| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Ubiquitin-activating enzyme UBA1 (E1). It inhibits the ATP-dependent activation of ubiquitin by E1. [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
在犬心脏浦肯野纤维和豚鼠心房组织中，A-935142 可缩短动作电位时程 (APD90) [1]。A-935142 对心肌动作电位缩短和 hERG 电流幅度增强具有浓度和电压依赖性效应。当加入 A-935142 (60 μM) 时，完全激活的 I-V 关系曲线的线性部分表现出斜率电导以及外向和内向 K⁺ 电流的增加。在两个样本电压下（-10 mV：τ = 100±17 ms vs. 164±24 ms，n=6，P<0.01；+30 mV：τ = 16.7±1.8 ms vs. 18.9±1.8 ms，n=5，P<0.05），A-935142 显著降低了 hERG 通道激活的时间常数 τ。此外，它使hERG激活的电压依赖性沿超极化方向移动9 mV [2]。
PYZD-4409在无细胞实验中抑制E1酶，估计IC50为20 μM。[1] PYZD-4409在K562白血病细胞中，经50 μM处理4小时后，可阻断E1依赖的泛素与E2酶cdc34的结合。[1] 在一系列白血病、骨髓瘤和实体瘤细胞系中，PYZD-4409诱导细胞死亡，但敏感性各不相同。骨髓瘤细胞系（LP1、KMS11、U266）尤其敏感，经72小时处理后，LD50值为3 μM或更低。白血病和实体瘤细胞系的LD50值较高（例如，实体瘤细胞系的LD50值约为15-20 μM）。[1] PYZD-4409（10 μM，24小时）抑制原发性急性髓系白血病（AML）细胞的克隆形成，但不降低正常造血外周血干细胞（PBSC）的集落形成。[1] 用PYZD-4409（50 μM，2-4小时）处理可增加受泛素化调控的短半衰期蛋白的丰度，例如细胞周期蛋白D3（在K562细胞中）和p53（在HCT116细胞中）。[1] PYZD-4409诱导内质网（ER）应激。在K562细胞中，PYZD-4409可增加内质网应激标志物Grp78和Hsp70的mRNA和蛋白水平（10-25 μM，24小时），并增加磷酸化JNK和磷酸化p38的水平（50 μM，2.5小时）。在MDAY-D2细胞中，PYZD-4409可增加磷酸化PERK、ATF4和CHOP的水平（10 μM，24小时）。[1] 在HT1080细胞中过表达内质网应激保护蛋白BI-1可抑制PYZD-4409（0-30 μM，24小时）诱导的细胞死亡，表明内质网应激对其细胞毒性作用具有重要的功能意义。[1] 结构相关的非活性对照化合物PYZDmut对E1活性或细胞毒性均无影响。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠异种移植模型中，对皮下接种MDAY-D2鼠白血病细胞的SCID小鼠腹腔注射PYZD-4409（10 mg/kg，隔日一次，连续8天），与对照组相比，可显著延缓肿瘤生长并减轻肿瘤重量，且未引起不良毒性。[1]
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| 酶活实验 |
为测定IC50值，将重组His标签人E1酶（1 μM）、His标签人E2酶（10 μM）、泛素（20 μM）和ATP（1 mM）在含有50 mM Tris-HCl（pH 7）、5 mM MgCl2和递增浓度PYZD-4409的反应缓冲液中孵育。启动反应后，立即使用荧光焦磷酸盐检测试剂盒定量E1催化泛素活化过程中ATP水解释放的无机焦磷酸盐。在微孔板读数仪中测量30分钟内的荧光信号。 [1]
在 E1-泛素缀合物测定中，将 GST 标签的人 E1 (0.5 μM) 和荧光素标记的泛素 (1 μM) 与不同浓度的 PYZD-4409 或非活性对照 PYZDmut 在反应缓冲液中于 37°C 孵育 30 分钟。然后将产物在非还原条件下进行 4-20% 梯度 SDS-PAGE 电泳分离。使用凝胶成像仪观察荧光信号以评估 E1-泛素缀合物的形成。[1] 为了评估对 E2 上样的影响，将 His 标签的 E1 (0.5 μM)、His 标签的 E2 (5 μM) 和泛素 (5 μM) 与不同浓度的 PYZD-4409 或 PYZDmut 孵育。将产物进行非还原性 4-20% 梯度 SDS-PAGE 电泳分离，然后用抗 His 抗体进行免疫印迹分析。使用荧光染料标记的二抗和凝胶成像仪检测对应于 E2 和 E2-泛素缀合物的荧光条带。[1] |
| 细胞实验 |
在细胞活力检测中，将白血病、骨髓瘤和实体瘤细胞系接种于96孔板中，并用递增浓度的PYZD-4409处理72小时。然后根据制造商的说明，使用Alamar Blue试剂盒检测细胞生长和活力。细胞死亡通过台盼蓝染色排除法进行确认，即将等分细胞与染料混合，并计数未染色（存活）的细胞。[1]
在克隆形成生长实验中，将原代人AML细胞或正常PBSC用PYZD-4409（10 μM）或缓冲液对照处理24小时。处理后，洗涤细胞，并以一式两份接种于MethoCult GF H4434甲基纤维素培养基中。AML克隆在培养7天后计数，而正常造血克隆在培养2周后计数。 [1] 对于蛋白质印迹分析，将细胞（例如 K562、HCT116、MDAY-D2）用指定浓度和时间（例如 2-24 小时）的 PYZD-4409 或对照处理。然后用 SDS 样品缓冲液裂解细胞，并测定蛋白质浓度。取等量的蛋白质进行 SDS-PAGE 电泳分离，转移至硝酸纤维素膜，并与特异性一抗（例如抗细胞周期蛋白 D3、抗 p53、抗 GRP78、抗磷酸化 JNK）杂交。使用增强型化学发光试剂盒显色。[1] 为了检测细胞中的 E1 活性，将 K562 细胞用 PYZD-4409 (50 μM) 或 PYZDmut 处理 4 小时。将细胞裂解液在非还原性或还原性SDS-PAGE上样缓冲液中加热，进行分级分离，并用针对E2蛋白cdc34的抗体进行免疫印迹分析，以评估E1介导的泛素在cdc34上的加载。[1] 对于实时RT-PCR，将K562细胞用PYZD-4409（10和25 μM）处理24小时。提取总细胞RNA，并使用ΔΔCT归一化法，通过实时定量RT-PCR检测GRP78和HSP70 mRNA相对于18S rRNA的表达水平。[1] 对于细胞死亡保护实验，将稳定过表达BI-1（HT1080-BI-1）或空载体（HT1080-neo）的HT1080细胞接种于96孔板中过夜。次日，将细胞用浓度递增的PYZD-4409（0-30 μM）处理24小时。采用Alamar Blue法测定细胞活力。[1] |
| 动物实验 |
雄性SCID小鼠皮下注射1 × 10^5个MDAY-D2鼠白血病细胞。次日，将动物随机分配至各治疗组。小鼠接受腹腔注射PYZD-4409（10 mg/kg，溶于生理盐水）或仅注射生理盐水作为对照。治疗每隔一天进行一次，共持续8天。肿瘤可触及后，至少每隔一天使用游标卡尺监测肿瘤生长情况。肿瘤接种16天后，用二氧化碳窒息法处死小鼠，切除肿瘤并称重。[1]
雄性SCID小鼠皮下注射1 × 10^5个MDAY-D2鼠白血病细胞。次日，将动物随机分配至各治疗组。小鼠接受腹腔注射PYZD-4409（10 mg/kg，溶于生理盐水）或仅注射生理盐水作为对照。每隔一天给药一次，共给药8天。肿瘤可触及后，至少每隔一天使用游标卡尺监测肿瘤生长情况。肿瘤接种16天后，用二氧化碳窒息法处死小鼠，切除肿瘤并称重。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在小鼠异种移植模型中，每隔一天腹腔注射10 mg/kg的PYZD-4409，持续8天，可延缓肿瘤生长，且未引起不良毒性。[1]
在基于细胞的实验中，PYZD-4409表现出优先细胞毒性，在10 μM浓度下可抑制原代急性髓系白血病（AML）细胞的克隆形成，而不影响正常造血外周血干细胞（PBSC）。[1] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
PYZD-4409是一种新型的3,5-二氧吡唑烷化合物，它是通过对基于吡唑烷药效团的聚焦化合物库进行筛选而发现的。其化学名称为1-(3-氯-4-氟苯基)-4-[(5-硝基-2-呋喃基)亚甲基]-3,5-吡唑烷二酮。分子量为352，CAS号为423148-78-1。该化合物的结构与另一种E1抑制剂PYR-41相似。[1]
该研究使用PYZD-4409作为化学探针，证明抑制E1酶可通过内质网应激和未折叠蛋白反应的机制诱导恶性细胞死亡，从而凸显了E1作为白血病和多发性骨髓瘤等血液系统恶性肿瘤潜在治疗靶点的价值。 [1] |
| 分子式 |
C18H19F3N2O2
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|---|---|
| 分子量 |
352.350875139236
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| 精确质量 |
352.139
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| CAS号 |
1031335-85-9
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| PubChem CID |
25125452
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
4.5
|
| tPSA |
66
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
25
|
| 分子复杂度/Complexity |
456
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
FC(C1=CC(C2C=CC(=CC=2)C2CCC(CC(=O)O)CC2)=NN1)(F)F
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| InChi Key |
YPHFQSYEKIEMNC-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H19F3N2O2/c19-18(20,21)16-10-15(22-23-16)14-7-5-13(6-8-14)12-3-1-11(2-4-12)9-17(24)25/h5-8,10-12H,1-4,9H2,(H,22,23)(H,24,25)
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| 化学名 |
2-[4-[4-[5-(trifluoromethyl)-1H-pyrazol-3-yl]phenyl]cyclohexyl]acetic acid
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| 别名 |
A-935142 A935142 A 935142
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.8381 mL | 14.1904 mL | 28.3809 mL | |
| 5 mM | 0.5676 mL | 2.8381 mL | 5.6762 mL | |
| 10 mM | 0.2838 mL | 1.4190 mL | 2.8381 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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