Dopamine D1 receptor (K0.5 = 4 nM)

利用计算机辅助构象分析表征D1多巴胺受体识别和激活的激动剂药效团。二氢二啶（DHX）是一种具有有限构象灵活性的高亲和力的全激动剂，作为一种结构模板，有助于确定其他更灵活的生物活性激动剂的分子几何形状。通过刺激大鼠纹状体匀浆中腺苷酸环化酶活性的能力（D1受体激活的公认指标）来评估药物在D1受体上的内在活性。此外，从D1多巴胺放射受体结合试验中获得了12种激动剂的亲和数据，包括6种完全激动剂（多巴胺、二氢西啶、SKF89626、SKF82958、A70108和A77636）以及6种效果较差的结构类似物。在SYBYL软件包中实现了药效团构建的主动模拟方法。构象分析和分子力学计算用于确定活性类似物（即完全激动剂）的最低能量构象，以及每种化合物显示共同药效几何的构象。假设DHX和其他完全激动剂可能共享一个D1药效团，由两个羟基组成，氮原子（约7 a来自间羟基的氧）和副环系统，其平面与儿茶酚环的夹角（多巴胺和A77636除外）。对于所有的完全激动剂（DHX、SKF89626、SKF82958、A70108、A77636和多巴胺），最低能量的构象和显示出普通药效团几何形状的构象之间的能量差异相对较小（< 5 kcal/mol）。完全激动剂的药效构象也被用来推断受体结合位点的形状。结合活性类似物的范德华密度图，计算了被排除的受体体积。随后使用各种无活性类似物（D1为K0.5 > 300 nM的部分激动剂）来确定受体基本体积（即空间耐受受体区域）。这些体积，连同药效团的结果，被整合到一个三维模型中，估计D1受体活性位点的地形。［１］

0.03 mg/kg 的训练剂量后，SKF-82958 ((±)-SKF 82958) (0.003-0.1 mg/kg; ip) 完全替代 SKF-82958，导致相关水平的反应出现剂量依赖性增加。 SKF-82958。通过增加 SKF-82958 的剂量也显着降低了缓解率 [2]。 SKF-82958（0.5-2.0 mg/kg；腹膜内注射）可显着抑制毛果芸香碱引起的下颌运动[3]。

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研究了高效多巴胺D(1)受体激动剂（+/-）6-氯- 7,8 -二羟基-3-烯丙基-苯基-2,3,4,5-四氢- 1h -3benzazepine++ +氢溴化物（SKF-82958）对大鼠（0.03 mg/kg）的鉴别刺激作用。SKF-82958在SKF-82958适当水平下产生剂量相关的增加，在训练剂量下发生完全替代。多巴胺D(1)/D(5)受体拮抗剂(-)-反式6,7,7a, 8,9,13b -六氢-3-氯-2羟基- n -甲基- 5h -苯并-[D]萘- 2,1 -b -氮平（SCH-39166） （0.01 mg/kg）预处理可减弱SKF-82958的鉴别刺激作用。用多巴胺D(2)受体拮抗剂raclopride （0.03 mg/kg）预处理无效果。高效多巴胺D(1)受体激动剂R(+) 6氯-7,8-二羟基-1-苯基-2,3,4,5-四氢-1H-3-苯卓-7,8-二醇氢溴化物（SKF-81297）完全取代SKF-82958，而低效多巴胺D(1)受体激动剂（+/-）1-苯基-2,3,4,5-四氢-(1H)-3-苯卓-7,8-二醇盐酸盐（SKF-38393）仅产生部分取代。多巴胺D(2)受体激动剂反式-(+/-)-4,4a,5,6,7,8,8a， 9-八氢-5-丙基- h -丙基- h -吡唑啉[3,4-g]喹啉二盐酸（喹匹罗）和间接多巴胺激动剂可卡因不能完全替代SKF-82958鉴别刺激线索。这些结果表明，高效多巴胺D(1)受体激动剂SKF-82958在大鼠体内可作为一种有效的鉴别刺激，其作用是通过多巴胺D(1)样受体机制介导的。[2]

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SKF 82958 （0.5 ~ 2.0 mg/kg IP）可减轻匹罗卡平所致的震颤性下颌运动。选择性D1多巴胺受体拮抗剂SCH 23390 （0.025 ~ 0.2 mg/kg IP）系统预处理后，SKF 82958对颌骨运动的抑制作用呈剂量依赖性逆转；SCH 23390在逆转SKF 82958作用方面的效力是D2拮抗剂raclopride的16倍。向腹侧纹状体（与人类腹侧壳核相似的啮齿动物）注入SCH 23390（0.5-2.0微克/侧），剂量依赖性地逆转了由SKF 82958引起的匹罗卡品诱导的下颌运动减少。向黑质网状部注射SCH 23390（0.5-2.0微克/侧）也能剂量依赖性地逆转SKF 82958对匹罗卡品引起的下颌运动的减少。在纹状体或黑质背侧对照部位注射SCH 23390（2.0微克/侧）对SKF 82958的作用没有影响。黑质内注射GABA-A拮抗剂双丘碱阻断了全身给药SKF 82958对下颌运动活性的抑制作用。 结论：这些数据提示SKF 82958的抗帕金森作用可能是由于刺激腹外侧纹状体和网状黑质的D1受体。此外，这些结果表明，GABA在黑质网状部的机制可能对D1激动剂的抗帕金森作用很重要。［３］

动物/疾病模型：雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠[3]
剂量：0.5-2.0 mg/kg
给药途径：腹腔注射(ip)
实验结果：显著减少了4.0 mg/kg毛果芸香碱引起的下颌震颤次数。\n\n药物辨别训练[2]
\n训练大鼠辨别SKF-82958（0.03 mg/kg）注射液与生理盐水注射液的程序与Kosten等人（1999）描述的方法类似。首先限制大鼠的食物摄入，并维持其体重约为自由摄食体重的85%。在初始训练阶段，将大鼠放入操作箱中，其中一个操作杆上方的刺激灯亮起，提示训练开始。逐步增加按压操作杆的次数，直至大鼠按压30次（固定比率30，FR30）后获得一颗食物奖励。一旦大鼠在任一操作杆上均能稳定地按压FR30，即可开始SKF-82958辨别训练。一半大鼠的左侧操作杆被指定为SKF-82958的适用操作杆，另一半大鼠的右侧操作杆被指定为SKF-82958的适用操作杆。在SKF-82958训练日，大鼠腹腔注射（ip）药物后，再次放入操作箱中。15分钟后，操作杆上方的刺激灯亮起，训练开始。每按压SKF-82958适用操作杆30次，即可获得一颗食物奖励。在载体训练日，载体经腹腔注射给药，15分钟后，每30次按压对应载体的操纵杆即可获得一颗食物颗粒。训练持续30分钟后结束。训练期间，采用药物或载体注射的双交替顺序（SKF、SKF、生理盐水、生理盐水、SKF等），每周训练5天。最初，训练剂量为1.0 mg/kg SKF-82958，但该剂量显著干扰了操纵杆按压行为，如按压频率和反应记录所示。随后，训练剂量降低至0.3 mg/kg，但仍观察到反应干扰。最终，训练剂量调整至0.03 mg/kg。在该剂量下，未观察到明显的按压频率干扰。使用此剂量的SKF-82958进行辨别训练，直至大鼠满足以下标准：(1) 首次完成的FR30操作是在与注射部位相对应的操作杆上；(2) 连续六次训练中，≥85%的总反应是在与注射部位相对应的操作杆上。\n

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\n\n辨别测试[2]
\n一旦满足上述标准，即可开始替代测试。测试通常每周进行两次，辨别训练安排在两次测试之间的两天。如果在训练日辨别表现低于85%，则不进行测试，并对大鼠进行进一步的辨别训练。如果大鼠在训练日保持≥85%的条件相关反应，则在第二天进行测试；否则，每次测试之间至少间隔两次训练。测试阶段与训练阶段相同，唯一的区别是，大鼠可以通过在任一操作杆上完成 30 次反应来获得食物奖励。\n替代测试使用不同剂量的 SKF-82958 (0.003–0.1 mg/kg)、SKF-81297 (0.1–1.0 mg/kg)、SKF-38393 (0.3–5.6 mg/kg)、反式-(±)-4,4a,5,6,7,8,8a,9-八氢-5-丙基-1H-丙基-1H-吡唑并[3,4-g]喹啉二盐酸盐（喹吡罗）(0.01–0.1 mg/kg) 和可卡因 (0.3–5.6 mg/kg) 进行。在拮抗作用研究中，我们研究了不同剂量的SKF-82958与多巴胺D1/D5受体拮抗剂SCH-39166（0.01 mg/kg）或多巴胺D2受体拮抗剂雷氯必利（0.03 mg/kg）的组合。替代和组合激动剂/拮抗剂试验的顺序在不同大鼠中以非系统性方式呈现。\n

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\n\n药物和注射[2]
\nSKF-82958、SKF-81297、SKF-38393、喹吡罗、盐酸可卡因和S(−)雷氯必利L-酒石酸盐均购自RBI公司。\n所有化合物均在实验当天用0.9%氯化钠溶液新鲜配制，并以1 ml/kg的体积给药。为确保溶解度，SKF-82958、SKF-81297 和 SKF-38393 在稀释前于恒温水浴中超声处理 30 分钟（1 mg/ml）。除 SCH-39166 和雷氯必利外，所有药物的预处理时间均为 15 分钟，均采用腹腔注射给药。SCH-39166 和雷氯必利均采用皮下注射给药，预处理时间为 30 分钟。所有剂量均以游离碱表示。

[1]. Conformational analysis of D1 dopamine receptor agonists: pharmacophore assessment and receptor mapping. J Med Chem. 1996;39(1):285-296.

[2]. The dopamine D(1) receptor agonist SKF-82958 serves as a discriminative stimulus in the rat. Eur J Pharmacol. 2000;388(2):125-131.

[3]. Striatal and nigral D1 mechanisms involved in the antiparkinsonian effects of SKF-82958 (APB): studies of tremulous jaw movements in rats. Psychopharmacology (Berl). 1999;143(1):72-81.

9-氯-5-苯基-3-丙-2-烯基-1,2,4,5-四氢-3-苯并氮杂卓-7,8-二醇是一种苯并氮杂卓类化合物。

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本研究表明，高效多巴胺D1受体激动剂SKF-82958可作为大鼠的有效辨别刺激。用选择性多巴胺D1/D5受体拮抗剂SCH-39166预处理可减弱SKF-82958的辨别刺激效应。相反，用多巴胺D2受体拮抗剂雷氯必利预处理则未产生明显的拮抗作用。多巴胺D1受体拮抗剂对SKF-82958线索的拮抗作用与之前的研究结果一致，即多巴胺D1受体激动剂SKF-38393和SKF-81297的辨别性刺激效应可被多巴胺D1受体拮抗剂SCH-23390选择性减弱（Cunningham等，1985；Kamien等，1987；Arnt，1988；Reavill等，1993）。虽然本研究未对此进行测试，但确定SCH-39166对SKF-82958的拮抗作用是否可以克服将很有意义。尽管如此，这些结果清楚地表明，SKF-82958的辨别性刺激效应主要由其与多巴胺D1样受体的相互作用介导。 [1]
通过使用高效和低效多巴胺D1受体激动剂SKF-81297和SKF-38393以及多巴胺D2受体激动剂喹吡罗进行的替代试验，进一步证实了SKF-82958辨别性刺激效应的特异性。SKF-81297在中等剂量下完全替代了SKF-82958线索，而低效多巴胺D1受体激动剂SKF-38393即使在显著降低反应的剂量下也只能部分替代。此外，喹吡罗在所测试的剂量下未能重现SKF-82958的辨别性刺激效应。总之，这种替代模式进一步证实了SKF-82958辨别性刺激的D1样特性。 [1]
已知高效多巴胺D1受体激动剂可刺激体外大鼠脑组织制备物中的腺苷酸环化酶（Stoof和Kebabian，1981；Izenwasser和Katz，1993）。SKF-82958刺激腺苷酸环化酶的效力与多巴胺相似（O'Boyle等，1989；Anderson和Jansen，1990；Izenwasser和Katz，1993）。在同一项研究中，SKF-81297产生的腺苷酸环化酶激活程度（81-100%）与多巴胺和SKF-82958相似，而SKF-38393刺激腺苷酸环化酶的程度较低（45-60%）。结合目前的研究结果，这些数据表明，当使用高效多巴胺受体激动剂作为辨别刺激时，只有具有相似内在效力的激动剂才能重现这些效应，这可以从SKF-81297和SKF-38393分别观察到的完全和部分替代模式中得到证实。相反，这些结果与Reavill等人（1993）的研究结果不一致，后者表明SKF-38393可以完全替代高效多巴胺D1受体激动剂SKF-81297。更可能的原因是，这源于两项研究中使用的实验测试程序不同，以及两种多巴胺D1受体激动剂的刺激特性本身存在差异（Rosenzweig-Lipson和Bergman，1993）。在这方面，或许进一步的研究（例如，使用不同的训练剂量）将有助于确定这些化合物作为辨别刺激的特性。 [1]
本研究发现，即使在降低反应率的剂量下，优先多巴胺D2受体激动剂喹吡罗也不能替代SKF-82958线索，这与其他研究结果一致，即多巴胺D2样受体激动剂不能替代多巴胺D1样受体激动剂，反之亦然（Cunningham等人，1985；Kamien等人，1987；Arnt，1988；Reavill等人，1993）。此外，研究还发现，SKF-82958的辨别性刺激效应只能被类似的多巴胺D1受体激动剂重现，而不能被多巴胺D2受体激动剂重现；并且该效应会被选择性多巴胺D1/D5受体拮抗剂SCH-39166减弱，但不会被多巴胺D2受体拮抗剂雷氯必利减弱。研究表明，SKF-82958 的内感受刺激是通过与多巴胺 D1 受体相互作用介导的。[1]
在本研究中，使用不同剂量的间接多巴胺受体激动剂可卡因进行的替代试验也未能完全替代 SKF-82958 的辨别性刺激线索。给予更高剂量的可卡因（最高测试剂量为 5.6 mg/kg）可能完全重现 SKF-82958 的辨别性刺激效应，但本实验并未进行此项测试。然而，当使用效力相似的多巴胺 D1 受体激动剂 SKF-81297 作为松鼠猴的辨别性刺激时，无论是可卡因还是右旋安非他明，在干扰反应的剂量下都未能完全替代 SKF-82958 的辨别性刺激（Rosenzweig-Lipson 和 Bergman，1993）。此外，这些数据与其他研究结果一致，表明情况恰恰相反，即高效和低效的多巴胺D1受体激动剂都不能可靠地替代精神兴奋剂。例如，在大鼠中，SKF-38393不能替代可卡因（Barrett和Appel，1989；Filip和Przegalinski，1997）或右旋安非他明（Furmidge等人，1991）。同样，SKF-81297也不能完全重现右旋安非他明的作用（Furmidge等人，1991；Reavill等人，1993），二氢沙定也不能替代可卡因（Witkin等人，1991）。此外，在灵长类动物中，即使使用显著降低反应率的剂量，多巴胺D1受体激动剂SKF-82958和SKF-81297也只能部分重现可卡因的作用（Spealman等人，1991）。因此，基于本实验和其他实验的结果，多巴胺D1受体激动剂（如SKF-82958）和精神兴奋剂（如可卡因）的辨别性刺激效应机制之间似乎并不完全重叠，反之亦然。 [1]
最近有研究表明，多巴胺D1样受体激动剂可能成为可卡因成瘾的一种“替代”药物疗法，部分原因是本药物辨别实验中使用的高效多巴胺D1受体激动剂SKF-82958已被证明可以阻断大鼠在短期消退期后可卡因自我给药行为的恢复（Self等人，1996a）。然而，在我们实验中，上述研究中使用的SKF-82958剂量导致了明显的反应率紊乱，这表明观察到的可卡因恢复阻断可能是由于行为紊乱而非对可卡因强化本身的选择性作用所致。此外，有证据表明，高效多巴胺 D1 受体激动剂在大鼠和灵长类动物中均可被自我给药（Self 和 Stein，1992；Self 等人，1996b；Weed 和 Woolverton，1995；Weed 等人，1997；Grech 等人，1996），这提示它们可能具有固有的滥用风险。相比之下，内在效力较低的多巴胺D1受体激动剂不易被患者自行给药（Woolverton等人，1984；Katz和Witkin，1992；Grech等人，1996；Weed等人，1997），并且可以通过阻断可卡因的部分行为效应，在体内发挥功能性拮抗剂的作用，提示这些药物可能在可卡因成瘾的治疗中发挥作用（Katz和Witkin，1992；Spealman等人，1997）。然而，多巴胺D1受体激动剂的其他行为效应是否会限制其应用仍有待确定。因此，有必要开展专门设计的临床前研究，以探讨使用部分多巴胺D1受体激动剂作为可卡因滥用药物疗法的可能性。 [1] 总之，本研究首次证明，高效多巴胺D1受体激动剂SKF-82958可作为大鼠可靠的辨别刺激，且其作用机制与多巴胺D1样受体机制相关。此外，尽管存在一些重叠，但直接多巴胺D1受体激动剂SKF-82958的刺激效应与间接多巴胺受体激动剂可卡因的刺激效应截然不同。[2]

C19H20CLNO2

410.73254

329.118

C, 69.19; H, 6.11; Cl, 10.75; N, 4.25; O, 9.70

80751-65-1

SKF-82958 hydrobromide;74115-01-8

1225

Typically exists as solid at room temperature

1.234 g/cm3

473.7ºC at 760 mmHg

240.3ºC

1.616

4.823

43.7

2

3

3

23

399

0

OC1=C(O)C=C2C(C3=CC=CC=C3)CN(CC=C)CCC2=C1Cl

HJWHHQIVUHOBQN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H20ClNO2/c1-2-9-21-10-8-14-15(11-17(22)19(23)18(14)20)16(12-21)13-6-4-3-5-7-13/h2-7,11,16,22-23H,1,8-10,12H2

9-Chloro-5-phenyl-3-prop-2-enyl-1,2,4,5-tetrahydro-3-benzazepine-7,8-diol

(±)-SKF 82958; Chloro-APB; SKF-81297 HBr; SKF-81297; Skf-82958; 80751-65-1; Cl-Apb; SKF 82958; SK&F 82958; SK&F-82958; 6-Chloro-7,8-dihydroxy-3-allyl-1-phenyl-2,3,4,5-tetrahydro-1H-3-benzazepine; 9-chloro-5-phenyl-3-prop-2-enyl-1,2,4,5-tetrahydro-3-benzazepine-7,8-diol; SKF 81297; SKF81297; (±)-SKF 82958 Chloro-AP

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。