GYKI53655 Hydrochloride   中文名称: GYKI53655盐酸盐

α-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic acid (AMPA) receptor

α-氨基-3-羟基-5-甲基异恶唑-4-丙酸 (AMPA) (10 μM) 诱导的反应可被 GYKI 53655 (LY300168) 盐酸盐抑制，IC50 值为 5.9±0.1 μM。在表达重组 G1uR4 的 HEK293 细胞中，GYKI 53655 盐酸盐抑制 AMPA (10 μM) 反应，IC50 值为 4.6±0.4 μM。使用 3 μM 环噻嗪与 GYKI 53655 盐酸盐产生 79±2% 的抑制（n=4 个细胞）。在 30 μM 浓度下，GYKI 53655 盐酸盐仅少量抑制红藻氨酸诱导的电流；在 100 μM 时，它可分别将红藻氨酸诱导电流抑制 12±2 (n=4) 和 18±4 (n)。 GYKI 53655 盐酸盐的 IC50 值为 1.5±0.1 μM，抑制小脑浦肯野神经元中 AMPA 受体介导的反应[1]。

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研究了2,3-苯二氮卓类谷氨酸受体拮抗剂在HEK293细胞中表达的重组人非NMDA谷氨酸受体和体外天然大鼠NMDA和非NMDA受体上的活性和选择性。消旋型2,3-苯二氮平类药物GYKI52466、LY293606 （GYKI53405）和LY300168 （ GYKI 53655）分别抑制AMPA（10微米）介导的HEK293细胞中表达的重组人GluR1受体的应答，IC50值分别约为18微米、24微米和6微米，抑制HEK293细胞中表达重组人GluR4的AMPA（10微米）应答，IC50值分别约为22微米、28微米和5微米。GYKI 52466、LY293606和LY300168是急性分离大鼠小脑浦肯野神经元AMPA受体介导反应的非竞争性拮抗剂，IC50值分别约为10微米、8微米和1.5微米。外消旋化合物LY293606和LY300168的活性均存在于其（-）异构体中。在100 μ m浓度下，GYKI52466、LY293606和LY300168对表达人同质GluR5或GluR6受体或异质GluR6+KA2 kainate受体的HEK293细胞产生的kainate激活电流的抑制作用< 30%。2,3-苯二氮卓类药物在100微米时对盐酸盐受体的活性较弱，但具有立体选择性。在背根神经节神经元中观察到类似水平的盐酸盐诱导电流的抑制。完整的组织制剂也被用来检测2,3-苯二氮卓类药物的立体选择性作用。在皮质楔块制备中，LY300168的活性异构体LY303070对ampa诱发的去极化产生非竞争性拮抗作用，而海碱盐诱导的去极化变化较小，对nmda依赖的去极化没有影响。LY303070对30微米ampa诱导的离体脊髓背根去极化也有效，IC50值约为1微米。LY300168和LY293606的活性异构体立体选择性地拮抗半切脊髓制备中的突触传递。综上所述，这些结果表明2,3-苯二氮卓类药物是非nmda谷氨酸受体AMPA亚型的有效、选择性和立体特异性拮抗剂。[1]

GYKI 53655 盐酸盐（4 mg/kg）的半恢复时间约为 7 分钟，发现它对离子电渗疗法 α-氨基-3-羟基-5-甲基异恶唑-4- 的神经元反应有短暂的抑制作用。丙酸（AMPA）。 GYKI 53655 的盐酸盐（4 和 8 mg/kg）显着降低或停止 AMPA 反应。结果显示，GYKI 53655 盐酸盐（2 至 8 mg/kg）以剂量依赖性方式抑制 AMPA。即使在最高检测剂量下，GYKI 53655 盐酸盐也能将 AMPA 反应降低至类似程度 [2]。当 GYKI 53655 盐酸盐剂量超过 5.0 mg/kg 时，完全避免了强直性痉挛和死亡。 GYKI 53655 盐酸盐的 ED50 值为 2.2 mg/kg ip。 GYKI 53655盐酸盐的出口抑制作用在一小时后降至20%，其最大作用持续三小时[3]。

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本研究通过静脉注射两种α-氨基-3-羟基-5-甲基异恶唑-4-丙酸（AMPA）拮抗剂，观察其对离子电泳施加兴奋性氨基酸的单神经元反应影响。实验在α-氯醛糖麻醉、脊髓横断的大鼠脊髓神经元上进行。2. 喹喔啉类化合物NBQX（2-16 mg/kg）和2,3-苯二氮卓类化合物GYKI 53655（2-8 mg/kg）均呈剂量依赖性抑制AMPA反应。3. 两种化合物作用时间短暂，NBQX半恢复期为15分钟，GYKI 53655为7分钟。4. 与离子电泳NBQX相比，全身给药的NBQX对AMPA/N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）反应的选择性显著降低，提示其可能代谢为选择性较差的产物；而全身给药的GYKI 53655则保持较高选择性。5. 因此GYKI 53655比NBQX更适合用于体内AMPA受体介导过程的研究。[2]

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初步实验发现，GYKI 53655（4 mg/kg）对离子电泳AMPA诱发的神经元反应具有短暂抑制作用（半恢复期约7分钟，图1a）。后续实验采用弹丸注射联合持续输注（7分钟内输注半量）的给药方式。在脊髓背角神经元测试中，GYKI 53655（4和8 mg/kg）可显著抑制或完全阻断AMPA反应，而对NMDA诱发放电影响较小（图1b）。14次实验的汇总数据显示，GYKI 53655（2-8 mg/kg）抑制AMPA反应呈剂量依赖性（图2a）。NBQX经静脉（2-16 mg/kg）或微离子电泳给药也呈现剂量依赖性抑制（图2b）。两种拮抗剂对AMPA反应的抑制均显著强于NMDA（各剂量P<0.002）。但静脉给药时GYKI 53655的选择性优于NBQX：最大测试剂量下两者对AMPA反应的抑制程度相似（分别降至对照的23±6%和27±6%），而对NMDA反应的影响分别为77±7%和59±7%。在相同实验条件下比较（图2c），NBQX（16 mg/kg）对NMDA反应的抑制显著强于GYKI 53655（8 mg/kg）（P<0.05）。
微离子电泳NBQX在最高测试电流（5-10 nA）下表现出高度选择性，将AMPA反应降至14±4%（P<0.001），而NMDA反应保持在85±4%（仍显著低于对照，P<0.01）。所有拮抗剂均降低自发放电频率，其中全身给药的GYKI 53655和NBQX（最高剂量下分别降至50±13%和36±10%）比微离子电泳NBQX（70±7%）作用更显著。[2]

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本研究评估了非竞争性AMPA/红藻氨酸受体拮抗剂GYKI 52466[1-(4-氨基苯基)-4-甲基-7,8-亚甲二氧基-5H-2,3-苯二氮卓]及其两种类似物GYKI 53405[1-(4-氨基苯基)-3-乙酰基-4-甲基-3,4-二氢-7,8-亚甲二氧基-5H-2,3-苯二氮卓]和GYKI 53655[1-(4-氨基苯基)-3-甲基氨基甲酰基-4-甲基-3,4-二氢-7,8-亚甲二氧基-5H-2,3-苯二氮卓]在两种癫痫模型和MgCl2诱导全脑缺血（急性神经保护模型）中的效果。GYKI 52466抑制强直性和阵挛性听源性癫痫发作的ED50值分别为3.6和4.3 mg/kg；GYKI 53405为1.1和3.1 mg/kg；GYKI 53655为1.3和2.0 mg/kg。三者抑制最大电休克癫痫的ED50值分别为6.9、2.6和2.2 mg/kg。在MgCl2全脑缺血模型中，三者的PD50值（50%存活延长时间剂量）分别为24.1、8.3和8.2 mg/kg（腹腔注射）。10 mg/kg GYKI 52466的抗惊厥作用在2小时后降至50%，而5 mg/kg的GYKI 53405和GYKI 53655在3小时后仍保持80%以上抑制率。6小时后GYKI 53655作用完全消失，而GYKI 52466仍维持50%效果。[3]

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抗惊厥活性[3]
所有GYKI化合物均呈剂量依赖性阻断听源性强直和阵挛发作。GYKI 53405和GYKI 53655分别在2.5和5.0 mg/kg以上剂量完全预防强直发作和死亡，而GYKI 52466需10.0 mg/kg。最大电休克实验中，GYKI 53405和GYKI 53655的ED50值（2.6和2.2 mg/kg）显著低于GYKI 52466（6.9 mg/kg）（表1）。

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急性神经保护作用[3]
三种GYKI化合物在MgCl2全脑缺血模型中均呈剂量依赖性延长存活时间。GYKI 53405和GYKI 53655的PD50值相近（8.3和8.2 mg/kg），显著优于GYKI 52466（24.1 mg/kg）。GYKI 52466在≥15 mg/kg时显著延长存活时间[F(4,40)=26.86; p<0.001]，而两种类似物在7.5 mg/kg即显效[F(4,43)=34.93/52.02; p<0.001]（图1）。

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听源性癫痫实验中抗惊厥活性时程[3]
抗惊厥活性时程显示（图2A），GYKI 52466作用2小时后降至50%，而其他化合物3小时后仍保持80%以上抑制率。GYKI 53655的作用在3-4小时内从80%快速降至20%后消失，而GYKI 52466的50%效果可持续6小时。出口抑制实验（图2B）中，GYKI 53655的最大效应持续3小时，1小时后降至20%；GYKI 53405持续4小时后逐渐消退；GYKI 52466完全保护仅维持1小时，但70%效果可持续至6小时。

急性分离的小脑浦肯野神经元[1]
采用改良的Mintz等人(1992)方法分离小脑浦肯野神经元。取6-11日龄Sprague-Dawley大鼠小脑蚓部，置于含82 mM Na2SO4、30 mM K2SO4、5 mM MgCl2、1 mM HEPES、1 mM葡萄糖和0.1%酚红(pH 7)的缓冲液中。组织经清洗、切碎后，用含1 mg/ml蛋白酶XXIII的缓冲液在37°C消化6分钟。消化洗涤后，转移至补充1 mg/ml牛血清白蛋白(BSA)和1 mg/ml胰蛋白酶抑制剂的缓冲液中。通过吹打分散细胞，接种于多聚赖氨酸包被(50 μg/ml)的玻璃盖玻片上。浦肯野细胞通过其大胞体(15-30 μm)进行形态学鉴定。

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急性分离的背根神经节神经元[1]
采用改良的Moises等人(1994)(Bleakman等,1996)方法分离背根神经节(DRG)神经元。从4-7日龄大鼠腰胸段取出DRG，在含82 mM Na2SO4、30 mM K2SO4、5 mM MgCl2、1 mM HEPES和1 mM葡萄糖(pH 7.4)的溶液中用II型胶原酶(3 mg/ml)37°C消化50分钟。离心去除酶液后，加入含20 mg/ml BSA的MEM培养基，重悬离心。重复该步骤后，更换为含1.5 mg/ml NaHCO3、300 ng/ml神经生长因子、10 μg/ml青霉素/链霉素和10 mM葡萄糖的MEM培养基。用细头塑料巴氏吸管机械分散细胞，接种于多聚赖氨酸包被(50 μg/ml)的盖玻片上。所有记录在接种后36小时内完成。

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转染细胞系[1]
如先前报道(Hoo等,1994;Korczak等,1995;Fletcher等,1995)，建立了稳定转染人GluR4(flip)、GluR5(Q)和GluR6(Q)受体cDNA的HEK293细胞系。通过共转染GluR6(Q)和KA2 cDNA(Hoo等,1994;Kamboj等,1992)建立GluR6(Q)+KA2异源表达细胞系，两种cDNA均整合入哺乳动物表达载体pRc/CMV。通过G418抗性筛选转染细胞，RT-PCR验证双基因表达。人GluR1受体通过放射性标记的大鼠GluR寡核苷酸探针杂交人胎脑cDNA/λZAPII噬菌体文库(Stratagene)获得。将人GluR1 cDNA整合入pRc/CMV载体转染HEK293细胞建立稳定细胞系，经G418筛选和RT-PCR验证表达。电生理记录前，细胞经吹打分散后接种于多聚赖氨酸包被(10 μg/ml)的盖玻片。

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电生理记录与给药[1]
采用膜片钳技术的全细胞紧密封接模式(Hamill等,1981)进行全细胞电压钳记录。将粘附细胞的盖玻片碎片置于灌流槽中，用含138 mM NaCl、5 mM CaCl2、5 mM KCl、1 mM MgCl2、10 mM HEPES和10 mM葡萄糖(pH 7.5，渗透压315 mosm/kg)的缓冲液冲洗。电极内液含140 mM CsCl、1 mM MgCl2、14 mM二Tris肌酸磷酸、50 U/ml肌酸磷酸激酶、14 mM MgATP、10 mM HEPES和15 mM BAPTA(pH 7.2，渗透压295 mosm/kg)。实验在室温(20-22°C)下进行，使用List EPC-7或Axopatch 1D放大器记录。电极电阻通常为1.5-2.5 MΩ。通过多通道给药系统(Biologic Inc.)进行药物灌流，当前记录条件下溶液交换时间约100毫秒。对GluR6、GluR6/KA2和GluR5转染细胞，实验前用250 μg/ml伴刀豆球蛋白A预处理盖玻片以消除激动剂诱导的脱敏。对GluR1和4转染细胞，在100 μM环噻唑存在下进行实验以消除脱敏(Partin等,1993)。小脑浦肯野神经元采用浴槽灌流给药，给药时间约15秒。我们先前证实，在此记录条件和缓慢给药方式下，红藻氨酸产生不受伴刀豆球蛋白A影响的非脱敏电流(Bleakman等,1996)，提示可能由红藻氨酸作用于这些细胞的AMPA受体介导。数据点曲线拟合基于方程y=100(Dn/(Dn+ic50n))，其中斜率n固定为1，D为拮抗剂浓度。统计学显著性采用单因素方差分析后接Student-Newman-Keuls检验。

动物准备[2]
\n实验采用27只雄性Wistar大鼠（260-350 g）。实验方法的详细内容已在其他文献中描述（Headley等，1987）。简而言之，大鼠用2℃的氟烷麻醉，并插入气管、颈动脉和颈静脉插管。暴露腰胸段脊髓，并在T9-T11节段切断，然后对动物进行背角单神经元动作电位的细胞外记录。术后使用α-氯醛糖维持麻醉（初始剂量50 mg/kg，静脉注射，之后根据需要追加10 mg/kg）。持续监测动脉血压；收缩压保持在100 mmHg以上。核心体温维持在37℃左右。使用填充有 3.5 M NaCl 的多管玻璃微电极的中央管，对单个脊髓背角神经元的动作电位进行细胞外记录。在与刺激相关的时段内，使用微型计算机在线分析诱发的尖峰活动计数。细胞放电率通过图表记录仪进行监测。实验结束时，用过量戊巴比妥钠处死大鼠。

\n\n药物 AMPA、NMDA 和 NBQX 通过微离子电泳法从多管微电极的侧管注入，溶液分别为 AMPA 的钠盐（10 mM，溶于 200 mM NaCl）、NMDA 的钠盐（100 mM，溶于 100 mM NaCl）和 NBQX 的钠盐（1 mM，溶于 50 mM NaCl），所有溶液的 pH 值均为 7.5-8。另一个管内装有 200 mM NaCl 用于电流平衡。 AMPA 和 NMDA 呈规律周期性放电。NBQX 和 GYKI 53655 均采用静脉注射给药。拮抗剂效应以对照 EAA 反应的百分比定量表示，其中对照取给药前最后 3 次计数的平均值；结果以平均值 ± 标准误差表示。未对自发活动进行校正。仅当 AMPA 和 NMDA 反应恢复至初始拮抗剂效应的至少 50% 时，测试结果才被接受。统计分析采用 Wilcoxon 配对检验，基于原始尖峰计数数据（另有说明除外）。皮质楔形制备 [1] 150–200 g 的大鼠经颈椎脱臼处死，断头后迅速取出脑组织，置于冰冷的人工脑脊液 (aCSF) 中。从包含前脑吻侧的脑组织块中切取 450 μm 厚的横切片。从扣带回皮层切取楔形切片，置于双室腔室中，灰质位于一个腔室，白质位于另一个腔室，两者之间以油脂密封隔膜分隔。记录两个腔室之间的直流电位，并通过Ag/AgCl电极连续记录至图表记录仪。灰质腔室灌注人工脑脊液（aCSF），其成分（mM）为：NaCl 124、NaHCO2 25.5、KCl 3.3、KH2PO4 1.2、CaCl2 2.5、D-葡萄糖 10，并用5% CO2/氧气混合气体平衡，室温下pH值为7.4-7.5。白质腔室置于含有1 mM MgSO4的静态aCSF池中。将化合物作为激动剂进行测试，方法是将4 ml灌注的aCSF分装后，以不低于20分钟的间隔滴加到灰质腔室中。通过连续灌流测试化合物作为拮抗剂的活性，并向该溶液中加入 4 ml 标准激动剂。数据以未添加拮抗剂时诱发反应的百分比表示。\n

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\n\n脊髓制备[1]
\n3 至 5 日龄大鼠断头处死。在含 Mg2+ 的人工脑脊液 (aCSF) 中，小心地将脊髓从椎管中取出，以保护 L4-L6 节段的腹根和背根。将脊髓对半切开，置于有机玻璃底座上，使背根 (DR) 和腹根 (VR) 分别接触 Ag/AgCl 刺激电极和记录电极。使用油脂密封圈将这些电极与脊髓本身隔离。脊髓持续灌注（1.5 ml/min）人工脑脊液（aCSF），其成分为（mM）：NaCl 126、KCl 3、NaH₂PO₄ 1.25、CaCl₂ 2.4、MgSO₄ 1.4 和 d-葡萄糖 10，并用 5% CO₂/O₂ 混合气体平衡，以在室温（20–22°C）下维持 pH 值在 7.4–7.5（Paternain 等，1995）。为了研究 2,3-苯二氮卓类药物对 AMPA 和 NMDA 诱导的去极化作用的影响，在至少 20 分钟的间隔内，以 3 ml 不含 Mg²⁺ 的 aCSF 溶液（其中含有 AMPA (3 μM) 或 NMDA (30 μM)）记录 VR DC 电位。在加入激动剂前至少灌注 20 分钟，以评估拮抗剂的作用。累积拮抗剂剂量反应曲线通过以对照激动剂反应的百分比表示振幅进行标准化（Palmer 和 Lodge，1993）。\n

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\n\nAS 测试 [3]
\n实验按照 De Sarro 等人的方法进行，并稍作修改。将测试化合物或溶剂（对照）腹腔注射给每组 9-16 只小鼠。15 分钟后，在直径 30 厘米的带盖玻璃圆筒中，用 120 dB 的 14 kHz 正弦音刺激小鼠。由两名独立的观察者评估癫痫发作反应。声音诱发的行为使用以下等级进行编码：0 = 正常行为，1 = 狂奔，2 = 阵挛，3 = 强直性屈肌发作，4 = 强直性伸肌发作；基于观察者的一致意见。声音效应持续60秒，但当观察动物出现强直性伸展性癫痫发作时，声音效应提前终止。记录每只动物在60秒内对不和谐声音的最大反应（0-4分）。同时记录动物的死亡率。采用Litchfield和Wilcoxon方法测定抑制阵挛性癫痫发作和强直性伸展性惊厥的ED50值。在听源性癫痫试验中，还检测了10 mg/kg GYKI 52466、5 mg/kg GYKI 53405和GYKI 53655的抗惊厥作用持续时间。计算了与对照组相比的癫痫发作抑制率和发作后抑制率。在这些实验中，每个预处理时间点（15分钟至8小时）均设置了单独的载体处理组和药物处理组。\n

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\n\nMgCl2诱导的全脑缺血（急性神经保护模型）[3]
\n每组10只小鼠，分别腹腔注射不同剂量的GYKI 53405和GYKI 53655（3.75、7.5、15和30 mg/kg）以及GYKI 52466（7.5、15、30和60 mg/kg），或载体。30分钟后，静脉注射饱和MgCl2溶液（5 ml/kg），导致心脏骤停，随后发生全脑缺血。如Berga等人所述，采用生存时间延长（从静脉注射致死剂量MgCl2到死亡的时间间隔，死亡定义为最后一次可观察到的喘息）来评估神经保护作用。结果以均值±标准误（SEM）表示，并采用方差分析和Duncan氏检验评估统计学意义。生存时间的百分比变化通过比较各治疗组与MgCl2对照组计算得出。生存时间延长50%的剂量（PD50值）通过线性回归分析计算得出。

126757 小鼠口服LD50为97 mg/kg，行为学表现：睡眠时间改变（包括翻正反射改变）；行为学表现：肌肉无力；肺、胸腔或呼吸：呼吸抑制。美国专利文件，编号5519019。
126757 小鼠腹腔注射LD50为93 mg/kg，行为学表现：睡眠时间改变（包括翻正反射改变）；行为学表现：共济失调；肺、胸腔或呼吸：呼吸抑制。美国专利文件，编号5519019。

[1]. Activity of 2,3-benzodiazepines at native rat and recombinant human glutamate receptors in vitro: stereospecificity and selectivity profiles. Neuropharmacology. 1996;35(12):1689-702.

[2]. A comparison of intravenous NBQX and GYKI 53655 as AMPA antagonists in the rat spinal cord. Br J Pharmacol. 1994 Jul;112(3):843-6.

[3]. Comparison of anticonvulsive and acute neuroprotective activity of three 2,3-benzodiazepine compounds, GYKI 52466, GYKI 53405, and GYKI 53655. Brain Res Bull. 2001 Jun;55(3):387-91.

我们在AS测试中测定了三种GYKI化合物在等效剂量下的时间进程。我们选择了对听源性刺激抑制率大于85%的剂量（数据未显示）。在这些剂量下，GYKI 52466的保护作用在给药后2小时降至50%，而两种类似物的保护作用分别持续4小时和3小时。有趣的是，效力最强的类似物GYKI 53655的作用在4小时后消失，而GYKI 52466的作用在6小时后仍维持在50%左右。在听觉输出抑制中也观察到了同样的现象，GYKI 52466的保护作用迅速降至70%水平，但这种保护作用可持续长达6小时。两种类似物的作用至少持续3小时，但之后它们的听觉输出抑制特性有所降低。与 GYKI 53405 相比，GYKI 53655 的作用减弱得更快，而 GYKI 53405 的作用则在 4 至 8 小时内逐渐减弱。由于 De Sarro 等人和 Yamaguchi 等人分别在最大电休克 (MES) 和 AS 测试中描述了 GYKI 52466 的短暂（最长 90 分钟）保护作用，因此该化合物作用的快速减弱并不意外。然而，6 小时后仍有约 50% 的癫痫抑制率，这多少有些令人惊讶。一种可能的解释是，该化合物代谢迅速，导致其最大作用持续时间短暂，而具有相同或更弱抗惊厥活性的代谢产物则负责其持久作用。我们的结果表明，在不同的模型中，所研究的 GYKI 化合物在疗效和作用持续时间方面存在显著差异。这些差异表明，在治疗适应症和疗效方面可能存在类似的变异性，并且化合物化学结构的微小变化即可显著改善其药理作用。 [3]

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在本研究中，GYKI 53655（GYKI 52466 的更强效衍生物，Tarnawa 等，1993）在降低 AMPA 和 NMDA 受体反应方面比 NBQX 更具选择性。然而，即使是 GYKI 53655 也在一定程度上降低了 NMDA 受体反应。背景活性的降低（推测是由于拮抗 AMPA 受体介导的细胞自发输入所致）反映了兴奋性的降低，这反过来会降低对 NMDA 和 AMPA 受体的反应；因此，这种效应可能导致了这种轻微的非选择性。然而，这种机制无法解释全身给药 NBQX 与离子导入 NBQX 或全身给药 GYKI 53655 之间选择性程度的差异（见图 2 中的数据），尤其是在对同一细胞比较这两种药物时。由于NBQX代谢迅速（在这些条件下半衰期为15分钟），因此，其代谢产物可能是导致全身给药后NBQX选择性较低的原因。GYKI 53655虽然选择性更高，但作用时间更短（半衰期为7分钟），这将限制该化合物的潜在治疗用途。GYKI 52466的二取代还原类似物作用时间更长（Tarnawa等人，1993）；朝此方向的开发可能会产生更多有用的化合物。总之，本研究表明，NBQX和GYKI 53655在全身给药后均可作为有效的AMPA受体拮抗剂。然而，在解释全身给药NBQX的结果时应谨慎，因为其拮抗剂活性似乎低于体外或体内局部给药后的选择性。这很可能是由于NBQX转化为选择性较低的代谢物所致。因此，GYKI 53655 似乎比 NBQX 更适合用于研究体内 AMPA 受体介导的过程。作者感谢威康信托基金会和医学研究理事会的资助，并感谢 D. Lodge 博士（英国礼来公司）和 Leimner 博士（德国 Merz 公司）分别赠予 GYKI 53655 和 NBQX。[2]

C19H21CLN4O3

388.848043203354

388.13

C, 58.69; H, 5.44; Cl, 9.12; N, 14.41; O, 12.34

143692-48-2

143692-18-6 (Free Base);143692-48-2 (HCl);

126757

Light yellow to yellow solid powder

563.6ºC at 760 mmHg

294.7ºC

5.11E-13mmHg at 25°C

3.297

92.67

3

5

1

27

561

0

Cl.O1COC2C1=CC1=C(C=2)C(C2C=CC(=CC=2)N)=NN(C(NC)=O)C(C)C1

ASLCSBBDVWPSQT-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H20N4O3.ClH/c1-11-7-13-8-16-17(26-10-25-16)9-15(13)18(22-23(11)19(24)21-2)12-3-5-14(20)6-4-12;/h3-6,8-9,11H,7,10,20H2,1-2H3,(H,21,24);1H

5-(4-aminophenyl)-N,8-dimethyl-8,9-dihydro-[1,3]dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepine-7-carboxamide;hydrochloride

91HGG22IDM; ly-300168 monohydrochloride; 1-(4-Aminophenyl)-3-methylcarbamyl-4-methyl-3,4-dihydro-7,8-methylenedioxy-5H-2,3-benzodiazepine hydrochloride; 7H-1,3-DIOXOLO(4,5-H)(2,3)BENZODIAZEPINE-7-CARBOXAMIDE, 5-(4-AMINOPHENYL)-8,9-DIHYDRO-N,8-DIMETHYL-, HYDROCHLORIDE (1:1); 7H-1,3-Dioxolo[4,5-h][2,3]benzodiazepine-7-carboxamide, 5-(4-aminophenyl)-8,9-dihydro-N,8-dimethyl-, hydrochloride (1:1); LY-300168 MONOHYDROCHLORIDE, (+-)-; 692-678-5; 143692-48-2;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 160 mg/mL (~411.47 mM)
H2O : ~8 mg/mL (~20.57 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。