| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
CCR1
CCX354 targets the chemokine receptor CCR1. By acting as a selective antagonist of CCR1, it exerts anti-inflammatory effects by inhibiting CCR1-mediated recruitment and infiltration of inflammatory cells. CCR1 is involved in the migration of monocytes, macrophages, and other immune cells to sites of inflammation. Blocking this receptor reduces tissue inflammation and damage. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在趋化性试验中，CCX354 具有很强的趋化活性，IC50 值低于 100 nM[1]。研究人员比较了几种研究较为深入的 CCR1 拮抗剂，包括 AZD4818、BX471、CCX354、CP-481715、MLN-3897 和 PS899877，以评估它们在体外抑制 [(125)I]-CCL3 与 RPMI 8226 细胞膜结合的能力。RPMI 8226 细胞是一种内源性表达 CCR1 的人类多发性骨髓瘤细胞系。此外，研究人员还使用 RPMI 8226 细胞评估了这些拮抗剂调节 CCL3 介导的 CCR1 内吞作用和 CCL3 介导的细胞迁移的能力。由于许多GPCR通过β-arrestin依赖性通路传递信号，而这些通路与G蛋白驱动的通路截然不同，研究人员还评估了这些化合物改变β-arrestin转位的能力。主要结果：CCR1拮抗剂在抑制CCL3与骨髓瘤细胞结合的能力以及抑制G蛋白依赖性和非依赖性功能反应的能力方面存在明显差异。结论和意义：我们的研究表明，组织表型似乎与CCR1相关。此外，对于CCR1拮抗剂而言，β-arrestin转位的抑制似乎并不一定与趋化性或受体内化相关[2]。体外实验表明，CCX354是一种强效的CCR1拮抗剂。它选择性地抑制CCR1介导的信号传导和细胞迁移。该化合物的活性已通过受体结合和功能测定得到表征，证明其对CCR1具有高亲和力和选择性。其抗炎活性已在多种体外模型中得到证实。
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| 体内研究 (In Vivo) |
CCX354展现出优异的药代动力学特性和体内抗炎活性[1]。
在一项双盲、安慰剂对照、单次和多次给药的I期临床试验（口服剂量1-300 mg/天）中，评估了新型CCR1拮抗剂CCX354的安全性和药代动力学/药效学特征。CCX354耐受性良好，剂量-暴露曲线呈线性关系，300 mg剂量下的半衰期接近7小时。采用荧光标记的CCL3结合法检测I期受试者全血中血液单核细胞上CCR1受体的阻断程度，该程度与药物血浆浓度密切相关。单次服用100 mg CCX354后，12小时时间点即可达到较高的受体覆盖率。临床前研究表明，有效阻断炎症细胞浸润组织需要始终保持血液白细胞上CCR1抑制率≥90%。CCX354的特性与其他已发表的CCR1拮抗剂的特性进行比较，为CCX354在类风湿性关节炎（RA）的持续临床开发中的剂量选择提供了依据[3]。 在体内，CCX354在临床前模型和临床试验中均显示出抗炎活性。它曾在CARAT-2临床试验中接受评估，用于治疗类风湿性关节炎，这是一项随机、安慰剂对照研究。该化合物抑制CCR1介导的炎症细胞募集的能力使其成为治疗炎症性疾病的一种有前景的候选药物。 |
| 酶活实验 |
结合实验[2]
按照先前描述的方法（Gilchrist等人，1998）从HEK_CCR1或RPMI 8226细胞制备膜，并分装后于−80°C保存备用。在竞争实验中，将膜悬浮于HEM缓冲液中，浓度为10 μg mL−1。HEM缓冲液由50 mM HEPES（pH 7.5）、1 mM EDTA和5 mM MgCl2组成。将化合物用HEM缓冲液进行10倍系列稀释，然后加入到膜混合物中。加入终浓度为2 pM的[125I]-CCL3，并将试管在37°C下振荡孵育2小时。进行初步实验以确定在2小时时间点是否达到平衡（数据未显示）。使用组织收集器，通过浸泡在TEM2缓冲液（20 mM Tris-HCl，pH 7.4，0.5 mM EDTA和5 mM MgCl2，并添加0.3%聚乙烯亚胺和20 mg·mL−1 BSA）中的Whatman GF/C滤纸过滤，分离结合态和游离态放射性配体。滤纸用冰冷的TEM2缓冲液洗涤两次，然后使用Packard γ计数器进行计数（每个样品1分钟）。结合实验重复两次，并通过在部分样品中加入放射性配体的同时加入冷CCL3（100 nM）来测定非特异性结合。结合实验数据通过非线性回归分析进行分析，以确定IC50值。在饱和实验中，我们使用浓度为 10 μg mL⁻¹ 的 HEK_CCR1 或 RPMI 8226 细胞膜，以及浓度递增的 [¹²⁵I]-CCL3（0–100 pM），并分别加入或不加入非特异性 CCL3（100 nM）以确定非特异性结合。结合实验在 37°C 下进行 2 小时，KD 和 Bmax 值使用 GraphPad Prism 6.0 版本进行测定。实验重复两次，具体重复次数见表2。 PathHunter β-arrestin 转位分析 [2] 为了定量评估 β-arrestin 转位，我们采用了 DiscoveRx 公司的酶片段互补模型，其中 CCR1 与源自 β-半乳糖苷酶的 ProLink™ 肽融合，β-arrestin 2 与 β-半乳糖苷酶的 N 端缺失突变体 [酶受体 (EA)] 融合。加入 CCL3 后，β-arrestin-EA 融合蛋白与活化的 CCR1-ProLink 结合。将 PathHunter hCCR1_CHO 细胞以每孔 1 × 10⁴ 个细胞的密度接种于 96 孔半体积白色板中，培养基为 Optimem，并过夜培养使其贴壁。初步实验确定 CCL3 的 EC50 为 200 pM。将拮抗剂进行系列稀释，稀释液用Optimem培养基配制，并加入三复孔中。将培养板置于37℃、5% CO₂条件下孵育90分钟，然后加入递增浓度的CCL3，继续在37℃、5% CO₂条件下孵育60分钟。加入检测试剂后，将培养板在室温下孵育60分钟。使用DTX800多功能酶标仪的发光模式读取结果。使用GraphPad Prism 6.0软件，通过Gaddum/Schild方程计算pKB值。所有实验均进行三复孔，并按表3所示重复进行。 对于体外受体结合实验，评估CCX354与CCR1的结合能力。将放射性标记的趋化因子配体（例如，¹²⁵I-CCL3/MIP-1α）与含有CCR1和不同浓度CCX354的膜制剂孵育。通过过滤分离结合的和游离的配体。结合亲和力（Ki）由竞争性结合曲线计算得出。选择性通过与其他趋化因子受体的比较进行评估。 |
| 细胞实验 |
受体内吞作用实验[2]
采用流式细胞术进行受体内吞作用实验。CCR1和CCR5表面染色按照PE标记的抗CCR1抗体和FITC标记的抗CCR5抗体生产商的建议进行。简而言之，将5 × 10⁶个RPMI 8226细胞悬浮于含1% FBS的RPMI 1640培养基中，并与不同浓度的拮抗剂孵育。15分钟后，用CCL3（1 nM）激活细胞，并在37°C下孵育2小时。用含1% FBS的RPMI 1640培养基洗涤后，将细胞悬浮于含1% FBS的PBS中，并加入10 μL的每种单克隆抗体。之后，将细胞在4°C避光孵育30分钟。用含1% FBS的PBS缓冲液洗涤两次后，使用BD FACScalibur流式细胞仪和Cell Quest软件分析样品。至少采集10,000个事件。通过FITC与PE的对比图识别并设门健康细胞群。对于细胞表面表达图，将未暴露于CCL3的左上象限（高CCR1/低CCR5）细胞百分比设定为1.0，并显示仅用1 nM CCL3（对照）以及1 nM CCL3联合递增浓度CCR1拮抗剂处理后荧光强度的倍数变化。为了计算IC50值（表3），将仅用1 nM CCL3（无拮抗剂）处理的样品设定为1.0，并使用GraphPad Prism 6.0版本进行非线性回归分析。实验重复进行，具体步骤见表3。 趋化性实验[2] 所有趋化性实验均使用孔径为8 μm的MultiScreen®-迁移侵袭和趋化性滤板。我们使用荧光染料Calcein AM标记RMPI 8226细胞。细胞用含10 mM HEPES的HBSS缓冲液（HHBSS）洗涤一次，并以4 × 10⁶个细胞/mL的浓度悬浮。加入Calcein AM（2 μM），细胞在37°C孵育30分钟。然后用HHBSS洗涤两次，并将细胞重悬于HHBSS中，浓度为2 × 10⁶个细胞/mL。将标记的细胞（50 μL）与拮抗剂（或溶剂对照）一起加入上室。下室中含有150 μL对照培养基（HHBSS）或趋化因子（1 nM CCL3溶于对照培养基）。将培养板置于37°C培养箱中培养3小时。3小时后，从下室中取出50 μL含细胞培养基，转移至底部透明的96孔黑色板中。使用DTX800多功能酶标仪，通过EX490/EM520模式读取该孔板。趋化性实验中，每个点重复四次，并减去自发迁移至趋化缓冲液的细胞数。趋化指数通过拮抗剂存在下迁移的细胞数除以自发迁移至CCL3的细胞数计算得出。实验重复四次，IC50值采用非线性回归分析计算。表3中，每种化合物的趋化指数取自三次重复实验的平均值。 在体外细胞实验中，CCX354用于表达CCR1的细胞，例如THP-1单核细胞或原代人单核细胞。细胞用不同浓度（通常为0.1 nM-10 µM）的化合物处理，并用CCR1配体（例如CCL3、CCL5）刺激。趋化性通过Transwell迁移实验测定。钙动员通过荧光钙指示剂测定。IC₅₀值由剂量反应曲线确定。 |
| 动物实验 |
在体内动物实验中，CCX354 通常以口服方式给药于炎症性疾病小鼠模型，例如胶原诱导性关节炎 (CIA) 或实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE)。该化合物的给药剂量范围为每日 1-30 mg/kg，持续 2-4 周。疾病严重程度的评估方法包括临床评分、爪肿胀程度测量以及受累组织的组织病理学分析。炎症细胞因子水平则通过检测血清或组织样本中的水平来评估。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
CCX354的药代动力学数据显示其具有口服生物利用度。该化合物的分子量为451.91 g/mol，分子式为C₂₂H₂₂ClN₇O₂。其口服生物利用度、半衰期和其他药代动力学参数已在临床前研究中得到表征。该化合物在肝脏代谢，其药代动力学特征支持每日一次或两次给药。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
CCX354的毒理学数据有限。作为一种CCR1拮抗剂，它在治疗剂量下通常耐受性良好。常见不良反应可能包括胃肠道不适。该化合物已在类风湿性关节炎的临床试验中进行评估，并在这些研究中证实了其安全性。然而，它目前尚未获准用于临床。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
CCX354-C 已用于治疗类风湿性关节炎的临床试验。
背景和目的：研究人员认为趋化因子受体 CCR1 在多发性骨髓瘤中发挥作用。使用 CCR1 反义抗体和中和抗体的研究表明，受体下调会改变小鼠模型中的疾病进展。最近，使用注射了人骨髓瘤细胞的 scid 小鼠进行的实验表明，CCR1 拮抗剂 BX471 可减少溶骨性病变，而 CCR1 拮抗剂 MLN-3897 可阻止骨髓瘤细胞粘附于破骨细胞。然而，关于 CCR1 拮抗剂在骨髓瘤细胞中的药理学信息仍然有限。[2] CCX354 是一种仅供研究使用的化合物，尚未获准用于临床应用。其分子量为 451.91，分子式为 C₂₂H₂₂ClN₇O₂。该化合物已被研究作为治疗类风湿性关节炎的潜在药物。它可从多家科研化学品供应商处获得，用于趋化因子受体研究和抗炎药物研发。 |
| 分子式 |
C22H22CLN7O2
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|---|---|
| 分子量 |
451.908782482147
|
| 精确质量 |
451.152
|
| 元素分析 |
C, 58.47; H, 4.91; Cl, 7.84; N, 21.70; O, 7.08
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| CAS号 |
1010073-75-2
|
| PubChem CID |
135565361
|
| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
|
| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
778.4±60.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
424.6±32.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.7 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.724
|
| LogP |
1.24
|
| tPSA |
92.2
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
32
|
| 分子复杂度/Complexity |
650
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
ZIMLRKWQDLVPEK-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H22ClN7O2/c1-32-18-13-15(4-5-17(18)23)28-9-11-29(12-10-28)19(31)14-30-22-16(3-2-6-26-22)20(27-30)21-24-7-8-25-21/h2-8,13H,9-12,14H2,1H3,(H,24,25)
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| 化学名 |
1-[4-(4-chloro-3-methoxyphenyl)piperazin-1-yl]-2-[3-(1H-imidazol-2-yl)pyrazolo[3,4-b]pyridin-1-yl]ethanone
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| 别名 |
CCX354; 1010073-75-2; CCX-354; CCR1 antagonist 1; 22PQS5K5TY; GSK-2941266; CCX354-C; Ethanone, 1-(4-(4-chloro-3-methoxyphenyl)-1-piperazinyl)-2-(3-(1H-imidazol-2-yl)-1H-pyrazolo(3,4-b)pyridin-1-yl)-;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2128 mL | 11.0641 mL | 22.1283 mL | |
| 5 mM | 0.4426 mL | 2.2128 mL | 4.4257 mL | |
| 10 mM | 0.2213 mL | 1.1064 mL | 2.2128 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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