5-HT2A/5-HT2C Receptor

德伦环烷/Deramciclane是一种新型抗焦虑药物，对 5-HT2A/2C 受体具有高亲和力。利用受体磷酸肌醇水解测定和受体放射自显影术进一步研究了 Deramcicane 与血清素 5-HT2C 受体的相互作用。 Deramciclane 抑制 5-HT2C 受体介导的 5-HT 诱导的磷酸肌醇水解，IC50 为 168 nM。 Deramcicane 还可将脉络丛生理系统中的基础磷酸肌醇水解降低高达 33% (EC50=93 nM)，表明它充当该受体的反向激动剂 [1]。

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5-羟色胺刺激的磷酸肌醇水解图1a和b总结了脉络丛中磷酸肌醇水解研究的结果。100 nM 5-羟色胺刺激了肌醇一磷酸（IP）的积累，比基础值约5000 DPM增加了4至5倍。Deramciclane拮抗5-HT（100 nM）刺激的磷酸肌醇水解，IC50值为168 nM（图1a）。Deramciclane本身不刺激磷酸肌醇水解，但抑制基础PI水解高达33%，EC50值为90 nM，表明去甲安是一种5-HT2C受体反向激动剂（图1b）[1]。

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Deramciclane（EGIS-3886）是一种假定的抗血清能化合物，可减少5-羟色胺诱导的磷酸肌醇水解和5-羟色胺能激动剂引起的各种作用。Deramciclane的受体结合谱与利坦色林相当相似。Deramcicrane对5-HT2A和5-HT2C受体具有很高的亲和力；它在两种受体亚型上都充当拮抗剂，在5-HT2C受体上具有反向激动剂特性，没有直接的刺激激动剂作用[2]。

虽然 30 mg/kg Deramciclane在 40-100 分钟和 160-240 分钟时没有显着改变多巴胺水平，但显着提高了多巴胺水平 (P<0.05)，而 3 mg/kg 和 10 mg/kg 德伦西卡恩在任何时间点都没有显着改变多巴胺水平。与基础水平相比的时间点。 Deramcicane 是一种可疑的抗血清素物质，可减轻血清素激动剂的作用和 5-HT 产生的磷酸肌醇的水解。在受体结合方面，德拉姆西卡恩和利坦色林有许多相似之处。德拉姆西卡恩对 5-HT2A 和 5-HT2C 受体均具有高亲和力，可作为两种受体亚型的拮抗剂，并在 5-HT2C 受体上表现出反向激动剂特性，而不直接刺激激动剂的作用。大量动物研究已证明 Deramciclane具有类似抗焦虑的特性 [2]。

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单次给药0.5mg/kg和10mg/kg导致脉络丛中5-HT2C受体的最大占有率分别高达45%和79%。通过受体放射自显影定量测定，与盐水治疗的对照组相比，用0.5 mg/kg或10 mg/kg的Deramciclane进行慢性（14天）治疗不会改变[125I]DOI（激动剂）或[3H]美苏利精碱（拮抗剂）与脉络丛5-HT2C受体的结合。相比之下，还研究了去甲安对5-HT2A结合特性和受体占有率的影响。Deramciclane治疗导致5-HT2A受体占有率高达78%，但慢性治疗对5-HT2A受体激动剂结合水平没有显著影响。总之，这些数据表明，Deramciclane是一种5-HT2C受体反向激动剂，在治疗过程中占据5-HT2C受体，并且长期使用德安奈德不会导致5-HT2C受体下调[1]。

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在本研究中，我们评估了单次分级剂量的假定抗焦虑化合物5-羟色胺（2A/C）拮抗剂富马酸Deramciclane（EGIS-3886）对伏隔核和纹状体多巴胺流出和代谢的影响，从而评估了Deramciclane引起与脑多巴胺能系统相关的不良反应的剂量窗口。在自由运动的大鼠中，使用双探针体内微透析来比较不同剂量的富马酸德安奈德（3、10和30mg/kg）、5-羟色胺（2A/C）拮抗剂利坦色林（1mg/kg）和部分5-羟色胺（1A）激动剂盐酸丁螺环酮（5mg/kg）对伏隔核和纹状体中多巴胺、3,4-二羟基苯乙酸（DOPAC）和高香草酸（HVA）细胞外水平的影响，通过高效液相色谱电化学检测进行测定。使用间接多巴胺激动剂D-硫酸苯丙胺（2mg/kg）作为阳性对照。利坦色林、丁螺环酮和去甲安3和10 mg/kg对两个脑区的细胞外多巴胺水平没有显著影响，但Deramciclane30 mg/kg显著增加了两个脑区域的阿曲巴多巴胺以及DOPAC和HVA。正如预期的那样，阳性对照D-苯丙胺显著增加了纹状体和伏管多巴胺水平。丁螺环酮或最高剂量的去甲安和D-苯丙胺对DOPAC和HVA水平的影响相反；丁螺环酮和德安奈德增加，而D-苯丙胺降低了两个脑区的代谢物水平。结果表明，单次高剂量的去甲安具有神经抑制剂或丁螺环酮样作用，特别是在中边缘区域。大鼠抗焦虑和抗精神病药物剂量之间至少有5倍的差距[2]。

5-HT2C受体介导的磷酸肌醇水解试验[1]
如前所述，在大鼠脉络丛中测量了5-羟色胺诱导的磷酸肌醇水解（Kuoppamäki等人，1993）。断头后迅速解剖脉络丛，将单个脉络丛（约0.5-1.0 mg湿重）放入含有10 mM葡萄糖的5 ml Krebs碳酸氢盐（KRB）缓冲液（118 mM NaCl、5.0 mM KCl、1.3 mM CaCl2、1.2 mM MgSO4、1.2 mM KH2PO4、25 mM NaHCO3）中。在37°C的振荡水浴中孵育1小时之前，KRB布厄更换了一次，布厄有两次中间变化。随后，在O2/CO2（95:5）的存在下，用1mCi的[3H]肌醇标记样品90分钟。加入10 mM帕吉林和10 mM锂，继续孵育15分钟。拮抗剂（如果存在）与帕吉林、锂同时加入。此后，加入5-羟色胺或等体积的布泽尔，使体积达到300毫升，并将样品孵育30分钟。通过加入940毫升氯仿/甲醇（1:2 v/v）停止反应。涡旋并静置15分钟后，加入300ml氯仿和300ml去离子水，将试管涡旋并离心。移除一部分（750 ml）含有水溶性肌醇磷酸盐的上层水相，并将其以甲酸盐形式施加到Dowex-1阴离子交换树脂柱上。用10 ml 10 mM肌醇洗脱游离肌醇，然后用10 ml 5 mM四硼酸钠/60 mM甲酸铵洗脱游离肌醇以洗脱磷酸甘油肌醇。用10ml 200mM甲酸铵/0.1M甲酸洗脱肌醇一磷酸（IP）。将最初的5毫升肌醇一磷酸直接洗脱到闪烁瓶中，而另外的5毫升则被丢弃。OptiPhase Hisafe 3用作闪烁液，IC50值用GraphPad InPlot 4.1软件计算。

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受体放射自显影术[1]
为了测定5-HT2C拮抗剂结合（慢性治疗实验），首先将载玻片在170 mM TRIS HCl缓冲液中在室温下预孵育15分钟，然后在170 mM TRIS HCl加5 nM[3H]美苏利精和100 nM spiperone中在室温孵育120分钟。随后将载玻片在0°C 170 mM TRIS HCl中洗涤（2´10分钟），并浸入冰冷的去离子水中。为了测定5-HT2C受体激动剂的结合，首先将干燥的室温载玻片在含有10 mM MgSO4和0.1%（w/v）牛血清白蛋白（BSA）的50 mM TRIS HCl溶液中在室温下预孵育10分钟，以去除内源性血清素。然后将载玻片在室温下在类似的缓冲液中加上200 pM（±）-1-（2,5-二甲氧基-4-[125I]碘苯基）-2-氨基丙烷（[125I]DOI）和100 nM螺旋藻（用于阻断5-HT2A受体）中孵育60分钟。孵育后，将载玻片在类似的冰冷的容器中冲洗（2´10分钟），并浸入冰冷的去离子水中去除盐分。为了测定5-HT2A受体结合，采用了5-HT2C激动剂结合方案，但有以下例外情况：在孵育过程中排除了螺哌酮，并且在1 mM酮色林而不是5 mM甲塞菌肽的存在下测定了非特异性Þc结合。将彻底干燥的载玻片和标准品在+4°C的X射线Þlm暗盒中放置30小时（[125I]DOI放射自显影）或21天（[3H]美苏利精放射自自显影），该暗盒包裹在塑料中以防止受潮。

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受体占有率测量[1]
对于5-HT2C受体占用实验，使用上述放射自显影方案，但有以下例外情况，以实现此类测定的最佳条件：省略预孵育以保持体内药物浓度，将载玻片孵育15分钟，然后擦拭到闪烁瓶中。对于5-HT2A受体占用实验，使用4 nM[3H]酮色林作为拮抗剂放射性配体，其测定方法与5-HT2C占用实验类似，但孵育时间除外，在5-HT2A测定中，孵育时间为20分钟。在两种受体占用测定中，对于每一部分，都测定了相邻部分的非特异性Þc结合，然后从总结合中减去。使用OptiFluor-O闪烁液以50%的效率通过β计数测量闪烁瓶中的放射性，但使用OptiPhase Hisafe 3闪烁液的5-HT2A受体结合试验除外。如前所述（Hietala等人，1990），对结合数据[EBDA（平衡结合数据分析）/LIGAND]进行计算机处理。

药物治疗[1]
Deramciclane用0.9%生理盐水稀释，并用一滴Tween 80乳化。氯氮平（25 mg/ml）使用市售安瓿。在慢性治疗实验中，四组大鼠（每组n = 6）每天一次皮下注射氯氮平（25 mg/kg）、Deramciclane（0.5或10 mg/kg）或等体积（1 ml/kg）的生理盐水（添加Tween 80），持续14天。在受体占有率实验中，大鼠单次注射Deramciclane（0.5或10 mg/kg）、氯氮平（25 mg/kg）或等体积（1 ml/kg）的生理盐水。剂量均指药物的游离碱。

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治疗。 [2]
采集样本用于测定多巴胺、DOPAC 和 HVA 的基础水平，持续 60 分钟。之后，以 5 ml/kg 体重的剂量腹腔注射药物（剂量指盐类）。治疗方案包括：富马酸地拉米西兰 3 mg/kg (= 7.2 µmol/kg)、10 mg/kg (= 24 µmol/kg) 和 30 mg/kg (= 72 µmol/kg)；硫酸右旋安非他明 2 mg/kg (= 5.4 µmol/kg)；利坦色林 1 mg/kg (= 2.1 µmol/kg)；以及盐酸丁螺环酮 5 mg/kg (= 12 µmol/kg)。所有药物均悬浮于 0.5% 羧甲基纤维素 (CMC) 的 0.9% 生理盐水溶液中。对照组（n = 5）腹腔注射5 ml/kg的0.5% CMC溶液。每个治疗组有9只大鼠。
富马酸地拉西克兰的剂量被认为在给药后1-3小时内可达到与人体治疗血浆浓度相当（3 mg/kg）或高约三倍（10 mg/kg）的血浆浓度。先前在大鼠中进行的地拉西克兰行为学研究表明，高剂量（20-40 mg/kg）的地拉西克兰具有一定的抗多巴胺能活性。本研究选择该剂量范围内的最高剂量（30 mg/kg）。根据文献和我们自身的经验，选择较高剂量的参考药物是为了检测所选药物改变纹状体或伏隔核细胞外多巴胺水平的能力。每次给药后，采集240分钟的样本，然后将其分成两份（35 µl/15 µl）。第一份样本储存在4°C，并在24小时内测定多巴胺含量。另一份样本冷冻保存于-70°C，直至测定DOPAC和HVA含量。

代谢/代谢物
Deramciclane 已知的人类代谢物包括 N-甲基-2-[(1,7,7-三甲基-2-苯基-2-双环[2.2.1]庚基)氧基]乙胺。

[1]. Deramciclane, a putative anxiolytic drug, is a serotonin 5-HT2C receptor inverse agonist but fails to induce 5-HT2C receptor down-regulation. Psychopharmacology (Berl). 1998 Mar;136(2):99-104.
[2]. Comparison of the effects of deramciclane, ritanserin and buspirone on extracellular dopamine and its metabolites in striatum and nucleus accumbens of freely moving rats. Basic Clin Pharmacol Toxicol. 2008 Jan;102(1):50-8

德拉西克兰（EGIS-3886）用于治疗多种焦虑症。德拉西克兰与其他抗焦虑药物的不同之处在于它并非苯二氮卓类药物，因此具有不同的结构和作用靶点。它拮抗5-HT2A受体，激动5-HT2C受体，并作为GABA再摄取抑制剂发挥作用。

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药物适应症
已研究用于治疗焦虑症。

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作用机制
德拉西克兰是一种新型的非苯二氮卓类抗焦虑化合物。它是选择性5-HT(2A)和5-HT(2C)受体拮抗剂，也具有反向激动剂特性。

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总之，本研究的主要发现如下：1）假定的抗焦虑药Deramciclane是一种5-HT2C受体拮抗剂，具有反向激动剂特性；2）单次给予抗焦虑剂量的deramciclane可导致大鼠脑内5-HT2C（和5-HT2A）受体的显著体内占据； 3) 长期（14 天，每日一次，皮下注射）给予地拉西克兰（10 mg/kg 和 0.5 mg/kg）治疗，不会改变大鼠脉络丛中 5-HT2C 受体激动剂或拮抗剂放射性配体的结合量。[1]

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高剂量富马酸地拉西克兰可有效提高伏隔核中多巴胺及其代谢物的细胞外水平，同时，根据 DOPAC 和 HVA 的 AUC0-240 min 判断，纹状体中多巴胺代谢物的水平也显著升高。盐酸丁螺环酮和 30 mg/kg 富马酸地拉西克兰均能显著提高伏隔核中多巴胺的细胞外水平，且高于纹状体。在伏隔核中，30 mg/kg 富马酸地拉西克兰也能显著提高细胞外 HVA 的水平，且高于纹状体。这些变化可能与其抗焦虑活性相关。硫酸右旋安非他明在纹状体中提高细胞外多巴胺水平和降低多巴胺代谢物水平的效果显著优于伏隔核。这与安非他明诱发的运动活性增强作用相符。单次使用富马酸地拉西克兰、盐酸丁螺环酮或利坦色林均无显著抗焦虑作用，而30 mg/kg的富马酸地拉西克兰则显著提高了大鼠伏隔核壳部的细胞外多巴胺水平。盐酸丁螺环酮和30 mg/kg的富马酸地拉西克兰均能提高细胞外DOPAC和HVA的水平。关于本研究的主要目的，我们得出结论：所研究的最高单次剂量富马酸地拉西克兰具有类似抗精神病药或丁螺环酮的作用，尤其是在中脑边缘系统中。在大鼠中，地拉西克兰的抗焦虑剂量和抗精神病剂量之间至少存在 5 倍的差异。[2]

C24H35NO5

417.55

417.252

C, 69.04; H, 8.45; N, 3.35; O, 19.16

120444-72-6

120444-71-5;120444-72-6 (fumarate);

6438165

Typically exists as solid at room temperature

375.2ºC at 760 mmHg

110.6ºC

7.93E-06mmHg at 25°C

4.018

87.07

2

6

7

30

518

3

CN(C)CC(NNC(=O)C(C1=CC=CC=C1NC(=O)C)=O)=O

RFQWRWCCNQNACG-HJYQBBATSA-N

InChI=1S/C20H31NO.C4H4O4/c1-18(2)17-11-12-19(18,3)20(15-17,22-14-13-21(4)5)16-9-7-6-8-10-16;5-3(6)1-2-4(7)8/h6-10,17H,11-15H2,1-5H3;1-2H,(H,5,6)(H,7,8)/b;2-1+/t17-,19-,20+;/m1./s1

(E)-but-2-enedioic acid;N,N-dimethyl-2-[[(1R,2S,4R)-1,7,7-trimethyl-2-phenyl-2-bicyclo[2.2.1]heptanyl]oxy]ethanamine

Deramciclane-fumarate; Deramciclane fumarate; 120444-72-6; exo-EGYT 3886; EGIS 3886; UNII-W1183TY0EE; W1183TY0EE; EGIS-3886; DERAMCICLANE FUMARATE [MI]; Deramciclane fumarate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。