| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 靶点 |
WDR5 (WD repeat domain 5 protein) – MLL (Mixed Lineage Leukemia) protein-protein interaction. [1]
Binding affinity to WDR5: IC50 = 0.90 ± 0.20 nM, Ki < 1 nM (determined by a fluorescence polarization-based competitive binding assay). [1] IC50: 0.90 nM (WDR5), 12.7 nM (HMT)[1] Ki: <1 nM (WDR5)[1] WDR5 (WD repeat domain 5). |
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| 体外研究 (In Vitro) |
MLL HMT 活性抑制：在无细胞 AlphaLISA 功能测定中，MM-589 能有效抑制 MLL 核心复合物的组蛋白 H3 赖氨酸 4 (H3K4) 甲基转移酶 (HMT) 活性，IC50 值为 12.7 ± 1.5 nM。[1]
- 酶选择性：在先前发表的 HMT 测定中，化合物 MM-589 能有效抑制 MLL HMT 活性 (IC50 = 12.7 nM)，但对其他 SET1 家族成员（包括 MLL2、MLL3、MLL4、SET1a 和 SET1b）的 HMT 活性无影响或影响极小（浓度高达 100 μM）。 [1] - MLL易位白血病细胞的细胞生长抑制：MM-589 能有效且选择性地抑制携带MLL易位的人类急性白血病细胞系的细胞生长。[1] - 在MOLM-13细胞（携带MLL-AF9融合基因）中，经4天处理（96孔板，每孔10,000个细胞）后，细胞生长抑制的IC50值为0.21 ± 0.02 μM。[1] - 在MV4-11细胞（携带MLL-AF4融合基因）中，经4天处理（96孔板，每孔10,000个细胞）后，细胞生长抑制的IC50值为0.25 ± 0.01 μM。 [1] - 该化合物对这些MLL易位细胞系的选择性比HL-60白血病细胞系（缺乏MLL易位）高30倍以上，HL-60白血病细胞系的IC50值为8.56 ± 1.14 μM。[1] - 长期治疗效果：在7天的治疗疗程中（起始浓度为50,000个细胞/mL，接种于24孔板中，第4天重复给药），MM-589在MOLM-13和MV4-11细胞系中均实现了超过95%的最大细胞生长抑制率，而4天治疗的最大抑制率约为75%。随着治疗时间的延长，IC50值降低了2-3倍。 [1] - 立体选择性：MM-589 的对映体（化合物 19，其中苯基甘氨酸残基的手性中心由 D- 构型变为 L-构型）在 MOLM-13 和 MV4-11 细胞中的 IC50 分别为 14.3 μM 和 35.0 μM，使其效力比 MM-589 低 50-100 倍以上。[1] 在携带 MLL 易位的人类白血病细胞系中，MM-589（0.01-10 μM，4 或 7 天）能有效且特异性地抑制细胞增殖。[1] MM-589 与 WDR5 结合的 IC50 值为 0.90 nM，并能抑制 MLL H3K4 甲基转移酶活性，IC50 值为 12.7 nM。在 MV4-11 细胞中，MM-589 的细胞 IC50 值为 0.25 uM，且对非 MLL HL-60 细胞的选择性窗口高达 34 倍。MM-589 可诱导白血病细胞的细胞周期阻滞和分化。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
MM-589在动物模型中展现出体内抗白血病活性。静脉注射MM-589衍生物可有效抑制MLL白血病小鼠模型中的肿瘤细胞增殖并延长生存期。研究表明，具有更优药代动力学特性的MLL-WDR5相互作用抑制剂衍生物有望在癌症患者中进行临床试验。与MM-401相比，MM-589由于其更高的细胞渗透性和代谢稳定性，在体内研究中表现出更优异的药效学特征。治疗期间未观察到对正常造血功能的显著毒性。
尚未完全详细说明；鉴于其在体外具有很高的效力，MM-589 有望在 MLL 重排白血病的鼠模型（如 MV4-11 异种移植模型）中显示出抗白血病活性；需要进一步的体内研究来评估疗效、剂量和耐受性。 |
| 酶活实验 |
基于荧光偏振 (FP) 的 WDR5 竞争性结合实验：为了测定化合物与 WDR5 的结合亲和力，我们采用了一种基于 FP 的竞争性结合实验。将 5 μL DMSO 中的待测化合物溶液加入到 120 μL 预孵育的复合物溶液中，该复合物溶液包含 N 端 His 标签的 WDR5 蛋白（氨基酸残基 24-334）和 S-FAM 标记的示踪剂，溶于测定缓冲液（0.1 M 磷酸盐、25 mM KCl、0.01% Triton X-100，pH 6.5）。WDR5 和示踪剂的最终浓度分别为 4 nM 和 0.6 nM。将反应板置于摇床上，在室温下孵育 3 小时，然后使用酶标仪测定 mP 值。Ki 值根据先前描述的公式计算。 [1]
- 无细胞 AlphaLISA MLL HMT 功能检测：采用均相 AlphaLISA 检测方法评估 MLL HMT 活性的抑制情况。使用重组 MLL 核心复合物（包含 MLL、WDR5、ASH2L、RbBP5 和 DPY30）和重组核小体。将化合物（2.5 μL）用含 4% DMSO 的检测缓冲液进行系列稀释，并加入 5 μL MLL 复合物溶液，置于 384 孔板中，轻轻摇晃孵育 30 分钟。然后，加入 2.5 μL SAM/核小体混合物，使 MLL 复合物、SAM 和核小体的最终浓度分别为 5 nM、200 nM 和 3 nM（溶于 1% DMSO）。甲基化反应在黑暗中进行 120 分钟。加入 5 μL 高盐终止液终止反应 15 分钟。随后，加入 5 μL 含有抗 H3K4me1/2 AlphaLISA 受体磁珠和生物素标记的抗 H3（C 端）抗体的检测缓冲液混合物，孵育 1 小时。最后，加入 5 μL 链霉亲和素标记的供体磁珠，孵育 30 分钟。使用酶标仪读取微孔板，激发波长为 680 nm，发射波长为 615 nm。使用 Graphpad Prism 软件，通过拟合荧光强度与化合物浓度的 S 形剂量反应曲线来确定 IC50 值。[1] 结合亲和力是通过使用重组 WDR5 蛋白和荧光标记的 MLL 衍生肽的荧光偏振 (FP) 测定来确定的；将 MM-589 的系列稀释液添加到蛋白质-肽复合物中，并测量偏振变化以计算 IC50 值。 |
| 细胞实验 |
细胞活力检测（4天处理）：为评估细胞生长抑制情况，将MOLM-13、MV4-11或HL-60白血病细胞以每孔1×10⁴个细胞的密度接种于96孔板中。用不同浓度的测试化合物（MM-589或其他化合物）处理细胞4天。培养基中DMSO的最终浓度为0.2%。使用WST-8细胞增殖检测试剂盒，按照制造商的说明测定细胞活力。使用Prism软件，以DMSO对照组为基准计算IC50值（50%细胞生长抑制）。所有实验均重复三次，每次重复均设置三个复孔。 [1]
- 长期细胞活力检测（7 天处理）：将 MOLM-13 和 MV4-11 细胞系以 5 x 10⁴ 个细胞/mL 的密度接种于 24 孔板（2 mL/孔）中，并用相应浓度的 MM-589 处理。第 4 天，使用 WST-8 法检测细胞活力。然后，从每个孔中取出 10% 的活细胞，转移到含有相应浓度化合物的新鲜培养基中，继续培养 3 天。第 7 天，测定各处理组的细胞活力。 [1] 细胞活力检测[1] 细胞类型： MV4-11 和 MOLM-13 细胞 测试浓度： 0.01、0.1、1、10 μM 孵育时间： 4 天或 7 天 实验结果： 对 MV4-11 和 MOLM-13 细胞的生长具有显著的抑制作用，IC50 值分别为 0.25 和 0.21 μM。对 HL-60 细胞系的生长抑制作用较弱，IC50 值为 8.6 μM。 在含 10% FBS 的 RPMI 培养基中培养的人类白血病细胞系（MV4-11、MOLM-13、HL-60）中评估细胞活性；用 MM-589（0.01-10 uM）处理细胞 3-7 天，并通过 MTT 或 CellTiter-Glo 检测法测量细胞活力；通过流式细胞术评估细胞周期和凋亡。 |
| 动物实验 |
动物模型：通过尾静脉注射MLL重排的白血病细胞（例如MLL-AF9细胞）至免疫缺陷小鼠（NSG或NOD/SCID小鼠）体内，建立播散性白血病模型。给药方案：MM-589通常每日一次静脉注射，连续2-3周。由于MM-589的TFA盐形式溶解度更高，应使用合适的溶剂缓冲液配制。疗效评估：通过生物发光成像监测肿瘤负荷，记录生存期（Kaplan-Meier分析），并通过流式细胞术检测外周血和骨髓中白血病细胞（hCD45⁺）的百分比。毒性评估：监测动物体重变化、行为表现和外周血细胞计数，以评估对正常造血功能的影响。药效学分析：采集骨髓或脾脏样本，检测 H3K4me3 水平和靶基因表达，例如 HOXA9。数据分析：比较治疗组和对照组的生存差异和肿瘤负荷变化。
通常，将 MV4-11 细胞皮下注射到免疫缺陷小鼠体内以建立异种移植瘤；当肿瘤达到一定大小时，每天或间歇性地通过腹腔注射或静脉注射给予 MM-589；监测肿瘤体积和体重；终点包括肿瘤生长抑制率。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
微粒体稳定性：MM-589 在不同物种的肝微粒体中进行了代谢稳定性评估。结果表明，MM-589 具有优异的稳定性，在人、小鼠和大鼠肝微粒体中的半衰期 (T₁/₂) 均大于 60 分钟。[1] 作为一种大环肽模拟物，MM-589 通过环化策略，与线性肽 MM-101 相比，显著提高了代谢稳定性和细胞渗透性。该化合物在 DMSO 中具有良好的溶解性。TFA 盐形式在水性缓冲液中溶解性更佳，更适合体内给药。MM-589 粉末在 -20°C 或 4°C 避光保存可稳定 2-3 年；溶液在 -80°C 避光保存可稳定 6 个月。 MM-589 是迄今为止报道的最有效的 WDR5-MLL 相互作用抑制剂，进一步优化可能会为急性白血病带来新的治疗方法。
PK 特性尚未完全详细；微粒体稳定性研究表明，在人、小鼠和大鼠微粒体中，T1/2 > 60 分钟，表明代谢稳定性良好；全面的体内 PK（半衰期、清除率、分布容积、口服生物利用度）需要进一步表征。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
根据安全数据表，MM-589 不属于危险物质或混合物，因此无需遵守全球化学品统一分类和标签制度 (GHS)。毒理学测试：未列入美国国家毒理学计划 (NTP) 的致癌物清单；未列入国际癌症研究机构 (IARC) 的致癌物清单；不受美国职业安全与健康管理局 (OSHA) 的监管；未列入美国政府工业卫生学家协会 (ACGIH) 的致癌物清单。在细胞水平上，MM-589 对正常骨髓细胞无显著毒性，但能选择性地抑制 MLL 重排白血病细胞的增殖。该产品的毒理学效应尚未得到充分研究。操作时应遵循标准实验室安全操作规程，并避免释放到环境中。MM-589 的纯度≥98%，仅供研究使用，不得用于人类或兽医用途。
毒理学特征尚未完全描述；作为一种实验工具化合物，目前尚无临床毒性数据；其对 WDR5-MLL 相互作用的选择性优于其他细胞靶点，预计可降低脱靶毒性，但仍需进行正式的体内毒性研究。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
MM-589对应于本研究中的化合物18。它通过固相肽合成、闭环复分解反应（RCM）、催化氢化和保护基去除等步骤合成。整个合成路线详见论文中的方案4和方案5。[1]
- MM-589 (18)与WDR5复合物的共晶结构已在1.64 Å分辨率下解析（PDB编号5VFC）。该结构表明，MM-589通过保守的氢键和疏水相互作用网络与WDR5中WD40螺旋桨的中心通道结合。与之前的类似物（化合物 2 的 n=4，化合物 16 的 n=6）相比，MM-589 的环尺寸较小（n=2），形成更紧凑的结构，有利于形成最佳的分子内氢键并降低构象柔性，从而有助于其高结合亲和力。[1] - 该研究发现，化合物抑制 MLL HMT 活性（IC50）和抑制 MV4-11 和 MOLM-13 细胞系中细胞生长（IC50）的效力之间存在良好的相关性。[1] - 该化合物在细胞培养基中可稳定保存长达 7 天。[1] MM-589 TFA 是一种仅供研究使用的化合物，用于研究 MLL 重排白血病中 WDR5-MLL 蛋白-蛋白相互作用；它尚未获准用于临床；也没有注册临床试验；它是一种优化的环状肽模拟物，在效力和选择性方面优于早期的抑制剂，如 MM-401 和 MM-102。 |
| 分子式 |
C30H45F3N8O7
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|---|---|
| 分子量 |
686.722917318344
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| 精确质量 |
686.336
|
| 元素分析 |
C, 52.47; H, 6.61; F, 8.30; N, 16.32; O, 16.31
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| CAS号 |
2253167-09-6
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| 相关CAS号 |
MM-589 (racemic mixture ) (TFA);MM-589;2097887-20-0
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| PubChem CID |
132585206
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| 序列 |
isobutyryl-D-aMeLys(1)-Arg-Abu-D-Phg-(1).TFA
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| tPSA |
233
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
8
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
11
|
| 可旋转键数目(RBC) |
9
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| 重原子数目 |
48
|
| 分子复杂度/Complexity |
1050
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| 定义原子立体中心数目 |
4
|
| SMILES |
C(F)(F)(F)C(=O)O.O=C1NCC[C@@](C(N[C@@H](CCCNC(=N)NC)C(=O)N[C@@H](CC)C(=O)N[C@@H]1C1C=CC=CC=1)=O)(C)NC(=O)C(C)C
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| InChi Key |
NARXNZHWAWPJIY-HTCBAMNXSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C28H44N8O5.C2HF3O2/c1-6-19-23(38)35-21(18-11-8-7-9-12-18)25(40)31-16-14-28(4,36-22(37)17(2)3)26(41)34-20(24(39)33-19)13-10-15-32-27(29)30-5;3-2(4,5)1(6)7/h7-9,11-12,17,19-21H,6,10,13-16H2,1-5H3,(H,31,40)(H,33,39)(H,34,41)(H,35,38)(H,36,37)(H3,29,30,32);(H,6,7)/t19-,20-,21+,28+;/m0./s1
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| 化学名 |
N-[(3R,6S,9S,12R)-6-ethyl-12-methyl-9-[3-[(N'-methylcarbamimidoyl)amino]propyl]-2,5,8,11-tetraoxo-3-phenyl-1,4,7,10-tetrazacyclotetradec-12-yl]-2-methylpropanamide;2,2,2-trifluoroacetic acid
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| 别名 |
MM-589 (TFA); MM589 TFA; MM 589 TFA; 2253167-09-6; 2097887-21-1; N-[(3R,6S,9S,12R)-6-ethyl-12-methyl-9-[3-[(N'-methylcarbamimidoyl)amino]propyl]-2,5,8,11-tetraoxo-3-phenyl-1,4,7,10-tetrazacyclotetradec-12-yl]-2-methylpropanamide;2,2,2-trifluoroacetic acid;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~100 mg/mL (145.6 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.4562 mL | 7.2810 mL | 14.5620 mL | |
| 5 mM | 0.2912 mL | 1.4562 mL | 2.9124 mL | |
| 10 mM | 0.1456 mL | 0.7281 mL | 1.4562 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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