| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Peptidylarginine Deiminase 4 (PAD4): GSK199 is a highly specific PAD4 inhibitor. It inhibits PAD4 enzymatic activity, reducing protein citrullination. IC50 = 0.60 μM against HCoV-OC43 replication in MRC-5 cells. [2]
Selectivity: GSK199 is specific for PAD4 over other PAD isoforms (PAD1, PAD2, PAD3, PAD6). The study shows that PAD4, but not PAD2, is upregulated upon HCoV-OC43 infection, and that PAD4-specific inhibition with GSK199, but not PAD2-specific inhibition with AFM30a, significantly reduces viral replication. [2] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
抗HCoV-OC43病毒活性：在感染HCoV-OC43（MOI 0.1）的人肺成纤维细胞MRC-5中，GSK199处理以剂量依赖的方式抑制病毒复制。IC50 = 0.60 μM。20 μM时可完全阻断病毒复制。细胞裂解液和上清液中的病毒基因组拷贝数均显著降低。[2]
病毒蛋白表达：Western blot分析显示，感染后72小时，20 μM GSK199处理显著下调了感染MRC-5细胞中HCoV-OC43核衣壳蛋白的表达。[2] 病毒滴度降低：噬斑试验表明，在感染HCoV-OC43的MRC-5细胞中，20 μM GSK199可使病毒滴度降低约2个对数级（降低99%）。 [2] 与PAD2抑制剂的比较：PAD2特异性抑制剂AFM30a对病毒复制的抑制作用甚微（20 μM时<40%），对病毒蛋白表达和病毒滴度的影响也微乎其微，证实其抗病毒作用是通过特异性抑制PAD4介导的。[2] 细胞毒性：MTT实验表明，GSK199在浓度高达20 μM时未显著降低细胞活力。仅在浓度高于100 μM时观察到显著的细胞毒性。在MRC-5细胞中，CC50 = 133.08 μM。选择性指数（SI）= CC50/IC50 = 224.94，表明其具有较宽的治疗窗口。[2] PAD4表达：MRC-5细胞的Western blot分析显示，PAD2和PAD4是仅有的两种表达的PAD亚型。 HCoV-OC43感染后，PAD4蛋白水平显著升高，而PAD2蛋白水平保持不变。PAD1、PAD3和PAD6蛋白均未检测到。[2] 瓜氨酸化抑制：HCoV-OC43感染可诱导MRC-5细胞中蛋白质发生显著的瓜氨酸化，这可通过Rh-PG探针检测到。GSK199处理可抑制这种瓜氨酸化，并与病毒复制减少相关。[2] |
| 细胞实验 |
细胞培养：人肺成纤维细胞MRC-5在含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素的DMEM培养基中，于37℃、5% CO₂条件下培养。[2]
病毒和感染：HCoV-OC43（ATCC VR-1558）在33℃下于MRC-5细胞中扩增。抗病毒实验中，细胞在感染前用GSK199或溶剂（DMSO）预处理1小时，感染复数（MOI）为0.1或1。病毒在33℃吸附2小时后，移除接种物，加入含抑制剂的新鲜培养基。细胞在33℃下孵育72小时。[2] 细胞活力检测（MTT）：将MRC-5细胞（96孔板，每孔3 × 10⁴个细胞）用不同浓度的GSK199处理72小时。加入 MTT 溶液并孵育 4 小时。溶解甲臜晶体后，在 570 nm 处测量吸光度。计算 CC50 值。[2] 病毒载量定量（实时 RT-PCR）：使用 TRI Reagent 从细胞裂解液和上清液中提取病毒 RNA。使用 Sensi Fast Probe No Rox One-step 试剂盒，以 HCoV-OC43 N 基因特异性引物和探针进行逆转录和扩增。循环条件：45°C 10 分钟，95°C 20 分钟，然后进行 40 个循环，每个循环包括 95°C 5 秒和 60°C 1 分钟。病毒载量以 DMSO 处理的对照组进行标准化。[2] 噬斑试验：将感染细胞上清液进行 10 倍系列稀释后接种到 MRC-5 细胞中。 24小时后，用冷丙酮-甲醇（50:50）固定细胞，并用抗HCoV-OC43单克隆抗体进行免疫染色。病毒滴度（PFU/mL）计算公式为：噬斑数×0.1 mL/稀释倍数。[2] 蛋白质印迹分析：用RIPA裂解缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.0，1 mM EDTA，1% NP-40，0.1%脱氧胆酸钠，0.1% SDS，150 mM NaCl）裂解细胞。采用Bradford法测定蛋白浓度。取等量蛋白进行SDS-PAGE电泳，转移至膜上，并用针对HCoV-OC43 NP、PAD1、PAD2、PAD3、PAD4、PAD6和β-actin的抗体进行检测。 [2] 罗丹明-苯基乙二醛 (Rh-PG) 瓜氨酸化检测：等量的蛋白质用 80% 三氯乙酸沉淀，并与 0.1 mM 罗丹明-苯基乙二醛探针孵育 30 分钟。反应在 4°C 下用 100 mM L-瓜氨酸终止 30 分钟。离心后，沉淀物用冷丙酮洗涤，并重悬于 SDS 上样缓冲液中。使用 ChemiDoc 成像系统，在激发波长 532 nm、发射波长 580 nm 下对凝胶进行成像。[2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
细胞毒性分析：在MRC-5细胞中，GSK199在浓度高达20 μM时未显示出显著的细胞毒性。CC50计算值为133.08 μM，选择性指数（SI = CC50/IC50）为224.94，表明其具有较宽的治疗窗口。[2]
安全性分析参考：该研究指出，包括GSK199在内的PAD抑制剂在针对多种炎症性疾病（如关节炎、结肠炎和脓毒症）的临床前研究中已显示出良好的安全性。[2] |
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
背景：GSK199 是一种高特异性的 PAD4 抑制剂，最初由 Lewis 等人 (2015) 开发和表征。本研究将 GSK199 重新定位为一种针对人类 β 冠状病毒的宿主靶向抗病毒药物。[2]
作用机制：HCoV-OC43 感染可上调 MRC-5 细胞中 PAD4 的表达，导致蛋白质瓜氨酸化增加。这种瓜氨酸化似乎是病毒最佳复制所必需的。GSK199 抑制 PAD4 的酶活性，从而抑制瓜氨酸化，进而减少病毒复制、蛋白质表达和感染性病毒颗粒的产生。[2] 特异性验证：PAD2 特异性抑制剂 AFM30a 缺乏抗病毒作用，证实了观察到的抗病毒活性是通过特异性抑制 PAD4 介导的，而非通过脱靶效应。 [2] 潜在机制（推测）：作者认为，PAD4介导的瓜氨酸化可能使具有抗病毒活性的干扰素刺激基因蛋白（如IFIT1和Mx1）失活。GSK199可能通过抑制PAD4来恢复这些ISG的抗病毒功能。然而，本研究尚未完全验证这一机制。[2] 治疗潜力：GSK199具有高选择性指数（224.94）和强效的抗病毒活性，使其成为进一步开发治疗包括SARS-CoV-2在内的β冠状病毒感染的理想候选药物。该研究还指出，GSK199在关节炎的临床前模型中显示出疗效，支持其安全性。 [2] 与泛PAD抑制剂的比较：虽然泛PAD抑制剂（Cl-A、BB-Cl）也显示出抗病毒活性，但GSK199的优势在于其PAD4特异性抑制作用，这可能减少抑制其他PAD亚型所带来的脱靶效应。[2] |
| 分子式 |
C24H29CLN6O2
|
|---|---|
| 分子量 |
468.98
|
| 精确质量 |
468.204
|
| CAS号 |
1549811-53-1
|
| PubChem CID |
86340155
|
| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
|
| tPSA |
91.2
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
33
|
| 分子复杂度/Complexity |
679
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
CCN1C(=CC2=C1N=CC=C2)C3=NC4=C(N3C)C(=CC(=C4)C(=O)N5CCC[C@H](C5)N)OC.Cl
|
| InChi Key |
KRGMIOKDGHBYQE-UNTBIKODSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C24H28N6O2.ClH/c1-4-30-19(12-15-7-5-9-26-22(15)30)23-27-18-11-16(13-20(32-3)21(18)28(23)2)24(31)29-10-6-8-17(25)14-29;/h5,7,9,11-13,17H,4,6,8,10,14,25H2,1-3H3;1H/t17-;/m1./s1
|
| 化学名 |
[(3R)-3-aminopiperidin-1-yl]-[2-(1-ethylpyrrolo[2,3-b]pyridin-2-yl)-7-methoxy-1-methylbenzimidazol-5-yl]methanone;hydrochloride
|
| 别名 |
GSK199 GSK 199 GSK-199
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~125 mg/mL (~266.54 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1323 mL | 10.6614 mL | 21.3229 mL | |
| 5 mM | 0.4265 mL | 2.1323 mL | 4.2646 mL | |
| 10 mM | 0.2132 mL | 1.0661 mL | 2.1323 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
