| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
FabI/enoyl-acyl carrier protein reductase
AFN-1252 targets FabI, the enoyl-acyl carrier protein reductase enzyme in Staphylococcus spp. FabI is a key enzyme in the type II fatty acid synthesis (FASII) pathway, which is essential for bacterial membrane synthesis. By inhibiting FabI with high affinity (Ki = 12.8 nM), AFN-1252 blocks the final step in each round of fatty acid elongation, depleting the bacterial cell of essential membrane components. This action is specific to the bacterial FASII pathway, which is structurally and functionally distinct from the fatty acid synthesis machinery in human cells, thereby providing a basis for the compound's selective antibacterial activity. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
AFN-1252 是一种强效的烯酰-酰基载体蛋白还原酶 (FabI) 抑制剂，在浓度 ≤0.12 μg/ml 时，可抑制所有受试的金黄色葡萄球菌 (n = 502) 和表皮葡萄球菌 (n = 51) 临床分离株，包括耐甲氧西林 (MRSA) 分离株。相反，AFN-1252 对肺炎链球菌、β-溶血性链球菌、肠球菌属、肠杆菌科、非发酵革兰氏阴性杆菌和卡他莫拉菌的临床分离株均无活性（MIC90 >4 μg/ml）。这些数据支持继续开发AFN-1252用于治疗耐药葡萄球菌感染患者[1]。
体外实验表明，AFN-1252对临床分离的金黄色葡萄球菌具有极强的活性，其最低抑菌浓度（MIC90）为0.015 µg/mL。它对凝固酶阴性葡萄球菌也显示出强效活性，MIC90为0.12 µg/mL。该化合物在浓度≤0.12 µg/mL时即可抑制所有临床分离的金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌。 AFN-1252 对肺炎链球菌、β-溶血性链球菌、肠球菌属、肠杆菌科和非发酵革兰氏阴性杆菌的临床分离株无活性（MIC90 >4 µg/mL），证实了其狭窄的、葡萄球菌特异性的活性谱。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
类鼻疽是由伯克霍尔德氏菌（Burkholderia pseudomallei，简称B. pseudomallei；Bpm）引起的热带细菌感染，B. pseudomallei是一种革兰氏阴性菌。目前的治疗选择主要局限于复方磺胺甲噁唑和β-内酰胺类抗生素，疗程约为4个月。此外，已有报道称这些药物存在耐药性。因此，迫切需要开发治疗类鼻疽的新型抗生素。烯酰-ACP还原酶（FabI）是脂肪酸生物合成途径中的关键酶，其抑制剂在抗菌药物研发方面展现出巨大的潜力。FabI已被确定为伯克霍尔德氏菌中主要的烯酰-ACP还原酶。在本研究中，我们评估了AFN-1252（一种目前正在临床开发的金黄色葡萄球菌FabI抑制剂）与BpmFabI酶结合并抑制伯克霍尔德氏菌生长的潜力。 AFN-1252 可稳定 BpmFabI 并抑制其酶活性，IC50 值为 9.6 nM。它对从类鼻疽患者分离的伯克霍尔德氏菌 R15 株表现出良好的抗菌活性（MIC 值为 2.35 mg/L）。BpmFabI 与 AFN-1252 的 X 射线晶体结构以 2.3 Å 的分辨率解析。BpmFabI 与 AFN-1252 的复合物形成对称的四聚体结构，每个单体亚基结合一个 AFN-1252 分子。动力学和热熔解研究支持 AFN-1252 可以不依赖辅因子与 BpmFabI 结合的结论。这些研究提供的结构和机制信息可能有助于合理设计和开发新型 FabI 抑制剂[2]。体内实验表明，AFN-1252 在败血症小鼠模型中有效。在一项使用感染致死剂量金黄色葡萄球菌（S. aureus Smith）腹腔接种物的雌性CD-1小鼠的研究中，单次口服1 mg/kg剂量的AFN-1252可提供100%的保护。该化合物通过灌胃给药，剂量范围为0.03至3 mg/kg，计算得到的ED50（95%置信区间）为0.15（0.11至0.21）mg/kg。这些结果表明AFN-1252对全身性葡萄球菌感染具有显著的体内疗效。
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| 酶活实验 |
AFN-1252 的 BpmFabI 酶抑制活性测定[2]
AFN-1252 采用已发表的合成路线38 自行合成。通过分光光度法监测辅因子 NADH 的氧化，评估 AFN-1252 对 BpmFabI 的抑制效力33。测定所用缓冲液为 30 mM PIPES（pH 6.8），含 150 mM NaCl 和 1 mM EDTA。测定中使用 175 nM 的 BpmFabI 酶。根据不同浓度巴豆酰辅酶 A 下的酶活性测定米氏常数 (Km) 和 Kcat。测得的 Km 值 (257 µM) 和 Kcat 值 (307 min-1) 略高于文献报道值（分别为 188 µM 和 215 min-1）。为测定IC50值，将AFN-1252与BpmFabI预孵育30分钟，然后加入含有巴豆酰辅酶A（300 µM）和NADH（375 µM）的底物混合物启动反应。通过监测340 nm处吸光度的降低来追踪NADH的氧化。使用Graphpad Prism V4软件，将剂量反应数据拟合为S型剂量反应（可变斜率）曲线，从而确定IC50值。为确定结合机制，在巴豆酰辅酶A浓度固定为300 µM的情况下，改变NADH浓度，并改变巴豆酰辅酶A浓度，同时保持NADH浓度固定为375 µM，进行动力学研究。随后绘制了Lineweaver-Burk作图，以确定AFN-1252与BpmFabI的结合机制。 热荧光测定[2] 在有无抑制剂存在的情况下，使用ABI Prism 7500仪器（Applied Biosystems，Carlsbad）在5×SYPRO Orange染料存在下测定BpmFabI蛋白的熔解温度。将2 µM BpmFabI溶于20 mM Tris pH 8.0、500 mM NaCl、5 mM咪唑（含或不含50 µM NADH）中，与20 µM AFN-1252/三氯生孵育1小时，然后加入SYPRO Orange染料。使用Protein thermal shift™软件1.1版，通过Boltzmann方程计算熔解温度。 AFN-1252的体外酶或受体结合测定包括测量其对FabI酶活性的直接抑制作用。该检测通常使用纯化的金黄色葡萄球菌重组FabI酶和底物（例如反式-2-十二烯酰辅酶A），并在NADH存在下进行。通过分光光度法监测340 nm处吸光度的降低来测定酶活性，该吸光度降低对应于NADH的氧化。将化合物与酶和底物以不同浓度孵育，并根据所得动力学数据计算抑制常数（Ki）。使用该方法测得AFN-1252的Ki值为12.8 nM。 |
| 细胞实验 |
采用Wiegand等人描述的微量稀释法并稍作修改39测定最低抑菌浓度(MIC)。将化合物在脑心浸液肉汤(BHIB)中进行两倍系列稀释，并分装至96孔板中。向每个孔中加入1 × 108 cfu/mL的BpR15菌液，并在37℃下培养24小时。同时设置生长对照（仅菌液）、无菌对照（仅肉汤）和阳性对照（含三氯生的菌液）并进行培养。记录抑制BpR15可见生长的最低AFN-1252浓度，即MIC。 MIC结果为n=2的平均值[2]。
采用标准肉汤微量稀释法进行AFN-1252的体外细胞活性测定，以确定其最低抑菌浓度（MIC）。将临床分离的葡萄球菌属菌株培养于阳离子调整的Mueller-Hinton肉汤中，并与化合物进行倍比稀释后孵育。MIC定义为在35°C过夜孵育后抑制细菌可见生长的最低化合物浓度。对于AFN-1252，该测定方法显示其对金黄色葡萄球菌的MIC90值为0.015 µg/mL，对凝固酶阴性葡萄球菌的MIC90值为0.12 µg/mL。也可进行时间-杀菌曲线研究以评估该化合物的杀菌活性。 |
| 动物实验 |
类鼻疽伯克霍尔德菌R15株（以下简称BpR15）分离自马来西亚吉隆坡医院一名死于类鼻疽的患者。40 BpR15常规在37℃的Ashdown琼脂培养基上培养，并在BHIB培养基中制备过夜细菌培养物。AFN-1252溶解于二甲基亚砜（DMSO）中，并储存于-20℃直至使用。[2] AFN-1252的体内动物实验采用小鼠败血症模型。雌性CD-1小鼠（5-6周龄，18-22克）腹腔注射致死剂量的金黄色葡萄球菌Smith菌株。感染后1小时，以不同浓度（例如，0.03、0.1、0.3、1、3 mg/kg）单次口服该化合物。生存情况监测持续7天。保护效力以存活动物百分比和ED50值表示，ED50值采用概率单位分析法计算。该模型是评估新型抗菌药物对全身性葡萄球菌感染体内疗效的标准模型。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
AFN-1252 的药代动力学 (PK) 特性表明其具有口服活性和生物利用度。该化合物的分子量为 375.42，分子式为 C22H21N3O3。在超声辅助下，其在 DMSO 中的溶解度为 5.8 mg/mL (15.45 mM)。在体内研究中，该化合物通常配制成口服制剂。粉末在 -20°C 下可稳定保存长达 3 年，在 4°C 下可稳定保存长达 2 年。溶液可在 -80°C 下保存 2 年，或在 -20°C 下保存 1 年。该化合物在临床前动物模型中表现出典型的药代动力学参数，支持其每日一次口服给药方案。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
AFN-1252 的毒理学数据表明其具有选择性抗菌剂的特征。其对葡萄球菌属的窄谱抗菌活性是其安全性的关键特征，因为它能最大限度地减少对正常人体微生物群的干扰。该化合物选择性抑制细菌 FASII 通路（该通路在人体细胞中不存在），进一步增强了其良好的毒理学特性。在临床前研究中，该化合物在治疗剂量下通常耐受性良好。目前正在开展标准毒理学研究，包括在啮齿类和非啮齿类动物中进行的急性毒性和重复给药毒性评估，以支持其作为新型抗生素的开发。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
AFN-1252 已用于治疗蜂窝织炎、烧伤感染、伤口感染、皮肤脓肿以及皮肤和皮下组织细菌感染的临床试验。
其他信息：AFN-1252 是一种在研抗生素，用于治疗严重的葡萄球菌感染，包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA) 引起的感染。它是一种首创的 FabI 抑制剂，具有独特的作用机制。该化合物已进行了广泛的临床前研究，包括体外活性、体内疗效和药代动力学特性的研究。AFN-1252 目前仅作为研究化合物用于非临床研究，尚未获准用于人体。 |
| 分子式 |
C22H21N3O3
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|---|---|
| 分子量 |
375.4204
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| 精确质量 |
375.158
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| 元素分析 |
C, 70.38; H, 5.64; N, 11.19; O, 12.78
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| CAS号 |
620175-39-5
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| 相关CAS号 |
1047981-31-6;620175-39-5;1047981-30-5 (tosylate hydrate);
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| PubChem CID |
10407120
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder.
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| LogP |
3.777
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| tPSA |
78.93
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
28
|
| 分子复杂度/Complexity |
622
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O1C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2C(C([H])([H])[H])=C1C([H])([H])N(C([H])([H])[H])C(/C(/[H])=C(\[H])/C1C([H])=NC2=C(C=1[H])C([H])([H])C([H])([H])C(N2[H])=O)=O
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| InChi Key |
QXTWSUQCXCWEHF-JXMROGBWSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H21N3O3/c1-14-17-5-3-4-6-18(17)28-19(14)13-25(2)21(27)10-7-15-11-16-8-9-20(26)24-22(16)23-12-15/h3-7,10-12H,8-9,13H2,1-2H3,(H,23,24,26)/b10-7+
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| 化学名 |
(E)-N-methyl-N-((3-methylbenzofuran-2-yl)methyl)-3-(7-oxo-5,6,7,8-tetrahydro-1,8-naphthyridin-3-yl)acrylamide
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| 别名 |
AFN-1252; AFN 1252; AFN1252; API-1252; API1252; API 1252; AFN12520000; AFN 12520000; AFN12520000; Debio1452; Debio 1452; Debio1452; afabicin desphosphono; API 1252; DEBIO1452; DEBIO-1452; Debio 1452;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO :5.8~9 mg/mL ( 15.45~23.97 mM）
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6637 mL | 13.3184 mL | 26.6368 mL | |
| 5 mM | 0.5327 mL | 2.6637 mL | 5.3274 mL | |
| 10 mM | 0.2664 mL | 1.3318 mL | 2.6637 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
