出现显著变化（AUC_0-t：25886 vs. 28057 h·ng/mL；C_max：2796 vs. 3086 ng/mL），表明药物吸收可能已达到饱和。药物溶解度是影响药物吸收的重要因素，当药物在吸收部位达到最大浓度（饱和溶解度）时，药物吸收达到最大值。推测 VV116 的溶解度有限可能是导致药物吸收饱和的原因。给药后 0-72 小时内，116-N1 在尿液中的排泄分数为 53.6%，而 116-N1 和 VV116 在粪便中的排泄分数为 5.25%，表明 VV116 主要以代谢物 116-N1 的形式经肾脏排泄。 [2]
在单次递增剂量研究中，Mindeudesivir (VV116) 的平均半衰期 (t1/2) 为 4.80–6.95 小时，提示临床治疗可采用每日两次给药方案。因此，在多次递增剂量研究中，采用连续每日两次给药（间隔 12 小时）的方案，持续 5.5 天（第 1–6 天）。AUC 参数和 Cmax 的累积比率表明，连续给药后 VV116 有轻微的累积。在第 5 天和第 6 天多次给药 200 mg 后，116-N1 的谷浓度在 242–345 ng/mL 范围内（表 5），高于 116-N1 在临床前抗 SARS-CoV-2 试验中针对 omicron 变异株的 EC90 (186.5 ng/mL)。因此，每日两次，每次200 mg及以上的给药方案可以持续维持有效的抗病毒药物浓度，建议在后续COVID-19患者的临床研究中采用该方案。[2]
空腹、标准餐和高脂餐条件下的中位Tmax分别为1.50、3.00和2.50小时，表明进食可以延长达峰时间。与空腹相比，进食后标准餐和高脂餐条件下Cmax的几何平均比值（GMR）（90% CI）均在80%–125%的范围内；标准餐条件下AUC的GMR（90% CI）也在80%–125%的范围内，但高脂餐条件下AUC0-t和AUC0-∞分别略微增加了26.32%和24.67%。由于食物摄入对米诺地韦 (VV116) 的 Cmax 无影响，而高脂饮食会略微增加 AUC，因此建议在 COVID-19 治疗中，VV116 可在空腹或进食后服用。[2]
在单次递增剂量研究中，未观察到明显的剂量相关性趋势，安慰剂组报告不良事件的受试者比例 (50.0%) 高于米诺地韦 (VV116) 组 (39.3%)。除 1 例 2 级中性粒细胞减少症外，所有不良事件的严重程度均为 CTCAE 1 级。在多次递增剂量研究中，VV116 组的不良事件发生率与安慰剂组相当 (51.9% vs. 55.6%)。不良事件的发生率与剂量略有相关性。 400 mg剂量组中仅有1例受试者报告了丙氨酸氨基转移酶（ALT）升高和天冬氨酸氨基转移酶（AST）升高。所有接受VV116治疗的受试者的不良事件（AE）均为1级，且无需任何治疗即可恢复。整个研究期间未发生严重不良事件，也没有受试者因不良事件退出研究。在临床前动物毒理学研究中发现，VV116可能对眼睛、甲状腺和性腺有毒性。在本研究中，我们对健康受试者在服用VV116前后进行了眼科检查、甲状腺功能检查、甲状腺B超检查和性激素检测。在上述器官中未观察到明显的毒性。总体而言，在三项研究中，VV116在健康受试者中表现出令人满意的安全性。[2]
肝毒性是RDV的主要不良反应（ADR），表现为转氨酶升高。在 I 期临床研究（GS-US-399-5505 研究）中，受试者接受 200 mg 的负荷剂量 RDV，随后接受 100 mg 的剂量，持续最多 9 天。20 名受试者中有 9 名（45%）观察到 1 级或 2 级的短暂性 ALT 升高。转氨酶升高也被报道为接受 RDV 治疗的 COVID-19 患者中最常见的不良反应。在明德西韦 (VV116) 的多剂量递增研究中，27 名受试者中仅有 1 名（3.7%）出现 1 级的短暂性 ALT 升高，并在停用 VV116 后自行恢复。这可能是由于 RDV 对肝脏具有很高的靶向性，其肝脏/血液浓度比约为 VV116 的 21 倍。单次静脉注射10 mg/kg [14C]RDV后4小时，RDV的肝脏/血液浓度比（以14C-GS-5734当量计算）为57.8；而单次口服30 mg/kg VV116后2小时，VV116的肝脏/血液浓度比（以主要代谢物116-N1计算）仅为2.8。尽管VV116的肝毒性风险低于RDV，但在后续针对COVID-19患者的VV116 II期研究中，仍将继续监测肝功能。[2]
结论[2]
Mindeudesivir (VV116)在健康受试者中表现出令人满意的安全性和耐受性。口服VV116后，116-N1的血浆药物浓度迅速达到峰值（中位Tmax为1.00-2.50小时）。在25-800 mg的剂量范围内，AUC和Cmax呈近似剂量比例增加，而药物吸收饱和可能在800 mg剂量时达到。标准餐对VV116的Cmax和AUC无影响。多次给药后，每日两次，每次200-600 mg的剂量水平可达到有效的抗病毒浓度。[2]
总之，这些研究的安全性数据和药代动力学特征支持继续在COVID-19患者中研究VV116。

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尽管安全有效的SARS-CoV-2疫苗已迅速推广，但COVID-19大流行仍未得到控制，这凸显了开发高效抗病毒药物的必要性。在感染和疫苗接种后免疫力减弱的情况下，突破性感染变得越来越常见，而治疗选择仍然有限。此外，SARS-CoV-2 变异株的出现及其可能逃避单克隆抗体治疗的潜力，凸显了开发靶向高度保守病毒蛋白的第二代口服抗病毒药物的必要性，以便能够快速应用于门诊患者。本文中，我们展示了 GS-621763 的体外抗病毒活性和体内治疗效果。GS-621763 是瑞德西韦的母体核苷类药物 GS-441524 的口服生物利用度较高的前药，其靶点为高度保守的 RNA 依赖性 RNA 聚合酶。GS-621763 在肺细胞系和两种不同的人原代肺细胞培养系统中均表现出显著的抗病毒活性。口服 GS-621763 后观察到的剂量比例药代动力学特征转化为感染 SARS-CoV-2 的小鼠的剂量依赖性抗病毒活性。治疗剂量的 GS-621763 显著降低了 COVID-19 小鼠模型的病毒载量，减轻了肺部病理损伤，并改善了肺功能。 GS-621763 与目前正在进行人体临床试验的口服核苷类似物抗病毒药物莫努匹拉韦的直接比较表明，两种药物的疗效相似。这些数据表明，瑞德西韦口服前药治疗可显著改善 SARS-CoV-2 感染小鼠的预后。因此，GS-621763 支持探索 GS-441524 口服前药用于治疗人类 COVID-19。[4]

C24H30DN5O7

502.54

502.228

C, 57.36; H, 6.42; N, 13.94; O, 22.29

2647442-33-7

GS-621763;2647442-13-3; 2647442-33-7; 2779498-79-0 (HBr)

163358784

White to off-white solid powder

2.3

168

1

11

11

36

887

4

[2H]C1=C2C(=NC=NN2C(=C1)[C@]3([C@@H]([C@@H]([C@H](O3)COC(=O)C(C)C)OC(=O)C(C)C)OC(=O)C(C)C)C#N)N

RVSSLHFYCSUAHY-QXMJNOOVSA-N

InChI=1S/C24H31N5O7/c1-12(2)21(30)33-9-16-18(34-22(31)13(3)4)19(35-23(32)14(5)6)24(10-25,36-16)17-8-7-15-20(26)27-11-28-29(15)17/h7-8,11-14,16,18-19H,9H2,1-6H3,(H2,26,27,28)/t16-,18-,19-,24+/m1/s1/i7D

(2R,3R,4R,5R)-2-(4-amino-5-deuteropyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-7-yl)-2-cyano-5-((isobutyryloxy)methyl)tetrahydrofuran-3,4-diyl bis(2-methylpropanoate)

VV116; VV 116; VV-116; JT001; JT-001; JT 001;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL ( ~198.98 mM ) Ethanol : ~100 mg/mL

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。