AR-C118925XX   中文名称: AR-C 118925XX

P2Y2 Receptor
AR-C118925XX targets the P2Y2 receptor, a G protein-coupled receptor activated by ATP and UTP. It acts as a selective antagonist, blocking P2Y2 receptor-mediated signaling. By inhibiting the P2Y2 receptor, AR-C118925XX suppresses ATP-induced IL-6 production and p38 MAPK phosphorylation. P2Y2 receptors are involved in inflammation, fibrosis, and cancer progression.

ATP和UTP可增加细胞内糖原含量，增强肌动蛋白纤维应激反应，并促进胃癌细胞的增殖和迁移，而P2RY2竞争性拮抗剂AR-C118925XX可逆转ATP诱导的这些变化。shRNA敲低P2RY2表达可抑制胃癌细胞的增殖。P2RY2激活可增加胃癌细胞中Snail、波形蛋白（Vimentin）和β-catenin的表达，并下调E-cadherin的表达，而AR-C118925XX可降低ATP诱导的这些基因的表达。P2RY2激活可激活AKT/GSK-3β/VEGF信号通路促进胃癌细胞增殖，而P13/AKT信号通路拮抗剂LY294002可逆转上述现象，但未发现AR-C118925XX与LY294002存在协同药理作用。 [2]体外实验表明，AR-C118925XX 可抑制 ATP 诱导的 IL-6 生成和 p38 MAPK 磷酸化。这些作用是通过其对 P2Y2 受体的拮抗作用实现的。该化合物抑制 ATP 诱导的信号通路的能力表明其具有强效的 P2Y2 受体拮抗活性。这些体外活性支持其用于研究 P2Y2 受体介导的炎症和纤维化反应。

AR-C118925XX（腹腔注射）可减轻博来霉素在小鼠中引起的皮肤增厚[1]。
P2Y2受体拮抗剂AR-C118925XX的给药显著抑制了博来霉素诱导的小鼠皮肤纤维化[1]。
我们发现，连续7天注射博来霉素可显著增加小鼠皮肤中的ATP含量（图6a），提示博来霉素诱导的皮肤损伤和炎症可能增强皮肤中各种细胞的ATP释放。最后，我们研究了P2Y2受体拮抗剂AR-C118925XX注射对博来霉素诱导的小鼠皮肤纤维化的影响。对博来霉素诱导的皮肤纤维化小鼠进行腹腔注射AR-C118925XX或磷酸盐缓冲液。博来霉素引起的真皮增厚被AR-C118925XX注射显著抑制（图6b和c）。我们证实，Masson三色染色显示，博来霉素诱导的真皮纤维化被AR-C118925XX注射显著减少（图6d）。博来霉素处理小鼠病变皮肤中α-平滑肌肌动蛋白阳性肌成纤维细胞、CD68阳性巨噬细胞和CD3阳性T细胞的数量增加，而AR-C118925XX注射显著抑制了博来霉素诱导的病变皮肤中肌成纤维细胞和巨噬细胞的数量（图6e）。AR-C118925XX注射有抑制博来霉素诱导的病变皮肤中T细胞数量的趋势，但这种差异无统计学意义。这些结果表明，博来霉素诱导的皮肤ATP可能与皮肤纤维化有关，而AR-C118925XX可能在体内对皮肤纤维化具有抑制作用。
在体内，AR-C118925XX可抑制博来霉素诱导的小鼠真皮纤维化，并抑制ATP诱导的肿瘤生长。腹腔注射AR-C118925XX可抑制博来霉素增强的小鼠真皮增厚。这些体内研究结果表明该化合物在减少纤维化和肿瘤生长方面具有疗效，支持其在研究P2Y2受体相关疾病方面的应用潜力。

Fluo-3AM 检测 [2]
使用钙离子荧光探针测量细胞内游离钙离子浓度的变化。将 AGS 和 HGC-27 细胞接种于 24 孔板中，并用 ATP（25、50 和 100 μM）、UTP（100 μM）、AR-C118925XX（10 μM）和 ATP + AR-C118925XX（10 μM）处理 30 分钟。加入 300 μl 4 μM Fluo-3AM 工作液，于 37°C 孵育 1 小时，然后用 PBS 洗涤细胞 3 次。取三次独立实验的 Fluo-3 荧光信号平均值。
AR-C118925XX 的体外受体结合实验通常包括使用表达 P2Y2 受体的细胞膜制备物进行放射性配体置换研究。通过测量化合物从受体上置换特定放射性标记配体的能力来确定其亲和力。这些无细胞检测方法可以直接测量化合物与P2Y2受体的结合亲和力和选择性。

实时PCR分析[1]
将人真皮成纤维细胞在DMEM培养基中，在指定浓度下，加入或不加入ATP或腺苷，孵育指定时间。细胞预先用以下药物处理：非选择性 P2 受体拮抗剂苏拉明 (100 μmol/L)、P2X4 受体拮抗剂 5-BDBD (100 μmol/L)、P2X7 受体拮抗剂 AZ11645373 (1 μmol/L)、P2Y1 受体拮抗剂 MRS2179 (100 μmol/L)、P2Y2 受体拮抗剂 AR-C118925XX (10 μmol/L) 和山奈酚 (30 μmol/L)、P2Y11 受体拮抗剂 NF157 (50 μmol/L)、P2Y12 受体拮抗剂氯吡格雷 (30 μmol/L)、P2Y14 受体拮抗剂 PPTN 盐酸盐 (1 μmol/L)、p38 抑制剂 SB203580 (10 μmol/L) 和 BIRB796。 （10 μmol/L）处理 30 分钟，然后用 1 mmol/L ATP 刺激 1 小时。

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Western blot 检测 [1]
Western blot 分析按照先前描述的方案进行（Motegi 等人，2011a，2011b）。为了研究苏拉明、SB203580、AR-C118925XX 和山奈酚对 ATP 诱导的 p38 磷酸化或 I 型胶原蛋白生成的影响，将细胞预先用苏拉明 (100 μmol/L)、SB203580 (10 μmol/L)、AR-C118925XX (10 μmol/L)、山奈酚 (10 nmol/L) 或 DMSO（溶剂对照）处理 30 分钟，然后用 ATP (1 mmol/L) 刺激 1 小时，以及用 ATP 和/或可溶性 IL-6 受体 (100 ng/ml) 刺激 48 小时。

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PAS 糖原含量检测 [2]
将 AGS 和 HGC-27 细胞接种于 24 孔板中，并用或不用 ATP (100 mmol/L) 处理。将细胞分别与以下培养基混合培养24小时：(μM) UTP (100 μM)、(10 μM) AR-C118925XX、(10 μM) ATP + AR-C118925XX、(20 mM) ATP + LY294002、(10 μM) ATP + AR-C118925XX + LY294002 或 shCon/shP2RY2。加入PAS固定液固定20分钟，然后用PBS洗涤3次。加入氧化剂固定15分钟，然后用PBS洗涤。用亚硫酸钠溶液洗涤细胞两次，每次2分钟。加入Mayer苏木素染色液染色2分钟，然后用PBS洗涤。然后，在倒置显微镜下观察PAS染色阳性细胞的数量，并使用Image Pro Plus 6.0软件进行测量。

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细胞划痕愈合实验[2]
将AGS和HGC-27细胞接种于6孔板中。待细胞均匀覆盖整个孔后，用无菌10 µl枪头划痕。加入含10% FBS的1640培养基，培养24小时。细胞分别用ATP（100 μM）、UTP（100 μM）、AR-C118925XX（10 μM）、ATP + AR-C118925XX（10 μM）、ATP + LY294002（20 mM）、ATP + AR-C118925XX（10 μM）+ LY294002（20 mM）或shCon/shP2RY2处理或不处理。在倒置显微镜下分别于0小时和24小时拍摄照片，并测量细胞划痕间的伤口愈合百分比。

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细胞迁移能力评估[2]
使用24孔Transwell小室分析GC细胞的侵袭能力。在上室滤膜中加入200 µl无血清细胞悬液（2 × 10⁴个细胞），在下室滤膜中加入200 µl含10% FBS的1640培养基。细胞分别用 ATP (100 μM)、UTP (100 μM)、AR-C118925XX (10 μM)、ATP + AR-C118925XX (10 μM)、ATP + LY294002 (20 mM) 或 ATP + AR-C118925XX (10 μM) + LY294002 (20 mM) 处理或不处理 24 小时，然后用 4% 多聚甲醛固定 30 分钟。随后，用结晶紫染色细胞，并在显微镜下随机选取五个视野进行计数。

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肌动蛋白纤维标记实验[2]
将 AGS 和 HGC-27 细胞接种于 24 孔板中，用 ATP (100 μM) 和 ATP + AR-C118925XX (10 μM) 处理 24 小时，然后用 PBS 洗涤。细胞用4%多聚甲醛在冰上固定15分钟，然后用PBS洗涤3次。加入400 μl 0.5% Trion X-100，孵育10分钟，再用PBS洗涤3次。加入200 μl用3 μl YF荧光标记的鬼笔环肽溶液稀释的PBS，孵育30分钟，然后用PBS洗涤。之后，在激光共聚焦显微镜（Lakar sp5）下随机选取5个视野进行拍照。
体外细胞实验评估AR-C118925XX对P2Y2受体的功能性拮抗作用。用ATP刺激表达P2Y2受体的细胞，并检测该化合物抑制下游信号通路（如IL-6产生和p38 MAPK磷酸化）的能力。这些实验在相关的细胞环境中证明了该化合物对P2Y2受体的功能性拮抗作用。

通过体内实验评估肿瘤生长[2]
BALB/c裸鼠在实验室中于光照和温度可控的无菌环境中饲养。收集AGS细胞并用PBS（100 μl）重悬，细胞浓度约为4 × 10⁶个。将细胞皮下注射到4周龄雄性裸鼠的大腿外侧，并使其生长形成异种移植瘤。一周后，当肿瘤生长至一定程度时，将小鼠随机分为三组，每组六只。每周两次向异种移植瘤组织内注射PBS（对照组）、ATP（100 µM）或ATP + AR-C118925XX（10 µM）。使用游标卡尺测量肿瘤大小，诱导肿瘤体积 = [长度 × 宽度²]/2，持续约1个月。

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博来霉素诱导的皮肤纤维化模型[1]
采用博来霉素注射法在8周龄C57BL/6小鼠中诱导皮肤纤维化。按照先前描述的方法（Yokoyama等，2018），每周5次，连续2周，每次注射300 μl浓度为1 mg/ml的博来霉素溶液。为了研究AR-C118925XX的作用，将AR-C118925XX（7 mg/kg/天）溶于100 μl DMSO中，或单独注射DMSO，每周5次，连续2周，腹腔注射小鼠。
已在纤维化和肿瘤生长的小鼠模型中进行了AR-C118925XX的体内动物研究。在博来霉素诱导的皮肤纤维化模型中，腹腔注射AR-C118925XX，并评估皮肤厚度和纤维化标志物。在肿瘤模型中，评估ATP诱导的肿瘤生长。这些研究表明该化合物在体内具有减少纤维化和抑制肿瘤生长的疗效。

现有文献中关于AR-C118925XX的具体药代动力学数据并不详尽。作为一种研究化合物，其吸收、分布、代谢和排泄等药代动力学特性尚未得到充分表征。该化合物主要用于体外和体内研究。其药代动力学特征对于其作为治疗药物的开发至关重要。

现有文献中关于AR-C118925XX的具体毒性数据并不详尽。作为一种选择性P2Y2受体拮抗剂，其毒性特征可能与其药理活性相关。然而，仍需进行临床前毒理学研究以评估其安全性。该化合物仅供研究使用，不得用于人体。

[1]. The Regulation of Skin Fibrosis in Systemic Sclerosis by Extracellular ATP via P2Y2 Purinergic Receptor. J Invest Dermatol. 2019 Apr;139(4):890-899.

[2]. AKT/GSK-3beta/VEGF signaling is involved in P2RY2 activation-induced the proliferation and metastasis of gastric cancer. Carcinogenesis. 2022 Dec 5:bgac095.

组织损伤/缺氧和氧化应激诱导的细胞外三磷酸腺苷（ATP）可作为损伤相关分子模式（DAMP）分子，启动炎症反应。本研究旨在阐明细胞外ATP在系统性硬化症（SSc）皮肤纤维化中的作用。我们发现，缺氧可增强ATP释放，且与正常成纤维细胞相比，细胞外ATP显著增强SSc成纤维细胞中IL-6的产生。正常成纤维细胞和SSc成纤维细胞中P2X和P2Y受体的表达水平无显著差异。非选择性P2受体拮抗剂和选择性P2Y2受体拮抗剂山奈酚和AR-C118925XX均能显著抑制ATP诱导的SSc成纤维细胞中IL-6的产生和p38的磷酸化。 p38抑制剂SB203580和多拉美匹米特也显著抑制了ATP诱导的IL-6生成。山奈酚和SB203580抑制了系统性硬化症（SSc）成纤维细胞中由ATP诱导的IL-6/IL-6受体反式信号通路介导的I型胶原蛋白生成。博来霉素治疗增加了皮肤中的ATP水平，而给予AR-C118925XX则显著抑制了博来霉素诱导的小鼠真皮纤维化。这些结果表明，血管损伤引起的缺氧和氧化应激可能增强SSc患者真皮中的ATP释放，并且通过P2Y2受体介导的p38磷酸化诱导的细胞外ATP可能增强SSc成纤维细胞中IL-6和I型胶原蛋白的生成。P2Y2受体拮抗剂疗法可能是治疗SSc患者皮肤硬化症的一种潜在方法。 [1]

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研究表明，ATP-G蛋白偶联受体P2Y2 (P2RY2) 在肿瘤进展中发挥作用，但P2RY2在调控胃癌(GC)进展中的作用及其相关分子机制尚不清楚。因此，本研究通过体内和体外实验探讨了P2RY2对胃癌细胞增殖和迁移的影响。结果显示，P2RY2在胃癌组织和胃癌细胞系中均有表达。三磷酸腺苷(ATP)以剂量依赖的方式增加AGS和HGC-27细胞中的钙离子内流。ATP和UTP可增加细胞内糖原含量，增强肌动蛋白丝应激反应，并促进胃癌细胞的增殖和迁移，而P2RY2竞争性拮抗剂AR-C118925XX可逆转ATP诱导的上述变化。shRNA敲低P2RY2表达可抑制胃癌细胞的增殖。 P2RY2的激活可增加胃癌细胞中Snail、波形蛋白（Vimentin）和β-catenin的表达，并下调E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达；而AR-C118925XX则可降低ATP诱导的这些基因的表达。P2RY2的激活可激活AKT/GSK-3β/VEGF信号通路，促进胃癌细胞增殖；P13/AKT信号通路抑制剂LY294002可逆转这一现象，但未发现AR-C118925XX与LY294002之间存在协同药理作用。体内实验表明，ATP可诱导肿瘤生长，而AR-C118925XX可抑制ATP诱导的肿瘤生长。我们的结论是，P2RY2激活AKT/GSK-3β/VEGF信号通路，促进胃癌细胞的增殖和迁移，提示P2RY2可能是胃癌治疗的一个新潜在靶点。[2]
AR-C118925XX是一种选择性P2Y2受体拮抗剂，可抑制ATP诱导的IL-6产生和p38 MAPK磷酸化。它还能抑制博来霉素诱导的小鼠皮肤纤维化和ATP诱导的肿瘤生长。该化合物是一种用于研究P2Y2受体介导的信号通路在炎症、纤维化和癌症中作用的科研化合物。它尚未获准用于临床，仅供科研用途。

C28H23N7O3S

537.592323541641

537.158

C, 62.56; H, 4.31; N, 18.24; O, 8.93; S, 5.96

216657-60-2

54210200

Light yellow to yellow solid powder

1.5±0.1 g/cm3

1.756

4.78

161

3

7

5

39

1010

0

CC1=CC2=C(C=C1)C(C3=C(C=C2)C=C(C=C3)C)C4=CN(C(=O)NC4=S)CC5=CC=C(O5)C(=O)NC6=NNN=N6

PVKNPGQAFNALOI-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C28H23N7O3S/c1-15-3-8-20-17(11-15)5-6-18-12-16(2)4-9-21(18)24(20)22-14-35(28(37)30-26(22)39)13-19-7-10-23(38-19)25(36)29-27-31-33-34-32-27/h3-12,14,24H,13H2,1-2H3,(H,30,37,39)(H2,29,31,32,33,34,36)

5-[[5-(6,13-dimethyl-2-tricyclo[9.4.0.03,8]pentadeca-1(11),3(8),4,6,9,12,14-heptaenyl)-2-oxo-4-sulfanylidenepyrimidin-1-yl]methyl]-N-(2H-tetrazol-5-yl)furan-2-carboxamide

AR-C118925XX; 216657-60-2; AR-C 118925XX; 5-[[5-(2,8-Dimethyl-5H-dibenzo[a,d]cyclohepten-5-yl)-3,4-dihydro-2-oxo-4-thioxo-1(2H)-pyrimidinyl]methyl]-N-2H-tetrazol-5-yl-2-furancarboxamide; CHEMBL4082045; 5-((5-(2,8-Dimethyl-5H-dibenzo[a,d][7]annulen-5-yl)-2-oxo-4-thioxo-3,4-dihydropyrimidin-1(2H)-yl)methyl)-N-(1H-tetrazol-5-yl)furan-2-carboxamide; 5-[(5-{6,13-dimethyltricyclo[9.4.0.0^{3,8}]pentadeca-1(11),3,5,7,9,12,14-heptaen-2-yl}-2-oxo-4-sulfanylidene-1,2,3,4-tetrahydropyrimidin-1-yl)methyl]-N-(1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl)furan-2-carboxamide; 5-[[5-(6,13-dimethyl-2-tricyclo[9.4.0.03,8]pentadeca-1(11),3(8),4,6,9,12,14-heptaenyl)-2-oxo-4-sulfanylidenepyrimidin-1-yl]methyl]-N-(2H-tetrazol-5-yl)furan-2-carboxamide;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~186.02 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。