PAF-R

ABT-491（4-乙炔基-N，N-二甲基-3-[3-氟-4-[（2-甲基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基）甲基]苯甲酰基]-1H-吲哚-1-甲酰胺盐酸盐）是一种新型PAF（血小板活化因子）受体拮抗剂，其K（i）值为0.6 nM，用于抑制PAF与人血小板的结合。与PAF相比，ABT-491与PAF受体的结合动力学与拮抗剂的相对较慢的关闭速率是一致的。抑制PAF结合是选择性的，与PAF介导的细胞反应（Ca2+动员、启动和脱颗粒）的功能拮抗有关[1]。

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抑制PAF结合[1]
通过测量[3H]C18-PAF与分离的兔血小板膜和完整人血小板的PAF受体结合的抑制作用，评估了ABT-491的内在PAF结合活性。图2A所示的结果说明了ABT-491在这些检测中的效力。根据这些结果计算出的ABT-491的抑制结合常数（Ki）分别为1.8和0.57 nM，在PAF本身效力的3倍以内（Kd，0.6 nM）。从结合结果中获得的Hill系数（1.1和0.8）接近于1，这表明，正如之前对PAF所表明的那样（Hwang和Lam，1986），ABT-491与一类结合位点相互作用。
使用兔血小板膜检查ABT-491对PAF结合的抑制性质。在竞争结合实验中，在ABT-491（0.5-1.9 nM）存在和不存在的情况下，将膜制剂与浓度逐渐增加的[3H]PAF一起孵育（1小时）。对这些结果的Scatchard分析表明，受体位点的最大数量（Bmax，x截距）没有受到影响，而表观解离常数（Kd，-1/斜率）随着ABT-491浓度的增加而增加（图2B）。这些结果强烈表明，ABT-491是PAF与高亲和力受体结合的竞争性抑制剂。然而，尽管ABT-491在平衡条件下充当竞争性受体拮抗剂，但其抑制作用存在时间依赖性成分。从结合试验结果的Scatchard分析中可以明显看出这一点，在结合试验中，膜在用[3H]PAF孵育30分钟之前用ABT-491预孵育1小时。在这些实验条件下，Bmax发生了变化，对表观Kd的影响很小，表明存在非竞争性抑制（图2C）。这些结果表明，与PAF相比，ABT-491对PAF受体的关闭速度可能相对较慢。
为了评估抑制PAF结合的特异性，ABT-491在各种受体、离子通道和膜结合试验中进行了评估。在这45种不同的结合试验中，ABT-491在高达10μM的试验浓度下均未表现出显著的相互作用（数据未显示）。

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PAF诱导的血小板反应的拮抗作用[1]
血小板脱颗粒和颗粒成分的释放是PAF介导的血小板活化的结果（McManus等人，1981）。使用PAF诱导的兔血小板释放[14C]血清素，证明了ABT-491抑制血小板脱颗粒的能力。在ABT-491浓度增加的情况下（PAF前5分钟1-3nM），观察到[14C]血清素释放的PAF剂量-反应曲线向右平行移动（图3A）。根据Schild对右移的分析，ABT-491对PAF结合的功能抑制的A2值计算为0.9 nM。在另一个实验中获得了类似的结果（A2=1.3nM），平均A2值为1.1nM（未显示）。当ABT-491的浓度大于3 nM时，激动剂浓度高达10μM时，对PAF的最大反应没有恢复。这些结果暗示了非竞争性拮抗作用，与用ABT-491预孵育的血小板膜结合研究中观察到的动力学一致。在其他实验中，ABT-491（10μM）不会引起[14C]血清素的释放，也不会抑制凝血酶（0.2 U/ml）或Ca2+离子载体（0.3μM）的释放。综上所述，这些结果表明ABT-491选择性和有效地抑制了与血小板PAF受体偶联的功能活性。

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PAF诱导的中性粒细胞反应的拮抗作用[1]
本研究检查了三种PAF介导的中性粒细胞反应：细胞内Ca2+动员、脱颗粒和启动（Korchak等人，1988；Dewald和Baggiolini，1987；Baggiolini和Dewald，1986；Gay，1993）。PAF诱导的Ca2+反应迅速而短暂，在30-45秒内达到最大值，然后在120秒内恢复到接近基础水平（图4A）。与ABT-491预孵育以浓度依赖的方式抑制了反应，导致PAF剂量-反应曲线向右移动，表明存在竞争性拮抗作用（图3C）。数据的Schild分析得出A2值为25nM。拮抗剂似乎具有选择性，因为ABT-491在完全抑制PAF诱导的反应的浓度（1μM）下，不会抑制对白三烯B4和C5a的Ca2+反应（未显示）。

体内给药ABT-491可有效抑制PAF诱导的炎症反应（血管通透性增加、低血压和水肿）和PAF引起的致死性。大鼠、小鼠和豚鼠的口服效力（ED50）在0.03至0.4mg/kg之间。当在这些物种中静脉注射时，ABT-491的ED50值在0.005至0.016 mg/kg之间。大鼠口服0.5 mg/kg的剂量可在8小时内对皮肤PAF攻击提供>50%的保护。口服ABT-491也能有效抑制脂多糖诱导的低血压（ED50=0.04mg/kg）、胃肠道损伤（0.05mg/kg，79%的抑制率）和致死率（1mg/kg，85%对57%的存活率）。这种新型拮抗剂的效力表明ABT-491可用于治疗PAF介导的疾病。[1]

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PAF诱导炎症的体内模型[1]
PAF诱导局部皮肤血管通透性和急性炎症特征性水肿（Hwang等人，1985b；Qu等人，1990）。ABT-491作为这些反应的拮抗剂具有强大的活性。在大鼠中，口服1mg/kg剂量的ABT-491导致PAF诱导的通透性反应受到90%的抑制（图5A）。抑制作用与剂量有关，回归分析得出ED50值为0.094mg/kg。此外，该化合物在静脉注射时表现出强效活性（ED50=0.003mg/kg）。在豚鼠身上，ABT-491的效力要低几倍。然而，当静脉注射时，50μg/kg的剂量产生了接近最大的拮抗作用（75%）的渗透反应（图5B）。与大鼠一样，豚鼠的抑制作用与静脉注射和口服给药的剂量有关（ED50=0.016和0.29mg/kg）。以足以对PAF诱导的反应提供最大（87%）抑制的剂量（1mg/kg静脉注射）对大鼠施用ABT-491，对血清素和组胺诱导的渗透反应没有显著影响（<5%）（未显示）。[1]
在小鼠中评估ABT-491对PAF诱导的水肿的影响。对爪子皮下注射PAF的小鼠预先给予ABT-491，以剂量相关的方式抑制了由此产生的水肿形成（图5C）。ABT-491阻断水肿的效力（ED50）静脉注射时为0.069mg/kg，口服时为0.38mg/kg。这些值与抑制豚鼠和大鼠PAF诱导的反应的值相当，并进一步说明了ABT-491在阻断PAF介导的炎症反应方面的有效性。

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PAF和LPS诱导的休克[1]
全身给药后，PAF会导致全身动脉压急性下降（Blank等人，1979）。在较高剂量的PAF下，死亡是由急性心肺衰竭和补体激活引起的（Carlson等人，1987；Sun和Xueh，1991）。动脉内注射PAF在豚鼠中诱导的低血压反应被ABT-491预处理以剂量依赖的方式拮抗（图7A）。动脉内和口服ABT-491的回归分析得出的ED50值分别为0.005和0.026mg/kg（图7A，插入）。[1]
大鼠动脉内注射LPS也会导致低血压。初始反应是短暂的，但随后全身血压持续下降（图7B）。ABT-491在LPS前1小时动脉内（0.1mg/kg）或口服（1mg/kg）给药时，阻断了第二阶段反应。抑制作用呈剂量依赖性，剂量-反应关系分析（图7B，插入）得出动脉内和口服给药的ED50值分别为0.004和0.036 mg/kg。除了在LPS前给药时有效外，ABT-491在LPS后给药时也能逆转低血压。如图7B所示，ABT-491的给药在LPS攻击后1小时内恢复了血压。[1]
感染性休克的其他特征，包括胃肠道损伤和致死性，在给予LPS后很明显。LPS后30分钟内，大鼠小肠明显充血和明显管腔出血。显微镜下可见粘膜微血管充血、单细胞坏死和绒毛孤立性缺失（Wallace等人，1987）。在目前的研究中，通过对小肠的总体外观进行评分和测量管腔内血红蛋白来追踪损伤程度。在LPS攻击前60分钟口服ABT-491（0.050 mg/kg），可抑制79%的肠出血（P<0.05）。高出10倍的剂量可获得完全保护，肠道外观正常。[1]
用小鼠进行了PAF致死作用的研究。静脉注射PAF（3-1000μg/kg）导致死亡率增加，且呈剂量依赖性（LD100约为30μg/kg，图8）。用ABT-491（1、10和100μg/kg，口服）预处理导致剂量-反应曲线向右移动，表明存在竞争性拮抗作用。1 mg/kg ABT-491的给药可完全防止高达1 mg/kg的PAF攻击引起的致死，这是PAF LD100的30倍以上。这些观察结果与PAF对心肺反应的强效拮抗作用一致，并提供了额外的证据，表明ABT-491的体内给药会导致全身PAF反应的拮抗作用。[1]
在大鼠内毒素血症模型中也评估了ABT-491对长期存活的影响。LPS（8.5 mg/kg，静脉注射）在24小时内导致43%的死亡率。用ABT-491（1 mg/kg，口服）预处理可显著降低死亡率（15%对43%，p<0.05）。

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缺氧缺血性脑损伤（HIBI）是新生儿死亡和发病的常见原因。迄今为止，还没有研究调查血小板活化因子（PAF）拮抗剂对HIBI新生大鼠模型神经元凋亡的作用。在本研究中，我们评估了一种高效选择性PAF拮抗剂（ABT-491）对HIBI新生儿大鼠模型神经细胞凋亡的影响。7天大的Wistar大鼠幼崽接受右侧颈总动脉结扎和缺氧（92%氮气和8%氧气）2小时。它们在缺氧前后立即接受ABT-491或生理盐水治疗。在假手术组动物中，既没有进行结扎，也没有进行缺氧。通过末端转移酶介导的dUTP-生物素缺口末端标记（TUNEL）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3染色方法评估神经元凋亡。与生理盐水治疗组相比，缺氧前后服用ABT-491可显著减少两半球凋亡细胞的数量。各组右半球凋亡细胞数均显著高于左半球。这些结果表明，ABT-491是一种高效且选择性的PAF拮抗剂，在缺氧前后给药可以减少细胞凋亡，我们提出ABT-491可能是治疗HIBI的一种新方法[2]。

结合实验[1]
用兔血小板膜和洗涤过的人血小板进行的PAF受体结合试验基于Hwang等人（1983）、Hwang等（1985a）和Hwang and Lam（1986）描述的程序，并在其他地方进行了详细描述（Albert等人，1996a）。简而言之，在Millitite GV微量滴定板上进行的标准膜结合试验含有10μg血小板膜蛋白、0.6 nM的[3H]C18-PAF和试验化合物，缓冲液中含有0.25%的牛血清白蛋白，最终体积为100μl。在96孔玻璃纤维滤板中进行的人血小板测定含有30×106个洗涤过的血小板、0.6 nM[3H]C18-PAF和试验化合物，总体积为250μl测定缓冲液。将试验化合物溶解在二甲亚砜中，并稀释到缓冲载体中（最终浓度<0.1%）。两种测定均在环境温度下进行60分钟。孵育期后，对滤板进行真空过滤，用1ml冰冷的测定缓冲液洗涤，并用微量滴定闪烁计数器测定放射性。特异性结合被定义为0.6 nM[3H]C18-PAF的总结合（在没有添加PAF的情况下为3H放射性）和非特异性结合（在1μM PAF存在的情况下的3H放射性）之间的差异。化合物结合是在测试化合物存在下的3H放射性。抑制百分比计算为[（总结合-化合物结合）/特异性结合]×100%。

PAF诱导的血小板反应[1]
对于兔血小板释放试验，如前所述制备用[14C]血清素标记的洗涤兔血小板（Ostermann等人，1983；Albert等人，1996a）。将血小板悬浮液的等分试样与不同浓度的试验化合物或载体（含1.3 mM CaCl2的Tyrode缓冲液）在37°C下孵育5分钟。然后加入不同浓度的PAF或载体缓冲液，并将反应混合物再孵育6分钟。为了评估抑制的特异性，用凝血酶（0.05-0.2 U/ml）或Ca2+离子载体A23187（0.3μM）代替PAF。通过在冰上冷却并加入3mM EDTA（终浓度）的盐水溶液来终止释放反应。然后将血小板悬浮液离心（1500×g，15分钟，4°C），收集上清液，通过液体闪烁光谱法测量释放的14C放射性。 为了测定外周血中β-血小板球蛋白的释放，从健康的人类志愿者中获得人血，用肝素（20 U/ml）处理，并在室温下与0.2%牛血清白蛋白在生理盐水（载体）或ABT-491中以指定浓度孵育5分钟。然后将等分血液与PAF或载体在37°C下再孵育5分钟，并放入冰水中。将血液样本离心（1000×g，15分钟），取出血浆并冷冻保存，直至分析。按照制造商的建议，使用市售免疫测定试剂盒测量β-血小板球蛋白的血浆水平。

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PAF诱导的中性粒细胞反应[1]
PAF诱导的弹性蛋白酶释放、活性氧产生和细胞内Ca2+的测定在其他地方有详细描述（Albert等人，1996a）。简而言之，对于弹性蛋白酶释放试验，中性粒细胞（在pH 7.4的Tyrode缓冲液中为100万/ml）在室温下用药物预处理6-8分钟，然后在37°C下暴露于细胞松弛素B（1μg/ml）15分钟（Dewald和Baggiolini，1987）。然后加入含有0.2%牛血清白蛋白的Tyrode缓冲液中不同浓度的PAF，并继续孵育10分钟，直至通过快速冷却终止。然后将细胞悬浮液在5°C下离心（700×g，15分钟）。然后分别在370和460 nm的激发和发射波长下，使用合成底物N-琥珀酰-l-丙氨酰-l-丙氨酸-l-脯氨酰-l缬氨酸氨基-4-甲基香豆素（0.25 mM），用荧光平板读数器测量上清液中的弹性蛋白酶活性。相对活性计算为用受刺激和非受刺激细胞获得的荧光增加率之比。
对于活性氧物种测定，将细胞重新悬浮在含有0.25%牛血清白蛋白和20μM鲁米诺的杜尔贝科磷酸盐缓冲盐水中（5×106个细胞/ml）（Allen，1986）。细胞（70μl）在室温下与10μl药物或载体（Hanks平衡盐溶液中的1%二甲亚砜）在微量滴定托盘中预孵育。5分钟后，加入10μl PAF或载体，在室温下继续预孵育2分钟。在预培养结束时，加入10μl甲酰基甲氧基亮氨酰苯丙氨酸（fMLP）或载体。在微量滴定闪烁计数器 中以20秒的间隔记录5分钟的光输出。通过计算5分钟内对PAF和fMLP挑战的反应曲线下面积（使用梯形法则）来测量对PAF的反应。
为了测量细胞内Ca2+，将悬浮在含0.035%NaHCO3（pH 7.0）的Hanks平衡盐溶液中的中性粒细胞与5μM indo-1 AM在室温下孵育30分钟，洗涤并以（1-2）×106个细胞/ml的浓度重新悬浮。用受体拮抗剂预处理细胞60秒，然后添加指定浓度的激动剂。使用SLM 8000荧光分光光度计在350nm的激发波长和485nm（低Ca2+）和410nm（高Ca2+）的发射波长下测量荧光。根据两个发射波长的荧光比计算细胞内Ca2+浓度（Grynkiewicz等人，1985）。值表示为在没有拮抗剂的情况下相对于PAF对照反应的抑制百分比。

动物准备和手术步骤[2]
\n大鼠幼崽采用吸入氟烷麻醉，麻醉时间不超过5分钟。根据Levine-Rice模型（Rice等，1981）诱导缺氧缺血。在颈部做正中切口。在显微镜下解剖右侧颈总动脉，并用6-0丝线结扎。伤口缝合后，给予动物3小时的恢复和进食时间。除假手术组外，其余大鼠均被置于塑料箱中，并持续通入8%氧气-92%氮气混合气体2小时。缺氧期结束后，将大鼠置于开放箱中，不补充氧气，恢复2小时。假手术组动物也置于开放箱中，恢复时间相同。为了维持恒定的温度环境，实验舱部分浸入37℃的水浴中。完成上述操作后，所有幼鼠均被断头处死。取出脑组织并进行石蜡包埋，用于病理学评估。
\n生理盐水处理组：分别在缺氧前（n = 20）或缺氧后（n = 20）腹腔注射0.5 mL生理盐水。该组有14只大鼠（缺氧前6只，缺氧后8只）在实验过程中死亡。
\nABT-491处理组：分别在缺氧前（n = 20）或缺氧后（n = 20）腹腔注射0.4 mg/kg溶于生理盐水的ABT-491。本组共有5只大鼠（缺氧前4只，缺氧后1只）在手术过程中死亡。\n

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\n\nPAF和内毒素诱导的休克[1]
\n为了测量PAF或内毒素诱导的低血压，将豚鼠和大鼠在吸入戊烷（Abbott Laboratories，North Chicago，IL，USA）维持轻度至中度麻醉后，用PE-50导管插入颈动脉。导管经皮下隧道穿行至颈后部，引出体外并连接至压力传感器和多导生理记录仪（Modular Instruments，Southeastern，PA，USA），用于监测动脉血压。插管后，动物至少恢复1小时。恢复期结束后，通过监测15分钟的动脉血压，建立每只动物的基线血压。对照组和实验组的基线值之间无显著差异。

\n在预处理研究中，分别于激动剂刺激前15分钟（动脉内）或1小时（口服）给予拮抗剂或赋形剂（0.9%生理盐水）。预处理后，豚鼠和大鼠接受血小板活化因子（PAF，0.6 μg/kg）或内毒素（脂多糖，LPS，25 mg/kg，溶于pH 7.4的PBS缓冲液）刺激，均以动脉推注方式给药。在研究ABT-491逆转持续性低血压的能力时，于LPS刺激后60分钟给药。每隔1分钟测量一次动脉血压，直至实验结束。为校正动物间较小的差异（<10%），血压值以初始基线值的百分比表示。通过计算实验期间刺激反应的基线百分比与时间曲线下面积（采用梯形法则），确定对 PAF 或 LPS 刺激和药物的反应。根据这些面积，激动剂诱导反应的抑制百分比计算公式为（药物-激动剂）/（载体-激动剂）。

\n通过测量渗入胃肠腔的血红蛋白来确定 LPS 处理引起的肠道出血。ABT-491 灌胃给予清醒大鼠（每组 6-7 只），60 分钟后给予 LPS（25 mg/kg）。LPS 刺激 30 分钟后处死大鼠，并从每只大鼠的十二指肠开始收集 15 cm 的肠段。通过冲洗肠段收集肠腔内容物。使用血红蛋白仪（Coulter Electronic，美国佛罗里达州海厄利亚）测定冲洗液中的血红蛋白浓度，并与标准血红蛋白溶液绘制的校准曲线进行比较。分别在小鼠和大鼠中进行了 PAF（3–1000 μg/kg）和 LPS（8.5 mg/kg）致死性研究。在两种情况下，均在 PAF 或 LPS 刺激前 30 分钟口服给予 ABT-491。PAF 的致死效应通常在 PAF 刺激后 30 分钟内出现，并持续监测 8 小时。LPS 诱导的死亡通常在 LPS 刺激后 6–10 小时出现。在 LPS 刺激后，对大鼠进行为期 2 周的密切监测，以确定总死亡数量。

作用持续时间[1]
采用PAF诱导的皮肤通透性模型评估ABT-491的作用持续时间。该化合物以预期在给药后1小时内产生70-80%抑制率的剂量口服给药。随后在给药后不同时间点评估PAF诱导的通透性抑制水平。如图6所示，ABT-491（0.5 mg/kg，口服）对大鼠皮肤PAF刺激的保护作用（>50%）持续超过8小时。

[1]. Pharmacology of ABT-491, a highly potent platelet-activating factor receptor antagonist. Eur J Pharmacol. 1997 Apr 23;325(1):69-80.
[2]. Platelet-activating factor antagonist (ABT-491) decreases neuronal apoptosis in neonatal rat model of hypoxic ischemic brain injury. Brain Res. 2007 Apr 27:1143:193-8.

ABT-491 是一种近期报道的高效选择性 PAF 拮抗剂（Albert 等，1997）。它能有效拮抗细胞水平上与 PAF 受体相关的反应，尤其是血小板和中性粒细胞的反应。Albert 等（1997）发现 ABT-491 也能有效阻断血液中的血小板活化，这表明高浓度的蛋白质和其他血清因子会轻微改变 ABT-491 与 PAF 受体的相互作用能力。在本研究中，我们采用腹腔注射 0.4 mg/kg 的 ABT-491。此前尚未有关于 ABT-491 用于治疗 HIBI 的剂量报道。研究表明，ABT-491 能有效抑制脂多糖诱导的低血压（ED50 = 0.04 mg/kg）和胃肠道损伤（0.05 mg/kg），但其致死剂量为 1 mg/kg（Albert 等，1997）。
血小板活化因子 (PAF) 的凋亡功能的具体机制尚不明确。然而，已有研究表明，PAF 通过 Bax 易位至线粒体、线粒体膜电位崩溃和 caspase 激活等机制诱导肠细胞凋亡（Lu 等，2004）。有强有力的证据表明，PAF 参与多种细胞类型的细胞凋亡，并伴有 Fas-Fas 配体 (FasL) 和细胞色素 C 的释放。Wu 等。 (2003)年的研究表明，在缺血再灌注后，PAF通过FasL介导的caspase-9活性通路促进大鼠小肠黏膜细胞凋亡。另一方面，近期研究强调了PAF拮抗剂的抗凋亡作用以及其对多种组织和细胞凋亡的保护作用（Murohisa等，2002；Loucks等，2003；Grypioti等，2006）。本研究首次报道了在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBI）模型中，高效选择性PAF拮抗剂ABT-491能够减少神经元凋亡。鉴于这些数据，我们提出，PAF拮抗剂抑制缺氧缺血性脑损伤中的细胞凋亡是其重要的保护作用。使用PAF拮抗剂治疗可能是一种治疗缺氧缺血性脑损伤的新方法。尽管关于PAF拮抗剂在新生儿缺氧缺血性脑损伤中的作用研究相对较少，但尚无研究探讨PAF拮抗剂在该模型中对神经元凋亡的影响。本研究表明，高效且选择性的PAF拮抗剂ABT-491在缺氧前或缺氧后给药均可减少细胞凋亡，我们认为ABT-491可能是一种治疗缺氧缺血性脑损伤的新方法。尽管本研究证实了ABT-491在缺氧缺血性脑损伤中的即时神经保护作用，但仍需研究该药物的长期疗效，并需要进一步研究以阐明涉及PAF激活的缺氧缺血性脑损伤机制以及血小板在缺氧缺血性脑损伤中的可能作用。 [2]

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PAF此前已被证实是内毒素诱导的大鼠胃肠道损伤和致死的介质（Albert等，1996b；Torley等，1992；Wallace等，1987；Terashita等，1985）。在本研究中，在LPS刺激前60分钟口服0.050 mg/kg ABT-491可有效阻断79%的LPS诱导损伤。因此，ABT-491阻断胃肠道损伤的口服效力与降低血压反应的活性密切相关，使其成为本模型中评估的最有效的PAF受体拮抗剂之一。ABT-491还能有效提高LPS处理大鼠的长期存活率；然而，达到最大疗效所需的口服剂量（1 mg/kg）高于预防胃肠道损伤所需的剂量。此外，其疗效略低于 PAF 诱导致死模型中的疗效（存活率分别为 85% 和 100%）。LPS 致死模型中较高的剂量和较低的疗效可能反映了预防 LPS 诱导死亡所需的保护时间更长（大多数死亡发生在 LPS 给药后 6-8 小时），而急性低血压和器官损伤反应的保护时间较短（30-60 分钟）。这也可能反映了其他介质在 LPS 反应中的作用。
总之，ABT-491 是一种新型拮抗剂，在纳摩尔和亚纳摩尔浓度下即可选择性抑制 PAF 结合和 PAF 介导的细胞反应。该受体拮抗剂口服剂量低于 mg/kg 即可发挥活性，且生物持续时间超过 8 小时。 ABT-491 具有口服活性和水溶性，因此有多种给药选择，使其成为临床研究的理想候选药物。因此，ABT-491 以及其他几种结构不同的拮抗剂（例如 BBT-882 和 SR-27,417）可能有助于明确 PAF 在哮喘、过敏性鼻炎和败血症等人类疾病中的作用。[1]

C28H22FN5O2

479.176

C, 70.13; H, 4.62; F, 3.96; N, 14.61; O, 6.67

170499-15-7

189689-94-9

154087

Typically exists as solid at room temperature

4.623

73.02

0

5

5

36

888

0

FC1C=C(C=CC=1CN1C(C)=NC2C=NC=CC1=2)C(C1=CN(C(N(C)C)=O)C2C=CC=C(C#C)C1=2)=O

GDLNHSUSOZEAOR-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C28H22FN5O2/c1-5-18-7-6-8-25-26(18)21(16-34(25)28(36)32(3)4)27(35)19-9-10-20(22(29)13-19)15-33-17(2)31-23-14-30-12-11-24(23)33/h1,6-14,16H,15H2,2-4H3

1H-Indole-1-carboxamide, 4-ethynyl-3-(3-fluoro-4-((2-methyl-1H-imidazo(4,5-c)pyridin-1-yl)methyl)benzoyl)-N,N-dimethyl-

ABT-491 free base; ABT491;170499-15-7; UNII-AYB44L739V; AYB44L739V; 1H-Indole-1-carboxamide, 4-ethynyl-3-(3-fluoro-4-((2-methyl-1H-imidazo(4,5-c)pyridin-1-yl)methyl)benzoyl)-N,N-dimethyl-; DTXSID40168870; DTXCID9091361; ABT 491; ABT-491

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。