AR 231453

GPR119

AR231453对所有其他测试的 GPCR（超过 230 个，包括所有已知的胰岛受体）均无活性，表明它对 GPR119 具有高度选择性[1]。 AR231453有效刺激 cAMP 积累 (EC50 = 4.7 nM)，其最大功效与毛喉素相似。 AR 231453 显着增强 HIT-T15 细胞中的胰岛素释放，EC50 为 3.5 nM[1]。 AR 231453 还在葡萄糖浓度范围为 8-17 mM 时刺激离体小鼠胰岛中的胰岛素释放[1]。

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GPR119激动剂刺激胰岛素体外释放[1]
观察到GPR119与g - αs偶联并在β细胞中表达，提示我们验证GPR119是一种促胰岛素受体的假设。在这方面，AR231453显著增强了HIT-T15细胞中的胰岛素释放，EC50为3.5 nM（图4A），与其对cAMP的作用相似(EC50为4.7 nM；见图3D)，效果与福斯克林相似。为了评估GPR119对AR231453的胰岛素依赖性，我们测试了其在缺乏GPR119的RIN-5F细胞（RIN-5F/vector）和稳定转染了人GPR119的RIN-5F细胞（RIN-5F/hGPR119）中的活性。AR231453在RIN-5F/hGPR119细胞中刺激胰岛素释放，但在RIN-5F/载体细胞中没有（图4B）。这些研究表明，AR231453在表达gpr119的β细胞系中特异性地具有胰岛素促胰岛素作用。接下来，我们研究了GPR119激动剂对离体大鼠和小鼠胰岛中葡萄糖刺激的胰岛素释放的影响。在15 mM葡萄糖下，300 nM AR231453与GLP-1相似，增强了大鼠胰岛中的胰岛素释放（图4C）。然而，该化合物对5毫米葡萄糖培养的胰岛没有影响。因此，GPR119激动剂在胰岛中的胰岛素促胰岛素作用是葡萄糖依赖的。AR231453在葡萄糖浓度范围为8-17 mM时也刺激了离体小鼠胰岛的胰岛素释放（图4D）。这表明GPR119激动剂的胰岛素调节作用只需要适度的血糖升高。

AR231453（20 mg/kg，口服）以剂量依赖性方式显着改善口服葡萄糖耐量，其功效与磺酰脲格列本脲的最大有效剂量相似[1]。动物模型：小鼠[1]。剂量：20毫克/公斤。给药方法：口服，一次。结果：小鼠的葡萄糖耐量得到改善。[1]
GPR119激动剂改善小鼠葡萄糖耐量，并促进葡萄糖依赖性胰岛素释放[1]
AR231453在C57BL/6小鼠中表现出良好的口服生物利用度，在本研究使用的剂量下达到微摩尔血浆水平超过2小时。AR231453（口服20mg /kg）以剂量依赖的方式显著改善口服葡萄糖耐量，其疗效与磺脲格列本脲的最大有效剂量相似（图5A）。平均而言，AR231453最大限度地抑制血糖漂移约42%（21个独立实验）。当给糖时，AR231453改善葡萄糖耐量的效果稍差(23%；三个独立实验)（图5B）。

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AR231453在gpr119缺陷小鼠中无活性[1]
为了证明AR231453的体内效应是通过GPR119发生的，我们制造了GPR119缺陷小鼠（图7）。与人类一样，小鼠GPR119基因位于X染色体上（Unigene Cluster Mm.34953）（图7A）。通过Southern blot分析（图7B）、胰腺GPR119 mRNA的RT-PCR分析（图7C）和敲除小鼠胰腺切片上GPR119受体的免疫荧光分析（图7D）证实了GPR119的缺失。gpr119缺陷小鼠的胰岛保持正常形态（图7D），对葡萄糖和GLP-1的反应正常（图7E）。这些小鼠也具有正常的大小、体重和进食/空腹血糖水平（未显示），并且在葡萄糖耐量试验中对格列本脲有典型的反应（图7，F和G）。因此，GPR119的缺失不会严重影响葡萄糖稳态。然而，来自这些动物的分离胰岛不再对AR231453有反应（图7E）。AR231453对GPR119缺陷小鼠的糖耐量也没有影响（图7G），表明观察到的AR231453在体内的活性确实是通过GPR119介导的。

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方法：每只化学诱导的C57BL/6小鼠左肾下移植100只同种C57BL/6小鼠胰岛。从移植当天开始，这些受体每天给予溴脱氧尿嘧啶（BrdU），伴或不伴AR231453，剂量为10 mg/kg/d。通过测量血糖水平监测胰岛移植功能。4周时，行左肾切除术，切除携带胰岛移植物的肾脏，以测定胰岛移植物中β细胞的复制情况。胰岛素和BrdU免疫荧光染色检测复制的β细胞。共聚焦显微镜下对移植胰岛细胞中胰岛素（+）和BrdU(+) β细胞进行计数。为了确定AR231453是否会增加血浆GLP-1水平，我们在治疗后30分钟收集AR231453治疗小鼠的血浆，并通过酶联免疫吸附法测量血浆中GLP-1的活性。
结果：尽管所有受体小鼠在接受或不接受治疗的28天内达到血糖正常，但AR231453治疗的小鼠在更短的时间内达到血糖正常。小鼠在16±6天内达到血糖正常，而ar231453只需要8±3天（P < 0.01）。ar231453处理的小鼠胰岛移植物中胰岛素（+）和BrdU(+) β细胞的百分比明显高于载药处理的小鼠。ar231453处理小鼠胰岛移植物中胰岛素（+）和BrdU(+) β细胞的平均百分比为21.5%±6.9%，载药处理小鼠为5.6%±3.7% （P < 0.01）。ar231453处理小鼠血浆活性GLP-1水平也显著高于载药处理小鼠（P < 0.05）。
结论：我们的数据表明，GPR119激动剂AR231453可刺激β细胞复制，改善胰岛移植功能[2]。

体外测定[1]
cAMP测定采用Flash Plate腺苷酸环化酶试剂盒。简单地说，用Lipofectamine 转染HEK293细胞，用空载体DNA或GPR119表达质粒DNA（如上所述）。24 h后，在GIBCO细胞分离缓冲液（目录13151-014）中收获转染的细胞，并在实验缓冲液（50% 1× PBS/50%刺激缓冲液）中重悬。化合物在室温下每孔105个细胞孵育60分钟。在检测缓冲液中用示踪剂孵育2小时后，在Wallac MicroBeta闪烁计数器中计数。每个孔的cAMP值根据每个测定板上的标准cAMP曲线推断。在仓鼠胰岛素瘤来源的HIT-T15细胞和gpr119转染的RIN-5F稳定系中进行cAMP测定，基本上以相同的方式进行，但没有瞬时转染。在旨在选择性降低内源性GPR119在HIT-T15细胞中的表达的实验中，细胞被转染了一种对照RNA寡核苷酸，其序列来源于仓鼠GPR119的义取向（5 ' -CUAUGCUGCUAUCAAUCUA-3 ‘）（对照）或反义取向（5 ’ -UAGAUUGAUAGCAGCAUAG-3 '）[小干扰RNA (siRNA)]。转染48小时后，检测细胞GPR119表达和激动剂刺激的cAMP产生，如上所述。

为测定肌醇磷酸积累量，用指定的G蛋白受体表达质粒转染96孔板中的HEK293细胞。此外，细胞用巨细胞病毒（CMV）空载体或Gαq/Gαi表达质粒共转染，其中Gαq的末端6个残基被Gαi的相应残基取代。受体和G蛋白嵌合体分别以4:1的摩尔比转染。第二天，细胞在含0.4 μCi [3H]肌肌醇的100 μl无肌醇/无血清DMEM中孵育。细胞孵育过夜，然后用100 μl无肌醇/无血清DMEM（含10 μM pargyline和10 mM氯化锂）替换培养基。1小时后，细胞裂解，AG1-X8甲酸树脂层析分离磷酸肌醇。经过结合、四次洗涤和多屏过滤板洗脱等额外纯化后，用Wallac闪烁计数器定量洗脱计数。

为了体外胰岛素释放，HIT-T15胰岛素瘤细胞被镀在24孔板中（每孔2.5 × 105个细胞）进行胰岛素释放测定。实验前一天，将培养基改为DMEM （3 mM葡萄糖），其中含有10%的马血清和2.5%的胎牛血清。第二天，用PBS洗涤细胞两次，在0.25 ml hepes缓冲的Krebs-Ringer缓冲液中，在15mm葡萄糖存在下，与DMEM中的测试化合物孵育1小时。采用超灵敏胰岛素酶联免疫吸附测定试剂盒检测上清胰岛素水平。用RIN-5F稳定系进行胰岛素测定的方法基本相同。

使用雌性Sprague Dawley大鼠（体重，175-185 g）或雄性C57BL/6小鼠（体重，25 g）分离的胰岛进行胰岛素释放试验。如前所述，在静态胰岛孵育中测定胰岛素释放。简单地说，每组5个胰岛放入孵育井中。用含有5 mM葡萄糖的hepes缓冲克雷布斯-林格缓冲液（pH 7.4）预孵育30分钟后，将胰岛转移到含有2 ml hepes缓冲克雷布斯-林格缓冲液和不同浓度葡萄糖和测试化合物的井中。研究在37℃的水浴摇床中进行，气氛为95% O2/5% CO2。孵育缓冲液于60 min后收集样品，用ELISA法测定胰岛素。

体内实验[1]
本研究使用C57BL/6雄性小鼠。在口服葡萄糖耐量试验中，隔夜禁食的小鼠（每组n=6）分别灌胃给予赋形剂（80%聚乙二醇400/10%吐温80/10%乙醇）或所需剂量的测试化合物。随后给予葡萄糖推注（口服3 g/kg或腹腔注射2 g/kg）。在2小时内，于指定时间点采集尾部采血（约5 μl），并使用血糖仪测定血浆葡萄糖水平。在胰岛素药效学研究中，对禁食的小鼠（每组和每个时间点n=6）口服给予赋形剂或AR231453。30分钟后，口服给予3 g/kg葡萄糖推注。在指定时间点，使用肝素化采血管采集血液。血浆样本经500 × g离心20分钟获得，并按上述方法测定胰岛素水平。

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胰岛移植和治疗[2]
胰岛的分离和移植按照与先前发表的分离方案类似的方案进行。⁶ 去除腺泡细胞、血管、淋巴结和导管的胰岛用于培养和移植。每只受体小鼠移植100个胰岛。受体小鼠随机分为两组，治疗从移植当天开始。第1组小鼠每日口服载体。第2组小鼠每日口服AR231453，剂量为10 mg/kg。所有受体小鼠还腹腔注射溴脱氧尿苷（BrdU），剂量为100 mg/kg/d，持续4周。 4周后，进行肾切除术，并收集所有带有原代胰岛移植物的左肾。

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血浆GLP-1活性免疫测定[2]
小鼠经口给予赋形剂或AR231453（10 mg/kg）。给药30分钟后采集血样。使用小鼠GLP-1酶联免疫吸附测定试剂盒测定血浆中活性GLP-1的水平。

[1]. A role for beta-cell-expressed G protein-coupled receptor 119 in glycemic control by enhancing glucose-dependent insulin release. Endocrinology. 2007 Jun;148(6):2601-9.

[2]. Stimulating β-cell replication and improving islet graft function by AR231453, A GPR119 agonist. Transplant Proc. 2011 Nov;43(9):3217-20.

胰岛β细胞功能障碍是2型糖尿病发病机制中的一个标志性事件。注射用胰高血糖素样肽-1 (GLP-1) 受体激动剂因其能够增强葡萄糖依赖性胰岛素释放并维持胰岛β细胞数量，已显示出作为抗糖尿病药物的巨大潜力。这些作用是通过刺激β细胞上的GLP-1受体释放cAMP介导的。我们发现，Gα(s)偶联受体GPR119主要定位于胰岛的胰岛素分泌β细胞。此外，我们还发现GPR119具有葡萄糖依赖性促胰岛素分泌的功能。与GLP-1受体和其他介导增强葡萄糖依赖性胰岛素释放的肽类受体不同，GPR119适合用于开发高效、口服有效的小分子激动剂。 GPR119特异性激动剂AR231453显著增加了HIT-T15细胞和啮齿动物胰岛中cAMP的积累和胰岛素的释放。在这两种情况下，GPR119的缺失均导致AR231453失活。AR231453还能增强体内葡萄糖依赖性胰岛素的释放，并改善野生型小鼠的口服葡萄糖耐量，但在GPR119缺陷型小鼠中则无此作用。糖尿病KK/A(y)小鼠对AR231453也表现出高度反应。口服活性GPR119激动剂有望成为新型的葡萄糖依赖性降血糖药物。[1]

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目的：G蛋白偶联受体119 (GPR119) 主要表达于β细胞和肠道L细胞。 AR231453 是一种选择性小分子 GPR119 激动剂，可增强葡萄糖依赖性胰岛素分泌和胰高血糖素样肽-1 (GLP-1) 释放。我们研究了 AR231453 是否能直接刺激糖尿病小鼠的 β 细胞增殖并改善胰岛移植功能。[2]

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这些数据有力地证明 GPR119 是胰腺 β 细胞中葡萄糖刺激胰岛素释放的重要调节因子。GPR119 选择性激动剂 AR231453 可刺激以下细胞中 cAMP 的积累和胰岛素的释放：1) 转染的 RIN-5F 胰岛瘤细胞；2) 内源性表达该受体的 HIT-T15 胰岛瘤细胞；以及 3) 分离的大鼠和小鼠胰岛。这些作用与福斯克林或 GLP-1 的作用基本相同，表明其具有重要的生理意义。在体内，AR231453 刺激胰岛素释放并改善葡萄糖耐量，其疗效与格列本脲（一种在啮齿动物和人类中均能强效刺激胰岛素释放的药物）相当。值得注意的是，AR231453 在糖尿病 KK/Ay 小鼠中的活性尤为显著。所有这些作用很可能都是通过 GPR119 介导的。缺乏 GPR119 的 RIN-5F 对照细胞对 AR231453 无反应。在 HIT-T15 细胞中，siRNA 介导的 GPR119 水平降低与对 AR231453 反应的几乎完全丧失相关。最后，AR231453 既不能增强 GPR119 缺陷小鼠胰岛中葡萄糖刺激的胰岛素释放，也不能改善 GPR119 缺陷小鼠的葡萄糖耐量。 GPR119缺陷小鼠的体内平衡未见明显缺陷，但这或许并不令人意外，因为缺乏GIP受体或GLP-1受体的小鼠在这方面仅有轻微改变。由于我们未检测GPR119缺陷小鼠体内AR231453的暴露量，因此该化合物在这些小鼠的葡萄糖耐量试验中无效可能仅仅是由于不同品系小鼠血浆中该化合物的暴露量存在差异。然而，这种可能性似乎不大。在C57BL/6小鼠中，AR231453的暴露量比其体外EC50值高出100倍以上。此外，该化合物对本文所用的其他所有品系小鼠均有效。许多结构不同的化合物已在野生型同窝小鼠和GPR119缺陷小鼠中进行了评估，结果与AR231453相似（数据未显示）。综上所述，这些数据强烈提示AR231453的作用是通过GPR119介导的，并明确证实GPR119是葡萄糖稳态中一个具有重要生理意义的调节因子。尽管这些研究支持GPR119通过直接增强胰岛β细胞功能来调节葡萄糖稳态的假设，但必须认识到GPR119可能通过其他机制发挥作用。腹腔注射葡萄糖后，AR231453的疗效降低了近50%，提示其作用可能还涉及肠促胰岛素信号的调节。这一假设值得进一步研究。我们在胰岛和小鼠中的研究表明，GPR119以葡萄糖依赖的方式刺激胰岛素释放。即使给予远超该化合物体内最大有效剂量的AR231453（C57BL/6小鼠为100 mg/kg），在空腹条件下也未观察到胰岛素释放的刺激或血糖的降低。相比之下，格列本脲在禁食小鼠中诱导了显著的胰岛素释放和明显的低血糖。这些数据与已知的GIP和GLP-1刺激胰岛素释放的机制完全一致。[1]

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在本研究中，我们发现AR231453治疗显著增强了接受微量治疗剂量胰岛移植小鼠的糖尿病逆转。这证实了我们之前的研究，即使用内源性GPR119配体油酰乙醇胺（OEA）和选择性小分子GPR119激动剂PSN632408来增强胰岛移植功能。[8]糖尿病的逆转依赖于胰岛移植的功能，因为切除携带胰岛移植的左肾后，高血糖复发。我们还发现AR231453治疗显著增加了胰岛移植中β细胞的增殖。在我们之前的研究中，我们发现艾塞那肽-4（exendin-4）能够刺激年轻和老年供体小鼠胰岛移植中的β细胞增殖⁴。因此，我们使用老年供体的胰岛进行移植。尽管已有研究表明老年小鼠的β细胞增殖能力下降，但我们的数据表明，AR231453能够刺激老年供体分离的胰岛中的β细胞增殖。AR231453在体外可直接刺激β细胞分泌胰岛素，并在体内改善葡萄糖耐量并增强葡萄糖依赖性胰岛素释放¹。最近，我们还发现OEA和PSN632408能够直接刺激培养胰岛中的β细胞增殖（论文已投稿）。因此，AR231453可能通过直接激活胰岛上的GPR119来改善胰岛移植功能并刺激胰岛移植中的β细胞增殖。然而，AR231453 也可通过激活 GPR119 刺激肠道内分泌 L 细胞分泌 GLP-1。我们发现，AR231453 治疗可提高小鼠血浆 GLP-1 水平。因此，AR231453 刺激胰岛移植中 β 细胞增殖也可能与血浆 GLP-1 浓度升高有关。为了探究 AR231453 通过激活 GRP119 对改善胰岛移植功能和刺激胰岛移植中 β 细胞增殖的直接和/或间接作用，需要使用 GLP-1 受体敲除小鼠和 GPR119 敲除小鼠作为胰岛供体和/或移植受体。靶向 GPR119 是一种增加 β 细胞增殖和改善胰岛移植功能的新治疗方法，具有应用于人类胰岛移植的潜力。单供体胰岛移植是临床胰岛移植极具吸引力的目标。单个供体胰岛细胞的数量通常不足以恢复正常血糖，尽管从单个供体胰腺中分离出的胰岛可以逆转糖尿病。¹¹ 因此，开发基于 GPR119 激动剂的策略来增加 β 细胞数量并改善胰岛移植功能，可能有助于提高单个供体胰岛移植的成功率。由于 1 型糖尿病患者在发病时仍保留一定数量的 β 细胞，因此 GPR119 激动剂也可用于通过刺激 β 细胞复制和增加 β 细胞数量来恢复正常血糖。^[2]

C₂₁H₂₄FN₇O₅S

505.52

505.154

C, 49.89; H, 4.79; F, 3.76; N, 19.40; O, 15.82; S, 6.34

733750-99-7

24939268

Light yellow to yellow solid powder

5.303

168.31

1

12

6

35

833

0

CC(C)C1=NOC(C2CCN(C3=NC=NC(NC4=CC=C(S(=O)(C)=O)C=C4F)=C3[N+]([O-])=O)CC2)=N1

DGBKNTVAKIFYNU-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H24FN7O5S/c1-12(2)18-26-21(34-27-18)13-6-8-28(9-7-13)20-17(29(30)31)19(23-11-24-20)25-16-5-4-14(10-15(16)22)35(3,32)33/h4-5,10-13H,6-9H2,1-3H3,(H,23,24,25)

N-(2-fluoro-4-methylsulfonylphenyl)-5-nitro-6-[4-(3-propan-2-yl-1,2,4-oxadiazol-5-yl)piperidin-1-yl]pyrimidin-4-amine

AR-231453; AR 231453; AR231,453; 733750-99-7; AR 231,453; AR231,453; N-(2-Fluoro-4-(methylsulfonyl)phenyl)-6-(4-(3-isopropyl-1,2,4-oxadiazol-5-yl)piperidin-1-yl)-5-nitropyrimidin-4-amine; AR-231453; N-(2-fluoro-4-methylsulfonylphenyl)-5-nitro-6-[4-(3-propan-2-yl-1,2,4-oxadiazol-5-yl)piperidin-1-yl]pyrimidin-4-amine; CHEMBL461384; 07Z1P4981I; AR231,453; AR-231453; AR231,453

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~25 mg/mL (~49.5 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。