| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
FLT3 in culture medium (IC50 = 132 nM); FLT3 in plasma (IC50 = 9.8 μM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 100–500 nM 剂量范围内，CGP52421（200、400、600、800 和 1000 nM）表现出比 PKC412 更大的细胞毒性 [1]。
与PKC412相比，CGP52421在血浆中结合的蛋白质可能更少[1] 我们首先调整了图3B所示的曲线，以解释活性代谢产物CGP62221的存在（只需将其浓度添加到PKC412的浓度中），但PIA数据点仍落在调整后的曲线的左侧（未显示）。由于PIA测定结果与药代动力学数据之间存在持续差异，并且由于试验患者血浆中CGP52421的水平非常高，我们进一步研究了CGP52422的FLT3抑制特性。在培养基中，CGP52421抑制FLT3自磷酸化的能力比母体化合物低22倍，IC50约为132 nM（图5A）。在血浆中，CGP52421的IC50为9.8μM，而PKC412的IC50为1.8μM（比较图5B和图1D）。因此，虽然CGP52421在含有10%血清的培养基中的效力比PKC412低22倍，但在血浆中的效力大约比母体化合物低5倍，可能是因为它结合的蛋白质较少。CGP52421在稳态下的水平范围为20至30μM，是IC50的2至3倍，可能足以显著抑制FLT3。使用PKC412浓度加CGP6221浓度加CGP52421/5.4浓度的公式，PKC412及其代谢产物的水平可以表示为FLT3抑制的调整值。当PIA结果与调整后的值作图时，这些点现在沿着PKC412介导的血浆FLT3抑制的标准曲线下降（图6A）。当所有PIA测定的结果被平均并与调整后的血浆浓度一起绘制时，PKC412及其代谢产物对FLT3的显著有效、持续的抑制作用得到了说明（图6B-C）。 |
| 酶活实验 |
FLT3磷酸化[1]
将白血病细胞在PBS中洗涤，然后通过将其重新悬浮在裂解缓冲液（20 mM Tris[pH 7.4]，100 mM NaCl，1%Igepal[Sigma，St Louis，MO]，1 mM EDTA，2 mM NaVO4，加完全蛋白酶抑制剂）中裂解30分钟，同时摇动。通过以14 000 rpm离心澄清提取物，并测定上清液中的蛋白质。将抗FLT3抗体加入提取物中孵育过夜，然后再加入蛋白质A-Sepharose 2小时。在十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）并转移到Immobilon膜上后，用抗磷酸酪氨酸抗体（4G10）进行免疫印迹，以检测磷酸化FLT3然后剥离印迹并用抗FLT3抗体重新标记以测量总FLT3。使用化学发光法对蛋白质进行可视化，并使用Bio-Rad GS800密度计进行扫描 血浆抑制活性[1] 将冷冻血浆样品解冻，并通过在16000g下离心2分钟进行澄清。与冷冻/解冻相比，使用新鲜血浆的结果没有差异，如果允许样品在室温下（避光）孵育长达1周，结果也没有差异（数据未显示）。然而，我们发现，在-80°C下储存超过12个月的CEP-701/血浆样本中，血浆抑制活性有所下降（数据未显示）。本文所述的所有检测均在收集后12个月内进行。对于每个时间点，将4×106 TF/ITD细胞与1 mL血浆在37°C下孵育2小时。我们发现，2小时的潜伏期与吲哚咔唑FLT3抑制剂产生的结果最一致。对于其他更易溶解的抑制剂，1小时的潜伏期就足够了。预处理血浆用作基线。TF/ITD细胞用冰冷的PBS洗涤两次，然后如上所述在“FLT3磷酸化”下裂解并通过免疫沉淀分析FLT3和抗磷酸酪氨酸免疫印迹。免疫印迹后，对条带进行密度测定分析，并通过将其相应条带的密度表示为基线条带密度的减少百分比来计算给定血浆样品的PIA，基线条带的浓度任意设置为100%。例如，如果样品带的密度分析显示其为预处理/基线样品的10%，则该样品的FLT3-PIA为90%。虽然我们已经成功地进行了这项检测，并使用其他人类细胞系（Molm-14、EOL-1、SEMK2）获得了相同的结果，但这里显示的结果仅适用于TF/ITD细胞。 |
| 细胞实验 |
CGP52421的选择性比PKC412低，但细胞毒性更强[1]
由于CGP52421对PKC412治疗患者的FLT3抑制有显著作用，我们希望更好地表征其对白血病细胞的细胞毒性。我们首先针对BaF3-ITD细胞进行了测试，这是一种通过用FLT3/ITD结构转染IL-3依赖的小鼠Ba/F3细胞而衍生的模型细胞系。16虽然所得的BaF3-IDT细胞是IL-3非依赖性的，但IL-3可用于“拯救”细胞免受FLT3抑制剂的细胞毒性作用。使用MTT法，我们确定PKC412在BaF3-ITD细胞中诱导细胞毒性作用，在没有IL-3的情况下IC50为29 nM，在有IL-3的存在下IC50为155 nM。在IL-3存在下观察到的细胞毒性作用可能是由于抑制了PKC412的其他未鉴定靶标。使用相同的测定法，CGP52421在BaF3-ITD细胞中诱导细胞毒性，在没有IL-3的情况下IC50为613nM，在有IL-3的存在下IC50为1053nM。在IL-3存在和不存在的情况下，PKC412和CGP52421的IC50值分别为1.7倍和4.3倍，这表明在抑制FLT3的浓度下，CGP52422的选择性低于PKC412。对于CEP-701，在没有IL-3的情况下，IC50为8 nM，在有IL-3存在的情况下为24 nM，这使其在选择性评估中位于PKC412和CGP52421之间。表1总结了IL-3救援试验的结果。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
我们开发了一种有效的替代检测方法，用于监测口服FLT3抑制剂治疗患者的FLT3抑制疗效。血浆FLT3抑制活性（PIA）与接受CEP-701和PKC412治疗患者的临床疗效相关。我们利用PIA检测方法，结合体外磷酸化和白血病细胞毒性试验，比较了PKC412及其代谢物CGP52421与CEP-701的疗效。虽然两种药物均能有效抑制体外FLT3活性，但在FLT3抑制水平相当的情况下，CEP-701对原代样本的细胞毒性更强。PKC412似乎比CEP-701更具选择性，因此在体外诱导原代急性髓系白血病（AML）样本细胞毒性的能力较弱。然而，PKC412 的代谢产物 CGP52421 的选择性低于其母体化合物 PKC412，并且在 FLT3 抑制水平相当的情况下，对原发性原始细胞样本的细胞毒性更高。血浆抑制活性测定是小分子抑制剂研发中一种有用的相关性工具。我们应用该测定方法发现，代谢产物 CGP52421 可能对接受口服 PKC412 治疗的患者所观察到的抗白血病活性有显著贡献。此外，我们的结果表明，非选择性可能是 FLT3 抑制剂在 FLT3 突变型 AML 中产生细胞毒性作用的重要组成部分[1]。
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| 分子式 |
C36H32N4O5
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|---|---|
| 分子量 |
600.66
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| 精确质量 |
586.222
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| 元素分析 |
C, 71.98; H, 5.37; N, 9.33; O, 13.32
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| CAS号 |
179237-49-1
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| 相关CAS号 |
3-Hydroxy Midostaurin-d5
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| PubChem CID |
137552093
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
5.726
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| tPSA |
97.96
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
44
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| 分子复杂度/Complexity |
1180
|
| 定义原子立体中心数目 |
4
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| InChi Key |
WMQSFYBLPAXEDG-VPROBEFOSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C36H32N4O5/c1-36-18-25(44-3)24(38(2)35(43)19-11-5-4-6-12-19)17-26(45-36)39-22-15-9-7-13-20(22)27-29-30(34(42)37-33(29)41)28-21-14-8-10-16-23(21)40(36)32(28)31(27)39/h4-16,24-26,34,42H,17-18H2,1-3H3,(H,37,41)/t24-,25-,26-,34?,36+/m0/s1
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| 化学名 |
N-((5S,7S,8S,10R)-15-hydroxy-8-methoxy-10-methyl-17-oxo-6,7,8,9,10,15,16,17-octahydro-5H-18-oxa-4b,10a,16-triaza-5,10-methanodibenzo[b,h]cyclodeca[jkl]cyclopenta[e]-as-indacen-7-yl)-N-methylbenzamide
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| 别名 |
CGP 52421; CGP-52421; 3-Hydroxy Midostaurin; CGP52421
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6648 mL | 8.3242 mL | 16.6484 mL | |
| 5 mM | 0.3330 mL | 1.6648 mL | 3.3297 mL | |
| 10 mM | 0.1665 mL | 0.8324 mL | 1.6648 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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