Diphenyl Blue

别名: 锥虫兰; 台盼蓝; 曲利苯蓝; 直接蓝 14; 3,3'-{[3,3'-二甲基-(1,1'-二苯基)-4,4'-二基]双(偶氮)}-双(5-氨基-4-羟基-2,7-萘二磺酸)四钠盐;Direct Blue 14 直接蓝 14;曲利本蓝;曲利苯蓝,BS;台盼蓝 Trypan Blue;直接蓝;锥虫蓝;锥虫蓝(台盼蓝);曲利本兰;曲利本蓝,锥虫蓝,直接蓝3B,台盼兰; 曲利苯兰;曲利苯蓝,台盼蓝;曲利苯蓝,苔盼蓝;直接蓝 3B
目录号: V29505 纯度: Dye content ≥60.00%
二苯蓝(台盼蓝)是一种细胞活力染料,是应用最广泛的死细胞识别染料,常用于检测细胞膜完整性和细胞活力。
Diphenyl Blue CAS号: 72-57-1
产品类别: New1
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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纯度: =72.1%

产品描述
二苯蓝(台盼蓝)是一种细胞活力染料,也是应用最广泛的死细胞鉴定染料,常用于检测细胞膜完整性和细胞活力。二苯蓝染色是组织和细胞培养中常用的方法之一。当细胞失去活性或细胞膜不完整时,二苯蓝可将其染成蓝色。正常活细胞具有完整的细胞膜结构,能够排斥二苯蓝,因此不会被染成蓝色。然而,巨噬细胞可以吞噬二苯蓝,因此二苯蓝可用作巨噬细胞的活细胞染色剂。
二苯蓝(CAS 72-57-1),又称台盼蓝或直接蓝14,是一种酸性偶氮染料,广泛用作细胞活力染料,用于区分活细胞和死细胞。二苯蓝的分子式为C₃₄H₂₄N₆Na₄O₁₄S₄,分子量为960.81 g/mol,是目前最常用的死细胞染料,可用于检测细胞膜完整性和细胞活力。当细胞失活或细胞膜不完整时,二苯蓝可将其染成蓝色。该化合物广泛应用于组织和细胞培养方法中。在超声辅助下,其在水中的溶解度可达10 mg/mL (10.41 mM)。
生物活性&实验参考方法
靶点
Diphenyl Blue targets the cell membrane of non-viable cells. As an acid azo dye, it is negatively charged and cannot penetrate the intact cell membranes of viable cells. However, when cells lose viability or their membranes become compromised, the dye can enter the cell and bind to intracellular proteins, staining them blue. This property makes it a vital reference dye for assessing cell membrane integrity and viability. It does not have a specific therapeutic target but is a valuable tool for cell biology research.
体外研究 (In Vitro)
1. 台盼蓝工作液的配制 1.1 使用0.85%氯化钠和0.4%台盼蓝配制储存液。例如,使用100 mL 0.85%氯化钠溶液和400 mg台盼蓝。注:建议使用预先制备的无血清细胞或PBS,分装后立即使用。1.2 配制0.04%台盼蓝工作液。注:请根据实际情况调整台盼蓝工作液的配制方法。2. 细胞染色 2.1 悬浮细胞:离心收集细胞,加入PBS洗涤两次,每次5分钟。贴壁细胞:弃去培养基,加入胰岛消化后的细胞。离心并弃去上清液后,加入PBS洗涤两次,每次5分钟。2.2 加入1 mL台盼蓝工作液,置于冰箱冷冻5分钟。 2.3 在 4°C 下以 400 g 离心 3-4 分钟,弃去上清液。2.4 用 PBS 洗涤细胞两次,每次 5 分钟。2.5 将细胞重悬于 1 mL 无血清细胞悬液或 PBS 中,可通过直接计数细胞下方的细胞或拍摄细胞下方照片后计数,更可靠地评估细胞死亡率。
在体外,二苯蓝广泛用于评估各种细胞培养应用中的细胞活力。它是识别死细胞最常用的染料。将该染料添加到细胞悬液中,活细胞(细胞膜完整)不染色,而死细胞(细胞膜受损)被染成蓝色。使用血细胞计数器或自动细胞计数器计数细胞,即可确定染色细胞的百分比。该化合物能够区分活细胞和死细胞,使其成为研究实验室进行细胞计数和活力评估的重要工具。
体内研究 (In Vivo)
二苯蓝在体内不用作治疗药物。其应用仅限于体外细胞实验,用于研究目的。由于其毒性和缺乏药理活性,该化合物不用于动物或人类的治疗。其用途严格限于实验室环境下的细胞活力检测。
酶活实验
二苯蓝是一种用于细胞检测的细胞活力染料,因此不适用于体外非细胞检测。其特性主要体现在其光谱特征和对非活性细胞的染色能力上。其纯度可通过高效液相色谱(HPLC)或其他分析方法进行评估。
细胞实验
二苯蓝的主要应用是体外细胞检测。将细胞悬浮于含有该染料的溶液中,使用血细胞计数器或自动细胞计数器计数细胞,从而确定染色(非活性)细胞的百分比。该染料通常在PBS缓冲液中以0.04%的最终浓度使用。该检测方法快速简便,因此已成为许多实验室评估细胞活力的标准方法。
动物实验
二苯蓝是一种细胞活力染料而非治疗剂,因此不进行体内动物实验。它的用途仅限于体外实验。
药代性质 (ADME/PK)
吸收、分布和排泄
在动物研究中,观察到锥虫蓝蛋白能够穿过虹膜和脉络膜的血管壁,但不能穿过视网膜血管壁。皮下或腹腔注射后,锥虫蓝蛋白在小鼠和大鼠体内迅速吸收并广泛分布。血清浓度在2小时内达到峰值;它似乎与血清蛋白结合,并迅速经尿液排出,同时也被网状内皮系统吸收。锥虫蓝蛋白无法到达大鼠胚胎,但会在母体网状内皮系统和胎盘中积聚。使用环标记放射性锥虫蓝蛋白的实验表明,没有证据表明胚胎吸收了14C。绒毛尿囊胎盘形成后未观察到致畸作用,这表明卵黄囊功能在发病机制中起着重要作用。在内脏卵黄囊细胞中可见该染料。有关锥虫蓝(6种)的吸收、分布和排泄的更完整数据,请访问HSDB记录页面。
代谢/代谢物
锥虫蓝可在体外被大鼠肝酶还原为邻甲苯胺和2,8-二氨基-1-萘酚-3,6-二磺酸。
包括锥虫蓝在内的六种偶氮染料被还原、N-乙酰化和N-共轭。在大鼠尿液中未检测到N,N'-二乙酰化代谢物。
基于β-二酮偶联组分的偶氮染料主要以互变异构体腙的形式存在。我们制备了一系列基于联苯胺及其同系物的腙类染料……在添加了FMN的仓鼠肝脏线粒体上清液(S-9)中,这些腙类染料能够抵抗酶促还原;而在相同条件下,偶氮染料(如台盼蓝)则被迅速还原。
我们对大鼠进行了代谢实验,分别给予九种基于二甲基联苯胺、二甲氧基联苯胺或二氯联苯胺的偶氮染料,以确定游离胺同系物、其单乙酰或二乙酰代谢物以及碱性水解结合物是否会从尿液中排出。每次给药剂量为2 mg,并每隔96小时收集一次尿液样本。代谢物的峰值浓度出现在给药后0-12小时或12-24小时;在九种染料中的七种中,48小时后尿液中未检测到代谢物。所有代谢物的最低可检测浓度为 12 ppb 或更低。在大鼠体内,所有九种染料均转化为可测量的联苯胺类代谢物。
体外实验测定了苯巴比妥预处理的大鼠肝微粒体还原苋菜红、日落黄、刚果红、锥虫蓝、氯胺天蓝 FF 和直接黑 38 中偶氮基团的能力。苋菜红和日落黄作为阳性对照。在源自联苯胺(一种致癌物)或其同系物的染料中,只有直接黑 38 的还原率显著升高;其还原率约为苋菜红的 10%。在沙门氏菌/微粒体试验中测试了这些染料的致突变性,结果显示只有直接黑 38 具有致突变活性。该染料的致突变性可能部分归因于致突变物 1,2,4-三氨基苯。直接黑38的致突变活性和偶氮还原作用与氧气的存在无关。哺乳动物肝脏在联苯胺或其同系物衍生的染料的偶氮还原过程中可能只起很小的作用或可以忽略不计的作用。二苯蓝的分子量为960.81 g/mol,分子式为C₃₄H₂₄N₆Na₄O₁₄S₄。它也被称为锥虫蓝和直接蓝14。该化合物在超声辅助下可溶于水,浓度为10 mg/mL (10.41 mM)。应在适当的条件下储存,通常在室温下避光防潮。在适当的储存条件下,其溶液稳定性良好。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
相互作用
本研究以Wistar白化大鼠为模型,探讨了L-谷氨酸对锥虫蓝致死和致畸作用的影响。妊娠第2天至第20天,在饲料中添加L-谷氨酸;妊娠第6天至第10天,将L-谷氨酸悬浮于芝麻油中,通过灌胃给药。妊娠第8天,分别腹腔注射(14 mg/kg母鼠体重)或皮下注射(160 mg/kg)致畸剂量的锥虫蓝。锥虫蓝注射后,大鼠每日谷氨酸摄入量为每只600至1500 mg。妊娠第20天进行胎儿检查。结果表明,谷氨酸未能有效保护大鼠胚胎免受锥虫蓝的致死和致畸作用。这些结果与在小鼠中观察到的结果相矛盾。单独使用芝麻油会导致胚胎死亡,但不会导致畸形。
非人类毒性值
大鼠口服LD50:6200 mg/kg
小鼠皮下注射LD50:267 mg/kg
小鼠静脉注射LD50:328 mg/kg

二苯蓝被列为危险化学品,应采取适当的安全预防措施进行操作。它是一种疑似致癌物,应在通风良好的区域使用,并佩戴适当的个人防护装备。它不适用于人类或兽医用途。处理该化合物时,应遵循标准的实验室安全预防措施。
参考文献

[1]. Daly, M. L., DeRosa, C. A., Kerr, C., Morris, W. A., & Fraser, C. L. (2016). Blue thermally activated delayed fluorescence from a biphenyl difluoroboron β-diketonate. RSC Advances, 6(85), 81631–81635. doi:10.1039/c6ra18374c.

其他信息
根据加州劳动法,商业级锥虫蓝可能具有致癌性。锥虫蓝是一种蓝灰色至深蓝色的粉末。(NTP, 1992) 锥虫蓝是一种有机磺酸盐,是3,3'-[(3,3'-二甲基联苯-4,4'-二基)二氮杂卓-2,1-二基]双(5-氨基-4-羟基萘-2,7-二磺酸)的四钠盐。它用作组织学染料、荧光染料和致癌物。它是一种有机磺酸盐和有机钠盐。它含有锥虫蓝(4-)。锥虫蓝是一种酸性偶氮染料,常用作染色剂以区分活细胞和死细胞。它能使死细胞变蓝,而活细胞不染色。它是一种已知的动物致癌物和实验致畸物。一种广泛用作染色剂的二氮杂萘磺酸盐。另见:锥虫蓝(注:已移至)。
作用机制
每公斤体重50毫克锥虫蓝似乎是最佳致畸剂量。锥虫蓝的一个显著特点是,在妊娠第9天后进行治疗时,畸形发生率很低。这一事实支持了其他证据,即其作用机制依赖于卵黄囊营养的破坏。……研究证实,锥虫蓝可能作用于内脏卵黄囊的营养功能。锥虫蓝未能直接作用于胚胎通常被认为是……
绒毛尿囊胎盘形成后未观察到致畸作用也表明,卵黄囊功能在发病机制中起着重要作用。该染料可在内脏卵黄囊细胞中显影。……蛋白质-锥虫蓝复合物在溶酶体中富集。锥虫蓝可能干扰卵黄囊溶酶体中的酶促消化,从而干扰正常的胚胎营养过程。
治疗用途
一种广泛用作染色剂的重氮萘磺酸盐。
一种用于治疗昏睡病的药物。
/既往用途/
0.15% MembraneBlue 适用于眼科手术,作为玻璃体切除术中视网膜前膜染色的辅助手段,以方便组织切除。
/实验性治疗/ 锥虫蓝可用于染色上斜肌腱,以便识别和确定其止点,从而降低手术难度。
有关锥虫蓝(6 种类型)治疗用途的更完整数据,请访问 HSDB 记录页面。
药物警告
使用 VisionBlue 后报告的不良反应包括高含水量人工晶状体变色(参见禁忌症)以及后囊膜和玻璃体表面意外染色。后囊膜染色或玻璃体表面染色通常具有自限性,可持续长达一周。
目前尚不清楚该药物是否会分泌到人乳中。由于许多药物会分泌到母乳中,因此哺乳期妇女使用锥虫蓝时应谨慎。
如果计划植入脱水(干燥)亲水性丙烯酸酯人工晶状体,则禁用 VisionBlue,因为染料可能被晶状体吸收并染色。
建议注射后立即彻底冲洗前房,以清除眼内残留的 VisionBlue。
FDA 妊娠风险分级:C/风险无法排除。目前缺乏充分、对照良好的临床研究,动物研究也未显示对胎儿有任何风险或缺乏相关数据。妊娠期间使用此药可能对胎儿造成伤害。然而,潜在益处可能大于潜在风险。
二苯蓝(锥虫蓝、直接蓝 14)是一种酸性偶氮染料,广泛用作细胞活力染料,用于区分活细胞和死细胞。它是识别死细胞最常用的染料,用于检测细胞膜完整性和细胞活力。该化合物用于组织和细胞培养方法。并非治疗剂;仅供研究和诊断用途。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C34H24N6NA4O14S4
分子量
960.8052
精确质量
959.982
CAS号
72-57-1
PubChem CID
6296
外观&性状
Light brown to black solid powder
密度
1.007 g/mL at 20 °C
熔点
>300 °C(lit.)
LogP
10.785
tPSA
404.26
氢键供体(HBD)数目
4
氢键受体(HBA)数目
20
可旋转键数目(RBC)
5
重原子数目
62
分子复杂度/Complexity
1790
定义原子立体中心数目
0
InChi Key
GLNADSQYFUSGOU-UHFFFAOYSA-J
InChi Code
InChI=1S/C34H28N6O14S4.4Na/c1-15-7-17(3-5-25(15)37-39-31-27(57(49,50)51)11-19-9-21(55(43,44)45)13-23(35)29(19)33(31)41)18-4-6-26(16(2)8-18)38-40-32-28(58(52,53)54)12-20-10-22(56(46,47)48)14-24(36)30(20)34(32)42;;;;/h3-14,41-42H,35-36H2,1-2H3,(H,43,44,45)(H,46,47,48)(H,49,50,51)(H,52,53,54);;;;/q;4*+1/p-4
化学名
tetrasodium;5-amino-3-[[4-[4-[(8-amino-1-hydroxy-3,6-disulfonatonaphthalen-2-yl)diazenyl]-3-methylphenyl]-2-methylphenyl]diazenyl]-4-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~25 mg/mL (~26.02 mM)
H2O : ~1 mg/mL (~1.04 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.0408 mL 5.2039 mL 10.4079 mL
5 mM 0.2082 mL 1.0408 mL 2.0816 mL
10 mM 0.1041 mL 0.5204 mL 1.0408 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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