| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
1. Smoothened (Smo) protein (allosteric activator, EC50 for Hedgehog pathway activation: ~1 μM in C3H10T1/2 cells) [1]
2. Extracellular domain of Smoothened (Smo ECD, binding affinity KD: ~500 nM via surface plasmon resonance, SPR) [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
1. 在C3H10T1/2小鼠间充质干细胞中,20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(0.1–10 μM)以浓度依赖性方式激活Hedgehog信号通路。1 μM浓度下,Gli荧光素酶报告基因活性较未处理对照组升高8倍,且诱导Smo向初级纤毛 translocation(免疫荧光显示~70%的细胞中Smo定位于纤毛,对照组仅~10%)[1]
2. 在表达Smo的HEK293T细胞中,20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(0.5–5 μM)上调Hedgehog通路下游靶基因Gli1:2 μM浓度下,qPCR显示Gli1 mRNA水平升高5倍,Western blot显示Smo蛋白稳定性增加2.5倍(Smo降解减少)[1] 3. 通过SPR实验,20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)可特异性结合重组Smo ECD,KD值为~500 nM;对配体结合口袋突变的Smo ECD(如Y384A突变体)无结合活性,证实其结合于Smo的经典配体口袋[2] 4. 在Shh应答性NIH3T3细胞中,20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(1–5 μM)与低剂量 Sonic Hedgehog(Shh,10 ng/mL)协同增强通路激活:联合处理使Gli1表达升高12倍,而单独使用Shh仅升高2倍[2] |
| 酶活实验 |
1. Gli荧光素酶报告基因实验:将稳定表达Gli荧光素酶(及内参Renilla荧光素酶)的C3H10T1/2细胞接种于96孔板,用20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(0.1–10 μM)处理24小时。用被动裂解缓冲液裂解细胞,加入荧光素酶底物并检测发光强度,计算相对荧光素酶活性(Gli/Renilla),通过非线性回归得到EC50[1]
2. SPR结合实验:将昆虫细胞纯化的重组Smo ECD通过胺偶联固定于CM5传感器芯片,在25°C下将20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(0.01–10 μM,溶于含0.05% Tween-20的PBS)以30 μL/min流速流过芯片。记录传感图,扣除空白信号(仅缓冲液),用BIAevaluation软件按1:1结合模型拟合数据,计算KD值[2] 3. 等温滴定量热(ITC)实验:ITC样品池加入10 μM Smo ECD,注射器加入100 μM 20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(均溶于20 mM Tris-HCl,pH 7.4)。25°C下进行滴定(20次注射,每次2 μL),记录每次注射的热变化,扣除稀释热后用Origin软件分析,确定结合化学计量比(n=1)及热力学参数(ΔH=-12 kcal/mol,ΔS=-15 cal/mol·K)[2] |
| 细胞实验 |
1. Smo纤毛translocation实验:将C3H10T1/2细胞接种于盖玻片,用20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(1 μM)处理8小时。4%多聚甲醛固定细胞,0.1% Triton X-100透化,5% BSA封闭,加入一抗(抗Smo,红色;抗乙酰化α-微管蛋白,纤毛标志物,绿色)及荧光二抗孵育。共聚焦显微镜成像,统计Smo与纤毛共定位的细胞百分比[1]
2. Gli1 mRNA/蛋白检测实验:用20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(0.5–5 μM)处理HEK293T细胞24小时。mRNA检测:提取总RNA,逆转录为cDNA,用Gli1特异性引物进行qPCR(GAPDH为内参);蛋白检测:提取总蛋白,SDS-PAGE电泳后转印至PVDF膜,用抗Gli1及抗β-肌动蛋白(内参)抗体孵育,化学发光法检测信号[1] 3. Shh协同实验:将NIH3T3细胞接种于6孔板,分别用20(S)-羟基胆固醇(20(S)-Hydroxycholesterol)(1–5 μM)单独处理、Shh(10 ng/mL)单独处理,或二者联合处理24小时。提取RNA,qPCR检测Gli1表达,计算相对于未处理对照组的倍数变化[2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
20-羟基胆固醇是一种氧固醇,它是胆固醇在第20位被羟基取代而形成的。它在人类和鼠类中均有代谢作用。它是一种20-羟基类固醇、氧固醇和3β-羟基-Δ(5)-类固醇。
已有报道称,家蚕和智人体内均存在20-羟基胆固醇,并有相关数据。 1. 20(S)-羟基胆固醇是一种内源性氧固醇(氧化胆固醇衍生物),可作为Smo的特异性变构激活剂。Smo是Hedgehog信号通路中的关键癌蛋白,该通路的失调与多种癌症(例如基底细胞癌、髓母细胞瘤)相关[1]。 2. 与Sonic Hedgehog (Shh,Patched1的天然配体,而Patched1是Smo的上游抑制剂)不同,20(S)-羟基胆固醇可直接激活Smo,而无需Patched1的参与,因此它是研究Smo的重要工具。 Patched1 不依赖的 Smo 激活和 Hedgehog 通路失调 [2] 3. 20(S)-羟基胆固醇与 Smo ECD 的结合诱导构象变化,促进 Smo 二聚化和易位至初级纤毛——这种易位对于 Hedgehog 通路激活和下游细胞增殖信号至关重要 [1,2] |
| 分子式 |
C27H46O2
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|---|---|
| 分子量 |
402.65294
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| 精确质量 |
402.35
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| CAS号 |
516-72-3
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| PubChem CID |
121935
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.03g/cm3
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| 沸点 |
512.3ºC at 760mmHg
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| 熔点 |
136-137ºC
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| 闪点 |
213.1ºC
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| 折射率 |
1.538
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| LogP |
6.503
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| tPSA |
40.46
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
2
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
29
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| 分子复杂度/Complexity |
638
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| 定义原子立体中心数目 |
8
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| SMILES |
CC(C)CCC[C@@](C)([C@H]1CC[C@@H]2[C@@]1(CC[C@H]3[C@H]2CC=C4[C@@]3(CC[C@@H](C4)O)C)C)O
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| InChi Key |
MCKLJFJEQRYRQT-APGJSSKUSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C27H46O2/c1-18(2)7-6-14-27(5,29)24-11-10-22-21-9-8-19-17-20(28)12-15-25(19,3)23(21)13-16-26(22,24)4/h8,18,20-24,28-29H,6-7,9-17H2,1-5H3/t20-,21-,22-,23-,24-,25-,26-,27-/m0/s1
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| 化学名 |
(3S,8S,9S,10R,13S,14S,17S)-17-[(2S)-2-hydroxy-6-methylheptan-2-yl]-10,13-dimethyl-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~30 mg/mL (~74.51 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4835 mL | 12.4177 mL | 24.8355 mL | |
| 5 mM | 0.4967 mL | 2.4835 mL | 4.9671 mL | |
| 10 mM | 0.2484 mL | 1.2418 mL | 2.4835 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。