| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
| 靶点 |
RORγ (RORgamma) (EC50 = 13 nM)
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在探索了核心、1-位取代基和3-酰基芳烃基团的最佳取代基后，我们优先选择了对RORc比PPARγ具有良好效力和选择性的最佳取代基团。将这些最佳取代基组合成一种化合物（28，GNE-6468，表4）提供了一种高效的RORc反向激动剂（EC50=2 nM），其RORc的选择性是PPARγ的1000倍以上。在我们分析的所有化合物中，化合物28也具有最高的LLE值（LLE=7.2）。然后，我们在一系列基于ROR和NR细胞的检测中测试了具有优于PPARγ的RORc选择性的强效RORc反向激动剂，以进一步探索它们的细胞效力和选择性特征。[1]
我们在一系列HEK-293细胞Gal4-ROR构建的人NR依赖性转录报告子检测中检测了2、9、10、18、24和28/GNE-6468（表5）。我们通过监测在没有任何外源激动剂的情况下其基础转录活性的抑制，分析了人类ROR的三种亚型（RORc、RORb和RORa）。为了评估强效RORc反向激动剂的NR细胞选择性，我们还在激动剂模式（不添加激动剂配体）和拮抗剂模式（使用T0901317[N-（2,2,2-三氟乙基）-N-[4-[2,2,2-二氟-1-羟基-1-（三氟甲基）乙基]苯基]-苯磺酰胺]作为外源配体）下对人法尼醇X受体（FXR）、肝X受体（LXR）-α、LXRβ和PXR的细胞报告分析小组中测试了这些化合物。所有这些化合物都显示出良好的RORc反向激动剂细胞效力值（EC50=4-36 nM），对其他ROR家族成员没有可检测的活性（浓度高达10μM）。此外，在我们的细胞检测小组中，这些化合物在激动剂或拮抗剂模式下（浓度高达10μM）均未显示出对其他NR的可检测活性。这些结果表明，与其他NR相比，RORc的细胞选择性曲线为2、9、10、18、24和28/GNE-6468（>277至>1000倍的选择性）。[1] 基于其有利的RORc细胞效力值，我们将2、9、10、18、24和28/GNE-6468转入人PBMC细胞因子产生测定，以评估其抑制IL-17产生的能力（表6）。在人PBMC测定中，化合物2、10、18和24对IL-17的产生显示出适度的抑制作用（分别为EC50=230、120、230和300 nM），而化合物9和28对IL-17产生的抑制作用更强（分别为EC 50=17和30 nM）。与2、10、18和24相比，化合物9和28具有独特的亚结构，表明9和28中存在的1-（3′-羟基-4′-苯甲酸）基序可能在IL-17生产测定中产生增强的效力。同样值得注意的是，这些化合物在干扰素（IFN）-γ或CellTiter-Glo®（CTG）反筛选试验中均未显示出任何活性，这表明这些化合物既没有不加选择地抑制细胞因子的产生，也没有严重的细胞毒性。 化合物9和28/GNE-6468是人PBMC细胞中IL-17产生的强效抑制剂（EC50值为30nM，表6），但它们在进一步抑制IL-17产生最大抑制百分比（%max）方面并不比效力低一个数量级的化合物（即2、10、18和24）更有效。事实上，我们在之前披露的具有几种RORc反向激动剂化学型的人类PBMC数据中注意到，IL-17 PBMC%max值平均抑制率为77%（我们披露的13种不同的人类IL-17 PBMC测定结果的%max抑制值的±23%，其中IL-17 PBMC EC50=0.044-3.0μM）。人外周血单个核细胞中IL-17产生缺乏完全抑制（即IL-17 PBMC%max l 99%）可能是由于RORa在IL-17产生中的作用。先前的小鼠基因敲除研究表明，小鼠IL-17的产生依赖于小鼠RORα和RORγ。在人类IL-17产生的背景下，需要强效和选择性的人类RORa反向激动剂来探索这一假设。强效和选择性人类RORa工具化合物的不足是几个研究项目的重点[1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
化学品 28 (GNE-6468) 在啮齿动物和人类的肝细胞中表现出较高的预期清除率，CLhep 值分别为 17 和 42 mL/min/kg [1]。
|
| 酶活实验 |
使用Life Technologies的Polar Screen™PPAR Gamma Competitor assay，Green检测试剂盒进行人PPARγ-LBD荧光偏振结合检测。有关此测定的更多详细信息，请参阅：https://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/Polar_Screen_PPARgamma_competitor_Assay_Green_PI.pdf1.
生化和细胞分析[1] 有关详细的生化和细胞测定方案，请参阅Fauber, B. P.; Boenig, G.; Burton, B.; Eidenschenk, C.; Everett, C.; Gobbi, A.; Hymowitz, S. G.; Johnson, A. R.; Liimatta, M.; Lockey, P.; Norman, M.; Ouyang, W.; René, O.; Wong, H. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2013, 23, 6604. 水溶性测定[1] 将化合物溶解在DMSO中至浓度为10 mM。将这些溶液稀释到PBS缓冲液（pH 7.2，由NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4组成）中，在pH 7.4下，最终化合物浓度为100µM，DMSO浓度为2%。将样品在23°C下摇动24小时，然后过滤。LC/CLND用于测定滤液中的化合物浓度，浓度由咖啡因校准曲线和样品的氮含量计算得出。将内标化合物掺入每个样品中以进行准确定量。 人和大鼠肝微粒体代谢稳定性研究[1] 在混合性别的人类（150个供体池）或混合性别的Sprague-Dawley大鼠（10个供体池的）肝微粒体中评估受试化合物的代谢稳定性。在含有0.5mg/mL微粒体蛋白、1mM NADPH和1µM受试化合物的0.1M磷酸钾缓冲液（pH 7.4）中制备孵育混合物（最终孵育体积=75µL）。在加入化合物之前，将肝微粒体在37°C下预热5分钟。通过加入NADPH和测试化合物引发反应。将混合物在37°C下孵育0、20、40和60分钟。在每个时间点，用30µL含内标的乙腈淬灭15µL的反应等分试样。样品在2000 g下离心10分钟。在LC MS/MS分析之前，上清液（30µL）在水中（60µL）稀释。 使用充分搅拌的模型计算肝清除率（CLhep，或预测肝清除率），并使用以下方程从固有清除率（CLPint）进行缩放：CLhep=Q×[（fu×CLint）/（fu×CLint/fumic+Q）]，其中Q是肝血流量，fu是未结合的分数。假设微粒体培养和血液中的fu等于1。下表列出了缩放因子。更多详细信息，请参见Khojasteh，S.C。；黄。；Hop，C.E.C.A.人体药代动力学预测。《药物代谢与药代动力学快速指南》，施普林格出版社：纽约，2011年；第134-135页。 血浆蛋白结合试验[1] 通过平衡透析，使用48孔格式的快速平衡透析（RED）装置，分子量截止值为8000道尔顿，在体外测定混合的人和啮齿动物血浆中蛋白质结合的程度（n=2）。将试验化合物溶解在二甲基亚砜（DMSO）中，并加入血浆中，使血浆中的终浓度为5µM。DMSO的最终百分比为1%。在37℃的加湿培养箱中，在摇动平台上用500µL PBS透析300µL含有化合物的血浆4小时。将平衡后缓冲液和血浆样品转移到96孔板上，并加入相反的基质。使用含有内标（100nM普萘洛尔）的65%乙腈沉淀血浆蛋白。通过LC-MS/MS测量血浆和PBS中化合物的浓度，并使用以下方程计算未结合分数百分比（fu）：%fu=[（缓冲液中的PA）/（IS PA））/（血浆中的PA/（IS BA））]×100，其中PA表示分析物峰面积，IS PA表示内标峰面积。 |
| 细胞实验 |
Madin-Darby犬肾（MDCK）通透性测定[1]
将Madin-Darby犬肾（MDCK）细胞以2.5 x 105个细胞/mL的初始浓度接种在24孔板中，并在37℃、95%湿度和5%CO2的条件下与Eagle's Minimum Essential Medium Earle’s BSS（0.1%非必需氨基酸、1 mM丙酮酸钠、2 mM L-谷氨酰胺、1.5 g/L碳酸氢钠）一起培养4天，补充10%胎牛血清。在实验前，MDCK单层在37℃、5%CO2和95%湿度的运输缓冲液（HBSS，含10 mM HEPES，pH 7.4）中平衡30分钟。在顶端至基底外侧2µM处检查试验化合物的渗透性（A→B） 方向。剂量溶液还含有单层完整性标记LY（100µM）和0.4%的最终DMSO百分比。通过LC-MS/MS分析受试化合物。表观渗透性（Papp）为顶端至基底外侧（A→B） 使用以下方程式计算：Papp（A→B） =（dQ/dt）×（1/C0）×（1/A），其中dQ/dt是受体室中化合物出现的速率（Q是化合物的量），C0是供体室中的浓度，A是插入物的表面积。 |
| 动物实验 |
体内大鼠药代动力学试验[1] 将化合物（例如GNE-6468）与DMSO/PEG400/生理盐水（体积比25/60/15）混合，通过静脉注射给药。将研究化合物与其他化合物（共9种）一起，以每种化合物0.5 mg/kg的剂量给予雄性Sprague Dawley大鼠（n = 3）。将相同组化合物以1.5 mg/kg的剂量，通过口服给药给予大鼠（n = 3），溶剂为DMSO/MCT混悬液（体积比37/63）。静脉注射和口服给药的剂量体积分别为1 mL/kg和2 mL/kg。在静脉注射和口服给药实验中，分别于给药后0.033、0.083、0.25、0.5、1、2、4、6和8小时经颈静脉采集血样。血浆经离心分离后，于20℃冷冻保存直至分析。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆样本中的药物浓度。药代动力学参数采用标准非房室模型方法测定。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
我们还通过一系列体外ADME试验（表7）对化合物9和28/GNE-6468进行了评估。43, 44 化合物9在人和啮齿动物肝细胞代谢稳定性试验中显示出中等的预测肝清除率（CLhep）值（分别为9和32 mL/min/kg），而28/GNE-6468在人和啮齿动物肝细胞中显示出较高的预测清除率值（分别为17和42 mL/min/kg）。进一步在人和大鼠血浆蛋白结合（PPB）试验中分析化合物9和28/GNE-6468，结果表明，化合物9和28/GNE-6468在两种动物中均具有高度蛋白结合率（结合率分别为>99%和99%）。化合物 9 和 28/GNE-6468 在 Madin-Darby 犬肾 (MDCK) 细胞渗透性试验中表现出良好的表观渗透性（Papp(A→B) 分别为 12 和 8 × 10⁻⁶ cm/s），且外排作用极小（Papp(A→B)/Papp(B→A) < 2）。动力学水溶性试验表明，化合物 9 和 28/GNE-6468 均具有较高的溶解度（45–86 μM）。因此，化合物 9 和 28/GNE-6468 是高效且选择性强的 RORc 反向激动剂，具有良好的性质和中等至高的清除率。 [1]化合物 9（GNE-6468 的类似物）在啮齿动物体内药代动力学 (PK) 实验中进行了分析（表 8），以确定体外大鼠肝清除率估计值（表 7）是否能预测其体内清除率。在大鼠 PK 实验中，化合物 9 表现出较高的血浆清除率 (CLp = 130 mL/min/kg)，但与其体外清除率 (大鼠肝 CLhep = 32 mL/min/kg) 不相关。化合物 9 的体内血浆清除率超过了啮齿动物的肝血流量 (55 mL/min/kg)，表明肝外清除机制也可能参与了化合物 9 的代谢。[1]
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
核受体（NR）视黄酸受体相关孤儿受体γ（RORγ、RORc 或 NR1F3）是治疗自身免疫性疾病的一个有前景的靶点。RORc 是促炎细胞因子白细胞介素-17（IL-17）产生过程中的关键调节因子。我们发现了一系列高效且选择性的咪唑并[1,5-a]吡啶和嘧啶类 RORc 反向激动剂。在我们的细胞选择性筛选实验中，活性最强的化合物对 RORc 的选择性比其他 ROR 家族成员、PPARγ 和 NR 高出 300 倍以上。GNE-0946 (9) 和 GNE-6468 (28) 具有良好的活性、选择性和理化性质，并且能够有效抑制人原代细胞中 IL-17 的产生，这些特性支持它们作为化学生物学工具，用于进一步探索 RORc 在人类生物学中的作用。 [1]
Glenmark Pharmaceuticals 最近提交的一系列专利申请描述了与化合物 1 相关的两类化合物。目前尚不清楚 Glenmark 专利申请中的化合物是否具有与化合物 9 和 28/GNE-6468 相似的代谢稳定性。总之，我们基于文献报道的一系列 RORc 反向激动剂（即化合物 1），开发了一系列咪唑并[1,5-a]吡啶和嘧啶类化合物，这些化合物对 RORc 的选择性优于 PPARγ。在生化和细胞实验中，该系列中的几种化合物表现出强效的 RORc 反向激动剂活性。其中活性最强的化合物在我们的细胞选择性实验中，对 RORc 的选择性比其他 ROR 家族成员和核受体高 300 倍以上。 GNE-0946 (9) 和 GNE-6468 (28) 具有良好的效力、选择性和理化性质，并且能够有效抑制人类原代细胞中 IL-17 的产生，因此可作为化学生物学工具，进一步探索 RORc 在人类生物学中的作用。[1] |
| 分子式 |
C23H16CLN3O4
|
|---|---|
| 分子量 |
433.843844413757
|
| 精确质量 |
433.082
|
| 元素分析 |
C, 63.68; H, 3.72; Cl, 8.17; N, 9.69; O, 14.75
|
| CAS号 |
1677668-27-7
|
| PubChem CID |
117964975
|
| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
|
| LogP |
5.7
|
| tPSA |
105
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
31
|
| 分子复杂度/Complexity |
704
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
ClC1C=CC=C(C=1C(C1=NC(C2C=CC(C(=O)O)=C(C=2)O)=C2N=CC=CN12)=O)C1CC1
|
| InChi Key |
GIYKJPISDNWSJD-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C23H16ClN3O4/c24-16-4-1-3-14(12-5-6-12)18(16)20(29)22-26-19(21-25-9-2-10-27(21)22)13-7-8-15(23(30)31)17(28)11-13/h1-4,7-12,28H,5-6H2,(H,30,31)
|
| 化学名 |
4-[6-(2-chloro-6-cyclopropylbenzoyl)imidazo[1,5-a]pyrimidin-8-yl]-2-hydroxybenzoic acid
|
| 别名 |
GNE-6468; 1677668-27-7; 4-[6-(2-Chloro-6-cyclopropylbenzoyl)imidazo[1,5-a]pyrimidin-8-yl]-2-hydroxybenzoic acid; CHEMBL3596279; SCHEMBL16582399;
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~5 mg/mL (~11.52 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3050 mL | 11.5250 mL | 23.0500 mL | |
| 5 mM | 0.4610 mL | 2.3050 mL | 4.6100 mL | |
| 10 mM | 0.2305 mL | 1.1525 mL | 2.3050 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Thiotaurine
ALG1001 TFA
SJF-8240 (Foretinib-Based PROTAC 7)
BMS-066
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
