Cgp 43487

NMDA/N-methyl-D-aspartate receptor

尼卡地平、硝苯地平和氟桂利嗪分别在20、20和15mg/kg的剂量下显示出抗惊厥活性（表现为强直性后肢伸展的癫痫发作阈值显著升高）。在联合研究中，CGP 40116[D-（E）-2-氨基-4-甲基-5-膦酰基-3-戊烯酸]或其甲酯衍生物（CGP 43487）分别以0.25和3.5 mg/kg的恒定剂量给药。在这些剂量下，两种竞争性NMDA受体拮抗剂都能显著提高惊厥阈值。尼卡地平、硝苯地平和氟桂利嗪的最大剂量（或更低）不影响惊厥阈值（分别为15、15和10mg/kg）。CGP 40116和CGP 43487的保护活性均被三种Ca2+通道抑制剂剂量依赖性地增强。联合治疗导致的运动障碍（在烟囱测试中评估）和长期记忆缺陷（在被动回避任务中测量）与单独使用CGP 40116或CGP 43487产生的相似。我们的结果表明，尼卡地平、硝苯地平和氟桂利嗪显著增强了CGP 40116和CGP 43487在小鼠体内的保护活性，但没有不良反应。[1]

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不同剂量的非竞争性NMDA受体阻断剂MK-801（0.03-1mg/kg IP）对大鼠的给药诱导了运动活动的刺激或减少，具体取决于剂量，而竞争性的NMDA拮抗剂CGP 43487（0.188-6mg/kg IP）和APV（2.5-20微克/大鼠ICV）在最高剂量下抑制了运动。与MK-801和APV治疗不同，CGP 43487的给药不会导致旋转棒试验性能的损害。竞争性和非竞争性NMDA拮抗剂在本身没有任何行为效应的剂量下，都能增强阿扑吗啡（0.25 mg/kg SC）引起的反应。特别是，MK-801给药对舔舐事件的发生影响较小，但CGP 43487和APV治疗显著增加了舔舐次数；所有的预处理都加剧了啃咬的感觉；嗅闻、运动、梳理和饲养的发生不受NMDA拮抗剂给药的影响。结果表明，促进多巴胺能功能而不引起运动损伤的竞争性拮抗剂可能是治疗帕金森病的有用补充剂[2]。

运动活性[2]
将不同组别的未接受过任何处理的大鼠（每组 n = 8 至 12 只）分别注射不同剂量的 MK-801（0.03、0.0625、0.125、0.25 和 1 mg/kg，腹腔注射）、CGP 43487（0.188、0.375、0.75、3 和 6 mg/kg，腹腔注射）或 APV（2、5、5、10 和 20 μg/只，脑室内注射），分别在 30 分钟、180 分钟或 5 分钟后，将它们放入活动记录笼（Dall'Olio 等，1988）中，记录其 60 分钟的运动情况。

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刻板行为[2]
皮下注射诱导的刻板行为在预先注射了MK-801（0.03和0.0625 mg/kg，腹腔注射，注射前30分钟）、CGP 43487（0.375和0.75 mg/kg，腹腔注射，注射前3小时）或APV（2.5和5 pg/只，脑室内注射，注射前5分钟）的不同组大鼠（每组n=8-16）中观察到了阿扑吗啡（0.25 mg/kg）的反应。动物被置于活动记录笼中，并在注射多巴胺能激动剂前适应实验环境2小时。阿扑吗啡给药10分钟后，使用行为检查表技术（Fray等人，1980；Molloy和Waddington，1984，1987）对动物进行评估。在连续5分钟内，以1分钟为间隔，对每只大鼠进行5秒的单独观察，以确定是否存在以下行为（单独或组合出现）：嗅探（Sn）；舔舐（Lk）；啃咬（Gn）；梳理毛发（Gr，任何形式）；静止（St；一动不动，无任何行为表现）；运动（L）；站立（R）。使用行为检查表进行评估后，采用传统的0-6分制评分标准观察动物的刻板行为（STR）：0 = 睡眠或不活动；1 = 间歇性正常活动；2 = 间歇性活动，伴有短暂的嗅探或站立；3 = 持续的刻板行为，例如沿固定路径嗅探或站立；4 = 刻板的嗅探或站立，固定在一个位置；5 = 刻板行为，伴有短暂的舔舐或啃咬；6 = 持续的舔舐或啃咬。该观察周期由不知晓处理方式的观察者以10分钟的间隔重复三次。每只大鼠仅使用一次（从上午9:00到下午3:00）。

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旋转杆测试[2]
使用大鼠旋转杆跑步机。大鼠以30分钟的间隔进行四次训练，以适应该装置。只有在所有训练试验中都能在旋转杆（速度16 rpm）上保持平衡至少10秒的动物才被用于药物效应的测定。训练24小时后，观察大鼠（每组n = 12）在接受MK-801（0.5和1 mg/kg，腹腔注射）、CGP 43487（3 mg/kg，腹腔注射）或APV（10 pg/只，脑室内注射）之前在旋转杆上的表现；分别在降雨30、180或5次后，再次评估动物在转棒上停留的时间。
CGP 43487溶于生理盐水，并进行腹腔注射。

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烟囱试验[2]
采用Boissier等人（1960）的烟囱试验来评估CGP 40116或CGP 43487单独或与Ca2+通道抑制剂联合使用对运动能力的影响。该试验中，动物无法在60秒内向后爬上管道（内径3厘米，长度25厘米）即表明其运动功能受损。动物在治疗前24小时进行预训练，无法完成试验的动物被排除在实验组之外。第二天，小鼠接受化合物单独或联合治疗。结果以未完成测试的动物百分比计算。

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被动回避习得和保持测试[2]
根据Venault等人（1986）的研究，穿行式被动回避任务可用于测量长期记忆。我们使用该测试比较了CGP 40116、CGP 43487、尼卡地平、硝苯地平、氟桂利嗪单独使用或联合使用（NMDA受体拮抗剂+Ca2-通道抑制剂）对小鼠被动回避习得的影响。实验程序细节已在其他文献中发表（Borowicz等人，1995）。简而言之，在小鼠进入黑暗隔间后（前一天它们会因进入该隔间而受到0.8 mA、持续2秒的电击惩罚），如果小鼠能够避开该隔间超过60秒，则不会出现长期记忆障碍，并被认为记住了该任务。记忆保持率以无记忆障碍小鼠的百分比表示。
使用无菌生理盐水溶解CGP 40116和CGP 43487。

[1]. Ca2+ channel blockade and the antielectroshock activity of NMDA receptor antagonists, CGP 40116 and CGP 43487, in mice. Eur J Pharmacol. 1996 Sep 19;312(1):27-33.
[2]. The competitive NMDA antagonists CGP 43487 and APV potentiate dopaminergic function. Psychopharmacology (Berl). 1995 Apr;118(3):310-5.

研究表明，Ca²⁺通道激动剂BAY k-8644仅抑制竞争性NMDA受体拮抗剂（CGP 37849和o-CPP-ene）的抗惊厥作用，而对非竞争性NMDA受体拮抗剂（MK-801）和非NMDA受体拮抗剂（NBQX和GYKI 52466）在小鼠电休克模型中的抗惊厥作用完全无效（Czuczwar等，1994）。这些发现提示，CGP 40116和CGP 43487抗惊厥疗效的增强可能是由于Ca²⁺通道抑制剂的中枢介导作用所致。同样，中枢活性Ca²⁺通道抑制剂可以增强传统抗癫痫药物的抗惊厥疗效，但维拉帕米则不能（Czuczwar等人，1990a,b），因为维拉帕米的脑渗透性有限（Hamann等人，1983）。癫痫样活动是一系列事件，可能由兴奋性氨基酸触发（Hayashi，1954；Bradford和Peterson，1987；Meldrum，1991）。首先，L-谷氨酸激活NMDA受体/通道复合物，导致初始去极化后Ca²⁺离子通过受体激活的通道进入细胞（Mayer和Miller，1990）。此外，NMDA激活的去极化会扩散至电压门控Ca²⁺通道，最终导致其激活和随后的大量Ca²⁺内流（Courtney等，1990；Mayer和Miller，1990）。因此，NMDA受体拮抗剂可能通过NMDA受体直接或通过电压门控Ca²⁺通道间接减弱Ca²⁺内流。类似地，Ca²⁺通道抑制剂也可能存在类似的“串扰”。这种解释或许可以说明Ca²⁺通道抑制剂本身以及与CGP 40116或CGP 43487联合用药的抗惊厥活性。还有证据表明，一些Ca²⁺通道抑制剂直接与NMDA受体复合物结合，并特异性地阻断其功能（Hashim等，1988；Skeen等，1993）。然而，除少数例外情况外，该假设缺乏实验支持。此外，钙离子通道抑制剂对突触前兴奋性氨基酸释放的抑制作用也不能完全排除（De Sarro等，1988；Janis和Triggle，1991）。尼卡地平、硝苯地平和氟桂利嗪以类似的方式增强了CGP 40116和CGP 43487的抗惊厥作用，这可能表明钙离子通道阻滞是造成这种效应的原因。氟桂利嗪除了这种作用机制外，还可能阻断钠离子通道（Ashton和Wauquier，1986），这种作用也可能参与其中。遗憾的是，NMDA受体拮抗剂的潜在抗癫痫应用受到其副作用的限制（Schmidt，1994；Witkin，1995）。事实上，Ca²⁺通道抑制剂显著增强CGP 40116或CGP 43487的保护作用的同时，也伴有行为障碍。然而，这种治疗癫痫的新策略（Ca²⁺通道抑制剂+NMDA受体拮抗剂）不应立即被摒弃，因为更具特异性且毒性更低的化合物可能很快就会问世。这种多药理学方法是否可用于治疗其他神经系统疾病，还有待进一步研究。[1]

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根据其他研究（Liljequist 1991; Ornstein et al. 1987; Starr and Starr 1994a,b），虽然低剂量的MK-801会诱发明显的活动过度，但任何剂量的CGP 43487和APV均不会增加大鼠的活动。高剂量的非竞争性或竞争性NMDA受体拮抗剂均能降低动物的自发运动能力，并表现出不同的行为特征。MK-801导致动物姿势扁平化和后肢外展，而非竞争性受体拮抗剂则仅引起更明显的镇静作用。事实上，转棒试验表明，CGP 43487治疗前后动物的运动协调性无显著差异，提示竞争性受体拮抗剂对动物自发行为的影响小于非竞争性受体拮抗剂，并且在所研究的拮抗剂中，CGP 43487可能具有明显的治疗优势。本研究最有趣的结果与NMDA受体拮抗剂对多巴胺能刺激诱导的行为效应的作用有关。竞争性或非竞争性NMDA受体拮抗剂均能增强混合型D1/D2受体激动剂阿扑吗啡的反应，而这些药物本身并不影响动物的自发行为。然而，与预先使用两种竞争性NMDA受体拮抗剂不同，MK-801的给药并未显著改变舔舐反应的频率。根据Fray等人（1980）的研究，在高剂量阿扑吗啡下，舔舐行为并不明显，取而代之的是啃咬行为。这表明多巴胺受体的过度刺激会优先导致啃咬行为。然而，在本研究中，MK-801不可能增强阿扑吗啡的反应以抵消舔舐行为，因为即使是较低剂量的非竞争性NMDA受体拮抗剂也没有增加这种行为的频率（数据未显示）。此外，较高剂量的竞争性NMDA受体拮抗剂会增强舔舐和啃咬行为的频率。观察发现，阿扑吗啡诱导的嗅探和运动在所有预处理组中均相似，而NMDA拮抗剂处理的大鼠则表现出啃咬频率增加，这可能提示多巴胺能增强作用主要发生在纹状体，而纹状体正是阿扑吗啡诱导啃咬行为的主要脑区（Ernst 1967; Ljungberg and Ungerstedt 1977）。这与之前的研究结果一致，这些研究表明中枢谷氨酸能系统和多巴胺能系统之间的拮抗作用发生在纹状体中（Carlsson and Carlsson 1989; Carlsson and Svensson 1990）。然而，我们的数据与其他研究结果并不完全一致，这些研究表明，在单胺耗竭的小鼠中，NMDA受体阻断会促进D1介导的运动反应，但并不影响D1/D2多巴胺受体刺激诱发的行为（Verma和Kulkarni，1992；Starr和Starr，1993）。对314只单胺耗竭的动物施用NMDA拮抗剂可能揭示了其他神经递质系统的激活潜力（Carlsson和Carlsson，1989；Carlsson和Svensson，1990）。不同的实验条件（未接受任何处理的动物与单胺耗竭的动物）和物种可能是导致我们观察到的NMDA拮抗剂增强D1/D2刺激诱发反应的结果的原因。总之，目前的研究结果与其他数据一致，表明阻断 NMDA 受体复合物的药物对多巴胺介导的行为有刺激作用，而竞争性 NMDA 拮抗剂似乎不太可能引起运动障碍和精神兴奋。[2]

C8H16NO5P

237.19

237.077

C, 40.51; H, 6.80; N, 5.91; O, 33.73; P, 13.06

146388-56-9

6438792

Typically exists as solid at room temperature

1.312g/cm3

434.1ºC at 760 mmHg

216.3ºC

9.46E-09mmHg at 25°C

1.512

0.701

119.66

3

6

6

15

295

1

CCOC([C@@H](/C=C(/CP(=O)(O)O)\C)N)=O

OKDOWCKDTWNRCB-PTYLAXBQSA-N

InChI=1S/C8H16NO5P/c1-3-14-8(10)7(9)4-6(2)5-15(11,12)13/h4,7H,3,5,9H2,1-2H3,(H2,11,12,13)/b6-4+/t7-/m1/s1

[(E,4R)-4-amino-5-ethoxy-2-methyl-5-oxopent-2-enyl]phosphonic acid

Cgp-43487; Cgp43487; Cgp 43487; 146388-56-9; Cgp-43,487; 3-Pentenoic acid, 2-amino-4-methyl-5-phosphono-, 1-ethyl ester, (R-(E))-; [(E,4R)-4-amino-5-ethoxy-2-methyl-5-oxopent-2-enyl]phosphonic acid; (R,E)-(4-amino-5-ethoxy-2-methyl-5-oxopent-2-en-1-yl)phosphonic acid; CGP-39,551; Cgp 43487

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。