| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
AKN-028 is a novel tyrosine kinase inhibitor. Its primary identified target is FMS-like receptor tyrosine kinase 3 (FLT3), with an IC50 of 6 nM for FLT3 enzyme inhibition. [1]
In a panel screen of 320 kinases, at a concentration of 1 µM, AKN-028 showed less than 20% remaining enzyme activity for FLT3, CDC-like kinase 1 (CLK1), and Ribosomal Protein S6 Kinase (RPS6K). [1] Further characterization yielded IC50 values: CLK1 = 140 nM, RPS6K = 220 nM, Fibroblast growth factor receptor 2 (FGFR2) = 1200 nM, and Vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR2) = 520 nM. [1] In cellular assays, AKN-028 was shown to inhibit autophosphorylation of FLT3 (wild-type, ITD, and TKD mutants) and KIT. [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
AKN-028（0.1 nM-100 μM；15 小时）以剂量依赖的方式抑制小鼠胚胎成纤维细胞和人急性巨核细胞白血病 M07 细胞中的 FLT3 和 KIT 自身磷酸化 [1]。AKN-028（10 μM；72 小时；恶性细胞系）对 AML 细胞系具有细胞毒性，并且 AKN-028 可诱导 AML 细胞系 MV4-11 凋亡 [1]。
AKN-028 以剂量依赖的方式抑制 FLT3 酶，IC50 为 6 nM。[1] 在 17 种细胞系中，AKN-028 对所有 5 种受试 AML 细胞系均显示出细胞毒活性。在FLT3-ITD突变细胞系MV4-11和MOLM-13中观察到最高的敏感性，IC50值<50 nM。其他AML细胞系（Kasumi-1、HL-60、KG1a）的IC50值范围为0.5至6 µM。在实体瘤细胞系HeLa、ACHN和NCI-H69中几乎未观察到细胞毒性作用。[1]在MV4-11 AML细胞系中，10 µM的AKN-028诱导细胞凋亡，表现为caspase 3的激活。[1]在原发性AML患者样本（n=15）中，AKN-028诱导了明显的剂量依赖性细胞毒性反应，平均IC50为1 µM。未观察到细胞毒性反应与FLT3突变状态、等位基因负荷或FLT3定量表达水平之间存在显著相关性。[1] 在另外11例原发性AML样本中，AKN-028表现出一致的剂量依赖性反应，在所有测试样本中均达到IC50。相比之下，特异性FLT3抑制剂AC220的反应则不稳定，通常呈现平坦的剂量反应曲线并趋于平台期。[1] 在MV4-11细胞中与阿糖胞苷或柔红霉素联合用药的研究中，中位效应分析显示存在顺序依赖性协同作用。当细胞与化疗药物同时或在AKN-028给药前24小时接受化疗时，观察到协同作用（平均CI < 0.7）。当细胞在接受化疗前24小时预先接受AKN-028处理时，观察到拮抗作用。 [1] 采用放射性蛋白激酶活性测定法，发现浓度为 1 µM 的 AKN-028 并未直接抑制下游靶点 AKT 1、2、3 或 ERK 1、2。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
AKN-028（15 mg/kg；静脉注射；每日两次，连续6天；雄性C57黑鼠，携带MV4-11异种移植瘤）可抑制小鼠原发性AML和MV4-11细胞的增殖[1]。
在小鼠中空纤维模型中，NMRI小鼠皮下注射AKN-028，每日两次，剂量为15 mg/kg，连续6天。该治疗显著抑制了MV4-11细胞系在体内的净生长。在测试的两个原发性AML样本中，一个样本（UPN26）的净生长受到显著抑制，而另一个样本（UPN25）的生长非常轻微，未观察到显著抑制。[1] 在中空纤维实验期间，未观察到动物出现严重毒性反应。体重和血液学指标（白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白、血细胞比容和血小板计数）未受到显著影响。 [1] |
| 酶活实验 |
FLT3酶抑制试验：采用固定化金属离子亲和荧光偏振（IMAP）技术评估了AKN-028对FLT3酶的抑制作用。该试验针对FLT3的酪氨酸激酶结构域进行。[1]
激酶谱筛选：在1 µM浓度下，评估了AKN-028对320种激酶的抑制谱。该谱分析采用放射性蛋白激酶测定法进行。该试验在50 µL反应体系中进行，使用FlashPlates板。与测试化合物孵育60分钟后，测定剩余激酶活性的百分比。使用参考化合物AC220和星形孢菌素进行比较。 [1] 下游靶点放射性蛋白激酶活性测定：采用放射性蛋白激酶活性测定法测定AKT 1、2、3和ERK 1、2的抑制情况。将样品与1 µM的AKN-028或参考化合物孵育60分钟后，测定激酶活性抑制百分比。[1] |
| 细胞实验 |
Western Blot 分析[1]
细胞类型：过表达 FLT-wt、FLT3-TKD 或 FLT3-ITD 的小鼠胚胎成纤维细胞和过表达 KIT 的人急性巨核细胞白血病 M07 细胞 测试浓度：0.1 nM-100 μM 孵育时间：15 小时 实验结果：FLT3 被抑制，KIT 发生自磷酸化。 细胞毒性试验[1] 细胞类型：肿瘤细胞系 测试浓度：10 μM 孵育时间：72 小时 实验结果：MV4-11 和 MOLM-13 细胞的细胞毒活性最高（IC50<50 nM），其次是其他三种 AML 细胞系（IC50=0.5-6 μM）。 细胞毒性试验 (FMCA)：采用荧光微培养细胞毒性试验 (FMCA) 评估AKN-028的细胞毒活性。将细胞以不同密度接种到预先配制药物的微孔板中。孵育 72 小时后，评估活细胞密度。结果以存活率指数（%）表示，定义为测试孔荧光强度占对照培养物的百分比。IC50 值通过非线性回归分析，根据对数浓度-效应曲线确定。该检测方法用于细胞系和原代患者样本。对于 MOLM-13 细胞系，采用 Alamar Blue 法分析其细胞毒活性。[1] 细胞凋亡检测：通过检测 caspase-3 的激活情况来研究 AKN-028 的细胞死亡特性。将 MV4-11 细胞接种于 96 孔光学板中，并用 10 µM 的化合物处理。在每个孔中加入一种可标记活性 caspase-3 细胞的探针。使用 caspase-3 抑制剂作为对照。使用活细胞成像仪分析细胞 48 小时。依托泊苷用作阳性对照。 [1] 磷酸化ELISA检测FLT3自磷酸化：采用磷酸化ELISA法评估AKN-028对FLT3（野生型、ITD、TKD）和KIT自磷酸化的抑制作用。将过表达这些靶点的细胞与八个不同浓度的化合物孵育5分钟。细胞裂解后，采用夹心ELISA法测定磷酸化水平。以舒尼替尼和AC220作为对照。[1] 蛋白质印迹分析：采用蛋白质印迹分析法评估AKN-028处理MV4-11细胞15小时后FLT3自磷酸化的抑制情况。 [1] 联合用药研究：本研究采用固定摩尔比（阿糖胞苷：AKN-028 = 2.5:1；柔红霉素：AKN-028 = 1:20），在MV4-11细胞中研究了AKN-028与阿糖胞苷或柔红霉素的联合用药。药物以三种不同的顺序添加：（I）化疗预处理24小时后，再给予AKN-028；（II）同时给药；（III）AKN-028预处理24小时后，再给予化疗。总孵育时间为72小时后，采用FMCA法评估细胞毒活性。使用CalcuSyn软件进行中位效应分析，并计算联合指数（CI）。 CI < 0.7 表示协同作用，CI ≈ 1 表示相加作用，CI > 1.45 表示拮抗作用。[1] FLT3 表达定量分析：从原代 AML 细胞中分离总 RNA，并反转录为 cDNA。采用定量实时逆转录 PCR (qRT-PCR) 对 FLT3 mRNA 转录本进行定量。使用含有野生型 FLT3 的质粒构建 FLT3 标准曲线。GUS 用作参考基因。FLT3 转录本的量表示为 FLT3 拷贝数与 100 个 GUS 拷贝数的比值。[1] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 携带 MV4-11 异种移植瘤的雄性 C57 黑鼠 [1]
剂量： 15 mg/kg 给药途径： 皮下注射；每日两次，持续 6 天 实验结果： 抑制肿瘤生长，且不影响体重。 体内疗效的中空纤维小鼠模型：** 在中空纤维小鼠模型中评估了 AKN-028 的体内活性。将含有 MV4-11 细胞或原代 AML 细胞（来自患者 UPN25 和 UPN26）的中空纤维皮下植入 NMRI 雄性小鼠体内。AKN-028 以 15 mg/kg 的剂量每日两次皮下注射。仅注射载体作为对照。治疗持续6天，每组8只动物，每只动物植入3根纤维。6天后，提取纤维，并使用MTT法评估活细胞量。[1] **药代动力学研究：**在雄性C57黑鼠中评估了AKN-028的药代动力学特性。该研究的详细信息见补充材料。基于这些药代动力学数据，预测了中空纤维实验中的血浆浓度曲线，估计目标暴露量为1-3 µM。[1] 体内疗效的中空纤维小鼠模型：在中空纤维小鼠模型中评估了AKN-028的体内活性。将含有MV4-11细胞或原代AML细胞（来自患者UPN25和UPN26）的中空纤维皮下植入NMRI雄性小鼠体内。 AKN-028以15 mg/kg的剂量皮下注射，每日两次（2×）。仅注射溶剂作为对照。治疗持续6天，每组8只动物，每只动物植入3根纤维。6天后，提取纤维，并使用MTT法测定活细胞量。[1] 药代动力学研究：在雄性C57黑鼠中评估了AKN-028的药代动力学特性。该研究的详细信息见补充材料。基于这些药代动力学数据，预测了中空纤维实验中的血浆浓度曲线，估计目标暴露量为1-3 µM。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
AKN-028在小鼠体内表现出较高的口服生物利用度。[1]
AKN-028的血浆蛋白结合率为96.5%。[1] 基于C57黑鼠的药代动力学研究，假设药代动力学呈线性且无应变差异，中空纤维实验的预测曲线下面积（AUC）为6 µM·h。预测的血浆浓度曲线表明，每日两次给药，血浆目标浓度（1-3 µM）以上的暴露时间约为1小时。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在空心纤维小鼠模型中，连续6天，每天两次皮下注射15 mg/kg的AKN-028，未观察到明显的毒性反应。对动物的体重变化进行监测，结果显示体重未受到不良影响。第6天进行的血液学分析（包括白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白、血细胞比容和血小板计数）显示，与溶剂对照组相比，AKN-028组未出现显著毒性反应。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
AKN-028 已用于治疗急性髓系白血病的临床试验。FLT3/KIT 激酶抑制剂 AKN-028 是一种口服生物利用度高的蛋白酪氨酸激酶抑制剂，可抑制 FMS 相关酪氨酸激酶 3 (FLT3; STK1) 和干细胞因子受体 (SCFR; KIT)，具有潜在的抗肿瘤活性。FLT3/KIT 激酶抑制剂 AKN-028 可结合并抑制野生型和突变型 FLT3 和 SCFR。这可能导致过度表达这些受体酪氨酸激酶的癌细胞类型中肿瘤细胞增殖受到抑制。
AKN-028（N-3-(1H-吲哚-5-基)-5-吡啶-4-基-吡嗪-2,3-二胺）是一种新型小分子酪氨酸激酶抑制剂，发现于2-氨基吡嗪系列化合物中。研究发现，无论FLT3突变状态如何，该化合物在急性髓系白血病（AML）细胞系和原代患者培养物中均具有强效的抗白血病活性。基于其激酶抑制谱、药代动力学特性和体外活性，该化合物被选中进行进一步开发。研究表明，其作用机制可能涉及靶向FLT3以外的多个通路，包括抑制KIT、CLK1和RPS6K，这可能有助于其在FLT3野生型AML中的疗效。一项针对急性髓系白血病 (AML) 患者的 AKN-028 的国际多中心 I 期临床试验于 2012 年 1 月启动（ClinicalTrials.gov NCT01573247）。[1] 在空心纤维小鼠模型中，小鼠皮下注射 15 mg/kg AKN-028，每日两次，持续 6 天，未观察到明显的毒性反应。研究人员监测了小鼠的体重变化，结果显示体重未受到不良影响。第 6 天的血液学指标分析（包括白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白、血细胞比容和血小板计数）显示，与溶媒对照组相比，AKN-028 组未出现显著毒性反应。[1] |
| 分子式 |
C17H14N6
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|---|---|
| 分子量 |
302.33
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| 精确质量 |
302.128
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| CAS号 |
1175017-90-9
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| 相关CAS号 |
AKN-028 acetate
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| PubChem CID |
44177328
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| LogP |
3.348
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| tPSA |
95.74
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
23
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| 分子复杂度/Complexity |
385
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1(N)=NC=C(C2C=CN=CC=2)N=C1NC1C=CC2=C(C=1)C=CN2
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| InChi Key |
JLRIJKVMMZEKDF-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C17H14N6/c18-16-17(22-13-1-2-14-12(9-13)5-8-20-14)23-15(10-21-16)11-3-6-19-7-4-11/h1-10,20H,(H2,18,21)(H,22,23)
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| 化学名 |
3-N-(1H-indol-5-yl)-5-pyridin-4-ylpyrazine-2,3-diamine
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| 别名 |
AKN 028 AKN028AKN-028
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~125 mg/mL (~413.46 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.3076 mL | 16.5382 mL | 33.0764 mL | |
| 5 mM | 0.6615 mL | 3.3076 mL | 6.6153 mL | |
| 10 mM | 0.3308 mL | 1.6538 mL | 3.3076 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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