AZ-12441970

Toll-like receptor 7/TLR7

AZ12441970改善了用药前的特性[1]
与母体（酯）相比，这些化合物中使用的前药概念依赖于活性降低的代谢物（酸），并且从人和大鼠TLR7的报告分析（表1）中可以清楚地看出，SM-324405的酸最多只比其母体酯低10倍。在确定该腺嘌呤系列化合物显示出与R848相当的生物活性后，我们寻找代谢物活性进一步降低的化合物，这导致了AZ12441970（表1）所示的一系列化合物。与SM-324405相比，该化合物的人TLR7效力降低了0.5个对数，但大鼠TLR7效力pEC50=6.6得以保持（表1）。酸性代谢产物AZ12443988的活性低于SM-324405的酸，对人和大鼠TLR7的酯/酸效力比均大于60倍。由于AZ12443988的活性极低，在高达10µM的浓度范围内无法确定pEC50，因此无法确定效力比值的真实范围。由于AZ12441970的血浆t1/2也比SM-324405短，因此总体而言，AZ124411970在体外表现出更好的前药特性。

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AZ12441970对Th2细胞因子IL-5的抑制作用[1]
TLR7激动剂具有通过重新平衡免疫反应来治疗以Th2表型为特征的过敏性疾病的潜力。我们使用PHA多克隆刺激人PBMC，并评估化合物抑制IL-5产生的能力，作为Th2细胞因子调节的标志物（图4A和B）。R848剂量依赖性地抑制IL-5的产生，pIC50为7.7。AZ12441970和SM-324405是IL-5的强效抑制剂，pIC50分别为8.7和7.9。与SM-324406（pIC50=6.8）相比，AZ12441970的酸性代谢产物（AZ12443988）作为IL-5产生抑制剂的活性要低得多（pIC50=5.4），AZ124419 70的酯/酸比为1900。这比SM-324405/SM-324406的13的比率有所改善。PHA在该试验中还诱导了IL-13，在评估10种TLR7激动剂时，我们观察到IL-5和IL-13的等效抑制作用（支持信息图S1）。然而，IL-4没有被诱导。在通过添加抗原（OVA）诱导IL-5的小鼠试验中，R848和AZ12441970有效地抑制了IL-5的产生，pIC50分别为8.7和7.5（图4C）。AZ12443988抑制IL-5的产生，pIC50为6.0。因此，这类TLR7激动剂抑制了人和小鼠T细胞中Th2细胞因子的产生。

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识别TLR7激动剂活性的潜在生物标志物[1]
由于TLR7刺激PBMC会导致IFN-α的产生，我们研究了这是否可能是抑制IL-5的介质。在人PBMC和小鼠脾细胞检测中，添加IFN-α会抑制IL-5（图5）。因此，IFN-α是TLR7刺激浆细胞样树突状细胞的潜在生物标志物，也是抑制Th2细胞因子的标志物。IFN-α在体内具有较短的t1/2，因此很难作为潜在的生物标志物进行测量。为了克服这一点，我们研究了作为IFN-α活性次要标志物的基因产物。向人PBMC诱导的IL-1RA中添加AZ12441970（图6A），这种诱导被中和性抗IFN-α/β受体抗体阻断（图6A。我们证实IFN-α诱导了IL-1RA（图6B），并证明中和抗体的加入阻断了IFN-α产生IL-1RA。这证实了IL-1RA是IFN-α产生的下游标志物。

AZ12441970在体内显示出疗效，全身活性最小[1]
通过将AZ12441970气管内给予OVA致敏的C57BL/6小鼠，然后用气管内抗原攻击，测定其体内活性（表3）。气管内注射1 mg·kg-1 AZ12441970预处理后，支气管肺泡灌洗液中的嗜酸性粒细胞增多症显著减少了87%，尽管不显著，但IL-5的产生也有减少的趋势。当给初生C57BL/6小鼠气管内注射0.1 mg·kg-1 AZ12441970时，与1 mg·kg−1 R848诱导的IFN-α相比，没有诱导全身IFN-α的任何增加（表4），用更高剂量（1 mg·kg-1）的AZ124411970治疗仅导致血浆IFN-α水平的适度增加。气管内注射AZ12441970同样没有诱导血浆IL-1RA、IL-6和TNF-α，而R848明显诱导了这三种细胞因子。这证明了AZ12441970的局部给药可以在小鼠过敏模型中介导有益作用，同时具有最小的全身激活。

TLR报告分析[1]
用人TLR7（pUNO表达载体）和pNiFty2 SEAP报告质粒稳定转染的HEK293细胞保持在Dulbecco改良的Eagle培养基中，FCS 10%（v/v），2 mM l-谷氨酰胺，非必需氨基酸，10µg·mL-1杀稻瘟素s和10µg•mL-1 zeocin。使用的序列由欧洲分子生物学实验室核苷酸序列数据库序列AF240467表示。将细胞以每孔10000个细胞的速度接种在经组织培养处理的透明平底聚苯乙烯96孔板中。通过添加试验化合物并在37°C、5%CO2的环境中孵育20小时，生成了剂量-反应曲线。使用对硝基苯磷酸盐作为底物定量释放的分泌性碱性磷酸盐（SEAP），并通过微孔板读数器测定405nm处的吸光度。

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血浆稳定性测定[1]
在37°C下将试验化合物（初始浓度为1µM）加入到人或大鼠血浆（通过离心1800×g EDTA管中收集的血液制备）中，总体积为0.5mL。在37°℃下孵育10分钟，在0、20秒、40秒和1、2、3、5和10分钟时取样，放入乙腈中。通过LC/MS/MS分析上清液中剩余的母体化合物，并确定母体化合物的t1/2。

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脾细胞制剂[1]
在颈椎脱位后，从二氧化碳窒息的雄性棕色挪威大鼠或天真的雌性Balb/c小鼠（Harlan）身上取出脾脏，并将其放入含有RPMI 1640的培养皿中。将脾脏轻轻推入70µm BD Falcon细胞株中，以获得单细胞悬浮液。将细胞在400×g下离心5分钟以获得细胞沉淀，去除上清液并将细胞重新悬浮在新鲜的RPMI 1640中。再次离心细胞，将细胞重新悬浮在完全培养基（RPMI-1640、5%（v/v）胎牛血清（FCS）、2 mM l-谷氨酰胺、10 U·mL-1青霉素、10µg·mL-1链霉素和50µM 2-巯基乙醇）中。

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外周血单个核细胞（PBMC）制剂[1]
将健康、自愿的志愿者的血液收集到肝素中，分层到淋巴细胞分离培养基1077（PAA，Pasching，Austria）上，以700×g离心25分钟。去除PBMC层，用PBS稀释至50 mL，以400×g离心10分钟。去除上清液，将沉淀重新悬浮在50 mL PBS中，以300×g离心5分钟。最后用50 mL PBS洗涤细胞，以200×g离心回收细胞5分钟。最终将PBMC重新悬浮在测定培养基（RPMI 1640，含25 mM HEPES，FCS 10%（v/v），2 mM l-谷氨酰胺，10 U·mL-1青霉素）中。10µg·mL-1链霉素）。
从收集到肝素中的狗血（动物设施，阿斯利康研发）制备狗PBMC，并使用与人PBMC相同的方案制备PBMC。

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脾细胞培养[1]
将20微升试验化合物或含有1%（v/v）DMSO的完整RPMI 1640（载体对照）加入每个孔中，然后加入180µL脾细胞悬浮液（2×105个细胞），如前所述制备完整RPMI。脾细胞和化合物在37°C的空气/CO2（95/5 v/v）气氛中孵育一段时间。
在44小时时，通过在细胞测定中加入0.0185MBq[3H]-胸苷来测定脾细胞增殖。再孵育6小时后，使用Tomtec过滤装置将细胞收集到玻璃纤维过滤垫上。将垫子干燥，加入Betaplate Scint，用MicroBeta 1450 Trilux定量过滤器结合的放射性。

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小鼠脾细胞IL-5和IFN-γ[1]
在第0天，通过腹腔注射10µg OVA+1 mg Al（OH）3的100µL溶液对幼年雌性Balb/c小鼠进行免疫接种。免疫接种8天后，将OVA/Al（OH）3致敏小鼠的脾脏收集到RPMI 1640培养基中，并如前所述制备和孵育脾细胞。加入OVA至终浓度为1mg OVA mL-1，孵育5天。去除上清液以测定产生的IL-5和IFN-γ的量。

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PBMC培养[1]
向每个孔中加入20微升含有1%（v/v）二甲亚砜（DMSO）的试验化合物或试验培养基，作为载体对照，然后在试验培养基（200000个细胞）中加入180µL PBMC细胞悬浮液（如前所述制备）。PBMC和化合物在37°C的空气/CO2（95/5 v/v）气氛中孵育规定的时间。
为了诱导IL-5，制备人PBMC并用如前所述的化合物铺板。以5µg·mL-1的终浓度加入植物血凝素（PHA），并在去除上清液后孵育44小时，以测定产生的IL-5的量。
在添加丁酰胆碱酯酶（BChE）以缩短前药暴露时间的试验中，用浓度为1 U·mL-1的BChE接种PBMC，并通过添加化合物启动培养。24小时后，取出150µL上清液进行细胞因子测定，并用150µL新鲜培养基替换。在44小时时，加入[3H]-胸苷，并如前所述测定增殖。

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基因芯片分析[[1]
Balb/c小鼠脾细胞、Brown Norway大鼠脾细胞或人PBMC与化合物一起孵育，4小时后用TRIzol®试剂提取RNA。根据标准方案，对人类（HG-U133+2）、小鼠（MOE430）和大鼠（RAE230）Affymetrix芯片组进行微阵列分析。在GeneChip Operating Software中使用MAS5算法对原始微阵列数据进行归一化。

抑制支气管肺泡灌洗液（BALF）中的炎症细胞（疗效）[1]
\n8-10周龄雄性褐挪威大鼠于第0天和第7天腹腔注射卵清蛋白（1 mg）和氢氧化铝佐剂（100 mg）的生理盐水（1 mL）进行致敏。对照组（未致敏/未激发）动物在相同时间点仅注射赋形剂（生理盐水）。在第14天至第18天之间的任意一天，大鼠通过雾化器吸入由10 mg/mL卵清蛋白溶液产生的卵清蛋白气溶胶15分钟进行激发。对照组动物同样吸入生理盐水气溶胶15分钟。在抗原激发前两小时，大鼠通过静脉注射给予测试化合物（悬浮于生理盐水中）或赋形剂（给药体积为0.5 mL/kg）。抗原激发24小时后，处死大鼠并进行气管插管。用2 mL生理盐水冲洗气道腔，重复此步骤6次（总体积12 mL）。用Turk染色液对支气管肺泡灌洗液（BALF）中的浸润细胞进行染色，并在计数室中计数有核细胞的数量。用细胞离心机制备涂片，并用Diff-Quick染色液（May-Grunwald染色）染色，进行细胞分类计数。每个BALF样本中至少计数300个细胞（放大倍数×400）。\n

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\n\n全身性IFN的诱导（副作用）[1]
\n8-10周龄雄性褐挪威大鼠接受试验化合物（悬浮于生理盐水中）的给药（给药体积为0.5 mL/kg）。给药后2、4、6和24小时，用乙醚麻醉大鼠，并通过尾静脉采集肝素化血液样本（约0.3 mL）。然后通过离心（12000 rpm，10分钟）制备血浆样本，并储存于−20 °C直至进行IFN分析。使用L929和水疱性口炎病毒（VSV）通过细胞病变效应（CPE）减少试验（生物测定）测定血浆样本中的IFN滴度。体内药代动力学测定[2]
\nAZ12441970配制于0.1% Tween80/0.6% NaCl/50 mM磷酸盐缓冲液（pH 6.0）中，浓度为0.5 mg·mL−1。六只雌性BALB/c小鼠经异氟烷短暂麻醉后，经鼻内给予50 µL制剂，每只小鼠剂量为1 mg·kg⁻¹。该剂量足以使药物吸入肺部，而不会滞留在鼻腔内。在每个时间点，用戊巴比妥钠过量处死两只小鼠，并从下腔静脉采集血液，置于含氟化钠（终浓度0.2 M）的溶液中以防止酯酶水解，然后再与抗凝剂EDTA混合。样品用甲醇淬灭，并在-20°C下冷冻保存。取出肺组织，放入含有1 mL氟化钠（1.2 M）的样品瓶中，并立即在-20°C下冷冻保存。将肺组织与八倍体积的水匀浆，并取匀浆液等分试样用甲醇淬灭。使用已知重量的测试化合物 AZ12441970 和酸性代谢物 AZ12443988 制备标准曲线，将其加入到含有氟化钠的肺匀浆或血液中，并按照先前样品的处理方法进行处理。\n\n所有样品均经离心，取上清液进行 LC/MSMS 分析，并定量测定 AZ12441970 和 AZ12443988 的浓度。\n

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\n\n小鼠 OVA 诱导的过敏性气道模型 [2]
\n雌性 C57BL/6 小鼠于第 0 天和第 14 天皮下注射 10 µg 吸附有 4 mg 氢氧化铝佐剂的 OVA（100 µL）进行致敏。于第 22 天经气管内（20 µL）给予 OVA（0.5 mg·mL−1）进行激发。 AZ12441970（40 µL，溶于 0.1% Tween80/ 0.6% NaCl/50 mM 磷酸盐缓冲液，pH 6.0）在 OVA 攻击前 24 小时和 2 小时经气管内途径给药。OVA 攻击后 48 小时，在麻醉下处死动物，并按照先前描述的方法（van Rijt 等，2004）通过 FACS 分析测量支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞的数量。简而言之，将支气管肺泡灌洗液细胞与抗小鼠CD16/CD32单克隆抗体2.4G2（BD Bioscience，美国加利福尼亚州圣地亚哥）于4°C预孵育15分钟，然后与抗小鼠FITC-CD4(L3T4)、FITC-CD8、FITC-B220和PE-CCR3（BD Bioscience）孵育。使用Becton Dickinson FACScan（Becton Dickinson）测定CD4−CD8−B220−CCR3+嗜酸性粒细胞的数量。采用酶联免疫吸附试验（ELISA，BD Bioscience）测定支气管肺泡灌洗液中的IL-5。\n

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\n\n小鼠全身细胞因子诱导[2]
\n将AZ12441970和R848（溶于0.1% Tween80/0.6% NaCl/50 mM磷酸盐缓冲液，pH 6.0）经气管内途径给予未经处理的雌性C57BL/6小鼠，每只小鼠20 µL。90分钟后，用肝素化注射器采集血液，并通过离心制备血浆。血浆冷冻保存直至分析。采用L929/OAS细胞的报告基因检测系统测定血浆中的IFN-α，并采用ELISA或Luminex技术测定细胞因子。\n\n\n

短期化合物暴露有利于 IFN-α 的诱导 [1]
为了研究 AZ12441970 的药代动力学特征，我们采用鼻内给药的方式，确保药物能够到达肺部。AZ12441970 在小鼠血浆中不稳定，半衰期为 0.22 分钟。给药 10 分钟后，90% 的化合物已在肺部代谢，并生成酸性代谢物（表 2）。酯类和酸类代谢物的水平在 150 分钟内进一步下降。在所研究的三个时间点，血浆中 AZ12441970 的浓度比肺部浓度低约 400 倍。尽管血浆中 AZ12443988 的浓度高于母体化合物，但该酸类代谢物也从血液中清除。
药代动力学数据表明，AZ12441970不仅在血浆中代谢迅速，而且在肺部沉积时也会发生水解。BChE已被证实是负责裂解该抗药酯的血浆酯酶，因为BChE选择性抑制剂乙烯利可阻断AZ12441970在血浆中转化为其酸性代谢物（见补充信息图S2）。IC50值为24 µM，与Haux等人（2000）测定的11 µM值一致。为了确定短期暴露于TLR7激动剂是否会产生生物学效应，我们将PBMC与BChE一起孵育，以促进酯的快速代谢，从而缩短暴露时间。用等浓度的代谢物AZ12443988进行孵育，结果表明酯裂解产生的任何酸都具有生物活性。在BChE存在的情况下，需要更高浓度的AZ12441970才能产生IFN-α及其下游标志物IL-1RA（图7A和B）。在1 µM AZ12441970存在下，这些介质的产生水平与在没有BChE的情况下诱导的水平相当。所有这些活性都不能归因于该酸，因为该酸在浓度高达1 µM时没有活性（图7B）。当测定TLR7刺激的其他终点，例如TNF-α产生和PBMC增殖时，即使在测试的最高剂量AZ12441970下，加入BChE也几乎完全抑制了任何TLR7介导的效应。这些数据表明，与TNF-α的产生和增殖相比，短期暴露更倾向于诱导IFN-α的产生。

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SM-324405、AZ12441970及其代谢物的TLR激动剂活性表征[1]
一项合成化学研究计划获得了可在血浆中快速代谢的TLR7激动剂前药（Kurimoto等人，2010）。随后的研究计划发现了一系列替代化合物，例如AZ12441970。本文概述了该系列化合物的生物活性和作用机制，并以TLR7激动剂SM-324405和AZ12441970及其代谢物为例进行了阐述（表1）。这些化合物在人血浆中代谢迅速，半衰期为 1–3 分钟，在大鼠血浆中代谢迅速，半衰期小于 1 分钟（表 1）。
AZ12441970 和 SM-324405 在人和大鼠 TLR7 报告基因检测中显示出与已充分表征的 TLR7/8 配体 R848 相当或更高的活性（表 1）。R848 对人 TLR8 具有活性，而其他两种化合物均不具有人 TLR8 活性，这是通过激活报告细胞系中的 NF-κB 来评估的。血浆代谢产物是一种酸，SM-324405 的该酸产物在人和大鼠 TLR7 报告基因检测中仍然显示出显著活性。然而，AZ12441970 的设计使得其酸性代谢物 AZ12443988 在人 TLR7 报告基因检测中效力降低了 60 倍以上。这两种酸性代谢物均未显示出任何可检测的 TLR8 活性。

[1]. Biological characterization of a novel class of toll-like receptor 7 agonists designed to have reduced systemic activity. Br J Pharmacol. 2012 May;166(2):573-86.

[2]. Chemical Strategies to Enhance the Therapeutic Efficacy of Toll-like Receptor Agonist Based Cancer Immunotherapy. Acc Chem Res. 2020 Oct 20;53(10):2081-2093.

我们已鉴定出强效的TLR7激动剂前药，并提供了数据表明，具有前药特性的TLR7激动剂9e是过敏性疾病免疫治疗的新候选药物。背景与目的：Toll样受体7 (TLR7) 激动剂在过敏性疾病的治疗中具有潜力。然而，目前小分子TLR7激动剂的治疗应用受限于其全身活性，导致不良副作用。我们开发了一系列TLR7选择性“前药”，包括SM-324405和AZ12441970，它们含有一个酯基，该酯基在血浆中可快速裂解，从而降低全身暴露。实验方法：在体外，我们使用报告细胞和多种物种的原代细胞评估了母体酯及其酸代谢物对TLR7的激动活性。在小鼠肺部给药后评估了药代动力学，并使用小鼠过敏性气道模型评估了其体内疗效。主要结果：这些化合物是TLR7的选择性激动剂，对TLR8无交叉反应，且在血浆中代谢不稳定，其酸性代谢物在多种检测中活性显著降低。这些化合物抑制IL-5的产生并诱导IFN-α，而IFN-α介导了IL-5的抑制。当给药于肺部时，这些化合物代谢迅速，短期暴露于“反药物”即可激活IFN通路。AZ12441970在小鼠过敏性气道模型中显示出疗效，且全身性IFN-α的诱导作用极小，这与该化合物的低血浆浓度相符。结论和意义：这些TLR7选择性激动剂“反药物”化合物的生物学和代谢特征表明，它们是一类新型化合物，可用于局部给药治疗过敏性疾病，同时降低全身性副作用的风险。相关文章：Kaufman 和 Jacoby 在本期第 569-572 页对本文进行了评论。如需查看该评论，请访问 http://dx.doi.org/10.1111/j.1476-5381.2011.01758.x。[1]

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另一种策略是使用反药物，反药物是指一种局部活性化合物，其设计目的是在进入血液循环后迅速代谢为非活性形式，并通过在血浆环境中失去激动活性来防止全身毒性。TLR 激动剂反药物在关键的 TLR 结合位点上具有可裂解的连接子。该可裂解连接子对血浆环境敏感，因此 TLR 激动剂会因关键结合位点的丢失而失活。 SM-324405 和 AZ12441970 是 TLR 7 激动剂类抗药，它们的关键 TLR 结合位点上含有酯键。这些酯键易被血浆酯酶裂解，导致激动活性降低。TLR 结合位点的丧失会导致外周血单核细胞 (PBMC) 诱导的干扰素-α (IFN-α) 分泌减少。[2]

C27H41N7O4

527.658945798874

527.322

C, 61.46; H, 7.83; N, 18.58; O, 12.13

929551-91-7

57733215

Typically exists as solid at room temperature

2.6

126

2

9

17

38

728

0

O=C1NC2C(N)=NC(=NC=2N1CCCN(CC1C=CC=C(CC(=O)OC)C=1)CCCN(C)C)OCCCC

OULXSRDSTASMNN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C27H41N7O4/c1-5-6-16-38-26-30-24(28)23-25(31-26)34(27(36)29-23)15-9-14-33(13-8-12-32(2)3)19-21-11-7-10-20(17-21)18-22(35)37-4/h7,10-11,17H,5-6,8-9,12-16,18-19H2,1-4H3,(H,29,36)(H2,28,30,31)

methyl 2-[3-[[3-(6-amino-2-butoxy-8-oxo-7H-purin-9-yl)propyl-[3-(dimethylamino)propyl]amino]methyl]phenyl]acetate

AZ12441970; 929551-91-7; SCHEMBL13798671;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。