| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Protein synthesis; bacterial 50S ribosomal subunit
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| 体外研究 (In Vitro) |
比较了恶唑烷酮抗菌剂Eperezolid（PNU-100592）和利奈唑胺（PNU-100766）与万古霉素对甲氧西林敏感和耐药金黄色葡萄球菌（n=200）、凝固酶阴性葡萄球菌（=100）以及万古霉素敏感和耐药粪肠球菌和屎肠球菌（n=50）临床分离株的活性。Eperezolid和利奈唑胺显示出良好的体外抑制活性，无论其对葡萄球菌的甲氧西林敏感性（MIC为90%的分离株被抑制[MIC90]范围，1至4微克/毫升）或对肠球菌的万古霉素敏感性（MIC90范围，1到4微克/ml）如何。在时间杀伤研究中，Eperezolid和利奈唑胺具有抑菌作用。Eperezolid和利奈唑胺对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌和屎肠球菌的抗生素后效应均为0.8+/-0.5小时。[1]
恶唑烷酮是一类新型抗生素，其作用机制是抑制蛋白质合成。据报道，该药物在翻译的起始阶段发挥其主要活性。为了研究药物和核糖体之间直接相互作用的可能性，我们开发了一种使用14C标记的Eperezolid（PNU-100592；以前的U-100592）的结合测定法。依哌唑啉特异性结合大肠杆菌的50S核糖体亚基。Eperezolidd的特异性结合是剂量依赖性的，与核糖体浓度成正比。结合数据的Scatchard分析表明，解离常数（Kd）约为20微M。氯霉素和林可霉素竞争性地抑制Eperezolid与核糖体的结合。然而，与氯霉素和林可霉素不同，Eperezolid不抑制嘌呤霉素反应，表明恶唑烷酮对肽基转移酶没有影响。此外，林可霉素和氯霉素在一定程度上抑制翻译终止，而依普瑞固体则没有作用。因此，我们得出结论，恶唑烷酮通过与氯霉素和林可霉素结合位点附近的50S核糖体亚基结合来抑制蛋白质合成，但恶唑烷酮在机制上与这两种抗生素不同[3]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在腹腔脓肿大鼠模型中检查了恶唑烷酮依哌唑胺（U-100592）和利奈唑胺（U-100766）对粪肠球菌和万古霉素耐药粪肠球菌各一株的体内有效性。两种药物对每种菌株的MIC均为2微克/毫升。在25mg/kg体重的剂量下，每天两次静脉注射或口服利奈唑胺，对粪肠球菌的脓肿细菌密度产生了微小但具有统计学意义的降低。观察到的活细胞减少不太可能具有临床相关性。依哌唑胺在此剂量下无效。在100mg/kg/天的剂量下，利奈唑胺治疗导致每克脓肿活细胞减少约100倍。对于屎肠球菌感染，静脉注射依普瑞固体和口服利奈唑胺是有效的，可将密度降低约2 log（10）CFU/g。在该模型中，两种恶唑烷酮都显示出对肠球菌的活性。然而，所采用的给药方案的结果并不理想。[2]
恶唑烷酮治疗粪肠球菌。[2] 对于依哌唑胺，尽管平均峰值水平约为MIC的10倍，但所研究的每12小时一次的静脉注射方案对粪肠球菌没有活性（表3）。通过连续24小时静脉输注或每12小时口服给药相同的总日剂量（50mg/kg）没有优势。当静脉注射25mg/kg q12h的药物时，利奈唑胺在血浆中的水平大约是依普瑞固体的两倍，口服这些化合物时大约是依普利固体的三倍。在用利奈唑胺治疗4.5天后，这两种剂量的给药途径都导致活菌数量略有下降，但具有统计学意义。将每日总剂量加倍（100mg/kg）并更频繁地给药，导致细菌计数减少2-log10 CFU/g。没有动物有无菌脓肿内容物。 恶唑烷酮治疗屎肠球菌。[2] 针对这种生物体，静脉注射和口服依哌唑胺，但静脉注射利奈唑胺，可显著降低活细胞密度。然而，利奈唑胺在口服时表现出活性。口服利奈唑胺和静脉注射依普瑞固体后，残留细菌几乎减少了2-log10 CFU/g。 |
| 酶活实验 |
结合试验。[3]
合成了放射性标记的化合物[14C]Eperezolid/依哌唑胺（59.32 mCi/mg，23.4 mCi/mmol）和[14C]PNU-96499（142 mCi/mg、55 mCi/mmol）。使用D-三-[二氯乙酰基-1-14C]氯霉素（166 mCi/mg，54 mCi/mmol）。结合研究在微量离心管中进行，该管含有总共100ml的反应混合物，其中包括0.3至2.0 nmol的核糖体、1至100 mM用1 ml二甲亚砜或过量（100至1000倍）未标记化合物放射性标记的化合物、50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、5 mM Mg（CH3COO）2和200 mM KCl。在添加核糖体之前，所有其他成分都混合在一起。将反应混合物在25°C下孵育10分钟，加入50毫升100%冰冷的乙醇以沉淀核糖体和结合的药物，从而终止反应。在4°C下孵育30至60分钟后，将悬浮液在Eppendorf微量离心机中全速离心20分钟。然后小心地去除上清液，并测量颗粒中的放射性。所有基准点代表至少三次独立测定的平均值（SEM）的平均6个标准误差。为了测量化合物的特异性结合，必须测量总结合和非特异性结合。通过加入高浓度的放射性标记配体直接测量总结合。假设在这些高浓度下，很高比例的结合是完全非特异性的。在较低浓度下，特异性结合位点将完全饱和，因此特异性结合的量很小。非特异性结合是通过以放射性标记化合物浓度的1000倍加入未标记化合物来确定的。几乎所有与特异性结合位点的高亲和力结合都会被置换，但非特异性结合不会。非特异性结合是指在过量未标记化合物存在的情况下，放射性标记化合物仍保持结合的量。化合物的特异性结合是通过从总结合中减去非特异性结合来确定的。1.5 M的NaCl取代了恶唑烷酮的结合，表明这种结合不是共价的。 嘌呤霉素反应。[3] 对于f[3H]Met-tRNA AUG核糖体复合物的形成，在氯霉素存在或不存在的情况下，在50 ml的结合缓冲液（20 mM Tris-HCl[pH 7.4]、10 mM MgCl2、150 mM NH4Cl）中，将含有0.65 nmol总核糖体、0.2 nmol f[3H]Met-tRNA（32.92 mCi/mg，9.7 Ci/mmol）和2.5 nmol AUG的反应混合物在30°C下孵育30分钟。，林可霉素、利奈唑胺或依哌唑胺在30°C下孵育30分钟。通过加入250 ml 100 mM磷酸钾缓冲液（pH 6）终止反应，然后将f[3H]Met嘌呤霉素产物提取到乙酸乙酯中。通过液体闪烁光谱法测量乙酸乙酯层中的放射性。 终止反应。[3] 在存在或不存在氯霉素、林可霉素、依哌唑胺或利奈唑胺的情况下，将含有5 ml上述复合物、50 mM Tris-HCl（pH 7.4）、30 mM MgCl2、75 mM NH4Cl、80 mM UAA和3.5 mg终止因子的50 ml体积的反应混合物在22°C下孵育30分钟。如Ganoza等人所述，分离终止因子。在测定中使用磷酸纤维素柱步骤的浓缩终止因子。通过加入250ml 0.1N HCl并将f[3H]Met产物萃取到乙酸乙酯中来停止反应。通过液体闪烁光谱法测量乙酸乙酯层中的放射性。如果终止三重密码子（UAA）或终止因子不存在，则没有释放f[3H]Met。 |
| 细胞实验 |
在6个月的时间里，从密歇根州底特律市底特律接收医院和大学健康中心的住院患者中收集了金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、各种其他凝固酶阴性葡萄球菌、粪肠球菌和屎肠球菌的临床分离株。通过苯唑西林纸片法测定了甲氧西林敏感性。[1]
MIC通过微量稀释法测定，其中Mueller Hinton肉汤补充了钙（25mg/l）和镁（12.5mg/l）（SMHB）。每种药物的敏感性测试都是根据国家临床实验室标准委员会的指导方针进行的。[1] 通过时间杀伤分析，将依哌唑胺和利奈唑胺的杀菌活性与万古霉素进行了比较。对四种具有代表性的临床分离株（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌R323、对甲氧西林敏感的表皮葡萄球菌R264、耐万古霉素的粪肠球菌R581和耐万古霉素的屎肠球菌R20）进行了评估。试验菌株在SMHB中于35°C下生长过夜，并稀释至106 CFU/ml的起始接种物。加入足够的储备抗生素溶液，以达到各自MIC的四倍的所需浓度。以类似的方式制备生长对照，用适当的培养基代替储备抗生素溶液。所有试管在35°C下恒温旋转24小时。在0、4、8和24小时取出样品（0.1 ml）；用0.9%氯化钠稀释至少250倍，以减少抗生素残留；并铺在胰蛋白酶大豆琼脂上。该方法的检测限为30 CFU/皿，相当于300 CFU/ml（11）。在细菌计数预计低于检测限值的时间点，将0.1毫升样品放入10毫升0.9%的冷氯化钠中，用0.45微米孔径的过滤器过滤。将过滤器无菌放置在胰蛋白酶大豆琼脂上并孵育24小时。该方法的检测限为10 CFU/板，相当于100 CFU/ml。所有时间杀伤曲线实验均重复进行。[1] 通过Craig和Gudmundsson描述的方法，确定了每组生物体代表的依哌唑胺、利奈唑胺和万古霉素是否存在抗生素后效应（PAE）。将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌或屎肠球菌的过夜生长稀释到新鲜的SMHB中至106 CFU/ml，然后在37°C的转子上孵育3至4小时，直至达到对数生长阶段。在此期间结束时，确定接种量，然后在转子上以37°C的MIC和四倍MIC将每管含有试验生物的试管暴露于Eperezolid、利奈唑胺或万古霉素1小时。每种生物体的一个试管也用作生长对照，并进行了与上述相同的程序，但未暴露于抗生素。用抗生素孵育后，将包括生长对照在内的培养物以1:1000的比例稀释到10毫升新鲜预热的SMHB中，并在37°C下重新孵育。每1.0小时取出两份样品，并将其铺在胰蛋白酶大豆琼脂上以测定PAE。每个PAE实验都进行了两次。PAE的持续时间通过方程式PAE=T−C计算，其中T是暴露于抗生素的培养物中CFU计数比抗生素去除后立即观察到的计数增加1 log10单位所需的时间，C是对照中CFU数量比抗生素去除试验培养物上使用的相同程序后立即观察的计数增加2 log10单位的时间。[1] 表1显示了与万古霉素相比，依哌唑胺和利奈唑胺的活性。对于金黄色葡萄球菌，万古霉素的活性比eperesolid和利奈唑胺高一到两倍。恶唑烷酮对所有测试的凝固酶阴性葡萄球菌的疗效与万古霉素相当。复方依普瑞固体对凝固酶阴性葡萄球菌的活性至少比利奈唑胺高一到两倍。在时间杀灭研究中，eperesolid和利奈唑胺对所有测试的分离物都显示出抑菌作用。正如预期的那样，万古霉素对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌显示出杀菌活性，但对粪肠球菌或屎肠球菌没有杀菌活性（图1）[1]。 |
| 动物实验 |
动物模型。[2]
采用先前描述过的模型，在体重175至250克的雄性Sprague-Dawley大鼠中建立肠球菌腹腔脓肿。所有手术操作均使用氯胺酮和赛拉嗪对大鼠进行麻醉。将0.5毫升浓度为10⁶ CFU/毫升的粪肠球菌1310或屎肠球菌A1221的脑心浸液肉汤悬液，与热灭活的脆弱芽孢杆菌ATCC 23745和灭菌的大鼠盲肠内容物（比例分别为1:1:2）以及硫酸钡（10% [w/v]）一起装入双层明胶胶囊，然后通过1厘米长的腹部正中切口腹腔内植入。 抗菌治疗。 [2] 接种后4小时开始治疗，给药途径为静脉注射或灌胃。静脉注射时，将噁唑烷酮类药物溶解于二甲基亚砜中，然后用无菌生理盐水稀释至5%（体积比）。本实验所用剂量参考了先前发表的小鼠保护研究中有效的剂量。抗菌药物按所需时间间隔给药，可通过中心静脉导管进行15至20分钟的单次输注或24小时持续输注。中心静脉导管于感染前一天经左侧颈内静脉手术植入上腔静脉，具体方法如前所述。灌胃时，将噁唑烷酮类药物悬浮于2毫升生理盐水中，每12小时（q12h）灌胃一次。作为阳性（有效）对照，采用持续静脉输注的方式给予氨苄西林，剂量为400 mg/kg体重/24 h，该剂量此前已被证实可达到约15 μg/ml的平均稳态血清浓度。持续输注治疗持续4.5天。对于每日两次给药方案，4.5天内共给予9次剂量。每个实验均包含未经治疗的对照大鼠。 治疗和结果监测。[2] 为了测定血浆中恶唑烷酮的浓度，在间歇输注结束后0至5分钟或灌胃后45至60分钟，通过眼眶后静脉穿刺采集血液样本以测定峰值浓度；在下次预定给药前采集血液样本以测定谷值浓度。样品用25 μl 2%乙二胺四乙酸二钠溶液处理，分离血浆，冷冻后送至Pharmacia & Upjohn公司，由Guy Padbury采用高效液相色谱法测定恶唑烷酮浓度。该测定方法的详细信息已在其他文献中发表。该技术已验证可检测低至0.01 μg/ml的浓度。该方法的批内和批间变异系数均小于10%。 大鼠在最后一次给予抗菌药物12小时后处死。在无菌条件下打开腹腔，收集脓肿内容物，称重，并在2 ml无菌生理盐水中匀浆，然后进行系列稀释。由于在粪便性腹膜炎大鼠模型中，未接种的细菌可能偶尔转移到腹腔脓肿内容物中，因此将菌悬液接种于血琼脂平板（每个样品重复两次）进行菌落计数，并接种于肠球菌选择性琼脂平板（一种肠球菌选择性培养基）上。两种菌种接种于该培养基上的菌落计数结果与血琼脂平板上的计数结果相同（数据未显示）。仅在少数情况下，当怀疑存在污染菌时，才使用选择性培养基的结果。统计分析采用双尾Mann-Whitney U检验。P值<0.05被认为具有统计学意义。 |
| 参考文献 |
[1]. Comparative in vitro activities and postantibiotic effects of the oxazolidinone compounds eperezolid (PNU-100592) and linezolid (PNU-100766) versus vancomycin against Staphylococcus aureus, coagulase-negative staphylococci, Enterococcus faecalis, and Enterococcus faecium. Antimicrob Agents Chemother. 1998 Mar;42(3):721-4.
[2]. Activities of the oxazolidinones linezolid and eperezolid in experimental intra-abdominal abscess due to Enterococcus faecalis or vancomycin-resistant Enterococcus faecium. Antimicrob Agents Chemother. 1999 Dec;43(12):2873-6. [3]. The oxazolidinone eperezolid binds to the 50S ribosomal subunit and competes with binding of chloramphenicol and lincomycin. Antimicrob Agents Chemother. 1997 Oct;41(10):2127-31. |
| 其他信息 |
然而，有两点理由表明，血浆中药物浓度高于最低抑菌浓度（MIC）的时间百分比可能并非该模型中疗效的准确预测指标。首先，在我们感染的大鼠中，以25 mg/kg q12h的剂量多次给予利奈唑胺，根据数量较少的数据点分析，其终末半衰期可能更接近1.75小时。在这种情况下，利奈唑胺和依帕唑胺的血浆浓度高于MIC的时间百分比都应接近60%。其次，虽然我们没有获得接受依帕唑胺持续输注治疗的大鼠的血浆浓度数据，但根据q12h给药方案的浓度，我们估计在整个给药间隔内，血浆药物浓度约为MIC的两倍。因此，似乎需要血浆药物浓度在相当一部分给药间隔内显著高于MIC，才能证明这些抑菌剂在本模型中能显著降低细菌密度。我们证实了先前关于恶唑烷酮类药物依帕唑利和利奈唑胺在实验性肠球菌感染中体内活性的观察结果。然而，其疗效有限，因此临床意义尚不明确。基于人体和实验动物的药代动力学比较以及恶唑烷酮类药物临床试验的安全性和耐受性结果，采用优化剂量进行进一步研究可能是合适的。[2]
本研究结果相当有力地表明，恶唑烷酮类药物对肽基转移酶或翻译终止没有影响。如果恶唑烷酮类药物确实如先前所提出的，通过阻断翻译起始发挥作用，那么我们不妨推测，恶唑烷酮类药物与50S亚基上一个与氯霉素和林可霉素结合位点密切相关的位点结合，该位点靠近50S亚基与30S亚基的界面。由此产生的扭曲位点可能阻止 30S 起始复合物正确定位形成 70S 起始复合物，从而抑制翻译起始。[3] |
| 分子式 |
C18H20FN4O5
|
|---|---|
| 分子量 |
391.3794
|
| 精确质量 |
394.165
|
| 元素分析 |
C, 55.24; H, 5.15; F, 4.85; N, 14.32; O, 20.44
|
| CAS号 |
165800-04-4
|
| PubChem CID |
73214
|
| 外观&性状 |
White to off-white Solid powder
|
| 密度 |
1.37g/cm3
|
| 沸点 |
701.2ºC at 760 mmHg
|
| 闪点 |
377.9ºC
|
| 蒸汽压 |
1.22E-20mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.579
|
| LogP |
0.386
|
| tPSA |
102.42
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
28
|
| 分子复杂度/Complexity |
599
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
FC1C([H])=C(C([H])=C([H])C=1N1C([H])([H])C([H])([H])N(C(C([H])([H])O[H])=O)C([H])([H])C1([H])[H])N1C(=O)O[C@@]([H])(C([H])([H])N([H])C(C([H])([H])[H])=O)C1([H])[H]
|
| InChi Key |
SIMWTRCFFSTNMG-AWEZNQCLSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C18H23FN4O5/c1-12(25)20-9-14-10-23(18(27)28-14)13-2-3-16(15(19)8-13)21-4-6-22(7-5-21)17(26)11-24/h2-3,8,14,24H,4-7,9-11H2,1H3,(H,20,25)/t14-/m0/s1
|
| 化学名 |
N-[[(5S)-3-[3-fluoro-4-[4-(2-hydroxyacetyl)piperazin-1-yl]phenyl]-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-yl]methyl]acetamide
|
| 别名 |
Eperezolid; U 100592; Eperezolid; 165800-04-4; U-100592; N-[[(5S)-3-[3-fluoro-4-[4-(2-hydroxyacetyl)piperazin-1-yl]phenyl]-2-oxo-1,3-oxazolidin-5-yl]methyl]acetamide; C460ZSU1OW; PNU-100,592; PNU 100,592; U-100,592; PNU 100592;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~44 mg/mL (~111.56 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5551 mL | 12.7753 mL | 25.5506 mL | |
| 5 mM | 0.5110 mL | 2.5551 mL | 5.1101 mL | |
| 10 mM | 0.2555 mL | 1.2775 mL | 2.5551 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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