| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
ISR; eIF2α; The target of ISRIB is eukaryotic translation initiation factor 2B (eIF2B). It binds to eIF2B, enhances its activity, and antagonizes the inhibitory effect of phosphorylated eIF2α on eIF2B, with an IC50 of 5 nM [2]
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| 体外研究 (In Vitro) |
ISRIB可有效逆转eIF2α磷酸化的效应。在因eIF2α磷酸化而翻译受抑的细胞中（如经毒胡萝卜素处理，该物质可诱导eIF2α磷酸化），ISRIB通过增强eIF2B活性、增加三元复合物水平和恢复蛋白质合成来重建翻译能力，同时减弱细胞中整合应激反应（ISR）的诱导 [2]
在慢性内质网应激激活PERK的细胞中，ISRIB会降低细胞活力 [2] 为评估蛋白质合成，细胞在毒胡萝卜素处理前用ISRIB（220 nM）预处理1小时，处理的最后10分钟加入嘌呤霉素，通过抗嘌呤霉素抗体的蛋白质印迹法分析其掺入新生蛋白的情况，证实翻译得到恢复 [1] [2] ISRIB 抑制内源性 ATF4 的合成，而 XBP1 mRNA 剪接和生产仍在继续。通过阻碍 UPR PERK 分支的信号传导，ISRIB 使细胞无法恢复 ER 稳态并降低 ER 应激细胞的存活率。 [1] ISRIB处理的细胞对eIF2α磷酸化具有抗性。 ISRIB是PERK分支特异性的，但不会损害PERK磷酸化。 ISRIB会损害对ER压力的适应。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠中，ISRIB可增强认知记忆。在水迷宫测试中，经ISRIB处理的小鼠回忆水下隐藏平台位置的速度是对照组的三倍，表明记忆保留能力提升 [1]
在朊病毒病小鼠中，ISRIB通过部分恢复整体翻译速率和阻止神经退行性变发挥神经保护作用 [3] ISRIB 在体内表现出良好的生物利用度，并在药代动力学实验中表现出良好的特性。通过改善恐惧相关学习和空间学习，ISRIB（0.25 mg/kg ip）可改善小鼠的长期记忆。 [1] eIF2α+/S51A（Eif2s1+/S51A）杂合子小鼠表现出增强的记忆，而脑锥体细胞中eIF2α激酶PKR的诱导会损害记忆（Costa-Mattioli等人，2007；Jiang等人，2010）。基于这些观察，我们想知道用ISRIB治疗小鼠是否会影响记忆。ISRIB在药代动力学分析实验中显示出良好的特性，表明体内研究具有足够的生物利用度。ISRIB在血浆中的半衰期为8小时（图6A），很容易穿过血脑屏障，迅速与中枢神经系统平衡（图6B）。单次腹腔注射后，我们在小鼠大脑中检测到ISRIB，其浓度比IC50高几倍（注射后24小时，ISRIB在大脑中的浓度约为60 nM）。为了探索ISRIB对记忆的影响，我们给小鼠腹腔注射了ISRIB，并测试了海马依赖的空间学习。为此，我们在Morris水迷宫中训练了小鼠，在这个迷宫中，动物学会了将视觉线索与水下隐藏平台的位置联系起来。因为我们在寻找记忆增强，所以我们使用了一个弱训练方案。如图6C所示，与赋形剂治疗的对照组（68.1±20秒，p<0.05）相比，ISRIB治疗的小鼠到达隐藏平台的速度明显更快（5天训练后的逃逸潜伏期=16.4±4.8秒）。在第3天和第4天，这种差异已经明显。与这些结果一致，在训练结束时进行的“探测测试”中，ISRIB治疗的小鼠明显更喜欢目标象限，其中平台从池中移除（p<0.05；图6D），平台位置的交叉增加（p<0.05；见图6E）。[1] |
| 酶活实验 |
为研究ISRIB与eIF2B的相互作用，将eIF2B与不同浓度的ISRIB及相关核苷酸共同孵育，测定其核苷酸交换活性。ISRIB在磷酸化eIF2α（eIF2(αp)）存在时优先加速该活性，而降低eIF2B对eIF2(αp)抑制敏感性的突变会减弱此效应 [2]
冷冻电镜显示，eIF2(αp)与ISRIB相互拮抗对方与eIF2B的结合 [2] 在 96 孔板中，用 100 nM 沙利度胺和 10μM 所选化合物处理表达 ATF4-dGFP-IRES-Cherry 报告基因的 U2OS 细胞 8 小时。 Hoechst 33,258 用于对细胞进行染色，并使用自动显微镜观察结果。 INCell Developer Toolbox 软件 1.9 版用于数据采集和图像分析。重新购买用于额外分析的化合物可防止 ATF4-dGFP 报告基因被诱导，不会阻止 IRES 下游 mCherry 的积累，并且根据通过细胞核计数的细胞数量判断为无毒。 |
| 细胞实验 |
为分析翻译情况，细胞用ISRIB（220 nM）预处理1小时，随后用毒胡萝卜素处理特定时长。最后10分钟加入嘌呤霉素，通过抗嘌呤霉素抗体的蛋白质印迹法评估其掺入新生蛋白的情况，以测量蛋白质合成水平 [1] [2]
为评估对细胞活力的影响，对慢性内质网应激激活PERK的细胞给予ISRIB，并监测活力变化 [2] 将HEK293T细胞用或不用1μg/ml的衣霉素、衣霉素和ISRIB（200 nM）或ISRIB处理1小时。加入环己酰胺（CHX）（100μg/ml）2分钟，用冰冷的PBS（含100μg/ml的CHX）洗涤细胞，并在20mM Tris pH=7.4（RT）、200mM NaCl、15mM MgCl、1mM DTT、8%甘油、100μg/ml CHX、1%Triton和蛋白酶抑制剂中裂解。使用注射器（25G5/8）研制细胞，将裂解物以12000rpm澄清10分钟，将一半裂解物用于RNA提取，另一半用RNase I消化。基于通过分析多核糖体梯度分析的多核糖体坍塌至单体峰，对每个样品的RNase I的量和孵育时间进行优化。用SUPERaseIn猝灭反应，然后将消化的裂解物装载在800μl蔗糖缓冲液上（将1.7 g蔗糖溶解在3.9 ml不含Triton的裂解缓冲液中），并在TLA100.2转子中以70000rpm离心4小时。将沉淀重悬于10mM Tris pH=7（RT）中，提取RNA（苯酚/氯仿）[1]。 |
| 动物实验 |
雄性C57BL/6J小鼠
0.25 mg/kg 腹腔注射；溶于45%生理盐水+50% PEG 400+5% DMSO Morris水迷宫[1] 小鼠在直径100 cm的水池中进行训练，水池中设有一个直径10 cm的隐藏平台。实验前3天，每天对小鼠进行操作，训练方案包括每天一次游泳试验。每只小鼠游到找到隐藏平台或游120秒后，轻轻引导其到达平台，并在平台上停留10秒后放回笼中。游泳试验结束后，立即腹腔注射ISRIB（0.25 mg/kg，溶于含1% DMSO的生理盐水中）。在探针测试中，移除平台后，每只小鼠自由游泳 60 秒，同时使用视频追踪系统监测其游泳轨迹。 情境恐惧条件反射[1] 小鼠接受训练，训练方案包括 2 分钟的情境探索，随后给予 0.35 mA、持续 1 秒的单次足底电击。训练结束后，小鼠立即接受单次腹腔注射 ISRIB（2.5 mg/kg，溶于 50% DMSO 和 50% PEG 400 的混合溶液），然后放回笼中。训练后 1 小时和 24 小时，将小鼠置于条件反射情境中 4 分钟，以测试其情境恐惧记忆。以 5 秒为间隔记录小鼠的冻结行为，分为“冻结”或“未冻结”。冻结百分比表示观察到冻结行为的间隔数除以 5 秒间隔的总数。统计分析采用学生t检验和单因素方差分析，组间比较采用Tukey事后检验。 插管和听觉恐惧条件反射[1] 雄性Sprague Dawley大鼠（275–350 g）用于插管，具体方法见Migues等人，2010 (Migues et al., 2010)。听觉恐惧条件反射训练结束后，立即将ISRIB（0.05 mg/ml，0.5 μl）双侧注入杏仁核。注入使用连接Hamilton注射器和塑料管的微量注射器（28号），流速为0.25 μl/min。为了使含有ISRIB的溶液从插管尖端扩散到组织中，微量注射器在插管内停留1分钟。听觉恐惧条件反射训练方案包括2分钟的A环境探索，随后呈现一次音调（5000 Hz，75 dB，30 s）与同时结束的足底电击（0.75 mA，1 s）配对刺激。电击后1分钟，将大鼠放回笼中。听觉恐惧记忆测试包括2分钟的B环境适应期（条件刺激前），随后呈现音调（条件刺激）（2800 Hz，85 dB，30 s）。测量僵直时间并计算僵直百分比。实验结束时，通过光学显微镜检查福尔马林-硫堇染色的50 μm脑切片，以确认插管位置。 小鼠：6-7周龄的雌性CD-1小鼠通过腹腔注射（ip）给药。每组三只小鼠，每种化合物/给药途径，单次给药剂量为5 mg/kg。 DMSO用于溶解ISRIB，然后用超精制PEG 400以1:1的比例稀释。给药后，分别在20分钟、1小时、3小时、8小时和24小时，从大隐静脉抽取80 μL血液，置于含EDTA的采血管中。然后制备血浆进行分析。采用飞行时间质谱法检测物质。在认知研究中，给小鼠服用ISRIB，并观察它们在水迷宫测试中的表现。小鼠学习利用环境线索找到隐藏的平台，并量化它们的搜索速度以评估认知增强效果[1]。在朊病毒疾病模型中，给患病小鼠服用ISRIB。测量整体翻译速率，并检查胰腺组织的毒性，以评估神经保护作用和安全性[3]。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
ISRIB在药代动力学分析实验中表现出良好的特性，表明其具有足够的生物利用度，可用于体内研究。ISRIB在血浆中的半衰期为8小时（图6A），且易于穿过血脑屏障，并迅速与中枢神经系统达到平衡（图6B）。单次腹腔注射后，我们在小鼠脑内检测到ISRIB，其浓度远高于IC50值（注射后24小时，脑内ISRIB浓度约为60 nM）。[1]
ISRIB的药代动力学[1] 对6-7周龄的雌性CD-1小鼠进行腹腔（ip）给药。每组3只小鼠/每种化合物/每种给药途径，小鼠接受单次5 mg/kg剂量。将ISRIB溶解于DMSO中，然后用超精制PEG 400以1:1的比例稀释。给药后不同时间点（20分钟、1小时、3小时、8小时、24小时），从隐静脉采集80 μl血液，置于含EDTA的采血管（Sarstadt CB300）中，并制备血浆用于分析。采用飞行时间质谱法检测化合物。腹腔注射（ip）给药，单次剂量为2.5 mg/kg，每个时间点（2、6、24和36小时）每组3只动物。使用组织匀浆器（Tissue Tearor）对脑组织样本进行单独匀浆。取约300 mg组织置于5 ml聚丙烯管中，加入四倍体积的水进行混匀。组织匀浆器的速度设置为3档，匀浆2分钟。均质化后，采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）分析上清液，以测定脑组织中的浓度。在提取脑组织样本之前，先采集血浆样本。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
ISRIB在朊病毒感染小鼠中未显示出明显的胰腺毒性[3]
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| 参考文献 |
[1]. Pharmacological brake-release of mRNA translation enhances cognitive memory Elife. 2013 May 28:2:e00498.
[2]. ISRIB Blunts the Integrated Stress Response by Allosterically Antagonising the Inhibitory Effect of Phosphorylated eIF2 on eIF2B. Mol Cell. 2021 Jan 7;81(1):88-103.e6. [3]. Partial restoration of protein synthesis rates by the small molecule ISRIB prevents neurodegeneration without pancreatic toxicity. Cell Death Dis. 2015 Mar 5;6(3):e1672. |
| 其他信息 |
ISRIB是一种整合应激反应（ISR）抑制剂。它作用于四种eIF2α磷酸化激酶（PERK、PKR、GCN2和HRI）的下游，逆转eIF2α磷酸化诱导的翻译抑制，是第一个被发现具有此活性的分子[1][2]。
它促进活性十聚体eIF2B复合物的组装，提高三元复合物的水平并恢复蛋白质合成，从而支持其在认知增强和神经保护中的作用[2][3]。 起始因子2 (eIF2) α亚基的磷酸化通过一种保守的机制控制蛋白质合成。在后生动物中，不同的应激条件会激活不同的eIF2α激酶（PERK、PKR、GCN2和HRI），这些激酶最终都会磷酸化eIF2α中的一个特定丝氨酸残基。这一系列信号通路被称为“整合应激反应”（ISR）。 eIF2α磷酸化会抑制蛋白质合成，同时允许某些mRNA优先翻译。我们首先通过基于细胞的PERK信号通路抑制剂筛选，鉴定出一种名为ISRIB的小分子，它能有效（IC50 = 5 nM）逆转eIF2α磷酸化的作用。ISRIB能降低慢性内质网应激激活PERK后细胞的存活率。eIF2α磷酸化与记忆巩固密切相关。值得注意的是，ISRIB处理的小鼠在空间学习和恐惧相关学习方面表现出显著增强。因此，记忆巩固本质上受到内质网应激的限制，而ISRIB则能解除这种限制。因此，ISRIB有望为我们理解和治疗认知障碍做出贡献。DOI:http://dx.doi.org/10.7554/eLife.00498.001.[1] |
| 分子式 |
C22H24CL2N2O4
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|---|---|
| 分子量 |
451.3430
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| 精确质量 |
450.111
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| 元素分析 |
C, 58.55; H, 5.36; Cl, 15.71; N, 6.21; O, 14.18
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| CAS号 |
548470-11-7
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| 相关CAS号 |
ISRIB (trans-isomer);1597403-47-8
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| PubChem CID |
1011240
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
|
| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
719.0±60.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
388.6±32.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.3 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.603
|
| LogP |
4.49
|
| tPSA |
76.7Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
8
|
| 重原子数目 |
30
|
| 分子复杂度/Complexity |
493
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
ClC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])OC([H])([H])C(N([H])C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])C1([H])[H])N([H])C(C([H])([H])OC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])Cl)=O)=O
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| InChi Key |
HJGMCDHQPXTGAV-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C22H24Cl2N2O4/c23-15-1-9-19(10-2-15)29-13-21(27)25-17-5-7-18(8-6-17)26-22(28)14-30-20-11-3-16(24)4-12-20/h1-4,9-12,17-18H,5-8,13-14H2,(H,25,27)(H,26,28)
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| 化学名 |
2-(4-chlorophenoxy)-N-[4-[[2-(4-chlorophenoxy)acetyl]amino]cyclohexyl]acetamide
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| 别名 |
ISRIB; ISRIB; 1597403-47-8; trans-ISRIB; 548470-11-7; ISRIB (trans-isomer); 1597403-48-9; N,N'-(cis-Cyclohexane-1,4-diyl)bis(2-(4-chlorophenoxy)acetamide); ISRIB trans-isomer;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 8.3~10 mg/mL (18.5~22.2 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2156 mL | 11.0781 mL | 22.1562 mL | |
| 5 mM | 0.4431 mL | 2.2156 mL | 4.4312 mL | |
| 10 mM | 0.2216 mL | 1.1078 mL | 2.2156 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
 Sidrauski C, et al. Elife. 2013, 2, e00498. |
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eIF4A-IN-1
eIF4A-IN-3
EIF2AK4 Recombinant Human Active Protein Kinase
EMD-C02602
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