| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
CCR1
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在趋化性测试中，CCX354 具有很强的作用，IC50 小于 100 nM[1]。
研究人员比较了几种研究得很好的CCR1拮抗剂，包括AZD4818、BX471、CCX354、CP-481715、MLN-3897和PS899877，以确定它们在体外使用RPMI 8226细胞制备的膜抑制[（125）I]-CCL3结合的能力，RPMI 8226细胞是一种内源性表达CCR1的人类多发性骨髓瘤细胞系。此外，使用RPMI 8226细胞评估拮抗剂调节CCL3介导的CCR1内化和CCL3介介导的细胞迁移的能力。由于许多GPCR通过与G蛋白驱动的途径分离和不同的β-arrestin依赖途径发出信号，研究人员还评估了这些化合物改变β-rarestin易位的能力。 关键结果：CCR1拮抗剂在抑制CCL3与骨髓瘤细胞结合的能力以及抑制G蛋白依赖性和非依赖性功能反应的能力方面存在明显差异。 结论和意义：研究表明，组织表型似乎与CCR1有关。此外，对于CCR1拮抗剂，抑制β-arrestin易位不一定与趋化性或受体内化有关[2]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
CCX354 表现出优异的药代动力学特性和体内抗炎活性 [1]。
在双盲、安慰剂对照、单剂量和多剂量I期研究（1-300mg/天口服剂量）中评估了新型CCR1拮抗剂CCX354的安全性和药代动力学（PK）/药效学（PD）特征。CCX354具有良好的耐受性，并显示出线性剂量暴露曲线，在300mg剂量下半衰期接近7小时。使用I期受试者全血中荧光标记的CCL3结合来评估血液单核细胞上CCR1受体阻断的程度，该程度与药物的血浆浓度密切相关。单次服用100mg CCX354后，在12小时的时间点实现了高水平的受体覆盖。临床前研究表明，有效阻断炎性细胞浸润组织需要始终对血液白细胞进行≥90%的CCR1抑制。CCX354与其他CCR1拮抗剂的特性比较为CCX354在类风湿性关节炎（RA）中的持续临床开发提供了剂量选择[3]。 |
| 酶活实验 |
结合分析[2]
如前所述（Gilchrist等人，1998），膜由HEK_CCR1或RPMI 8226细胞制备，并在-80°C下等分储存，直至需要。对于竞争试验，将膜悬浮在由50 mM HEPES、pH 7.5、1 mM EDTA和5 mM MgCl2组成的HEM缓冲液中，浓度为10μg mL-1。将化合物在HEM缓冲液中连续稀释至10倍浓度，然后加入膜混合物中。加入终浓度为2 pM[125I]-CCL3的试管，在37°C下振荡培养2小时。进行初步实验以确定在2小时的时间点已达到平衡（数据未显示）。通过Whatman GF/C滤纸过滤，分离结合和游离的放射性配体，该滤纸浸泡在由20 mm Tris-HCl、pH 7.4、0.5 mm EDTA和5 mm MgCl2组成的TEM2缓冲液中，并补充0.3%聚乙烯亚胺和20 mg·mL-1 BSA，使用组织采集器。用冰冷的TEM2缓冲液洗涤过滤器两次，然后使用Packard Gamma计数器计数（每个样品1分钟）。结合试验进行了两次，通过在某些样品中同时加入冷CCL3（100 nM）和放射性配体来确定非特异性结合。通过非线性回归分析对结合实验的数据进行分析，以确定IC50值。对于饱和实验，我们使用10μg mL-1的HEK_CCR1或RPMI 8226细胞制备的膜，并在有和没有冷CCL3（100 nM）的情况下增加[125I]-CCL3（0-100 pM）的浓度，以确定非特异性结合。在37°C下进行2小时的结合实验，使用GraphPad Prism 6.0版确定KD和Bmax值。如表2所示，重复进行两次实验。 PathHunterβ-arrestin易位测定[2] 为了定量评估β-arrestin易位，我们使用了DiscoveRx Corporation的酶片段互补形式，其中CCR1与源自β-半乳糖苷酶的ProLink™肽融合，β-arrestin2与β-半乳糖酶的N端缺失突变体[酶受体（EA）]融合。添加CCL3后，β-arrestin-EA融合蛋白结合活化的CCR1-ProLink。PathHunter hCCR1_CHO细胞在Optimem中以每孔1×104个细胞的比例铺在96孔半体积白色板上，并允许其附着过夜。初步实验确定CCL3的EC50为200 pM。在Optimem中制备拮抗剂的连续稀释液，并将其加入三个孔中。将平板在37°C下与5%CO2一起孵育90分钟，然后加入浓度逐渐增加的CCL3，并在37°℃下与5%二氧化碳一起孵育另外60分钟。加入检测试剂，并在室温下孵育平板60分钟。使用DTX800多模读板器上的发光设置读取板。pKB值是在GraphPad Prism 6.0版上使用Gaddum-Schild方程确定的。实验按表3所示进行三次并重复。 |
| 细胞实验 |
受体内化试验[2]
使用流式细胞术进行受体内化实验。按照PE偶联抗CCR1和FITC偶联抗CCR5的制造商的建议对表面CCR1和CCR5进行染色）。简而言之，将5×106个RPMI 8226细胞悬浮在含有1%FBS的RPMI 1640培养基中，并与不同浓度的拮抗剂一起孵育。15分钟后，用CCL3（1 nM）激活细胞，并在37°C下孵育2小时。用含有1%FBS的RPMI 1640培养基洗涤后，将细胞悬浮在含有1%FBS和10μL每种mAb的PBS中。此后，细胞在4°C的黑暗中孵育30分钟。用含1%FBS的PBS洗涤两次后，使用Cell Quest软件在BD FACScalibur流式细胞仪上分析样品。至少获得了10000个活动。健康人群在FITC与PE图上进行了识别和门控。对于细胞表面表达图，没有暴露于CCL3的左上象限（高CCR1/低CCR5）的细胞百分比设置为1.0，显示了仅1 nM CCL3（对照）和1 nM CCR3随CCR1拮抗剂浓度增加的荧光倍数变化。为了计算IC50值（表3），将含有1 nM CCL3（无拮抗剂）的样品设置为1.0，并使用GraphPad Prism 6.0版进行非线性回归分析。如表3所示，重复实验。 趋化性测定[2] 所有趋化性实验均使用孔径为8μm的MultiScreen®迁移侵入和趋化性滤板。我们利用荧光染料Calcein AM标记RMPI 8226细胞。用补充了10 mM HEPES（HHBSS）的HBSS洗涤细胞一次，并将其悬浮在4×106个细胞mL−1。加入钙黄绿素AM（2μM），在37°C下孵育细胞30分钟。然后用HHBSS洗涤细胞两次，然后以2×106个细胞mL−1的浓度悬浮在HHBSS中。将标记细胞（50μL）与拮抗剂（或载体对照）一起加入顶室。底部腔室包含150μL对照培养基（HHBSS）或化学引诱剂（对照培养基中的1 nM CCL3）。将平板置于37°C的培养箱中3小时。3小时后，从底部腔室中取出50μL含细胞的培养基，并转移到底部透明的96孔黑色平板上。该印版是在DTX800多模印版阅读器上使用EX490/EM520读取的。对于趋化性，每个点进行四次，并减去自发迁移到趋化性缓冲液的细胞数量。趋化指数是通过将拮抗剂存在下迁移的细胞数量除以自发迁移到CCL3的细胞数量来确定的。实验进行了四次，使用非线性回归分析（GraphPad Prism 6.0版）计算IC50值。对于表3，每种化合物的三次重复实验的趋化指数取平均值。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
CCX354-C 已用于类风湿性关节炎治疗研究的临床试验中。
背景和目的：研究人员认为趋化因子受体 CCR1 在多发性骨髓瘤中发挥作用。使用 CCR1 反义抗体和中和抗体的研究表明，在小鼠模型中，受体下调会改变疾病进展。最近，利用注射了人骨髓瘤细胞的 scid 小鼠进行的实验表明，CCR1 拮抗剂 BX471 可减少溶骨性病变，而 CCR1 拮抗剂 MLN-3897 可阻止骨髓瘤细胞粘附于破骨细胞。然而，关于 CCR1 拮抗剂在骨髓瘤细胞中的药理学信息仍然有限。[2] |
| 分子式 |
C22H22CLN7O2
|
|---|---|
| 分子量 |
451.908782482147
|
| 精确质量 |
451.152
|
| 元素分析 |
C, 58.47; H, 4.91; Cl, 7.84; N, 21.70; O, 7.08
|
| CAS号 |
1010073-75-2
|
| PubChem CID |
135565361
|
| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
|
| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
778.4±60.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
424.6±32.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.7 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.724
|
| LogP |
1.24
|
| tPSA |
92.2
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
32
|
| 分子复杂度/Complexity |
650
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
ZIMLRKWQDLVPEK-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C22H22ClN7O2/c1-32-18-13-15(4-5-17(18)23)28-9-11-29(12-10-28)19(31)14-30-22-16(3-2-6-26-22)20(27-30)21-24-7-8-25-21/h2-8,13H,9-12,14H2,1H3,(H,24,25)
|
| 化学名 |
1-[4-(4-chloro-3-methoxyphenyl)piperazin-1-yl]-2-[3-(1H-imidazol-2-yl)pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl]ethanone
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| 别名 |
CCX354; 1010073-75-2; CCX-354; CCR1 antagonist 1; 22PQS5K5TY; GSK-2941266; CCX354-C; Ethanone, 1-(4-(4-chloro-3-methoxyphenyl)-1-piperazinyl)-2-(3-(1H-imidazol-2-yl)-1H-pyrazolo(3,4-b)pyridin-1-yl)-;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2128 mL | 11.0641 mL | 22.1283 mL | |
| 5 mM | 0.4426 mL | 2.2128 mL | 4.4257 mL | |
| 10 mM | 0.2213 mL | 1.1064 mL | 2.2128 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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