α-glucosidase

α-葡萄糖苷酶抑制活性[2]
几十年来，研究人员已经证明，桑叶提取物对大鼠和人α-葡萄糖苷酶有很强的抑制作用（Anno et al., 2004, Miyahara et al., 2004, Oku et al., 2006）。α-葡萄糖苷酶位于肠细胞的刷状缘表面膜上，被认为是淀粉和其他碳水化合物消化过程中最重要的酶（Herscovics, 1999）。通过膳食食物和药物改变碳水化合物代谢可能具有治疗价值。1-Deoxynojirimycin (Duvoglustat)/DNJ结合到α-葡萄糖苷酶的活性中心，在小肠中是该酶的有效抑制剂（Junge, Matzke, & Stoltefuss, 1996）。 对于营养保健品的商业开发，应该知道目标化合物及其在产品中的浓度，以达到最佳的治疗效果。在桑树干茶中，我们认为DNJ是关键化合物，因为它能强烈抑制α-葡萄糖苷酶，桑叶中含有高浓度的DNJ（占总亚氨基糖的50%）（Asano et al., 2001）。α-葡萄糖苷酶抑制与纯DNJ (r = 0.96)（图4B）和桑叶DNJ含量（r = 0.84）（图4A）高度相关。在1-Deoxynojirimycin (Duvoglustat)/DNJ浓度下，桑叶提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性高于DNJ标准：如在5 μg DNJ/ml时，桑叶提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用为27%，纯DNJ对α-葡萄糖苷酶的抑制作用为23%。这种额外的抑制作用可以解释为桑树提取物中存在其他亚氨基糖（即n -甲基- dnj， 2-O-α-d-半乳糖酰氨基- dnj和fagomine）和其他成分，如异槲皮素，槲皮素和芦丁。

Duvoglustat 盐酸盐（1-Deoxynojirimycin 盐酸盐）（20-80 mg/kg；静脉注射；每天一次，持续四个星期）显示出抗肥胖作用 [3]。盐酸度伏鲁司他通过激活 db/db 小鼠骨骼肌中的胰岛素信号 PI3K/AKT 通路，显着提高胰岛素敏感性[3]。

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1-Deoxynojirimycin (Duvoglustat)/DNJ作为肠道α-葡萄糖苷酶抑制剂广泛用于糖尿病的治疗。然而，关于其对改善胰岛素敏感性的作用的报道很少。本研究的目的是探讨DNJ是否通过改善胰岛素敏感性来降低高血糖。建立了一种制备大量DNJ的经济方法。然后，db/db小鼠静脉注射DNJ(20、40和80 mg·kg（-1）·d(-1)) 4周。通过血糖和生化分析来评价其对高血糖的治疗效果，并探讨骨骼肌的相关分子机制。DNJ显著降低体重、血糖和血清胰岛素水平。DNJ治疗也改善了葡萄糖耐量和胰岛素耐量。此外，虽然骨骼肌中总蛋白激酶B （AKT）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、胰岛素受体β (IR-β)、胰岛素受体底物-1 （IRS1）和葡萄糖转运蛋白4 （GLUT4）的表达不受影响，但DNJ处理显著增加了Ser473-AKT、p85-PI3K、Tyr1361-IR-β和Tyr612-IRS1的GLUT4易位和磷酸化。这些结果表明，DNJ通过激活db/db小鼠骨骼肌中胰岛素信号通路PI3K/AKT显著改善胰岛素敏感性。[3]

α-葡萄糖苷酶抑制试验[1]
α-葡萄糖苷酶抑制活性是通过Ma， Hattori， Daneshtalab和Wang（2008）描述的程序的修改来测量的。简单地说，将大鼠肠丙酮粉（1 g）悬浮在100 mM磷酸钾缓冲液（pH 7.0）中，超声振荡20 min。在3000 rpm下离心30 min后，将上清液作为α-葡萄糖苷酶的来源。底物（2 mM 4-硝基苯-α-d-葡萄糖吡喃苷）在100 mM磷酸钾缓冲液（pH 7.0）中移液至96孔板（40 μl/孔）。加入5 μl桑树样品或对照溶液（乙醇与蒸馏水的比例为50:50）混合。加入酶（5 μl）后，37℃孵育20 min，测定405 nm的紫外吸光度。计算桑树样品和标准1-Deoxynojirimycin (Duvoglustat)/DNJ α-葡萄糖苷酶抑制活性的百分比为：（ΔAcontrol-ΔAsample） × 100/ΔAcontrol，其中ΔA为405 nm吸光度。

蛋白质印迹[3]
为了研究1-脱氧野尻霉素/1-Deoxynojirimycin (Duvoglustat)对胰岛素信号通路的影响，如前所述进行了蛋白质印迹分析。简而言之，骨骼肌组织（0.1 g）在裂解缓冲液（50 mM Tris（pH 7.4）、150 mM NaCl、0.1%SDS、0.5%脱氧胆酸钠、1%NP40、10μL磷酸酶抑制剂、1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100 mM PMSF）中裂解，在4°C下以16000×g离心15分钟，并通过双辛可宁酸蛋白测定法定量蛋白质浓度。将等量的蛋白质（70μg）装载在10%SDS-PAGE上，并转移到PVDF膜上。膜被阻断后，它们与抗IR-β、对-Tyr1361-IR-β，IRS1、对-Tur612-IRS1、PI3K、对-p85-PI3K、AKT、对-Ser473-AKT、GLUT4、β-actin或Na+K+-ATP酶α1的一抗在4°C下孵育过夜，然后在室温下与HRP偶联的二抗孵育2小时。使用ECL检测试剂盒观察蛋白质条带。以β-actin为对照进行总蛋白表达的正常化。以Na+K+-ATP酶α1为对照进行m-GLUT4表达的正常化。

db/db小鼠
20、40、80 mg/kg
静脉注射；每日一次，持续四周

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十周后，接受静脉注射生理盐水的野生型C57BLKS小鼠作为正常对照组（N对照组）（n = 6）。db/db小鼠分为四组（n = 6）：第一组作为糖尿病对照组，接受静脉注射生理盐水（D对照组）。第二、三、四组分别静脉注射1-脱氧野尻霉素（Duvoglustat）/DNJ 20、40和80 mg·kg−1·day−1。选择静脉注射是为了避免DNJ作为α-糖苷酶抑制剂在胃肠道中的作用。为了选择DNJ的剂量，我们之前的研究通过ICR小鼠的葡萄糖耐量试验筛选了大量中药，其中包括桑叶。我们发现从桑叶中分离得到的生物碱（DNJ 40 mg·kg−1）能够改善ICR小鼠的葡萄糖耐量（图A1）。随后，我们测试了10、20和40 mg·kg−1的剂量，但10和20 mg·kg−1均未观察到任何效果（图A2）。因此，我们最终选择了1-脱氧野尻霉素（Duvoglustat）/DNJ的剂量为20、40和80 mg·kg−1·day−1。所有剂量均连续给药4周。每周测量小鼠的血糖、体重、平均食物摄入量、饮水量和尿量。实验结束后，小鼠禁食12小时后用水合氯醛麻醉，并采集血样测定血清胰岛素水平。此外，采血后取出骨骼肌，用生理盐水冲洗，立即置于−80 °C保存[3]。

大鼠口服LD50 >5 gm/kg 行为：嗜睡（总体活动减少）；肾脏、输尿管和膀胱：尿量增加；皮肤及其附属器官（皮肤）：毛发：其他。《国际毒理学杂志》，16（增刊）

[1]. 1-Deoxynojirimycin: Occurrence, Extraction, Chemistry, Oral Pharmacokinetics, Biological Activities and In Silico Target Fishing. Molecules. 2016 Nov 23;21(11). pii: E1600.

[2]. Development of high 1-deoxynojirimycin (DNJ) content mulberry tea and use of response surface methodology to optimize tea-making conditions for highest DNJ extraction. LWT - Food Science and Technology. Volume 45, Issue 2, March 2012, Pages 226-232.

[3]. 1-Deoxynojirimycin Alleviates Insulin Resistance via Activation of Insulin Signaling PI3K/AKT Pathway in Skeletal Muscle of db/db Mice. Molecules. 2015 Dec 4;20(12):21700-14.

AT2220 是一种用于治疗庞贝氏症的实验性口服药物，属于一类被称为药理伴侣的分子。它是一种小分子，旨在作为药理伴侣，特异性结合、稳定并促进 α-葡萄糖苷酶 (GAA) 的正确折叠和转运。GAA 被转运至溶酶体，在那里发挥其正常功能。研究表明，AT2220 可提高庞贝氏症患者来源细胞系和表达错误折叠 GAA 的转染细胞中 GAA 的活性。
一种具有抗病毒作用的 α-葡萄糖苷酶抑制剂。脱氧野尻霉素衍生物可能具有抗HIV活性。

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药物适应症
庞贝氏病，又称II型糖原贮积症或酸性麦芽糖酶缺乏症，是一种相对罕见的神经肌肉和溶酶体贮积症，由一种名为α-葡萄糖苷酶（Gaa）的关键酶的遗传基因突变引起。

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作用机制
AT2220旨在作为一种药理学伴侣，选择性地与导致庞贝氏病的错误折叠酶Gaa结合。AT2220与该酶结合后，被认为能够促进该酶的正确折叠、加工和转运，使其从内质网到达其最终目的地——溶酶体，溶酶体是该酶在细胞内发挥作用的区域。一旦到达溶酶体，药理学伴侣蛋白就会被置换出来，酶就能发挥其正常功能，即分解其天然底物糖原。

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杜沃格鲁司他是一种具有2R,3R,4R,5S构型的2-(羟甲基)哌啶-3,4,5-三醇的光学活性形式。它是一种EC 3.2.1.20（α-葡萄糖苷酶）抑制剂、抗HIV药物、抗肥胖药物、细菌代谢产物、降血糖药物、保肝药物和植物代谢产物。它是一种2-(羟甲基)哌啶-3,4,5-三醇和哌啶生物碱。
一种具有抗病毒作用的α-葡萄糖苷酶抑制剂。脱氧野尻霉素的衍生物可能具有抗HIV活性。
据报道，1-脱氧野尻霉素存在于南极假丝酵母（Parmotrema austrosinense）、前缘假丝酵母（Parmotrema praesorediosum）以及其他有相关数据的生物体中。
一种具有抗病毒作用的α-葡萄糖苷酶抑制剂。脱氧野尻霉素的衍生物可能具有抗HIV活性。
另见：法戈明（注释已移至此处）。

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1-脱氧野尻霉素（DNJ，C₆H13NO₄，163.17 g/mol）是一种生物碱氮杂糖或亚氨基糖，是一种存在于桑叶、鸭跖草（Commelina communis）以及多种细菌菌株（如芽孢杆菌属和链霉菌属）中的具有生物活性的天然化合物。脱氧野尻霉素具有降血糖、抗肥胖和抗病毒特性。因此，本文旨在详细综述脱氧野尻霉素（DNJ）的来源、提取、纯化、测定、化学性质和生物活性等方面的现有知识，以便研究人员能够利用这些知识探索DNJ的未来研究方向。此外，本文还将采用合适的计算机模拟方法研究DNJ可能的分子靶点。[1]

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桑葚1-脱氧野尻霉素（DNJ）是一种强效的α-葡萄糖苷酶抑制剂，能够抑制餐后血糖，从而可能预防糖尿病。目前，桑葚干茶在许多国家作为功能性食品进行商业销售，但由于其DNJ含量较低（约100 mg/100 g干重），这些产品可能无法提供有效剂量（6 mg DNJ/60 kg体重）。因此，开发DNJ含量更高的茶饮是十分必要的。为了研究DNJ的分布及其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性，我们调查了35个泰国桑树品种中DNJ的含量。幼叶中DNJ的含量在不同桑树品种间存在差异，范围为30至170 mg/100 g干叶。DNJ含量最高的品种为Kam、Burirum 60和Burirum 51。叶片位置对DNJ含量有显著影响：嫩枝 > 幼叶 > 成熟叶。DNJ浓度与α-葡萄糖苷酶抑制活性呈高度相关（r = 0.84），表明桑叶的α-葡萄糖苷酶抑制活性主要来源于DNJ。因此，我们利用Burirum 60等品种的嫩枝制作了高DNJ含量的桑叶茶，其DNJ含量高达300 mg/100 g干叶。我们采用响应面法优化了制茶条件，以获得最高的DNJ提取率。在98℃下保持400秒，高DNJ含量干茶中约95%的总DNJ被提取出来；这些条件可适用于制备高DNJ含量的商业产品。一杯（230毫升，标准份量）富含DNJ的桑叶茶含有足够的DNJ（6.5毫克），可有效抑制餐后血糖。[2]

C6H14CLNO4

199.631

199.061

C, 36.10; H, 7.07; Cl, 17.76; N, 7.02; O, 32.06

73285-50-4

1-Deoxynojirimycin;19130-96-2

13018787

White to off-white solid powder

1.456 g/cm3

361.1ºC at 760 mmHg

195-196ºC

197.3ºC

92.95

6

5

1

12

132

4

Cl.OC[C@H]1NC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O

ZJIHMALTJRDNQI-VFQQELCFSA-N

InChI=1S/C6H13NO4.ClH/c8-2-3-5(10)6(11)4(9)1-7-3/h3-11H,1-2H21H/t3-,4+,5-,6-/m1./s1

(2R,3R,4R,5S)-2-(hydroxymethyl)piperidine-3,4,5-triol hydrochloride

Duvoglustat; BAY-h 5595; AT2220; AT-2220; AT 2220; DNJ; 1DNJ; NOJ; Moranoline; Moranolin; Duvoglustat hydrochloride; deoxynojirimycin; 1-Deoxynojirimycin; 1-Deoxy-Nojirimycin 1-Deoxynojirimycin hydrochloride; 73285-50-4; Duvoglustat HCl; Moranoline hydrochloride; Moranoline HCl; (2R,3R,4R,5S)-2-(Hydroxymethyl)piperidine-3,4,5-triol hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ~250 mg/mL (~1252.32 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。