Altinicline   中文名称: 5-乙炔基尼古丁

nAChR

表1显示了1、2、5和7的结合和体外多巴胺（DA）释放实验的结果。数据表明，与大鼠皮质膜中的[3H]QNB（毒蕈碱）结合位点相比，所有测试的化合物对[3H]Nic（尼古丁）结合位点都表现出高度的选择性。然而，在化合物从大鼠纹状体切片释放DA的能力方面观察到了差异。在该生物测定中，2往往比1更有效，而7的活性明显较低。此外，数据表明，在结合试验中，SIB-1508Y/（S）-2是表现出最高亲和力的对映体，主要负责2刺激的DA释放，这种作用被NAChR拮抗剂甲戊胺和二氢-β-赤藓烷阻断。结果说明了功能测定法在区分两种密切相关的类似物（2和7）方面的实用性，并导致决定更全面地评估2和（S）-2。[1]

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表达重组人NAChRs的爪蟾卵母细胞电流反应的电生理记录是检测激动剂或拮抗剂活性的灵敏方法。因此，获得了表达人α2β2、α2β4、α3β2、β4、β2、4或7 NAChR亚型的卵母细胞的电压钳记录（图1）。SIB-1508Y/2引发的内向电流被归一化为先前对同一细胞施加乙酰胆碱（ACh；10μM）产生的反应。在10μM的浓度下，2在表达α2β2、α2β4、α3β2、γ4β2和α4β4 NAChR亚型的卵母细胞中产生的电流范围为ACh（10μM）引起的反应的20%至50%。在人类α7受体亚型上没有观察到可检测到的内向电流，25在α3β4亚型上只检测到最小的反应。这与1（数据未显示）形成鲜明对比，1在本试验中是α3β4和α7受体亚型的强效激动剂。[1]

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使用稳定表达人重组NAChR亚型的细胞系的功能测定提供了进一步的数据，比较了1、2SIB-1508Y/（S）-2和（R）-2。在该试验中，激动剂激活重组受体会刺激钙进入细胞。随后细胞质Ca2+浓度（[Ca2+]i）的升高是通过测量Ca2+敏感染料1-[2-氨基-5-（2,7-二氯-6-羟基-3-氧基-9-蒽基）苯氧基]-2-（2-氨基-5-甲基苯氧基）乙烷-N，N，N'，N'-四乙酸（fluo-3）的荧光变化来确定的。30在表达重组人α2β4、α3β4、a 4β4和α4β2 NAChR亚型的细胞系和表达人神经肌肉NAChR胎儿形式（α1β1γδ）的细胞系中测试了这些化合物（表2和表3）。在每个细胞系1、2和（S）-2中，[Ca2+]i均增加，这些作用被NAChR拮抗剂d-筒箭毒碱和甲戊胺阻断（数据未显示）。虽然（S）-2在α4β2 NAChR亚型中显示出最大的效力（表2），但（R）-2在含β4的细胞系中表现出较低的活性，在表达α4β2中没有活性。此外，在最大有效浓度下，每个细胞系中SIB-1508Y/（S）-2的有效性为1的26-52%，而（R）-2的疗效较弱（表3）。数据表明（S）-2是更具活性的对映体，这与结合和DA释放结果一致（表1）[1]。

与生理盐水治疗的动物相比，皮下注射（sc）2 mg/kg可显著增加同侧旋转，这一作用被甲戊胺阻断。此外，在最大有效剂量下，2比1更有效，副作用最小。这些研究导致了用于治疗PD的SIB-1508Y/（S）-2的临床前开发。[1]

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对三只因长期接触多巴胺能神经毒素1-甲基-4而患帕金森病的猴子的运动症状和残疾量表评分，评估了中枢作用、亚型选择性神经元烟碱乙酰胆碱受体激动剂（S）-（-）-5-乙炔基-3-（1-甲基-2-吡咯烷基）-吡啶（SIB-1508Y）的潜在抗帕金森病作用- 划译 由于2/SIB-1508Y刺激了大鼠纹状体切片中DA的释放，因此在帕金森病动物模型中进行了评估。表4显示了2对单侧黑质纹状体6-羟基多巴胺（6-OHDA）损伤32（大鼠翻转模型）大鼠同侧旋转的影响。皮下注射（sc）25mg/kg的剂量时，2与生理盐水治疗的动物相比，同侧旋转显著增加，这一作用被甲戊胺阻断。此外，在最大有效剂量下，2比1更有效，副作用最小。这些研究导致了用于治疗PD的SIB-1508Y/（S）-2的临床前开发。[1]

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在三只猴子的运动症状和残疾量表评分中评估了中枢作用、亚型选择性神经元烟碱乙酰胆碱受体激动剂（S）-（-）-5-乙炔基-3-（1-甲基-2-吡咯烷基）-吡啶（SIB-1508Y）的潜在抗帕金森病作用，这三只猴子之前因长期接触多巴胺能神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）而患上帕金森病。与左旋多巴（左旋多巴）相比，单独给药时，SIB-1508Y仅具有轻微的抗帕金森病作用。这种药物的镇痛作用干扰了高剂量的潜在治疗效果。然而，当低剂量、无效剂量的SIB-1508Y与低剂量、有效剂量的左旋多巴联合使用时，观察到显著的临床效果。这些数据表明，亚型选择性烟碱型乙酰胆碱受体激动剂可能有望作为抗帕金森病药物，当与左旋多巴联合使用时，可以减少达到显著临床效果所需的左旋多巴剂量[2]。

爪蟾卵母细胞。[1]
制备和电生理学非洲爪蟾蛙通过浸入0.15%的甲烷磺酸三卡因溶液进行麻醉，并手术切除卵巢。卵母细胞注射10-50nL，其中含有10-100ng编码a，+x的mRNA，比例为1:1（a7为50ng）。注射后，卵母细胞在16-19℃下在含有（以mM计）NaCl（77.5）、KCl（2）、CaCl 2（1.8）、MgCl 2（1）、HEPES（5）、萘丙酮酸盐（5）的溶液中孵育；pH 7.3，用NaOH调节，并补充100 U/mL青霉素和100 ptg/mL链霉素。使用双电极电压钳技术（保持膜电位：-80 mV）在mRNA注射后两到五天检查卵母细胞的功能表达。记录溶液含有（单位为mM）：NaCl（115）、KCl（2.5）、CaC12（1.8）、HEPES（10）、阿托品（0.001），pH 7.3。记录电极填充有3M KCl。以约6-10ml/min的速率将灌注溶液重力送入记录室（容量：100pL）。所有记录均在室温（19-23OC）下进行。数据被放大、数字化（100-500Hz）和滤波（40-200Hz）。当用标准NAChR激动剂（尼古丁或ACh，100-300iiM）攻击时，假注射卵母细胞（50nL蒸馏水）或注射ax或Px mRNA（a7除外）的卵母细胞没有显示任何可检测的电流（<1nA）。

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基于平板的Fluo-3测定法测量细胞质Ca2+浓度。[1]
将用编码人NAChR亚基的表达质粒稳定转染的细胞以2 x 105个细胞/孔的速度铺在96孔聚-L-赖氨酸包被的微量滴定板上。24小时后，用200 pIL的HEPES缓冲盐水（HBS:125 mM NaCl，5 mM KC1，0.62 mM MgCl 2，1.8 mM CaCl2，20 mM葡萄糖，20 mM HEPES，pH 7.4）洗涤细胞，并在20℃的黑暗中用30μL的20 mM氟-3-乙酰氧基甲酯（fluo-3/AM）孵育2小时。在含有2%二甲亚砜（DMSO）和0.2%普朗尼克F127的HBS中制备fluo3/AM储备溶液。用200g/L HBS洗涤残留的无负载染料，随后向每个孔中加入180pL HBS。使用板读数荧光计进行荧光测量。首先，在添加药物之前测定基础荧光（Fb）。接下来，向每个孔中加入20pL药物溶液，以0.33秒的间隔记录荧光60秒，以确定峰值反应（Fp）。用Triton X-100（终浓度0.20%）裂解细胞后测定最大荧光（Fma）。为了记录最小荧光（Fmin），然后加入MnCl 2至终浓度为10 mM。所有荧光测定均进行四次。根据Daggett等人的方法计算了峰值和基础细胞质钙浓度[Ca]i。

6-Hydroxydopamine (6-OHDA) Rotation Model Animals. [1]
Unilaterally 6-OHDA lesioned rats (male Sprague-Dawley rats) weighing between 250 to 350 g at the start of the experiment were used for these studies. The animals were housed three per cage and maintained in a humidity and temperature (22 oC) controlled facility on a 12 h: 12 h light/dark cycle (lights on at 6:00 a.m.) with free access to food (Harlan-Teklad 4% rat diet 7001) and water. After arrival at SIBIA, each rat was allowed a 2-week period for habituation to the animal room. For all treatment groups 8 rats were tested.

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Compounds. [1]
(-)-Nicotine hydrogen tartrate was used. Fumarate 2/SIB-1508Y was synthesized as described above. Nicotine (1) and SIB-1508Y fumarate were dissolved in saline and the pH was adjusted to 7.0 by addition of 1OM NaOH. Doses of drugs are expressed in terms of their free amine concentrations. All compounds were administered subcutaneously into the dorsal neck region in a volume of 1 ml/kg body weight. Saline was used as control.

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Lesioning. [1]
The ascending nigrostriatal DA pathway was lesioned by unilateral stereotaxic injection of 6-OHDA hydrobromide (16 [tg/ L administered at a rate of 0.34 ul/min for 6 min) slightly anterior and to the left substantia nigra. All injections of 6-OHDA were preceded (30 min) by desipramine (25 mg/kg, i.p.) and pargyline (75 mg/kg, i.p.) in order to protect noradrenergic neurons from being destroyed. The rats were lesioned.

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Behavioral Testing. [1]
After 7-10 days of recovery from the surgery, the effectiveness of the lesion was verified by determining the response of the animals to apomorphine (0.2 mg/kg, sc). Only rats with a minimum response of 100 contralateral turns/30 min were used further in this study. Two weeks later, the selected rats were tested with the drugs using an automated rotometer system to record number and direction of rotations. In order to distinguish spontaneous rotations (non-specific) from induced rotations (specific to the effect of the drug), each rat served as its own control.
The procedure was as follows: the rats were placed in the rotometer system (bowl: 45.5 cm internal diameter) for a 15-min acclimation period, after which they were administered the vehicle subcutaneously and were monitored for one hour. They then received the test compound subcutaneously and were monitored for an additional two hours. The rats were first administered with amphetamine (1 mg/kg free amine) then SIB-1508Y/2 fumarate and finally (-) nicotine. Washout periods of 4 days and 9 days separated the injection between amphetamine/2 fumarate and 2 fumarate/(-) nicotine, respectively. Six animals were tested at one time. Testing was carried out between 9:00 a.m. and 4:00 p.m. each day (light cycle).

[1]. (S)-(-)-5-ethynyl-3-(1-methyl-2-pyrrolidinyl)pyridine maleate (SIB-1508Y): a novel anti-parkinsonian agent with selectivity for neuronal nicotinic acetylcholine receptors. J Med Chem. 1996 Aug 16;39(17):3235-7.

[2]. Effects of SIB-1508Y, a novel neuronal nicotinic acetylcholine receptor agonist, on motor behavior in parkinsonian monkeys. Mov Disord. 1998 Jul;13(4):637-42.

In conclusion, the novel NAChR agonist SIB-1508Y/(S)-2 has been synthesized and evaluated in a range of in vitro and in vivo assays. Significantly, the differentiation of (S)-2 from structurally related agonists with quite similar binding affinities for endogenous NAChRs was accomplished on the basis of results derived from functional assays, including a novel functional assay employing cell lines stably expressing recombinant human NAChR subtypes. This assay provides a powerful method for the discovery of subtype selective NAChR agonists and antagonists, acting either at the ACh binding site or at novel allosteric sites on the receptor complex [1].

C12H14N2

186.25296

186.116

C, 77.38; H, 7.58; N, 15.04

179120-92-4

3036156

Typically exists as solid at room temperature

287.7ºC at 760 mmHg

127.8ºC

0.00245mmHg at 25°C

1.767

16.13

0

2

2

14

240

1

C#CC1=CC(=CN=C1)[C@@H]2CCCN2C

NUPUDYKEEJNZRG-LBPRGKRZSA-N

InChI=1S/C12H14N2/c1-3-10-7-11(9-13-8-10)12-5-4-6-14(12)2/h1,7-9,12H,4-6H2,2H3/t12-/m0/s1

3-ethynyl-5-[(2S)-1-methylpyrrolidin-2-yl]pyridine

Altinicline; 179120-92-4; 5-Ethynyl Nicotine; (-)-5-Ethynylnicotine; Altinicline [INN]; Pyridine, 3-ethynyl-5-[(2S)-1-methyl-2-pyrrolidinyl]-; RJ9V9V09VM; CHEMBL111659; 5-Ethynyl Nicotine; (-)-5-Ethynylnicotine; SIB 1508Y; SIB1508Y; SIB-1508Y;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。