| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
MDM2 and MDMX (dual inhibitor). Binding affinities (Ki): MDM2 Ki = 0.9 nM, MDMX Ki = 7 nM. Biacore-derived KD values: MDM2 KD = 0.91 nM, MDMX KD = 2.31 nM. The negative control analog (ATSP-7342, Phe19 to Ala19 mutation) showed significantly diminished binding to both MDM2 (Ki = 536 nM) and MDMX (Ki > 1,000 nM) [1].
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性： ATSP-7041是一种订书肽α-螺旋双重MDM2/MDMX抑制剂。在SJSA-1（MDM2扩增）和MCF-7（MDMX过表达）癌细胞中，ATSP-7041（1.25-10 μM处理24小时）处理导致p53蛋白水平剂量依赖性增加，并升高p53转录靶点p21和MDM2。在MCF-7细胞中，ATSP-7041诱导的p53通路激活显著高于MDM2选择性抑制剂Nutlin-3a，反映了其额外的MDMX抑制活性 [1]。
ATSP-7041（2.5-10 μM处理48小时）在SJSA-1和MCF-7细胞中通过Annexin V实验检测到剂量依赖性诱导凋亡。在MCF-7细胞中，ATSP-7041的凋亡效应比Nutlin-3a更显著，与其双重抑制机制一致 [1]。 ATSP-7041（0.3-10 μM处理24小时）在SJSA-1和MCF-7细胞中均引起有效的G1期和G2/M期细胞周期阻滞，导致S期细胞减少。MCF-7细胞更敏感，在0.3-1 μM浓度下完全阻断增殖 [1]。 在p53野生型细胞系（SJSA-1、MCF-7、HCT116、RKO）的细胞活力实验中，ATSP-7041的IC50值在低微摩尔范围，而p53突变细胞系（SW480、MDA-MB-435）显著不敏感，选择性指数>30。在SJSA-1细胞中，ATSP-7041在10%血清存在下的效力比早期订书肽SAH-p53-8和ATSP-3900显著提高（分别提高>50倍和>25倍）[1]。 用ATSP-7041（10 μM处理4小时）处理MCF-7细胞的免疫共沉淀实验显示，与p53结合的MDM2和MDMX蛋白均显著减少，证实ATSP-7041能穿透活癌细胞并抑制p53与两种靶蛋白的结合。ATSP-7041还表现出延长抑制效应；药物去除后，抑制效应持续长达48小时，而小分子MDM2抑制剂RG7112在4小时后大部分效应消失 [1]。 FAM标记的ATSP-7041（20 μM处理4.5小时）在HCT116细胞中显示弥散的细胞内定位，证实了有效的细胞穿透。无活性的对照FAM-mt-7041也显示出有效的细胞穿透，证实其无活性是由于缺乏靶标结合而非摄取不良 [1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
体内活性： 在SJSA-1骨肉瘤异种移植模型（MDM2扩增）中，静脉注射ATSP-7041 15 mg/kg每日一次或30 mg/kg隔日一次，持续2周，两种给药方案均达到61%的统计学显著肿瘤生长抑制率。所有给药方案均耐受良好 [1]。
在MCF-7乳腺癌异种移植模型（MDMX过表达）中，静脉注射ATSP-7041 20 mg/kg或30 mg/kg隔日一次，持续23天，分别达到63%和87%的肿瘤生长抑制率。相比之下，选择性MDM2小分子抑制剂RG7112（50和100 mg/kg口服每日一次）分别达到61%和74%的肿瘤生长抑制率 [1]。 对MCF-7异种移植肿瘤的药效学分析显示，ATSP-7041以时间依赖性方式诱导p21 mRNA表达。给药后4小时，20和30 mg/kg剂量组分别观察到4倍和5倍的增加。到8小时，p21表达进一步增加到12倍和19倍。相比之下，RG7112在所有检测剂量和时间点仅显示5倍的适度增加 [1]。 |
| 酶活实验 |
酶学实验： 使用荧光偏振结合实验测定解离常数。将荧光标记的线性肽（FAM-ATSP-3848，10 nM）与10 pM至5 μM浓度的MDM2(1-138)或MDMX(1-134)孵育。对于竞争实验，将MDM2或MDMX蛋白与系列稀释的待测订书肽（从5 μM开始3倍稀释）混合，然后加入FAM-ATSP-3848（10 nM）。孵育3小时后测量荧光偏振，通过非线性回归计算IC50值。使用Kenakin描述的方法计算Ki值 [1]。
Biacore研究在Biacore 551上进行。将Series S Sensor芯片CM5衍生化用于固定Penta His抗体以捕获His标记的p53。MDM2或MDMX蛋白保持在300 nM恒定浓度，实验在25°C下于含10 mM Hepes、0.15 M NaCl和2% DMSO的运行缓冲液中进行 [1]。 对于X射线晶体学，将人源化斑马鱼MDMX（15-106，L46V/V95L）与等摩尔量的ATSP-7041（从100 mM DMSO储备液）混合，在4°C下静置过夜。使用坐滴蒸汽扩散法获得晶体，池液含15%聚乙二醇4000、0.1 M柠檬酸钠（pH 5.6）和0.2 M硫酸铵。以1.7 Å分辨率收集数据，用XDS处理，通过分子置换解析结构 [1]。 圆二色谱在分光偏振计上进行，使用标准参数（温度20°C，波长190-260 nm，步长分辨率0.5 nm，速度20 nm/s，10次累积，光程0.1 cm）测定α-螺旋含量 [1]。 |
| 细胞实验 |
细胞实验： 对于细胞活力实验，将细胞接种于96孔板中，用系列稀释的ATSP-7041处理5天。加入MTT试剂，在570 nm处测量吸光度，参比波长为650 nm。所有实验均进行三次重复，数据归一化至溶媒处理的对照 [1]。
对于Western blot分析，将对数生长期细胞与ATSP-7041（1.25-10 μM）或Nutlin-3a（10 μM）孵育24小时。在RIPA缓冲液中制备细胞裂解物，使用特异性抗体测定p53、p21和MDM2的蛋白水平。以肌动蛋白作为上样对照 [1]。 对于免疫共沉淀，用10 μM ATSP-7041处理MCF-7细胞4小时。使用小鼠单克隆抗p53和兔多克隆抗MDMX抗体进行免疫沉淀。免疫复合物在蛋白G Sepharose珠上于4°C收集过夜，洗涤后，用兔抗p53、小鼠抗MDMX和小鼠抗MDM2抗体进行Western blotting [1]。 对于Annexin V凋亡实验，将细胞接种于24孔板（5 × 10⁴个/孔），药物处理前24小时，然后用ATSP-7041（2.5、5或10 μM）或Nutlin-3a再孵育48小时。收集脱落和贴壁细胞，使用Guava个人细胞分析仪定量Annexin V阳性细胞 [1]。 对于细胞周期分析，将SJSA-1和MCF-7细胞（1 × 10⁵个/T75培养瓶）与0.3、3或10 μM ATSP-7041孵育24小时。在固定前最后2小时加入BrdU（20 μM），细胞用碘化丙啶/FITC标记的抗BrdU抗体染色处理。通过流式细胞术分析细胞周期分布 [1]。 对于定量RT-PCR，使用RNeasy Mini Kit匀浆后从细胞或肿瘤异种移植物中提取总RNA。使用MultiScribe逆转录酶将总RNA逆转录，进行实时PCR以测量p21、MDM2和MIC-1 mRNA水平 [1]。 对于细胞摄取研究，将HCT116细胞以60,000个/孔的密度接种于四孔室盖玻片中，在含10% FBS的Opti-MEM中用20 μM FAM标记的ATSP-7041或FAM-mt-7041孵育4.5小时。洗涤细胞，用WGA-alexa 647缀合物染色30分钟以标记细胞膜，用4%多聚甲醛固定，使用共聚焦显微镜成像 [1]。 |
| 动物实验 |
动物实验方案： 对于SJSA-1异种移植药效研究，将5 × 10⁶个细胞悬浮于0.2 mL 1:1 Matrigel:PBS中，皮下注射至无胸腺裸鼠右侧侧腹。当平均肿瘤体积达到约100-200 mm³时，将小鼠随机分为治疗组（每组10只），每日静脉注射溶媒（组氨酸缓冲盐水中的50 mg/mL MPEGDSPE）或每日一次静脉注射ATSP-7041 15 mg/kg，或隔日一次静脉注射30 mg/kg，持续2周 [1]。
对于MCF-7异种移植研究，在细胞植入前至少一天，将90天0.72 mg缓释17β-雌二醇颗粒皮下植入雌性BALB/c裸鼠颈背。将1 × 10⁷个MCF-7细胞悬浮于0.2 mL 1:1 Matrigel:PBS中，皮下植入小鼠右侧侧腹。当平均肿瘤体积达到约100-200 mm³时，将小鼠随机分为治疗组（每组10只），用ATSP-7041 20或30 mg/kg静脉注射隔日一次，持续23天，或用RG7112 50或100 mg/kg口服每日一次。通过卡尺测量监测肿瘤体积，记录小鼠体重 [1]。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
ATSP-7041易于配制用于静脉给药，在小鼠、大鼠和食蟹猴中表现出良好的血浆药代动力学特征。在小鼠和大鼠中，ATSP-7041暴露量（AUC0-last）以剂量依赖性方式增加。消除半衰期：小鼠约1.5小时，大鼠约2.1小时，食蟹猴约18.3小时。清除率：小鼠43.5-52.2 mL/h/kg，大鼠6.1-12.5 mL/h/kg，食蟹猴11.5 mL/h/kg。稳态分布容积较低：小鼠69.8-82.6 mL/kg，大鼠20.7-30.4 mL/kg，食蟹猴35.6 mL/kg [1]。
在大鼠中单次静脉注射放射性标记的[³H]-ATSP-7041后的定量全身放射自显影研究显示广泛的组织分布和清除，在任何组织子集中均无蓄积。ATSP-7041广泛分布于全身，但大脑和中枢神经系统组织除外（有限），红细胞穿透性也有限。给药后48小时，大部分放射性剂量通过胆汁消除，尿液中回收的放射性剂量不到总剂量的3%。血浆白蛋白结合：ATSP-7041与人白蛋白高度结合（结合分数98.2%），与猴、犬、大鼠和小鼠白蛋白的结合程度相当 [1]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
ATSP-7041在小鼠异种移植研究中的所有给药方案均耐受良好，无显著毒性或不良事件报告。在MCF-7异种移植研究中，监测了体重变化，未观察到显著毒性。未报告特异性毒性数据（LD50、器官毒性等）[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Stapled α-helical peptide drug development: a potent dual inhibitor of MDM2 and MDMX for p53-dependent cancer therapy. Proc Natl Acad Sci U S A. 2013 Sep 3;110(36):E3445-54. https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.1303002110
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| 其他信息 |
ATSP-7041是一种订书肽α-螺旋肽（Ac-Leu17-Thr-Phe-cyclo(R8-Glu-Tyr-Trp-Ala-Gln-Cba-S5)-Ser-Ala-Ala30-NH₂），作为MDM2和MDMX的强效双重抑制剂。它通过迭代优化噬菌体展示肽和早期订书肽（如SAH-p53-8）而开发。圆二色谱测定显示该化合物具有高α-螺旋含量（pH 7.0时为70%），而线性pDI肽仅为11% [1]。
ATSP-7041与MDMX结合的高分辨率X射线晶体结构（1.7 Å）显示，该肽使用三个关键位置（Phe19、Trp23和Cba26，后者取代Leu26）结合到p53结合位点。还观察到Tyr22和订书部分本身与MDMX蛋白之间的额外相互作用。订书部分与Lys47、Met50、His51、Gly54、Gln55和Met58形成范德华接触，His51的ND1与订书中的双键之间存在可能的阳离子-π相互作用（距离分别为3.8和4.0 Å）。Tyr22通过与Gln66、Arg67、Gln68、His69、Val89和Lys90的范德华接触以及水介导的氢键与MDMX结合口袋相互作用 [1]。 该化合物表现出持久的药效学反应，药物去除后p53通路激活持续长达48小时，而小分子MDM2抑制剂在4小时内大部分效应消失。ATSP-7041的低清除率和延长的半衰期，特别是在高等物种中（猴子t₁/₂ = 18.3小时），表明在人类中以治疗剂量可实现有效的暴露水平。广泛的组织覆盖使其能够到达治疗实体瘤和血液系统恶性肿瘤最关键的靶组织，清除机制提示在人类中具有可预测的消除途径和暴露水平 [1]。 |
| 分子式 |
C87H125N17O21
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|---|---|
| 分子量 |
1745.02472186089
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| 精确质量 |
1743.9236
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| 元素分析 |
C, 59.88; H, 7.22; N, 13.65; O, 19.25
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| CAS号 |
1451197-99-1
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| 序列 |
Ac-Leu-Thr-Phe-cyclo(R8-Glu-Tyr-Trp-Ala-Gln-Cba-S5)-Ser-Ala-Ala-NH2
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| 短序列 |
Ac-LTF-{R8}-EYWAQA-{S5}-SAA-NH2
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| SMILES |
C([C@H]1C(N[C@H](C(N[C@@H](C(N[C@H](C(N[C@](CCCC=CCCCCCC[C@@](C)(NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C)CC(C)C)CC2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@]([H])(CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N1)(C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N)=O)CC1CCC1)=O)CCC(=O)N)=O)C)=O)C1=CNC2=CC=CC=C12 |c:17,&1:1,4,7,10,13,25,30,34,35,41,60,70,86,92,97|
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| InChi Key |
UEOCESQEOWHKDQ-YSRHUJMRSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C87H125N17O21/c1-48(2)41-63(94-53(7)107)79(119)102-71(52(6)106)83(123)99-66(42-54-25-18-17-19-26-54)82(122)104-86(8)39-22-15-13-11-10-12-14-16-23-40-87(9,85(125)101-68(47-105)80(120)93-50(4)73(113)91-49(3)72(89)112)103-81(121)65(43-55-27-24-28-55)97-75(115)61(35-37-69(88)109)95-74(114)51(5)92-77(117)67(45-57-46-90-60-30-21-20-29-59(57)60)98-78(118)64(44-56-31-33-58(108)34-32-56)96-76(116)62(100-84(86)124)36-38-70(110)111/h12,14,17-21,25-26,29-34,46,48-52,55,61-68,71,90,105-106,108H,10-11,13,15-16,22-24,27-28,35-45,47H2,1-9H3,(H2,88,109)(H2,89,112)(H,91,113)(H,92,117)(H,93,120)(H,94,107)(H,95,114)(H,96,116)(H,97,115)(H,98,118)(H,99,123)(H,100,124)(H,101,125)(H,102,119)(H,103,121)(H,104,122)(H,110,111)/b14-12-/t49-,50-,51-,52-,61-,62-,63-,64-,65-,66-,67-,68-,71-,86-,87-/m0/s1
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| 化学名 |
L-Alaninamide, L-α-glutamyl-L-tyrosyl-L-tryptophyl-L-alanyl-L-glutaminyl-3-cyclobutyl-L-alanyl-N14-(N-acetyl-L-leucyl-L-threonyl-L-phenylalanyl)-(2S,6E,14R)-2,14-diamino-14-carboxy-2-methyl-6-pentadecenoyl-L-seryl-L-alanyl-, (7→1)-lactam
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| 别名 |
ATSP7041; ATSP 7041; ATSP-7041
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.5731 mL | 2.8653 mL | 5.7306 mL | |
| 5 mM | 0.1146 mL | 0.5731 mL | 1.1461 mL | |
| 10 mM | 0.0573 mL | 0.2865 mL | 0.5731 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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