WP9QY

TNF-a; bioactive peptide

虽然已经证明TNFα拮抗剂WP9QY可与TNFα结合并抑制其与TNFR-1的结合，但尚不清楚WP9QY在与3D PEG水凝胶网络结合后是否保留其与TNFα结合的亲和力。为了检测固定化WP9QY的tnf α-结合能力，我们合成了一种交联的、FITC标记的WP9QY肽类似物，即丙烯基（FITC）WP9QY（图1a）。FRET实验表明亲和性结合，首先在PBS或PEGDA大分子溶液中存在丙烯基-(FITC)WP9QY肽（供体）和alexafluor555标记的TNFα （AF555-TNFα，受体）。如图2a所示，在恒定供体（丙烯基-(FITC)WP9QY）浓度为500nM时，归一化FRET随受体（AF555-TNFα）浓度的变化而增加。PBS中FRET的增加表明合成的WP9QY类似物保持了与TNFα的结合亲和力。tnf - α- wp9qy在PEGDA （6kDa和10kDa）大分子溶液中结合程度进一步增加。这是由于PEG大分子的高排斥体积增加了局部TNFα和WP9QY浓度，导致结合平衡向TNFα-WP9QY复合物移动。注意，在PEG大分子存在的情况下，归一化FRET的增加不能归因于PEG分子的自身荧光，因为在没有受体存在的情况下，FRET信号归一化为PEG/供体溶液的信号。[1]

为了研究TNFα与固定化肽拮抗剂WP9QY的结合，我们在丙烯酸基（FITC）WP9QY和可溶性AF555-TNFα存在下光聚合PEGDA溶液，形成PEG-WP9QY水凝胶。如图1b和1c所示，通过调节PEGDA预聚体溶液中功能化肽的浓度，可以严格控制丙烯酸基-(FITC)WP9QY在PEG水凝胶中的掺入。此外，FRET结果（图2b）显示，TNFα和WP9QY的归一化FRET再次随着受体浓度的增加而增加，这表明固定化的WP9QY保留了与可溶性TNFα的结合能力。值得注意的是，TNFα-WP9QY在PEGDA水凝胶中的结合程度低于在PEGDA溶液中的结合程度，而PEGDA溶液中TNFα和WP9QY均可溶解。在之前的工作中，我们证明了水凝胶网络固定化肽与可溶性蛋白的亲和结合由于固定化肽的迁移性降低和周围PEG链产生的“空间位阻”而降低。尽管如此，PEG水凝胶中TNFα与固定化WP9QY的结合仍然高于其在PBS中的结合（图2b），这表明PEG-WP9QY水凝胶具有类似（如果不是更高）的TNFα拮抗作用。用共聚焦显微镜观察fitc标记的PEG-WP9QY水凝胶、AlexaFluor555-TNFα的存在以及FRET现象（图2c）。[1]

其次，PEG-WP9QY水凝胶的膨胀与肽含量有关。水凝胶的膨胀是重要的，因为它决定了运输性质，影响重要分子扩散的时间尺度，并与被包被细胞的存活相关。为了验证丙烯酸- wp9qy在PEGDA水凝胶中的掺入不会对PEG水凝胶的膨胀和扩散特性产生不利影响，我们表征了在生理pH值（7.4）下PEG- wp9qy水凝胶的平衡质量膨胀比和胰岛素（MW: 5.5kDa）扩散。结果表明，当浓度高达500μM时，丙烯酸- wp9qy肽的掺入不影响水凝胶膨胀（图1d）和胰岛素释放（数据未显示）。 [1]

如上所述，促炎细胞因子TNFα可诱导多种细胞类型的凋亡。为了阐明PEG-WP9QY水凝胶在保护被包被细胞免受tnf α诱导的凋亡中的作用，我们用WP9QY肽功能化的PEG水凝胶包被大鼠嗜铬细胞瘤细胞或PC12细胞。细胞粘附肽CGRGDS也通过巯基丙烯酸酯光聚合固定在PEG凝胶中。RGD肽的功能是支持PC12在3D水凝胶中的存活所必需的。先前的研究表明，在二维培养中，TNFα诱导分化的PC12细胞显著凋亡，而naïve细胞则没有。我们在3D水凝胶培养中观察到类似的现象，PEG-RGD水凝胶中未分化的PC12细胞即使受到TNFα的攻击也保持活力和非凋亡（数据未显示）。然而，当包被的PC12细胞用神经生长因子（2.5S NGF）分化6天时，与未激发细胞的活力相比，PEG-RGD水凝胶中分化的PC12细胞的活力降低了约40%（图4a）。另一方面，TNFα刺激下PC12细胞的存活不受影响，并保持与PEG-RGD-WP9QY水凝胶（100 μ m和250μM WP9QY）中未刺激细胞相当的活力。此外，定性活/死染色和共聚焦成像结果也显示，未经修饰的PEG凝胶在TNFα攻击下死亡细胞数量增加，而PEG-WP9QY （100μM acryl-WP9QY）凝胶中死亡细胞数量没有增加（图4c和4d），这表明固定化的WP9QY肽在保护被包裹细胞免受细胞因子诱导的细胞死亡方面发挥了重要作用。进一步检测转染或未转染TNFα的PC12细胞中caspase 3/7的激活情况表明，TNFα转染下细胞存活率的降低是通过凋亡途径介导的（图4b）。 [1]

为了进一步探讨PEG-WP9QY水凝胶促进被包被细胞功能的作用，我们在PEG或PEG-WP9QY （100μM）水凝胶中对小鼠胰岛进行光包被，研究了固定化<强>WP9QY对胰岛细胞凋亡的保护作用，以及由于TNFα浸润而减少胰岛素分泌的作用。胰岛在受到促炎细胞因子（如TNFα）的刺激时，会经历凋亡通路。虽然胰岛包封和移植被认为是治疗1型糖尿病的一种解决方案，但目前的包封技术不能防止小的促炎细胞因子引起的β细胞损伤。为此，我们成功地制造了允许的PEG-WP9QY水凝胶环境，支持光封装胰岛的生存和功能。如图S1所示，虽然人细胞因子的作用不如小鼠细胞因子，但人细胞因子确实能诱导小鼠β-细胞凋亡，提示PEG-WP9QY水凝胶可用于阻止htnf α诱导的小鼠β-细胞凋亡。事实上，在hTNFα刺激下，被未修饰的PEG水凝胶包裹的小鼠胰岛显示出caspase 3/7活性增加（图5a）、细胞存活受损（图5b）和胰岛素分泌减少（图5c），但当胰岛被PEG- wp9qy （100μM）功能凝胶包裹时，无论是否有hTNFα刺激，胰岛没有发现显著差异。 [1]

使用水凝胶包封人间充质干细胞（hMSCs）已被证明在提供三维环境以支持其成骨、软骨和脂肪分化以恢复受损组织方面具有价值。然而，仍有一个问题有待回答，在伤口部位的高度炎症环境中，被封装的hMSCs在促炎细胞因子存在下是否仍能经历其所需的分化途径？在二维培养中，一些出版物揭示了TNFα抑制hMSCs成骨分化的分子机制。为了在TNFα刺激下促进hMSCs的成骨分化，我们将hMSC光包埋在PEG-RGD （3mM CGRGDS）或PEG-RGD- wp9qy （100μM）水凝胶中，研究浸润TNFα对hMSCs存活和成骨分化潜能的影响。我们的研究结果显示，与PC12（图4b）和胰岛（图5a）包封相似，被包封的hMSCs在PEG-RGD水凝胶中表现出更高的caspase 3/7活性，而在PEG-RGD- wp9qy水凝胶中则没有（图6a）。然而，与TNFα刺激下PC12细胞和胰岛细胞存活率下降不同的是，在TNFα存在下，PEG-RGD水凝胶中包裹的hMSCs比PEG-RGD-WP9QY水凝胶中更具有增殖能力。这一结果与最近报道的TNFα诱导hMSC增殖一致。我们在2D培养（图S3a）和3D水凝胶中验证了TNFα对hMSC的增殖作用（图6b）。由于增殖性骨髓间充质干细胞的分化潜力较小，而TNFα的处理增加了骨髓间充质干细胞[36]的增殖，因此在TNFα的刺激下，成骨分化可能会减少。如图S3b所示，在二维培养中，当TNFα激发时，hMSCs显示出较低的碱性磷酸酶（ALP）活性（以每个细胞为基础），这表明TNFα在抑制hMSC成骨分化方面的潜在作用。最后，我们发现使用PEG-RGD-WP9QY功能化的水凝胶成功地阻止了TNFα对3D水凝胶培养中包裹的hMSCs成骨分化的抑制作用。如图6c所示，PEG-RGD- wp9qy凝胶包封的hMSCs在TNFα刺激下保持相对ALP活性，而PEG-RGD水凝胶则没有。 [1]

我们发现PEG-WP9QY水凝胶对TNFα的拮抗作用持续两周（图6b）。然而，一个关注仍然是关于水凝胶的长期细胞因子拮抗作用。应该注意的是，在足够高的肽浓度下，从固定肽释放的结合细胞因子是最小的。也有可能结合的细胞因子在与固定肽长期结合后会变性。这项研究为制造能够与小细胞因子相互作用的功能性生物材料开辟了一条途径，以提高被封装细胞的存活率和功能，用于体内组织工程和再生医学应用。这些细胞因子拮抗剂PEG水凝胶的治疗效果可以通过固定化其他协同的拟肽拮抗剂进一步扩大，以对抗额外的细胞毒性细胞因子，如白细胞介素-1β (IL-1β)和干扰素γ (IFN- γ)。这种多肽功能化的水凝胶平台也可以作为一个相互作用的亲和库，装载治疗药物，招募细胞以促进组织再生。[1]

FRET实验[1]
为了检测TNFα与固定的WP9QY的结合，FRET实验在PBS中设计，或在PEGDA大分子溶液或水凝胶存在下设计。简单地说，根据制造商的方案，用alexafluor 555标记TNFα并作为FRET受体（AF555-TNFα），而丙烯-(FITC)WP9QY作为FRET供体。用于FRET测量的样品，包括仅受体样品，仅供体样品，以及受体和供体样品，在96孔板中制备。所有样品的荧光在酶标仪上定量，使用三组滤光片，包括供体（Ex: 485nm, Em: 535nm）、受体（Ex: 560nm, Em: 595nm）和FRET （Ex: 485nm, Em: 595nm）滤光片。所获得的荧光信号（在PBS或PEGDA溶液中光聚合前后）按照先前报告的描述进行校准。然后，在没有受体（仅供体）的情况下，通过FRET标准化每个受体浓度的校准FRET，以获得标准化的FRET（见支持信息）。

细胞培养和包封 [1]
将PC12细胞置于含有15%马血清、5%胎牛血清、1%青霉素-链霉素和0.5μg/mL真菌素的RPMI1640培养基中，在37℃、5% CO2的潮湿条件下保存。为了进行包封，将PC12细胞从烧瓶中胰蛋白酶化，并与含有0.025wt% I-2959和所需量的丙烯酸-WP9QY肽的10wt% PEGDA大分子溶液混合。细胞粘附肽CGRGDS （2mM）也加入到PEG凝胶中以支持细胞存活。通过将含有细胞的高分子溶液（40μL/gel, 150,000个细胞/gel）暴露在紫外线下实现光封装，类似于上述光聚合过程。包封后，载细胞凝胶在含有1%马血清和50ng/mL 2.5S神经生长因子的PC12分化培养基中保存6天，用于神经元分化。分离的小鼠胰岛悬浮在含有所需量的丙烯酸-WP9QY和0.025 wt% I-2959的10 wt% PEGDA大分子溶液中。将各含约20个胰岛（30μL）的胰岛大分子溶液注射到直径为9 mm的灌注室模具中。× 0.5 mm厚，Grace Bio-Labs, Bend， OR)，在紫外线照射下光聚合10分钟。包封的胰岛在RMPI 1640培养基中添加10%牛血清、1%青霉素-链霉素和0.5 μg/mL真菌素。文化媒介每隔一天就更换一次。在低糖DMEM培养基中（添加10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素、0.5 μg/mL真菌素和1ng/mL bFGF）中维持hMSCs，每周传代2次。所有用于包封的hMSCs(类似于上述程序；15万个细胞/凝胶)，保存在成骨分化培养基中（含10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素、0.5 μg/mL真菌素、0.01 μM地塞米松、0.2mM抗坏血酸2-磷酸、10mM甘油2-磷酸的高糖DMEM）。

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TNFα激发和caspase 3/7活性测定 [1]
将含有细胞的PEG水凝胶和PEG-WP9QY水凝胶暴露于重组人TNF-α (50 ng/mL)中24小时。之后，将载细胞的凝胶转移到含有10% AlamarBlue试剂的0.6 mL新鲜培养基中，孵育3小时。取200 μL的溶液转移到96孔透明板上，AlamarBlue荧光(Ex: 560nm；Em: 590nm)信号测定每个凝胶中的相对细胞数。然后将凝胶转移到含有50% CaspasGlo 3/7试剂的新鲜培养基中，在室温下在轨道摇床上孵育1小时。将200 μL的溶液转移到白壁96孔板上，在微孔板读取器中进行发光测量。将得到的发光信号归一化为之前得到的对应凝胶样品的alamabblue荧光，并以相对caspase 3/7活性表示。用活/死染色试剂盒对包封的PC12细胞进行活/死染色，并用共聚焦显微镜成像。

[1]. Functional PEG-peptide hydrogels to modulate local inflammation induced by the pro-inflammatory cytokine TNFalpha. Biomaterials. 2009 Oct;30(28):4907-14.

水凝胶是一类重要的生物材料，可用于细胞封装和递送，在宿主组织和封装细胞之间形成物理屏障或“免疫隔离”。这种半透性凝胶能够保护封装细胞免受宿主免疫细胞和/或抗体的识别，同时允许营养物质的快速扩散。然而，一个此前未被解决的问题是，高通透性的水凝胶无法阻止可溶性免疫介质（例如在体内伤口环境中高表达的促炎细胞因子）的渗入。当遇到促炎细胞因子时，封装细胞无法发挥其预期功能。本文报道了一种肽功能化的细胞因子拮抗剂聚乙二醇（PEG）水凝胶的合成、表征和应用，该水凝胶能够有效隔离促炎细胞因子——肿瘤坏死因子α（TNFα）。结果表明，在体外TNFα处理下，未修饰的PEG水凝胶中包封的细胞（例如，大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12、小鼠胰岛细胞和人骨髓间充质干细胞或hMSCs）的存活、功能和分化均受到显著抑制。相反，包封在TNFα拮抗水凝胶中的细胞不受浸润的TNFα的影响。这项研究表明，控制高容许性水凝胶中促炎细胞因子的可用性至关重要。[1]

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利用TNFα-WP9QY的高特异性结合，我们在此报道了TNFα拮抗PEG水凝胶的合成、表征及其在增强包封细胞抵抗TNFα刺激的存活和功能方面的应用。我们首先描述了利用荧光共振能量转移 (FRET) 设计和表征人 TNFα 与 WP9QY 肽功能化 PEG 水凝胶的亲和力结合，然后表征了 PEG-WP9QY 水凝胶的物理性质，包括水凝胶的溶胀程度、小分子的扩散性和细胞因子在凝胶中的吸收。由于TNFα是一种强效促炎细胞因子，可广泛影响体内多种主要细胞类型，我们将三种对TNFα刺激敏感的细胞类型，包括大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12、小鼠胰岛细胞和人骨髓间充质干细胞（hMSCs），封装在PEG-WP9QY功能化水凝胶中，以验证其抑制TNFα诱导的封装细胞命运损伤的能力。

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总之，我们合成了WP9QY功能化的TNFα拮抗剂PEG水凝胶，该水凝胶能够螯合细胞毒性TNFα，并延长封装的PC12细胞和小鼠胰岛细胞的存活时间和功能。此外，WP9QY功能化的PEG水凝胶不仅能抑制TNFα诱导的hMSCs增殖，还能在3D水凝胶培养中维持其成骨分化潜能。本研究为制备用于细胞疗法的免疫隔离水凝胶提供了一种新方法，有望在体内组织工程应用中得到有效利用。[1]

C60H74F3N11O17S2

1342.41828298569

1225.457

199999-60-5

16134442

Tyr-Cys-Trp-Ser-Gln-Tyr-Leu-Cys-Tyr (Disulfide bridge:Cys2-Cys8); L-tyrosyl-L-cysteinyl-L-tryptophyl-L-seryl-L-glutaminyl-L-tyrosyl-L-leucyl-L-cysteinyl-L-tyrosine (2->8)-disulfide; H-Tyr-Cys(1)-Trp-Ser-Gln-Tyr-Leu-Cys(1)-Tyr-OH

YCWSQYLCY (Disulfide bridge:Cys2-Cys8); YCWSQYLCY

White to off-white solid powder

1.5±0.1 g/cm3

1692.1±65.0 °C at 760 mmHg

977.2±34.3 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.701

0.46

487

16

18

19

86

2300

9

SC[C@@H](C(N[C@H](C(=O)O)CC1C=CC(=CC=1)O)=O)NC([C@H](CC(C)C)NC([C@H](CC1C=CC(=CC=1)O)NC([C@H](CCC(N)=O)NC([C@H](CO)NC([C@H](CC1=CNC2C=CC=CC1=2)NC([C@H](CS)NC([C@H](CC1C=CC(=CC=1)O)N)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O.FC(C(=O)O)(F)F

OXRZFLLXMORPHO-XCLFSWKQSA-N

InChI=1S/C58H71N11O15S2/c1-30(2)21-42-52(77)69-48(57(82)66-45(58(83)84)24-33-11-17-37(73)18-12-33)29-86-85-28-47(68-50(75)39(59)22-31-7-13-35(71)14-8-31)56(81)65-44(25-34-26-61-40-6-4-3-5-38(34)40)54(79)67-46(27-70)55(80)62-41(19-20-49(60)74)51(76)64-43(53(78)63-42)23-32-9-15-36(72)16-10-32/h3-18,26,30,39,41-48,61,70-73H,19-25,27-29,59H2,1-2H3,(H2,60,74)(H,62,80)(H,63,78)(H,64,76)(H,65,81)(H,66,82)(H,67,79)(H,68,75)(H,69,77)(H,83,84)/t39-,41-,42-,43-,44-,45-,46-,47-,48-/m0/s1

(2S)-2-[[(4R,7S,10S,13S,16S,19S,22R)-22-[[(2S)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-13-(3-amino-3-oxopropyl)-16-(hydroxymethyl)-10-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-19-(1H-indol-3-ylmethyl)-7-(2-methylpropyl)-6,9,12,15,18,21-hexaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20-hexazacyclotricosane-4-carbonyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid

199999-60-5; H-Tyr-Cys-Trp-Ser-Gln-Tyr-Leu-Cys-Tyr-OH; WP9QY; (2S)-2-[[(4R,7S,10S,13S,16S,19S,22R)-22-[[(2S)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-13-(3-amino-3-oxopropyl)-16-(hydroxymethyl)-10-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-19-(1H-indol-3-ylmethyl)-7-(2-methylpropyl)-6,9,12,15,18,21-hexaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20-hexazacyclotricosane-4-carbonyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid; L-Tyrosyl-L-cysteinyl-L-tryptophyl-L-seryl-L-glutaminyl-L-tyrosyl-L-leucyl-L-cysteinyl-L-tyrosine cyclic (2 inverted exclamation marku8)-disulfide; TNF-.alpha. Antagonist; HY-P2612; FT111079;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。