Echinomycin   中文名称: 醌霉素A

HIF-1 (HIF-1α/HIF-1β heterodimer) binding to the hypoxia-responsive element (HRE) core sequence 5'-RCGTG-3' [1]
HIF1α [2]

用棘霉素（0-10 nM；16 小时；U251 细胞）治疗可显著且剂量依赖性地降低缺氧产生的 VEGF mRNA 的产量。棘霉素的EC50值为1.2 nM，能高效且剂量依赖性地抑制U251-HRE细胞中缺氧刺激的荧光素酶表达[1]。

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在利用重组HIF-1α-bHLH-PAS和HIF-1β-bHLH-PAS蛋白进行的DNA结合ELISA实验中，棘霉素剂量依赖性地抑制HIF-1 DNA结合活性，在320 nmol/L浓度下几乎完全抑制[1]。
-在EMSA实验中，棘霉素（浓度高达10 μmol/L）特异性抑制HIF-1 DNA结合活性，但不抑制AP-1（c-Fos/JunD）或NF-κB（p65）与其共有序列的结合。它还完全抑制了MCF-7细胞核蛋白与E-box寡核苷酸的结合[1]。
- 在U251细胞的ChIP实验中，Echinomycin（0.5 μmol/L）完全阻断了HIF-1与VEGF启动子HRE的结合，但不影响c-Fos与cyclin D1启动子的结合或p65与ICAM-1启动子的结合[1]。
- 在缺氧条件下，Echinomycin不影响U251细胞中HIF-1α蛋白的积累；相反，HIF-1α水平略有升高[1]。
- 在U251-HRE细胞中，Echinomycin抑制了缺氧诱导的荧光素酶表达，EC50约为1.2 nmol/L。药物洗脱后，抑制作用部分可逆（分别在 5、10 和 20 nmol/L 浓度下处理 4 小时后，恢复率分别为 94%、80% 和 42%）[1]。
- 棘霉素 (0-10 nmol/L) 呈剂量依赖性地抑制 U251 细胞中缺氧诱导的 VEGF mRNA 表达（5 倍诱导显著降低，P<0.01）[1]。
- 在 22K 寡核苷酸微阵列中，棘霉素 (20 nmol/L, 20 h) 在常氧条件下下调 276 个基因，在缺氧条件下下调 451 个基因，下调幅度≥2 倍； 17 个已知的 HIF-1 诱导基因中有 14 个被抑制了 3 倍以上 [1]。
- 在小鼠 TGB 淋巴瘤细胞中，棘霉素 可消除癌症干细胞 (c-Kit+Sca-1+) 的集落形成单位 (CFU) 活性，IC50 为 29.4 pM（通过 HRE-GFP 报告基因测定）。正常小鼠造血祖细胞 (HPC) 的敏感性大约降低了 100 倍 [2]。
- 棘霉素 (20 pM，16 小时) 选择性地增加了 c-Kit+Sca-1+ 淋巴瘤细胞的凋亡（Annexin V+ 从 1.8% 增加到 10%），但对 c-Kit-Sca-1- 细胞没有影响 [2]。
- 在 7 例原发性人类 AML 样本中，棘霉素 抑制了 CFU 活性，IC50 值介于 50-120 pM 之间。 HIF1α shRNA 沉默降低了对棘霉素的敏感性[2]。
- 与 AML 细胞群相比，棘霉素选择性地诱导 CD34+CD38- AML 干细胞亚群凋亡（数据以 Annexin V+ 细胞百分比表示，并已扣除载体对照组）[2]。
- 所用浓度的棘霉素 (20 pM) 不影响 c-Myc 功能[2]。
- DNA 热熔解分析显示，棘霉素使 HRE 寡核苷酸的 Tm 值从 51.5°C 升高至 65°C（升高 26.2%），而 NF-κB 和 AP-1 寡核苷酸的 Tm 值分别仅升高 5.5°C 和 5°C [1]。

通过选择性地清除癌症干细胞（CSCs），使用棘霉素（10 μg/kg；静脉注射；持续 40 天）治疗可有效根除异种移植模型中的人类急性髓系恶性肿瘤和鼠淋巴瘤。AML，即白血病。 HIF1α可抑制Notch通路中的负反馈环路，从而维持小鼠淋巴瘤干细胞的存活[2]。

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在同源小鼠淋巴瘤模型（腹腔注射1×10^6个培养的TGB淋巴瘤细胞的B10.BR小鼠）中，使用棘霉素（10 μg/kg/次，腹腔注射，每2天注射一次，共5次，从肿瘤注射后14天开始）治疗可完全消除肿瘤并延长小鼠的生存期（所有接受治疗的小鼠均存活至134天或252天安乐死，且无肿瘤迹象）[2]。
- 在异种NOD-SCID小鼠人急性髓系白血病（AML）模型（静脉注射8×10^6个AML患者外周血细胞的照射小鼠）中，使用棘霉素（10 μg/kg/次，每日注射，连续5天，休息2天，重复一次，从肿瘤注射后15天开始）治疗可完全消除肿瘤并延长小鼠的生存期。移植）完全清除了AML150中的人类CD45+细胞，并在第40天显著降低了AML71骨髓中的人类白血病负荷[2]。
- 在同一AML71模型中，棘霉素使人类CD45+细胞群中CD34+CD38-细胞（推定的AML干细胞）的比例降低了10倍以上。来自棘霉素治疗小鼠的骨髓在连续移植到次级受体后未能重新诱发白血病（5只受体中0只发生白血病），而来自载体治疗小鼠的骨髓则很容易诱发白血病[2]。

HIF-1 DNA结合ELISA：将含有典型HRE的生物素标记双链寡核苷酸固定在链霉亲和素包被的酶标板上。将重组HIF-1α-bHLH-PAS（10 pmol）和HIF-1β-bHLH-PAS（6 pmol）混合于缓冲液（25 mmol/L Tris-HCl pH 7.6、100 mmol/L KCl、0.2 mmol/L EDTA、20%甘油、5 mmol/L DTT）中，并在室温下预孵育5分钟。将混合物加入酶标板中，并在室温下孵育1小时。使用抗His标签单克隆抗体（1:2000）检测蛋白复合物，随后使用抗小鼠HRP偶联抗体（1:10000）进行检测。加入 TMB 底物 10 分钟后，用 0.5 mol/L H2SO4 终止反应，并在 450 nm 处读取吸光度，以 655 nm 为参比波长。化合物筛选浓度为 10 μmol/L。竞争实验使用了 50 pmol 非生物素标记的寡核苷酸 [1]。
- 电泳迁移率变动分析 (EMSA)：将重组 HIF-1α-bHLH-PAS (10 pmol) 和 HIF-1β-bHLH-PAS (6 pmol)、p65 (100 ng) 或 c-Fos (10 pmol) 以及 JunD (10 pmol) 混合于 40 μL 缓冲液（25 mmol/L Tris-HCl pH 7.6、100 mmol/L KCl、0.2 mmol/L EDTA、20% 甘油、5 mmol/L DTT、200 ng 小牛胸腺 DNA）中。室温预孵育 5 分钟后，加入 1 μL 32P 标记的探针（~50,000 cpm），冰上孵育 20 分钟。竞争实验中，使用过量100倍的未标记野生型或突变型寡核苷酸。超移位实验中，加入单克隆抗HIF-1α抗体或多克隆抗HIF-1α抗体。寡核苷酸序列：WT HRE (5'-GTGCTACGTGCTGCTACG-3')、突变型 HRE (5'-GTGCTAAAAGCTGCTAG-3')、NF-κB (5'-AGTTGAGGGGACTTCCAGGGC-3')、AP-1 (5'-CTAGTGATGAGTCAGCCGGGATC-3')、WT Myc/Max E-box (5'-AGTTGACCACGTGGTCTGGG-3')、突变型 Myc/Max (5'-AGTTGACTAAAAGGTCTGGG-3') [1]。
- DNA 热熔解分析：将含有 HRE、NF-κB 结合位点或 AP-1 结合位点的双链寡核苷酸 (0.5 μmol/L) 配制于 10 mmol/L Tris pH 8.0、1 mmol/L EDTA 缓冲液中，并添加或不添加 1 μmol/L 棘霉素 (0.1%)。 DMSO）。通过测量 260 nm 处的吸光度随温度的变化获得热转变曲线。熔解温度 (Tm) 使用软件 [1] 计算。
- 溴化乙锭置换实验：棘霉素 在 3 μmol/L 浓度下可使 HRE 寡核苷酸上的溴化乙锭置换约 50%，而即使在 10 μmol/L 浓度下也未观察到 AP-1 寡核苷酸上的显著置换 [1]。

RT-PCR[1]
细胞类型： U251 细胞
测试浓度： 0 nM、0.625 nM、1.25 nM、5 nM、10 nM
孵育时间： 16 小时
实验结果： 以剂量依赖的方式显著抑制缺氧诱导的 VEGF mRNA 表达。

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染色质免疫沉淀 (ChIP)：将 U251 细胞在有或无棘霉素 (0.5 μmol/L) 的情况下，用缺氧和去铁胺 (400 μmol/L) 处理 6 小时。细胞经交联、裂解和超声处理。采用 2 μg 抗 HIF-1α 单克隆抗体、抗 c-Fos 多克隆抗体、抗 p65 多克隆抗体或同型匹配的无关抗体进行免疫沉淀。PCR 引物：VEGF 启动子（正向引物 5'-CCTTTGGGTTTTGCCAGA-3'，反向引物 5'-CCAAGTTTGTGGAGCTGA-3'，产物 135 bp）；cyclin D1 启动子（正向引物 5'-CTACACCCCAAACAAAACCA-3'，反向引物 5'-TAACCGGGAGAAACACACCT-3'，产物 163 bp）；ICAM-1 启动子（正向引物 5'-CGTGATTCAAGCTTAGCCTG-3'，反向引物 5'-TTATTTCCGGACTGACAGGG-3'，产物 176 bp）。 PCR产物经3%琼脂糖凝胶电泳分离，并用溴化乙锭染色[1]。
- Western Blot：U251细胞在常氧或低氧条件下，用或不用棘霉素（0.5 μmol/L）处理16小时。细胞用裂解缓冲液（50 mmol/L Tris-HCl pH 7.4，1% NP40，150 mmol/L NaCl，蛋白酶抑制剂）裂解。裂解液在4°C下以13,000 rpm离心5分钟。将上清液进行SDS-PAGE电泳，并用多克隆抗体进行免疫印迹分析，包括抗HIF-1α（1:200）、抗细胞周期蛋白D1（1:200）和抗肌动蛋白（1:3000）抗体[1]。
- 荧光素酶活性检测：将U251-HRE细胞（稳定转染pGL2-TK-HRE质粒）和U251-pGL3对照细胞接种于24孔板中，并在常氧或低氧条件下，用浓度递增的棘霉素（0-1000 nmol/L）孵育16小时。测定荧光素酶活性，并以蛋白浓度进行标准化。为了验证其可逆性，将细胞用棘霉素（5、10、20 nmol/L）处理4小时，洗涤三次，然后在常氧或低氧条件下培养36小时[1]。
- VEGF mRNA的实时定量PCR：将U251细胞在常氧或低氧条件下培养16小时，并加入递增浓度的棘霉素（0-10 nmol/L）。提取总RNA，进行逆转录，并使用人VEGF引物（正向引物5'-TACCTCCACCATGCCAAGTG-3'，反向引物5'-ATGATTCTGCCCTCCTCCTTC-3'）和探针（5'-FAM-TCCCAGGGTGCACCATGGGC-TAMRA-3'）进行TaqMan实时定量PCR。 18S rRNA 用作内参 [1]。
- 微阵列分析：将 U251 细胞在常氧或低氧条件下用棘霉素 (20 nmol/L) 处理 20 小时。总 RNA 与氨基烯丙基修饰的 dUTP 进行逆转录，分别与 Cy3（对照）或 Cy5（处理组）偶联，并与人 22K 寡核苷酸微阵列杂交。扫描阵列并分析数据 [1]。
- 小鼠淋巴瘤 CSC 的集落形成单位 (CFU) 测定：将 TGB 淋巴瘤细胞培养于甲基纤维素培养基中。加入指定浓度的棘霉素。培养后计数集落。CSC 的 IC50 为 29.4 pM。对于正常造血祖细胞（HPC），骨髓细胞也采用类似方法进行检测[2]。
- 人急性髓系白血病（AML）的集落形成单位（CFU）测定：将原代AML细胞（2.5×10^5/mL）用棘霉素预处理24小时，然后以10^5/孔的密度接种于培养板中进行CFU测定。7-10天后计数集落。在7个AML样本中，IC50值范围为50-120 pM [2]。
- 细胞凋亡检测（Annexin V）：将培养的TGB淋巴瘤细胞用Echinomycin（20 pM）或载体处理16小时，然后用c-Kit、Sca-1和Annexin V染色。在c-Kit⁺Sca-1⁺和c-Kit^-Sca-1^-亚群中确定Annexin V⁺细胞的百分比[2]。
- 人AML细胞凋亡检测：将原代AML细胞培养过夜，然后在含有细胞因子（CSF、GM-CSF、IL-3）的培养基中用Echinomycin（0-200 pM）处理30小时。用CD34、CD38、Annexin V和DAPI对细胞进行染色。 Annexin V+ DAPI+/- 细胞定量分析[2]。
- HRE-GFP 报告基因慢病毒检测：将含有三个 HRE 元件、位于最小 TATA 盒上游和 EGFP 的慢病毒报告基因转导至 TGB 淋巴瘤细胞。通过流式细胞术分析 GFP+ 细胞（指示 HIF 活性）。棘霉素 可降低 c-Kit+GFP+ 细胞的百分比，IC50 为 29.4 pM [2]。
- shRNA 敲低和互补：将表达 HIF1α shRNA（sh-1：5'-ctagagatgcagaagact-3'；sh-2：5'-gagagaaatgcttacaca-3'）或对照序列的慢病毒转导至 TGB 淋巴瘤细胞。经杀稻瘟菌素筛选后，分析 CFU、c-Kit+Sca-1+ 细胞百分比和 Hes1 表达。采用对shRNA具有抗性的HIF1α cDNA进行互补实验[2]。

动物/疾病模型：NOD-SCID（重症联合免疫缺陷）小鼠接受1.8Gy照射，并静脉注射AML-71和AML-150患者的外周血细胞[2]
剂量：10 μg/kg
给药途径：静脉注射；静脉注射。结果持续40天：通过优先清除癌症干细胞，有效根除小鼠淋巴瘤和异种移植模型中可连续移植的人类AML。

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同基因小鼠淋巴瘤模型（治疗研究）：将1×10^6个培养的TGB淋巴瘤细胞腹腔注射到B10.BR小鼠（免疫功能正常）中。肿瘤注射后14天，小鼠每2天腹腔注射一次棘霉素（Echinomycin），剂量为10 μg/kg/次，共注射5次（第14、16、18、20、22天）。对照组小鼠仅注射溶剂（DMSO或类似物）。每日监测小鼠的存活情况。濒死小鼠实施安乐死。所有治疗组小鼠均存活至第134天或第252天实施安乐死，尸检未见肿瘤[2]。
- NOD-SCID小鼠异种人AML模型：NOD-SCID小鼠接受1.8 Gy全身照射。同日，静脉注射8×10^6个来自AML患者（AML71或AML150）的外周血细胞。移植后15天，小鼠连续5天每天腹腔注射10 μg/kg的棘霉素（Echinomycin），之后休息2天，然后重复该疗程一次（14天内共注射10次）。对照组小鼠仅注射载体。末次治疗40天后，处死小鼠，收集骨髓细胞进行流式细胞术分析（人CD45、CD34、CD38、CD14、CD15、CD33、CD19）[2]。
- 人AML细胞的连续移植：将载体处理组或棘霉素处理组的原代AML71异种移植小鼠的骨髓细胞混合，并在照射后一天注射到NOD-SCID受体小鼠体内（1.5×10^6个细胞/只）。受试者未接受进一步治疗，并在8周后被处死，以分析人体细胞重建情况[2]。

在U251细胞中，在常氧和缺氧条件下，24小时后，Echinomycin在磺基罗丹明B (SRB) 检测中IC50 >5 μmol/L，表明在用于抑制HIF-1的浓度下，其对细胞活力无显著影响[1]。
- 在小鼠集落形成实验中，骨髓中的正常造血祖细胞 (HPC) 对Echinomycin的敏感性比淋巴瘤癌干细胞 (CSC) 低约100倍[2]。
- 在人类急性髓系白血病 (AML) 中，与大量白血病细胞相比，Echinomycin选择性地诱导CD34+CD38-干细胞亚群凋亡（浓度高达200 pM）[2]。

[1]. Echinomycin, a small-molecule inhibitor of hypoxia-inducible factor-1 DNA-binding activity. Cancer Res. 2005 Oct 1;65(19):9047-55.

[2]. Targeting HIF1α eliminates cancer stem cells in hematological malignancies. Cell Stem Cell. 2011 Apr 8;8(4):399-411.

喹诺霉素C是一种环状缩合物。棘恶唑是一种从棘链霉菌（Streptomyces echinatus）中分离得到的细胞毒性喹喔啉类抗生素。它能与DNA结合并抑制RNA合成。据报道，棘恶唑存在于三裂链霉菌（Streptomyces triostinicus）、链霉菌科（Streptomycetaceae）和棘链霉菌（Streptomyces echinatus）中，并且已有相关数据。棘恶唑是一种从棘链霉菌（Streptomyces echinatus）中分离得到的喹喔啉类抗肿瘤抗生素。棘恶唑以序列特异性的方式同时插入DNA上的两个位点，从而抑制DNA复制和RNA合成。(NCI04) 一种从棘链霉菌（Streptomyces echinatus）中分离得到的细胞毒性喹喔啉类抗生素，它能与DNA结合并抑制RNA合成。另见：棘霉素（注：已移至此处）。

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棘霉素 (NSC-13502) 是一种喹喔啉类抗生素的环状肽，最初从棘链霉菌 (Streptomyces echinatus) 中分离得到。它以序列特异性方式与 DNA 结合，具有强结合位点，包含中心 2 bp 序列 5'-CG-3' 以及关键识别元件 5'-ACGT-3' 和 5'-TCGT-3' [1]。
- 该化合物是通过对 NCI 140,000 个小分子化合物库进行高通量筛选，并利用 HIF-1 靶向细胞检测方法鉴定出来的。在对128种化合物进行HIF-1 DNA结合ELISA测试中，有20种化合物在10 μmol/L浓度下抑制率超过50%，其中棘霉素是最有效且特异性最高的抑制剂之一[1]。
- 棘霉素通过插入HRE核心序列抑制HIF-1 DNA结合，从而阻止HIF-1异二聚体与DNA结合，而不是干扰HIF-1α/HIF-1β二聚化或蛋白质稳定性[1]。
- 在小鼠淋巴瘤干细胞（CSC）中，由于VHL下调，HIF1α在常氧条件下持续激活。棘霉素靶向该通路，并通过抑制Notch通路中的负反馈环路（拮抗Hes1自身调节）来消除CSC[2]。
- 在人类急性髓系白血病（AML）中，CD34⁺CD38^-干细胞表现出HIF1α和GLUT1表达升高。 棘霉素能有效靶向这些细胞并阻止连续移植，提示其可清除白血病起始细胞[2]。
- 该化合物此前曾作为双功能嵌入剂进入临床试验，但最终被放弃。其在皮摩尔浓度下靶向癌症干细胞的显著疗效提示，应基于癌症干细胞概念重新评估其在癌症治疗中的应用[2]。

C51H64N12O12S2

1101.265

1100.42

512-64-1

3197

White to off-white solid powder

1.41 g/cm3

1427.2ºC at 760 mmHg

817ºC

1.536

1.826

352.4

4

18

7

77

2200

0

AUJXLBOHYWTPFV-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C51H64N12O12S2/c1-25(2)38-49(72)74-22-36(59-42(65)34-21-53-30-17-13-15-19-32(30)57-34)44(67)55-28(6)46(69)63(10)40-48(71)62(9)39(26(3)4)50(73)75-23-35(58-41(64)33-20-52-29-16-12-14-18-31(29)56-33)43(66)54-27(5)45(68)60(7)37(47(70)61(38)8)24-77-51(40)76-11/h12-21,25-28,35-40,51H,22-24H2,1-11H3,(H,54,66)(H,55,67)(H,58,64)(H,59,65)

N,N'-((1R,4S,7R,11S,14R,17S,20R,24S)-11,24-diisopropyl-2,4,12,15,17,25-hexamethyl-27-(methylthio)-3,6,10,13,16,19,23,26-octaoxo-9,22-dioxa-28-thia-2,5,12,15,18,25-hexaazabicyclo[12.12.3]nonacosane-7,20-diyl)bis(quinoxaline-2-carboxamide)

Quinomycin A Antibiotic A 654ISK 302BEchinomycin NSC 526417NSC 13502

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~5.3 mg/mL (~4.81 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。