20(S)-Hydroxycholesterol

别名: 20α-羟基胆固醇; 5-胆甾烯-3β,20α-二醇;á-羟基胆固醇;20Alpha-羟基胆固醇
目录号: V30323 纯度: ≥98%
20(S)-羟基胆固醇 (20α-Hydroxycholesterol) 是平滑 (smo) 癌蛋白的变构激活剂。
20(S)-Hydroxycholesterol CAS号: 516-72-3
产品类别: New1
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
10mg
50mg
100mg
250mg
500mg
Other Sizes
点击了解更多
  • 与全球5000+客户建立关系
  • 覆盖全球主要大学、医院、科研院所、生物/制药公司等
  • 产品被大量CNS顶刊文章引用
InvivoChem产品被CNS等顶刊论文引用
产品描述
20(S)-羟基胆固醇 (20α-Hydroxycholesterol) 是平滑 (smo) 癌蛋白的变构激活剂。在使用NIH3T3细胞的基因转录报告实验中,激活hedgehog (Hh)信号通路的EC50为3 μM。
生物活性&实验参考方法
靶点
1. Smoothened (Smo) protein (allosteric activator, EC50 for Hedgehog pathway activation: ~1 μM in C3H10T1/2 cells) [1]
2. Extracellular domain of Smoothened (Smo ECD, binding affinity KD: ~500 nM via surface plasmon resonance, SPR) [2]
体外研究 (In Vitro)
1. 在C3H10T1/2小鼠间充质干细胞中,20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(0.1–10 μM)以浓度依赖性方式激活Hedgehog信号通路。1 μM浓度下,Gli荧光素酶报告基因活性较未处理对照组升高8倍,且诱导Smo向初级纤毛 translocation(免疫荧光显示~70%的细胞中Smo定位于纤毛,对照组仅~10%)[1]
2. 在表达Smo的HEK293T细胞中,20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(0.5–5 μM)上调Hedgehog通路下游靶基因Gli1:2 μM浓度下,qPCR显示Gli1 mRNA水平升高5倍,Western blot显示Smo蛋白稳定性增加2.5倍(Smo降解减少)[1]
3. 通过SPR实验,20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)可特异性结合重组Smo ECD,KD值为~500 nM;对配体结合口袋突变的Smo ECD(如Y384A突变体)无结合活性,证实其结合于Smo的经典配体口袋[2]
4. 在Shh应答性NIH3T3细胞中,20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(1–5 μM)与低剂量 Sonic Hedgehog(Shh,10 ng/mL)协同增强通路激活:联合处理使Gli1表达升高12倍,而单独使用Shh仅升高2倍[2]
酶活实验
1. Gli荧光素酶报告基因实验:将稳定表达Gli荧光素酶(及内参Renilla荧光素酶)的C3H10T1/2细胞接种于96孔板,用20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(0.1–10 μM)处理24小时。用被动裂解缓冲液裂解细胞,加入荧光素酶底物并检测发光强度,计算相对荧光素酶活性(Gli/Renilla),通过非线性回归得到EC50[1]
2. SPR结合实验:将昆虫细胞纯化的重组Smo ECD通过胺偶联固定于CM5传感器芯片,在25°C下将20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(0.01–10 μM,溶于含0.05% Tween-20的PBS)以30 μL/min流速流过芯片。记录传感图,扣除空白信号(仅缓冲液),用BIAevaluation软件按1:1结合模型拟合数据,计算KD值[2]
3. 等温滴定量热(ITC)实验:ITC样品池加入10 μM Smo ECD,注射器加入100 μM 20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(均溶于20 mM Tris-HCl,pH 7.4)。25°C下进行滴定(20次注射,每次2 μL),记录每次注射的热变化,扣除稀释热后用Origin软件分析,确定结合化学计量比(n=1)及热力学参数(ΔH=-12 kcal/mol,ΔS=-15 cal/mol·K)[2]
细胞实验
1. Smo纤毛translocation实验:将C3H10T1/2细胞接种于盖玻片,用20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(1 μM)处理8小时。4%多聚甲醛固定细胞,0.1% Triton X-100透化,5% BSA封闭,加入一抗(抗Smo,红色;抗乙酰化α-微管蛋白,纤毛标志物,绿色)及荧光二抗孵育。共聚焦显微镜成像,统计Smo与纤毛共定位的细胞百分比[1]
2. Gli1 mRNA/蛋白检测实验:用20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(0.5–5 μM)处理HEK293T细胞24小时。mRNA检测:提取总RNA,逆转录为cDNA,用Gli1特异性引物进行qPCR(GAPDH为内参);蛋白检测:提取总蛋白,SDS-PAGE电泳后转印至PVDF膜,用抗Gli1及抗β-肌动蛋白(内参)抗体孵育,化学发光法检测信号[1]
3. Shh协同实验:将NIH3T3细胞接种于6孔板,分别用20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(1–5 μM)单独处理、Shh(10 ng/mL)单独处理,或二者联合处理24小时。提取RNA,qPCR检测Gli1表达,计算相对于未处理对照组的倍数变化[2]
参考文献

[1]. Oxysterols are allosteric activators of the oncoprotein Smoothened. Nat Chem Biol. 2012 Jan 8;8(2):211-20.

[2]. Nedelcu D, et al, Oxysterol binding to the extracellular domain of Smoothened in Hedgehog signaling. Nat Chem Biol. 2013 Sep;9(9):557-64.

其他信息
20-羟基胆固醇是一种氧固醇,它是胆固醇在第20位被羟基取代而形成的。它在人类和鼠类中均有代谢作用。它是一种20-羟基类固醇、氧固醇和3β-羟基-Δ(5)-类固醇。
已有报道称,家蚕和智人体内均存在20-羟基胆固醇,并有相关数据。
1. 20(S)-羟基胆固醇是一种内源性氧固醇(氧化胆固醇衍生物),可作为Smo的特异性变构激活剂。Smo是Hedgehog信号通路中的关键癌蛋白,该通路的失调与多种癌症(例如基底细胞癌、髓母细胞瘤)相关[1]。
2. 与Sonic Hedgehog (Shh,Patched1的天然配体,而Patched1是Smo的上游抑制剂)不同,20(S)-羟基胆固醇可直接激活Smo,而无需Patched1的参与,因此它是研究Smo的重要工具。 Patched1 不依赖的 Smo 激活和 Hedgehog 通路失调 [2]
3. 20(S)-羟基胆固醇与 Smo ECD 的结合诱导构象变化,促进 Smo 二聚化和易位至初级纤毛——这种易位对于 Hedgehog 通路激活和下游细胞增殖信号至关重要 [1,2]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C27H46O2
分子量
402.65294
精确质量
402.35
CAS号
516-72-3
PubChem CID
121935
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.03g/cm3
沸点
512.3ºC at 760mmHg
熔点
136-137ºC
闪点
213.1ºC
折射率
1.538
LogP
6.503
tPSA
40.46
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
2
可旋转键数目(RBC)
5
重原子数目
29
分子复杂度/Complexity
638
定义原子立体中心数目
8
SMILES
CC(C)CCC[C@@](C)([C@H]1CC[C@@H]2[C@@]1(CC[C@H]3[C@H]2CC=C4[C@@]3(CC[C@@H](C4)O)C)C)O
InChi Key
MCKLJFJEQRYRQT-APGJSSKUSA-N
InChi Code
InChI=1S/C27H46O2/c1-18(2)7-6-14-27(5,29)24-11-10-22-21-9-8-19-17-20(28)12-15-25(19,3)23(21)13-16-26(22,24)4/h8,18,20-24,28-29H,6-7,9-17H2,1-5H3/t20-,21-,22-,23-,24-,25-,26-,27-/m0/s1
化学名
(3S,8S,9S,10R,13S,14S,17S)-17-[(2S)-2-hydroxy-6-methylheptan-2-yl]-10,13-dimethyl-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~30 mg/mL (~74.51 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.4835 mL 12.4177 mL 24.8355 mL
5 mM 0.4967 mL 2.4835 mL 4.9671 mL
10 mM 0.2484 mL 1.2418 mL 2.4835 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
+
+

计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

相关产品
联系我们