| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Tuvusertib (0-2 μM, 24 hours) promotes cell death and cell death in myeloma cells, such as U266 and OPM2 cells [2]. Tuvusertib (0-5 μM, 16 or 24 hours) suppresses STAT3 p-Y705 phosphorylation and lowers STAT3 downstream target (c-MYC) in U266 and OPM2 cells [2].
Tuvusertib (M1774) is a potent inhibitor of ataxia telangiectasia and Rad3-related (ATR) kinase [2]. (Specific IC50/Ki values are not provided in this study.) |
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| 体外研究 (In Vitro) |
Tuvusertib（0-2 μM，24 小时）可促进骨髓瘤细胞（例如 U266 和 OPM2 细胞）的细胞死亡和细胞死亡 [2]。 Tuvusertib（0-5 μM，16 或 24 小时）可抑制 U266 和 OPM2 细胞中 STAT3 p-Y705 磷酸化并降低 STAT3 下游靶点 (c-MYC) [2]。
在人多发性骨髓瘤U266细胞中，用Tuvusertib (1 μM) 处理可诱导时间和浓度依赖性的γH2AX形成和caspase-3剪切增加，表明DNA损伤和凋亡 [2]。 Tuvusertib (1 μM, 16-24小时) 显著降低STAT3在Tyr705位点的磷酸化（p-STAT3 Y705），而不影响Ser727磷酸化，Western blot和ImageStream成像证实了这一点。同时，STAT3下游靶点如c-MYC、MCL-1和BCL-XL表达下调 [2]。 在从患者骨髓分离的原代CD138+ MM细胞中，离体暴露于Tuvusertib (1 μM, 20-24小时) 也降低了p-STAT3 Y705的表达 [2]。 ATR抑制剂 (Bay1895344, AZD6738) 在低微摩尔浓度（0.5 至 2 μM，处理 24-48 小时）下，能显著诱导 IL-6 非依赖性（U266）和 IL-6 刺激（OPM2）的多发性骨髓瘤细胞发生凋亡，此结果通过 7-AAD 摄取测定。[2] 用 ATR抑制剂 (Bay1895344, M1774, AZD6738) 处理 U266 细胞 16-40 小时，可诱导时间和浓度依赖性的 caspase-3 和 PARP 切割，以及 γH2A.X 的形成。[2] ATR抑制剂 也能在高度硼替佐米耐药的 U266/PS-R 和 RPMI8226/V10R 细胞以及其他多种 MM 细胞系（H929, KMS11, RPMI8226, KAS-6/1）中诱导细胞死亡。[2] 用 ATR抑制剂 (0.5–1.0 μM Bay1895344, M1774, AZD6738) 处理 U266 和 OPM2 细胞 16-24 小时，能显著降低 STAT3 在 Tyr705 位点的磷酸化 (p-Y705)，但对 Ser727 位点的磷酸化 (p-S727) 影响甚微。同时伴随 STAT3 下游靶点 BCL-XL、MCL-1 和 c-MYC 的表达下调。[2] 在硼替佐米耐药细胞和用患者来源的基质细胞条件培养基培养的 OPM2 细胞中，也观察到了对 p-STAT3 (Y705) 和靶蛋白的类似效应。[2] 在基于 ELISA 的实验中，ATR抑制剂 (Bay1895344, AZD6738) 处理 6 小时能显著降低 U266 和硼替佐米耐药 PS-R 细胞中 STAT3 的 DNA 结合活性。[2] 在使用 293T 细胞的 STAT3 荧光素酶报告基因实验中，ATR抑制剂 (Bay1895344, AZD6738, VE-822) 能显著降低 IL-6 诱导的 STAT3 报告基因活性。[2] 通过 shRNA 在 U266 细胞中进行 ATR 基因敲低，重现了药理抑制剂的效果，导致 p-STAT3 (Y705) 和 c-MYC 的表达降低，这通过免疫印迹、ImageStream 分析和 qRT-PCR 得到证实。[2] 异位表达组成型活化的 STAT3 (CA-STAT3) 或其下游靶点（c-MYC, MCL-1, BCL-XL）能显著减弱 ATR抑制剂 诱导的细胞死亡，并减少凋亡标志物（切割的 PARP、切割的 caspase-3、γH2A.X）。[2] 在来自患者骨髓穿刺样本的原代 CD138+ MM 细胞中，用 Bay1895344 (1 μM, 24 小时) 或 M1774 (1 μM, 20 小时) 处理，通过 ImageStream 分析显示 p-STAT3 (Y705) 表达明显降低。[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在使用 NOD-SCID IL2Rgammanull (NSG) 小鼠的 U266 异种移植瘤模型中，口服 Bay1895344 (30 mg/kg，每日两次，连续 3 天) 与溶媒对照组相比，能显著抑制肿瘤生长并降低最终肿瘤重量。[2]
对切除肿瘤提取的蛋白质进行 Western blot 分析显示，治疗组中 STAT3 p-Y705 表达有适度降低，而切割的 caspase-3、切割的 PARP 和 γH2A.X 则有所增加。[2] 该治疗方案未导致小鼠出现显著的体重下降。[2] |
| 酶活实验 |
采用 STAT3 DNA 结合 ELISA 实验评估 STAT3 活性。从经化合物处理的 MM 细胞中制备核提取物。将提取物加入包被了含有 STAT3 共有结合位点的寡核苷酸的孔板中孵育。使用针对 STAT3 的一抗检测 STAT3 结合，然后使用辣根过氧化物酶偶联的二抗和显色底物。测量 450 nm 处的吸光度，该值与 STAT3 DNA 结合活性相关。[2]
采用 STAT3 荧光素酶报告基因实验测量 STAT3 转录活性。将受 IL-6 sis 诱导元件 (SIE) 控制的萤火虫荧光素酶报告质粒与用于标准化的海肾荧光素酶质粒共转染至 293T 细胞。转染后，用化合物预处理细胞 1 小时，然后用 IL-6 (10 ng/mL) 刺激 5 小时。制备细胞裂解液，使用双荧光素酶报告系统依次测量萤火虫和海肾荧光素酶活性。计算萤火虫与海肾荧光素酶活性的比值以确定 STAT3 报告基因活性。[2] |
| 细胞实验 |
蛋白质印迹分析[2]
细胞类型： U266 和 OPM2 细胞 测试浓度： 0-2 μM 孵育时间： 24 小时 实验结果： γH2A.X、caspase-3 裂解和 PARP 裂解水平增加。 通过流式细胞术评估细胞死亡。用化合物处理 MM 细胞，收集细胞，并用 7-氨基放线菌素 D (7-AAD) 染色。通过流式细胞术分析确定 7-AAD 阳性细胞的百分比，该指标反映膜完整性丧失和晚期凋亡/坏死。[2] Western blot分析：将MM细胞（如U266）用Tuvusertib (1 μM) 处理指定时间（16-24小时）。制备全细胞裂解液，通过SDS-PAGE分离蛋白质，转至硝酸纤维素膜。膜与一抗（针对p-STAT3 Tyr705、p-STAT3 Ser727、总STAT3、c-MYC、MCL-1、BCL-XL、剪切caspase-3、剪切PARP、γH2AX及内参β-actin、GAPDH、α-tubulin）孵育，然后用HRP标记的二抗孵育。使用成像系统检测信号 [2]。 ImageStream分析：将细胞（U266或原代CD138+细胞）固定、透化，用抗p-STAT3 Tyr705抗体和APC标记二抗染色，并用DAPI复染。使用ImageStream流式细胞仪采集图像，定量p-STAT3强度 [2]。 细胞活力：使用CellTiter-Glo发光法检测Tuvusertib处理后的细胞活力 [2]。 使用发光的 CellTiter-Glo 实验测定细胞活力/增殖。将细胞接种于孔板中，用化合物处理，孵育期结束后，加入等体积的 CellTiter-Glo 试剂。混合孵育以裂解细胞并产生与 ATP 量成正比（ATP 量与代谢活跃细胞相关）的发光信号。使用酶标仪测量发光值。[2] 对于 Western blot 分析，用化合物处理细胞，收集并裂解。测定蛋白浓度，将等量蛋白通过 SDS-PAGE 分离，转印至硝酸纤维素膜上，并用特异性一抗（例如针对 p-STAT3 (Y705)、p-STAT3 (S727)、总 STAT3、BCL-XL、MCL-1、c-MYC、切割的 caspase-3、切割的 PARP、γH2A.X）进行检测。与辣根过氧化物酶偶联的二抗孵育后，使用化学发光和成像系统检测信号。[2] 进行定量 RT-PCR (qRT-PCR) 以测量 mRNA 水平。使用 RNA 提取试剂盒从细胞中提取总 RNA。将 RNA 反转录为 cDNA。使用 TaqMan 基因表达检测探针和引物在实时 PCR 系统中定量目标基因（如 ATR、c-MYC）和内参基因（GAPDH）的 mRNA 水平。使用相对定量 Ct 法计算相对 mRNA 表达量。[2] 使用 ImageStream 成像流式细胞术分析细胞内和核内蛋白质的定位/表达。固定并透化细胞，用针对 p-STAT3 (Y705) 的一抗和荧光染料偶联的二抗染色。细胞还使用 CD138-PE（针对原代细胞）和 DAPI 染色。获取单个细胞的图像，并量化 p-STAT3 (Y705) 在特定细胞区室（如细胞核）中的荧光强度。[2] 使用慢病毒转导进行基因敲低或过表达。通过将含有目的基因（shRNA 或过表达构建体）的质粒与包装质粒共转染至包装细胞中来生产慢病毒。收集并过滤病毒上清液，在 polybrene 存在下用于感染靶向 MM 细胞。筛选并验证稳定的细胞群或克隆。[2] |
| 动物实验 |
在体内异种移植疗效研究中，将5 × 10⁶个U266多发性骨髓瘤细胞皮下注射到NOD-SCID IL2Rγnull (NSG)小鼠的侧腹部。当肿瘤生长至约300 mm³（或直径8-10 mm）时，用ATR抑制剂Bay1895344治疗小鼠。该药物配制于由PEG400、乙醇和超纯水按6:1:3 (v/v/v)混合而成的溶剂中，浓度为3.75 mg/ml。Bay1895344以30 mg/kg的剂量口服给药，每日两次（bid），连续3天。对照组动物给予等体积的溶剂混合物。每隔一天用游标卡尺测量肿瘤生长情况。在实验终点（例如第 19 天），处死小鼠，切除肿瘤，称重，并进行蛋白质提取和蛋白质印迹分析。在整个研究过程中，还监测了动物的体重。[2]
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| 药代性质 (ADME/PK) |
吸收：口服后，Tuvusertib 可迅速吸收，达峰时间 (tmax) 中位数为 0.5 至 3.5 小时。
消除：Tuvusertib 的平均末端消除半衰期 (t1/2) 为 1.2 至 5.6 小时。 暴露量和靶点结合：暴露量相关的药效学分析表明，每日一次 (QD) ≥130 mg 的剂量可达到最大靶点结合（例如，抑制磷酸化 CHK1）。群体药代动力学 (POPPK) 模拟预测，每日一次 100–180 mg 剂量下的平均稳态浓度超过 pCHK1 的 IC90 值。 制剂/载体（临床前）：在临床前体内研究中，Tuvusertib溶解于由15% captisol（磺丁基醚-β-环糊精）和4.95 mM盐酸（HCl）组成的载体中。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
血液学毒性（临床 - 剂量限制性毒性）：Tuvusertib的主要剂量限制性毒性 (DLT) 为贫血。在首次人体研究 (NCT04170153) 中，最常见的 ≥3 级治疗期间出现的不良事件是贫血，发生率为 36%。其他血液学毒性包括中性粒细胞减少症和淋巴细胞减少症（均为 7%）。11 例患者出现 DLT，最常见的是 2 级 (n=2) 或 3 级 (n=8) 贫血。
给药方案和耐受性（临床）：推荐扩展剂量 (RDE) 确定为每日一次 (QD) 180 mg，采用 2 周用药/1 周停药的方案。这种间歇给药方案的耐受性显著优于每日一次 180 mg 的最大耐受剂量 (MTD) 持续给药方案。群体药代动力学/药效动力学模型显示，与每日连续给药相比，这种间歇给药方案可使血红蛋白部分恢复，并在多周期治疗后降低≥3级贫血的发生率。 非血液学毒性（临床）：未观察到对血液免疫细胞群的持续影响。 临床前毒性/耐受性（体内）：在无胸腺裸鼠DU145前列腺癌异种移植模型中，Tuvusertib与IL-15超激动剂N-803的联合用药耐受性良好，并显示出显著的抗肿瘤疗效。所有动物研究均已获得批准，并按照机构动物护理和使用委员会的方案进行。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
Tuvusertib 是一种口服的共济失调毛细血管扩张症和 Rad3 相关激酶 (ATR) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，tuvusertib 可选择性抑制 ATR 活性，并阻断下游丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶检查点激酶 1 (CHK1) 的磷酸化。这可阻止 ATR 介导的信号传导，从而抑制 DNA 损伤检查点激活，破坏 DNA 损伤修复，并诱导肿瘤细胞凋亡。ATR 是一种在多种癌细胞类型中高表达的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在 DNA 修复、细胞周期进程和细胞存活中发挥关键作用。它由DNA复制相关应激过程中造成的DNA损伤激活。
ATR抑制剂通过破坏STAT3信号通路，特别是抑制STAT3在Tyr705位点的磷酸化（该位点对其二聚化和核转位至关重要），在多发性骨髓瘤细胞中发挥非经典作用。[2] ATR抑制剂的抗骨髓瘤活性与STAT3下游生存靶点（如BCL-XL、MCL-1和c-MYC）的下调有关，最终导致细胞凋亡。[2] ATR抑制剂对亲代和硼替佐米耐药的多发性骨髓瘤细胞系均有效。[2] ATR抑制剂抑制STAT3激活的能力也可能对抗微环境/基质细胞介导的耐药形式，例如IL-6驱动的耐药。 [2] STAT3 失活在功能上促进了 ATR 抑制剂在多发性骨髓瘤细胞中的致死作用。[2] Tuvusertib (M1774) 是由 EMD Serono 公司提供的一种强效 ATR 抑制剂。本研究揭示了 ATR 在多发性骨髓瘤细胞中 STAT3 激活的非经典作用，并表明 Tuvusertib 与其他 ATR 抑制剂一样，会破坏 STAT3 Tyr705 的磷酸化及其下游信号传导，从而发挥其抗多发性骨髓瘤活性 [2]。 |
| 分子式 |
C16H12F2N8O
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|---|---|
| 分子量 |
370.316287994385
|
| 精确质量 |
370.11
|
| 元素分析 |
C, 51.89; H, 3.27; F, 10.26; N, 30.26; O, 4.32
|
| CAS号 |
1613200-51-3
|
| 相关CAS号 |
1613200-51-3;
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| PubChem CID |
90199447
|
| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
0.2
|
| tPSA |
116
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
27
|
| 分子复杂度/Complexity |
557
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
FC1=CN=CC(=C1C1=CN=CN1C)NC(C1C(N)=NN2C=C(C=NC2=1)F)=O
|
| InChi Key |
RBQPCTBFIPVIJN-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C16H12F2N8O/c1-25-7-21-5-11(25)12-9(18)3-20-4-10(12)23-16(27)13-14(19)24-26-6-8(17)2-22-15(13)26/h2-7H,1H3,(H2,19,24)(H,23,27)
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| 化学名 |
2-amino-6-fluoro-N-[5-fluoro-4-(3-methylimidazol-4-yl)pyridin-3-yl]pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide
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| 别名 |
tuvusertib; M1774; M-1774; JE1BE6ZGZ7; compound I-C-79 [WO2014089379A1];
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~5 mg/mL (~13.50 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7004 mL | 13.5018 mL | 27.0037 mL | |
| 5 mM | 0.5401 mL | 2.7004 mL | 5.4007 mL | |
| 10 mM | 0.2700 mL | 1.3502 mL | 2.7004 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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