Hepatitis C virus/HCV NS5B protein (IC50 < 28 nM)

当与 pegIFN/RBV 联合使用以及与其他 DAA（包括核苷 NS5B 抑制剂、NS5A 抑制剂和 HCV NS3 蛋白酶抑制剂）联合使用 2 种或 3 种药物时，Beclabuvir/贝拉布韦表现出协同或相加的抗病毒效果[2]。

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Beclabuvir是HCV NS5B RNA聚合酶的强效非核苷抑制剂，在体外对HCV基因型1、3、4、5和6具有纳摩尔活性。Beclabuvir（原名BMS-791325）是一种强效的非核苷NS5B聚合酶抑制剂，结合NS5B拇指口袋1变构位点，对HCV GTs 1、3、4、5和6显示出纳摩尔活性，GT1a和GT1b 11的50%有效浓度（EC50）分别为3和6nm。在体外，Beclabuvir与聚乙二醇干扰素/RBV以及与一系列DAAs的2或3种药物组合（如HCV NS3蛋白酶抑制剂、NS5A抑制剂和/或核苷NS5B抑制剂）显示出相加或协同的抗病毒活性[2]。

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Beclabuvir是HCV NS5B RNA依赖性RNA聚合酶的变构抑制剂。已知的HCV NS5B变构抑制剂靶向聚合酶上的四个不同位点。酶的结构类似于手，位点I和II位于“拇指”结构域，位点III和IV位于“手掌”结构域。靶向不同结合位点的变构抑制剂彼此之间没有交叉抗性。因此，这些抑制剂可能与NS5B的其他变构抑制剂以协同或非拮抗方式相互作用。Beclabuvir是一个拇指部位1-NS5B聚合酶配体。一般来说，这些化合物抑制RNA复制的起始步骤，而不是伸长步骤。Beclabuvir已被证明可以同等抑制从头合成和引物依赖性合成，比之前研究的化合物强5-75倍，因此据我们所知，它是基因型1（GT-1）NS5B聚合酶最有效的拇指位点1抑制剂。结合后，beclabuvir以时间依赖的方式抑制NS5B活性，从而阻止活性复制复合物的形成[1]。

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在体外，Beclabuvir能够以纳摩尔效力在50%抑制浓度（IC50）下抑制源自HCV基因型1、3、4和5的重组NS5B蛋白。在细胞培养中，倍氯布韦分别在3 nM和6 nM的50%有效浓度（EC50s）下阻碍基因型1a和1b的HCV亚基因组复制子的复制。对于基因型3a、4a和5a，观察到类似的值（3至18nM）。对于基因型6a，EC50值显示出更多的变异性（9至125 nM），而与基因型2相比，效力较弱（EC50，87至925 nM）。对一组哺乳动物病毒（鼠疫病毒、牛病毒性腹泻病毒）或人类DNA聚合酶α、β、γ缺乏活性（EC50s>4μM）（IC50值>25μM）表明其特异性，同时细胞毒性浓度（50%）比HCV EC50高出3000倍以上。此外，当与其他HCV抑制剂如达卡他韦、阿舒那韦和人λ1 IFN联合使用时，beclabuvir对复制子抑制显示出相加的协同作用。此外，最近的一项体外研究表明，在四联治疗方案中添加Beclabuvir和sofosbuvir（达克拉他韦/阿舒那普利/贝克拉布韦/索非布韦）可以在5天的治疗时间内有效清除细胞中的达克拉他维/阿舒那普利耐药复制子[1]。

研究人员分析了DCV/ASV/BCV（Beclabuvir）治疗HCV感染小鼠和慢性肝炎患者的疗效。人肝细胞嵌合小鼠注射了从DAA初治患者或DCV/ASV治疗失败患者获得的血清样本，然后单独或与BCV联合使用DCV/ASV治疗4周。DCV/ASV治疗成功地消除了DAA初治患者HCV感染小鼠中的病毒。DCV/ASV治疗失败的HCV感染小鼠在DCV/ASV治疗期间出现了病毒突破，通过直接测序观察到NS5A-L31V/Y93H HCV耐药相关变异（RAV）的出现。DCV/ASV/BCV治疗抑制了NS5A-L31V/Y93H突变的HCV感染小鼠的病毒突破，但在停止治疗后，HCV随着NS5B-P495S变体的出现而复发。还分析了三联疗法对HCV感染患者的疗效；1名DAA幼稚患者和4名DAA治疗失败的患者接受了12 DCV/ASV/BCV治疗数周。一名DAA初治患者和一名DCV/ASV/BCV治疗失败的DCV/ASV患者实现了持续的病毒学应答；然而，其他先前DCV/ASV和/或sofosbuvir/ledipasvir治疗失败的患者发生了HCV复发。对于之前DAA治疗失败的NS5A RAV患者，DCV/ASV/BCV治疗似乎疗效有限。[3]

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在感染 HCV 基因型 1（全球最流行的基因型）的患者中，Beclabuvir/贝拉布韦、阿舒瑞韦和达拉他韦的组合可提供非常高的病毒根除率（约 90%）[1]。
在一项双盲、安慰剂对照研究中，24名患有慢性HCV基因型1感染的患者（每个给药队列中随机分配5:1）接受了单次每日递增剂量的Beclabuvir（100、300、600或900 mg）或安慰剂治疗，这些患者都是干扰素初治和有经验的。在2至4小时之间观察到峰值贝拉布韦浓度，t1/2为6.8至9.4小时。尽管t1/2似乎低于10小时，但24小时可实现的暴露量大大超过了体外建立的有效浓度。最大抗病毒反应与血浆药物暴露量相关，20名接受药物治疗的患者中有12名在给药后24小时（范围12-48小时）达到中值。在所有剂量的药物中，观察到病毒RNA的显著减少（在1 log10和超过3 log10 IU/ml之间）。两名患者达到了观察到的最高HCV RNA最大减少量，一名患者在600mg队列中（给药前基线，6.6 log10IU/ml），一名在900mg队列中（剂量前基线，6.5 log10IU/ml），其病毒载量在给药后24小时下降了3.4 log10UI/ml。

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无干扰素联合试验[1]
在一项II期研究和两项III期研究中评估了给予慢性HCV感染患者的3种DAAs、NS5A抑制剂达卡他韦（DCV）、NS3/4蛋白酶抑制剂阿舒那普利（ASV）和非核苷类NS5B聚合酶抑制剂Beclabuvir（BCV）的全口服固定剂量组合的疗效和安全性：i）AI443-014，这是一项针对初次治疗的GT-1和GT-4患者进行的II期研究，以及聚乙二醇干扰素/RBV（利巴韦林）先前无效反应的GT-1患者。本研究探讨了DCV-TRIO治疗（DCV-ASV-BCV）12或24周的安全性和有效性；ii）UNITY-1（AI443-102）是一项针对未接受治疗和有治疗经验的非肝硬化GT-1患者进行的III期研究。本研究评估了DCV TRIO治疗12周的安全性和有效性；iii）UNITY-2（AI443-113）是一项针对初次治疗和有治疗经验的GT-1代偿性肝硬化患者进行的iii期研究。本研究评估了DCV TRIO治疗加RBV治疗12周。

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本研究评估了Beclabuvir与聚乙二醇干扰素α-2a（pegIFN）和利巴韦林（RBV）联合治疗HCV基因型1的疗效和安全性。在这项随机（1:1:1）、双盲、安慰剂对照、剂量范围为2a期的研究中，39名慢性感染HCV基因型1的未接受治疗的患者接受了48周的贝拉布韦（75mg或150mg）加聚乙二醇干扰素（180μg）和红细胞毒素（1000mg/天[<75kg]或1200mg/天[≥75kg]）治疗，与单独使用聚乙二醇干扰素/RBV相比。76.9%（10/13）的患者接受75 mg倍氯布韦治疗，38.5%（5/13）接受150 mg倍氯布韦治疗，而仅接受聚乙二醇干扰素/RBV治疗的患者为0%，达到了延长快速病毒学反应的主要疗效终点（在治疗第4周和第12周无法检测到HCV RNA）。在所有次要疗效终点（包括随访第12或24周的持续病毒学应答）中，接受75 mg贝拉布韦治疗的患者的应答率较高。三名患者在治疗中出现病毒学突破，均在贝拉布韦150mg治疗组。Beclabuvir在两种剂量下均具有良好的耐受性，最常见的不良事件（头痛、疲劳、恶心、食欲下降、易怒、抑郁和失眠）与聚乙二醇干扰素/RBV观察到的不良事件一致。总之，当与聚乙二醇干扰素/RBV联合使用治疗慢性HCV GT1时，倍氯布韦既有效又耐受良好，支持将倍氯布威作为HCV GT1全口服方案的一部分进行研究。[2]

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总体而言，69名患者接受了筛查，39名患者被随机分配；其中，29名患者完成了研究（图S1）。除了与其他组相比，Beclabuvir75mg组的男性比例较低，白人患者和IL28B（rs12979860）CC基因型患者比例较高外，三组的基线特征总体上是平衡的（表S1）。

与聚乙二醇干扰素/RBV组（0%）相比，Beclabuvir75mg（76.9%）和150mg（38.5%）组的患者比例更高，达到了eRVR的主要疗效终点（图1）。贝拉布韦75 mg组的患者对次要疗效终点RVR、cEVR、SVR12和SVR24的反应率最高（图1）。当将缺失测量值的患者排除在分析之外时，也得到了类似的结果（在治疗分析中；图S2）。与安慰剂相比，对于IL28B CC和非CC基因型，贝克拉布韦治疗组的反应率通常也更高（图1），尽管数字很小。贝克拉布韦75 mg组与150 mg组的反应率较高可由两个因素解释：（i）150 mg组中IL28B（rs1297860）CC基因型患者的比例（15%）低于75 mg组（46%），已知与非CC基因型14-16相比，IL28B（rs 1297860，CC基因型与对基于聚乙二醇干扰素/红细胞疫苗的治疗方案的反应率更高；（ii）150 mg治疗组中在治疗后第24周HCV RNA数据缺失的患者比例更高。当考虑到缺失的数据时，150mg治疗组的SVR24发生率有所改善，贝拉布韦150mg组和安慰剂组的SVR22发生率观察值分别为71%（5/7）和90%（9/10）。

在Beclabuvir75mg组中，没有患者在治疗后出现病毒学突破或复发；在四名没有SVR24的患者中，一名患者在治疗结束时检测到HCV RNA，而其余3名患者（在治疗后随访第24周之前均检测不到HCV RNA）在此时间点之前丢失了第24周的治疗后数据，无法进行随访，或因其他原因（监禁）而中断治疗。在贝拉布韦150mg组中，在8名没有SVR24的患者中，3名患者在治疗结束时出现病毒学突破，1名患者检测到HCV RNA；未观察到治疗后复发。其余四名患者（在治疗后第24周之前均检测不到HCV RNA）要么在治疗后24周丢失了RNA数据（n=1），要么失去了随访（n=3）。在安慰剂组中，在8名没有SVR24的患者中，2名在治疗结束时检测到HCV RNA，3名在治疗后复发，而其余3名患者（在治疗后第24周之前均检测不到HCV RNA）缺少RNA数据或撤回同意书。

在三名病毒学突破的患者中（所有Beclabuvir150mg），所有患者均患有GT1a感染，为IL28B非CC基因型，并在突破时有NS5B替换A421V和P495A/L/S的证据；一名患者在基线时也使用了NS5B替代M426L。观察到所有病毒学突破的患者在A421和P495处都有GT1a和NS5B变异，这与贝克拉布韦和其他拇指口袋1 NS5B抑制剂的先前数据一致。P495的变体是拇指口袋-1抑制剂的标志性抗性相关替代，之前在单独存在贝拉布韦和与NS3抑制剂asunaprevir联合存在的GT1a复制子细胞体外传代后观察到A421V[2]。

在体外研究中，与NS5B遗传变异（野生型、L30S和P495L）的结合分析揭示了该药物的两步缓慢结合机制。详细地说，在基于基因型1的复制子中，由Beclabuvir/BCV选择的抗性替代大多映射到NS5B氨基酸495（P495A/S/L/T），因此可以认为这是唯一具有临床相关性的抗性变体。对于P495，初始复合物形成和解离的速率与野生型相似，但第二步的动力学明显更快。这与停留时间缩短有关，最终转化为抑制剂效力的降低。相比之下，BCV对L30S的效力大致等于野生型聚合酶。因此，L30S突变的检测被认为与临床无关。
关于基因型特异性抗性谱，GT1a对Beclabuvir/BCV的抗性屏障最高，而GT6a的抗性屏障最低。至少在基于基因型3至6的复制子系统中，NS5B拇指结构域第494和495位的置换赋予了不同水平的BCV抗性。然而，没有观察到对NS5A或NS3蛋白酶抑制剂的交叉耐药性。关于6a亚型，值得注意的是，A494多态性（赋予BCV降低的效力）存在于欧洲HCV数据库中21%的序列中[1]。

Beclabuvir 的体外细胞活性通常使用 HCV 亚基因组复制子细胞模型进行评价。具体流程如下：将稳定表达 HCV 亚基因组复制子（包含荧光素酶报告基因或通过定量PCR检测HCV RNA水平）的 Huh-7 细胞接种于培养板中，培养过夜使细胞贴壁。随后，将不同浓度的 Beclabuvir 加入培养基中，在 37°C、5% CO₂ 条件下继续孵育 72 小时。孵育结束后，裂解细胞，通过测定荧光素酶活性或使用实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）检测 HCV RNA 的复制水平，计算药物抑制病毒复制的半数有效浓度（EC50）。在该体系中，Beclabuvir 对基因 1a 型复制子的 EC50 为 3 nM，对基因 1b 型复制子的 EC50 为 6 nM 。同时，应设置细胞毒性对照实验，通过 MTT 或 CellTiter-Glo 等方法评估药物的细胞毒性，以确定观察到的抗病毒效果并非由细胞活力下降所致。研究表明，Beclabuvir 的半数细胞毒性浓度（CC50）远高于其抗病毒 EC50（> 3000 倍），显示出良好的选择性指数 。

患者和方法 [2]
这是一项随机（1:1:1）、双盲、安慰剂对照、剂量范围的 2a 期研究（AI443-012；ClinicalTrials.gov：NCT 01193361），旨在评估Beclabuvir联合聚乙二醇干扰素/利巴韦林治疗初治慢性 HCV GT1 感染成人患者的安全性和有效性。符合条件的患者接受为期 48 周的每日两次口服 Beclabuvir（75 mg）、Beclabuvir（150 mg）或安慰剂治疗，每种药物均联合每周一次皮下注射聚乙二醇干扰素（180 μg）和每日两次口服利巴韦林（根据体重给予 1000 mg/天 [<75 kg] 或 1200 mg/天 [≥75 kg]）。治疗后随访时间为 24 周（治疗结束时 HCV RNA 检测不到的患者）或 48 周（治疗结束时 HCV RNA 可检测到或复发的患者）。

患者在筛选时需满足以下条件：HCV RNA ≥10–5 IU/mL（COBAS TaqMan HCV Test 2.0；Roche Molecular Diagnostics，Pleasanton，California；定量下限 [LLOQ] 25 IU/mL），且在随机分组前 24 个月内肝活检未发现肝硬化证据。主要排除标准包括：随机分组前 6 个月内接受过干扰素或利巴韦林治疗超过 4 周；丙氨酸氨基转移酶 (ALT) ≥5 × 正常值上限 (ULN)；总胆红素 ≥34 μmol/L (≥2 mg/dL) 或直接胆红素 >ULN；国际标准化比值 (INR) ≥1.7；确诊肌酐清除率≤50 mL/min；或同时诊断为慢性乙型肝炎病毒感染、HIV感染、肝细胞癌或其他非HCV肝病。

主要安全性终点为严重不良事件（SAE）的发生率以及因不良事件（AE）而终止研究治疗的情况。主要疗效终点为获得延长快速病毒学应答（eRVR）的患者比例，定义为在治疗第4周和第12周均检测不到（<定量下限）HCV RNA。次要疗效终点包括治疗第4周（快速病毒学应答；RVR）、第12周（完全早期病毒学应答；cEVR）以及治疗后第12周和第24周（持续病毒学应答；分别为SVR12和SVR24）HCV RNA检测不到的患者比例。探索性分析包括贝克拉布韦及其代谢物 BMS-794712 的药代动力学，以及贝克拉布韦的抗病毒活性或安全性与宿主 IL28B 基因型或贝克拉布韦暴露之间的关联。

在基线时进行 NS5B 群体测序，并对所有接受 Beclabuvir 治疗且治疗无效（定义为 [i] 病毒学突破 [HCV RNA 较最低值增加 >1 log10 IU/mL，或在治疗期间确认检测不到 HCV RNA 后 HCV RNA ≥ LLOQ]；[ii] 第 4 周 HCV RNA 下降 <1 log10；[iii] 未达到 EVR [定义为第 12 周 HCV RNA 下降 <2 log10 IU/mL]；或 [iv] 第 12 周 HCV RNA 可检测到且第 24 周 ≥ LLOQ）或复发（治疗结束时 HCV RNA 检测不到，但在任何治疗后访视中确认 HCV RNA 可检测到）且 HCV RNA ≥1000 IU/mL 的患者进行测序。

药代动力学和代谢[1]
对早期NS5B聚合酶抑制剂系列化合物性质的优化，产生了一类有前景的烷基桥联哌嗪甲酰胺类抗病毒化合物，并发现了Beclabuvir，对其进行了临床前表征。在体外，研究人员在人、大鼠、犬和食蟹猴肝微粒体中研究了Beclabuvir。在人和猴的微粒体中，Beclabuvir的半衰期(t1/2)分别为53分钟和23分钟，而在大鼠和犬的实验中，t1/2均大于200分钟。基于这些数据，研究人员对该化合物进行了24小时大鼠药代动力学研究。在本研究中，当以PEG-400溶液给药时，口服生物利用度为66%，分布容积为2.7升/公斤；静脉给药后，血浆清除率为3.5毫升/分钟/公斤，血浆半衰期估计为8.3小时。
在多种动物（大鼠、犬和猴）中，口服给药后体内血浆和肝脏暴露量表明，Beclabuvir具有肝脏趋向性（不同物种的肝脏/血浆比值范围为1.6至60倍）。给药24小时后，所有受试物种的肝脏暴露量均大于或等于HCV基因型1、3和5复制子EC50值的10倍；大于GT 4复制子EC50值的6.7至40倍；且比 GT 6 复制子 EC50 值高 1.5 至 14 倍。
以最大药物浓度 (Cmax) 和血浆浓度-时间曲线下面积 (AUCinf) 衡量的Beclabuvir暴露量呈剂量依赖性，且与剂量呈正比关系，Cmax 的点估计值和 90% 置信区间约为 1.1 (0.99 至 1.22)，AUCinf 的点估计值和 90% 置信区间约为 1.18 (0.99 至 1.36)，这与每日一次或两次给药的预期相符。在复制子培养中，所有剂量下，给药后 1 小时内和 24 小时，所有患者的蛋白质校正 EC90 值均低于血浆浓度 (52 ng/ml)。因此，即使在最低测试剂量（100 mg）下重复给药，也能获得令人满意的抗病毒效果，而单次剂量超过 300 mg 则几乎不带来额外的抗病毒益处。此外，Beclabuvir 可代谢为一种等效化合物 (BMS-794712)，该化合物具有相似的药代动力学特征，其血浆暴露量约为母体药物的 22%，因此对总抗病毒活性有显著贡献。在多项临床试验中（详见后文），Beclabuvir 已与达克拉他韦和阿舒那韦联合使用。由于所有这些药物都是 CYP3A4 底物、OATP1B1 抑制剂和 P-糖蛋白抑制剂，因此在 AI443014 试验的药代动力学子研究中，研究人员调查了三联药物组合的潜在药物相互作用。在该子研究中，32 名未经治疗的 HCV GT 1 感染的非肝硬化患者接受了 12 或 24 周的达卡他韦（60 mg qd）、阿舒那韦（200 mg bis in die [bid]）和两种剂量的贝克拉布韦（75 mg bid 或 150 mg bid）治疗。在达克拉他韦和阿舒那韦的基础上加用贝克拉布韦未显示任何具有临床意义的相互作用。
尽管达克拉他韦 (DCV)、阿舒那韦 (ASV) 和贝克拉布韦/贝克拉布韦 (Beclabuvir/BCV) 主要经粪便排泄（肾脏排泄占总清除率的 < 10%），但人们担心慢性肾脏疾病导致的间接机制同样会影响这些药物的非肾脏清除率。因此，开放标签、多剂量 AI443110 研究评估了 41 名未感染丙型肝炎病毒 (HCV) 的受试者（33 名不同肾功能损害程度的患者和 8 名肾功能正常的健康对照者）中 DCV、ASN 和 BCV 的药代动力学和安全性。在中度和重度肾功能损害的受试者中，DCV、ASV、贝克拉布韦/贝克拉布韦 (Beclabuvir/BCV) 和 BMS-794712 的平均浓度高于肾功能正常的受试者。对于接受血液透析（HD）的终末期肾病（ESRD）患者，DCV、BCV 和 BMS-794712 的平均浓度与肾功能正常的患者相当，而 ASV 的平均浓度则较低。在肾功能受损的患者中，药物的 Cmax 和 AUCtau 均高于肾功能正常的患者，尤其是在重度肾功能受损的患者中。由于接受了血液透析，ESRD 患者的药物暴露量通常与肾功能正常的患者相当，并且在血液透析后，与健康受试者相比，DCV 的游离药代动力学参数较低。在主要回归分析中（不包括接受血液透析的患者），DCV、ASV、BCV 和 BMS-794712 的 Cmax 和 AUCtau 随着肌酐清除率的降低而增加，主要在严重肾功能损害的受试者中（范围为 42% 至 105%）。

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Beclabuvir 及其代谢物 BMS-794712 达到最大血浆浓度的中位时间 (Tmax) 在每个剂量下均为 2 小时（图 S3）。在第 12 周治疗时，Beclabuvir 和 BMS-794712 的暴露量均高于剂量比例，代谢物与母体药物的 AUC 比值约为 0.23–0.25，这与先前一项 Beclabuvir I 期研究¹² 的单剂量数据（100–900 mg）一致。未观察到 Beclabuvir 的复合谷浓度与病毒学应答（eRVR、SVR24、RVR、cEVR、SVR12；图 S4a 和未显示数据）、严重不良事件 (SAE) 的发生率或因不良事件 (AE) 而停药之间存在关联（图 S4a）。药物暴露量与特定临床实验室终点指标（包括总胆红素（图 S4b）、ALT、血红蛋白或绝对中性粒细胞计数（未显示数据））的基线变化之间也无持续关联；然而，需要注意的是，谷浓度是峰值暴露量的间接指标。 [2]

临床试验：耐受性[1]
在单药递增剂量的Beclabuvir/BCV单药治疗研究中，耐受性和安全性良好。未报告死亡、严重不良事件 (SAE) 或因不良事件 (AE) 而停药的情况。记录的不良事件均为轻度，但900 mg剂量组中有两例中度胃肠道事件，这可能至少部分归因于较高的胶囊服用量（18粒胶囊）。总体而言，治疗期间观察到的最常见不良事件为恶心、呕吐和头痛（29 例患者中有 2 例出现这三种症状）。
在基于干扰素的治疗方案中，Beclabuvir/BCV 在两种剂量（75 mg 和 150 mg，每日两次）下均耐受良好，最常见的不良事件（头痛、疲乏、恶心、食欲下降、易怒、抑郁和失眠）与单独使用聚乙二醇干扰素/利巴韦林（pegIFN/RBV）观察到的不良事件一致。
在评估该药物与达卡他韦（DCV）和阿司匹林（ASV）联合用药的试验中，AI443-014、UNITY-1 和 UNITY-2 试验中分别有 2 例、3 例和 1 例患者因不良事件而停止治疗。
在 AI443-014 试验中，基因 1 型患者发生 6 例严重不良事件（SAE），基因 4 型患者未发生 SAE；无死亡病例。在既往未接受过治疗的 GT1 患者中，共发生 3 例严重不良事件 (SAE)，其中 1 例发生在 Beclabuvir/BCV 75 mg 组（食管肿瘤，与联合治疗无关，导致治疗中断），2 例发生在 Beclabuvir/BCV 150 mg 组（其中 1 例为咽喉紧缩感，与联合治疗相关，导致治疗中断）。治疗期间最常见的不良事件 (AE)（≥ 10%）依次为头痛、腹泻、疲乏和恶心。在既往无应答的患者中，研究期间发生 3 例 SAE（颈椎神经根病、晕厥和治疗后 7 天发作的精神障碍）和 1 例 3 级 AE（晕厥）；所有 4 例事件均发生在 24 周的治疗期间，且被认为与研究药物无关。未观察到 4 级 AE。最常见（≥10%）的不良事件包括头痛、疲乏、瘙痒、腹泻和上呼吸道感染。在GT-4患者中，未报告严重不良事件、3/4级不良事件或死亡。GT-4患者中最常见的不良事件（在两组患者中发生率≥10%）为头痛（总体29%）、失眠（19%）、恶心（14%）和疼痛（14%）。
在UNITY-1研究中，共发生7例严重不良事件和1例死亡（治疗后）；所有事件均被认为与治疗无关。头痛、疲乏、腹泻和恶心是最常见的不良事件（发生率>10%）。3例（<1%）患者因不良事件而停止治疗。
在UNITY-2研究中，共发生3例被认为与治疗相关的严重不良事件，无死亡病例。疲劳、头痛、恶心、腹泻、失眠和瘙痒是最常见的报告不良事件（发生率≥10%）。接受三种直接抗病毒药物（DAA）联合利巴韦林（RBV）治疗的患者中，5%出现治疗期间血红蛋白水平<9 g/dl，而未接受RBV治疗的患者中无一例出现这种情况。一名患者因不良事件而停止DAA治疗。
在针对肾功能正常或受损的未感染丙型肝炎病毒（HCV）患者开展的开放标签、多剂量AI443110研究中，DCV TRIO给药后未报告死亡或严重不良事件。一名患者因不良事件而停止使用研究药物。一名中度肾功能损害组的受试者报告了与研究药物相关的中度血尿酸升高。在研究期间，29%的肾功能不全患者出现一种或多种不良事件（AE），大多为轻度且短暂，而健康受试者未报告不良事件。未发现任何具有临床意义的实验室异常被评为不良事件。总之，DCV-TRIO在肾功能不全患者和肾功能正常受试者中均表现出良好的耐受性。肾功能不全患者无需调整药物剂量，但未接受血液透析治疗的严重肾病患者应每日服用一次DCV-TRIO。

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Beclabuvir在两种剂量下均耐受性良好，未发生意外安全性事件（表1）。未报告死亡病例。三个组（≥92%）治疗期间不良事件的性质和发生率相似，最常见的不良事件通常与聚乙二醇干扰素/利巴韦林（pegIFN/RBV）治疗相关。治疗期间最常见的3/4级实验室异常为血液学异常，也是聚乙二醇干扰素/利巴韦林治疗的预期不良事件。在治疗期间和治疗后随访期间，3 例患者出现严重不良事件 (SAE)；其中 2 例患者的 SAE 被认为与研究药物无关。第 3 例患者（接受 75 mg 贝克拉布韦治疗）在治疗后随访第 4 周出现 3 级贫血和 2 级白细胞减少症，这些不良事件被认为与研究药物相关。6 例患者因不良事件 (AE) 而停止研究治疗（1 例接受 75 mg 贝克拉布韦治疗，2 例接受 150 mg 贝克拉布韦治疗，3 例接受安慰剂治疗）。4 例患者因在治疗的前 2 周内（第 5-10 天）出现确诊的结合型高胆红素血症（胆红素 ≥ 3 倍基线值且 > 正常值上限）而根据方案规定停止治疗（贝克拉布韦组和安慰剂组各 1 例，安慰剂组 2 例）。所有四例事件的严重程度均为轻度（1级）或中度（2级），直接胆红素水平范围为0.4至1.0 mg/dL（正常范围为0-0.2 mg/dL）。三名患者在停用所有研究药物后，胆红素异常完全消退或恢复至略高于基线水平，但一名安慰剂组患者在开始接受市售聚乙二醇干扰素/利巴韦林治疗后，胆红素异常持续存在。[2]

[1]. Beclabuvir for the treatment of hepatitis C. Expert Opin Investig Drugs. 2015;24(8):1111-21.

[2]. A randomized, placebo-controlled study of the NS5B inhibitor beclabuvir with peginterferon/ribavirin for HCV genotype 1. J Viral Hepat. 2015 Aug;22(8):658-64.

[3]. Limitations of daclatasvir/asunaprevir plus beclabuvir treatment in cases of NS5A inhibitor treatment failure. J Gen Virol. 2018 Aug;99(8):1058-1065.

贝克拉布韦已用于研究慢性丙型肝炎治疗的临床试验。
贝克拉布韦是一种非核苷类聚合酶抑制剂，可抑制丙型肝炎病毒 (HCV) 非结构蛋白 5B (NS5B)，一种 RNA 依赖性 RNA 聚合酶，具有潜在的抗 HCV 活性。给药后，贝克拉布韦经细胞内吸收后，通过变构作用与 HCV NS5B 聚合酶的非催化性 Thumb 1 位点结合，从而降低病毒 RNA 的合成和复制。HCV NS5B 蛋白对于 HCV RNA 基因组的复制至关重要。HCV 是一种小型、有包膜的单链 RNA 病毒，属于黄病毒科。

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引言：全球约有 1.85 亿人患有慢性丙型肝炎病毒 (HCV) 感染。目前，最有效的丙型肝炎病毒（HCV）感染抗病毒疗法可降低疾病进展至肝病晚期（肝硬化、肝细胞癌和死亡）的风险。然而，近年来，几种新型的直接抗HCV病毒药物已上市或正处于临床开发的后期阶段。
本文综述：本文重点介绍HCV聚合酶的变构非核苷酸抑制剂Beclabuvir。文章涵盖了其药代动力学、作用机制、耐受性和安全性以及耐药性。
专家意见：Beclabuvir的药代动力学、疗效和耐受性以及耐药屏障均非常理想。特别是，Beclabuvir与asunaprevir和daclatasvir联合用药，在HCV基因1型感染患者中可达到极高的病毒清除率（约90%），而HCV基因1型是全球最常见的基因型。因此，贝克拉布韦是抗击丙型肝炎病毒（HCV）感染的强效武器，应被视为定制化无干扰素联合治疗方案中的理想选择。[1]

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贝克拉布韦/BCV 的药代动力学特性允许每日两次给药。BCV 与蛋白酶抑制剂阿司匹林（ASV）和 NS5A 抑制剂达卡他韦（DCV）联合用药 12 周，在 HCV 基因 1 型感染患者中可达到约 90% 的持续病毒学应答率（SVR）。关于该联合方案在 HCV 基因 4 型感染患者中的疗效，目前数据虽少但非常令人鼓舞。其他非 1 型基因型的数据目前尚缺乏。该药物的耐受性和安全性令人满意。
综上所述，贝克拉布韦/BCV 是抗击 HCV 感染的强效武器，应被视为定制化无干扰素联合治疗方案中的理想选择。
HCV 感染的治疗正经历着令人振奋的快速变革。多种抗病毒药物组合的出现，使得不同基因型和疾病不同阶段的丙型肝炎病毒（HCV）感染患者都有可能治愈。然而，仍需评估以下几个方面：i) 直接抗病毒药物（DAA）在疾病晚期患者的耐受性和安全性；ii) 如果在疾病晚期清除病毒，病毒清除对生存率和生活质量的实际影响。换句话说，是否存在一个临界点，超过这个临界点，病毒清除不再具有显著的临床获益？iii) 针对每种情况的最佳药物组合；iv) 所有患者都能以合理的价格获得药物；以及 v) 病毒清除对轻度肝损伤但伴有HCV相关肝外损害的患者的潜在影响。
关于前两点，值得注意的是，目前尚无关于Beclabuvir/BCV 治疗失代偿期肝硬化的疗效和安全性研究。这可能是由于联合治疗方案中使用了ASV，而ASV在晚期肝硬化患者中是禁忌的，因为Child-Pugh B/C级患者由于ASV在肝脏中的分布异常，可能导致ASV血浆浓度升高。我们建议开展临床试验，评估Beclabuvir/BCV联合其他药物的疗效和安全性，以评价其在治疗HCV感染合并晚期肝病患者中的真正潜力。
关于如何选择性价比最高的联合方案，我们强调，大多数参与临床试验的患者感染的是HCV基因1型。这是全球最常见的基因型。然而，对于这种基因型，我们有几种联合方案具有相似的优异SVR率，例如索非布韦/雷迪帕韦、索非布韦/达卡他韦、索非布韦/西美普韦、奥比他韦-帕瑞他韦-利托那韦和达沙布韦。这种新药及其不同组合方案最主要的优势在于，它为医生提供了更多选择。一方面，这使得医生能够根据患者的具体情况制定个性化治疗方案，以应对可能存在的药物相互作用、耐药性或禁忌症。另一方面，大量针对丙型肝炎病毒（HCV）的药物也加剧了制药公司之间的竞争。市场竞争的一个基本作用是降低药品价格。这对于目前无力承担这些药物高昂价格的发展中国家而言，意义尤为重大。
最后，临床实践中常见的情况是，需要对合并HCV肝外疾病（例如混合型冷球蛋白血症或非霍奇金淋巴瘤）的患者进行管理，这些疾病可能危及生命并严重损害患者的生活质量[76-78]。然而，在某些情况下，肝外损害无法量化。事实上，HCV感染与一些代谢相关疾病有关，例如动脉粥样硬化、糖尿病和整体心血管风险。因此，一些数据显示，在达到持续病毒学应答（SVR）的丙型肝炎病毒（HCV）感染者中，心血管相关死亡率有所降低，这并不令人意外[79]。贝克拉布韦（Beclabuvir/BCV）的使用仍需评估，例如其对非1型基因型的疗效。事实上，尽管体外实验显示其具有泛基因型活性，但目前临床上仅对21例4型基因型患者使用过该药；此外，贝克拉布韦作为CYP3A4的底物以及OATP1B1和P-糖蛋白的抑制剂，可能存在药物相互作用。因此，人们期待开展贝克拉布韦与一些常用药物联合用药的药代动力学研究。综上所述，贝克拉布韦是一种耐受性和安全性良好的有效药物，与其他抗病毒药物联合使用时，在丙型肝炎病毒感染的代偿期可达到最佳疗效。 [1]

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在各剂量下，Beclabuvir及其代谢物BMS-794712达到最大血浆浓度的中位时间（Tmax）均为2小时（图S3）。在治疗第12周，Beclabuvir和BMS-794712的暴露量均高于剂量比例，代谢物与母体药物的AUC比值约为0.23–0.25，这与先前Beclabuvir I期研究中的单剂量数据（100–900 mg）一致。未观察到Beclabuvir复合谷浓度与病毒学应答（eRVR、SVR24、RVR、cEVR、SVR12；图S4a及未显示数据）、严重不良事件（SAE）发生率或因不良事件（AE）而停药之间存在关联（图S4a）。药物暴露量与特定临床实验室终点指标（包括总胆红素（图S4b）、ALT、血红蛋白或绝对中性粒细胞计数（数据未显示））的基线变化之间也未发现持续相关性；然而，需要注意的是，谷浓度是峰值暴露量的间接指标。
总之，这些数据表明，Beclabuvir与聚乙二醇干扰素/利巴韦林联合用于治疗慢性HCV基因1型感染有效且耐受性良好，并支持在全口服方案中使用beclabuvir。基于这些结果以及涉及直接抗病毒药物达克拉他韦（DCV；NS5A抑制剂）和阿舒那韦（ASV）的类似数据，一项针对基因1型感染的IIb期研究启动，该研究采用三联DAA组合Beclabuvir（75 mg或150 mg）、DCV（60 mg）和ASV（200 mg）。在一项试点队列研究（N = 66）中，这种全口服联合疗法在治疗12周或24周后，92%的患者达到SVR12，且应答率似乎与IL28B基因型和治疗持续时间无关。随后，一项针对更大规模（N = 166）患者队列的研究报告了类似的疗效和安全性结果，该研究采用75 mg或150 mg的贝克拉布韦剂量，治疗12周。目前正在进行贝克拉布韦（75 mg剂量）联合达卡他韦和阿司匹林三联疗法的3期临床试验，该疗法以固定剂量复方制剂的形式给药，目标人群包括初治患者和经治患者。[2]

C36H46CLN5O5S

696.3

695.29

C, 62.10; H, 6.66; Cl, 5.09; N, 10.06; O, 11.49; S, 4.60

958002-36-3

958002-36-3 (HCl);958002-33-0;

72722244

Typically exists as solid at room temperature

113 Ų

2

7

6

48

1320

4

Cl.CN(S(NC(C1C=CC2C(=C3N(C=2C=1)C[C@]1(C(N2[C@@H]4CC[C@H]2CN(C4)C)=O)[C@@H](C1)C1=C3C=CC(OC)=C1)C1CCCCC1)=O)(=O)=O)C

IHXVACFNNPBRLK-OZSFMWOHSA-N

InChI=1S/C36H45N5O5S.ClH/c1-38(2)47(44,45)37-34(42)23-10-14-28-31(16-23)40-21-36(35(43)41-24-11-12-25(41)20-39(3)19-24)18-30(36)29-17-26(46-4)13-15-27(29)33(40)32(28)22-8-6-5-7-9-22;/h10,13-17,22,24-25,30H,5-9,11-12,18-21H2,1-4H3,(H,37,42);1H/t24-,25+,30-,36-;/m0./s1

(4bS,5aR)-12-cyclohexyl-N-(N,N-dimethylsulfamoyl)-3-methoxy-5a-((1R,5S)-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octane-8-carbonyl)-4b,5,5a,6-tetrahydrobenzo[3,4]cyclopropa[5,6]azepino[1,2-a]indole-9-carboxamide hydrochloride.

Beclabuvir hydrochloride ;BMS-791325 BMS 791325; Beclabuvir hydrochloride; BMS-791325 hydrochloride; 958002-36-3; Beclabuvir hydrochloride [USAN]; UNII-3KU5345YJF; 3KU5345YJF; BMS-791325-08; BECLABUVIR HYDROCHLORIDE [MI]; BMS791325; Beclabuvir HCl

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。