| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
β-catenin-regulated transcription (CRT)
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| 体外研究 (In Vitro) |
iCRT-5和PNU-75654对受刺激dc的免疫表型无不良影响。因此，在刺激过程中，iCRT5处理的dc与对照dc一样，具有相对较强的T细胞增殖。相比之下，在PNU-75654存在下刺激的DCs诱导的T细胞增殖比对照人群少，尽管OVA的摄取和加工增强。我们的研究结果表明，β-catenin抑制剂对受刺激的DCs的不同作用反映了脱靶效应。关于β-catenin抑制剂在肿瘤治疗中的潜在应用，iCRT-5可能是最有益的，因为它对受刺激的dc没有不利影响。[1]
研究人员证实，iCRTs（如iCRT5）以剂量依赖性的方式阻断Wnt/β-cat报告细胞活性，下调β-cat表达，抑制细胞增殖，最佳剂量接近15 μM。我们的数据进一步表明，在最佳剂量下，iCRTs不会影响Wnt通路上游组分DKK1的表达，这表明iCRTs可能特异性靶向MM细胞中的β-cat。此外，icrt处理MM细胞，与BMSC共培养，显示出对VEGF和细胞迁移的抑制作用。 结论：本研究首次提供了对新描述的iCRTs作为多发性骨髓瘤潜在Wnt-β-cat/VEGF通路拮抗剂的体外数据评估。[2] |
| 酶活实验 |
酶联免疫吸附法（ELISA）检测VEGF [2]
MM细胞（U266）按照前面章节的描述进行培养。本研究中使用的原代骨髓间充质干细胞是从患者身上获得的，并在Iscove改良的Dulbecco培养基中培养，培养基中含有20% FBS、2mm l -谷氨酰胺和5mg/ml青霉素/链霉素。从U266细胞中收集细胞培养基，与粘附的BMSCs（生长在6个孔板中）共培养，用iCRT-5处理，用于VEGF分析。ELISA检测采用Human VEGF Quantikine ELISA试剂盒，按照制造商的方案进行。这些检测采用定量夹心酶免疫分析技术。所得颜色在450nm处用酶联免疫吸附测定试剂盒Max-M2-读取。样品中VEGF的浓度通过插值由制造商提供的标准曲线来确定。实验一式三次，至少重复两次。 RNA分离与实时荧光定量PCR[2] 用Trizol试剂从iCRT-5（15µM）处理的MM细胞中提取总RNA，如前所述（20,）。一个两步rt - pcr进行总RNA(5µg)提取U266 BMSC处理50µMiCRT-5用于初始变性2分钟在95°C,继续放大一个扩展在72°C, 7分钟33周期使用VEGF gene-specific引物序列上5 'atttacaacgtctgc gcatctt 3“低,5 'ctcgccttgctgctctacctc3”的放大glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶(GAPDH),上部5 ' ggatgaccttgcccacagcct 3 '低,5 ‘ ’捕获ccccctctgctga ‘ ’作为内部控制（IDT）。实时定量PCR用智能循环器进行三次，使用SYBR-Green混合物，如我们之前所述。将结果归一化为GAPDH扩增，并根据2ΔΔCt确定折叠变化。 |
| 细胞实验 |
细胞增殖分析[2]< >
将活跃生长的细胞以5×105 /孔的密度在含有5-50µM iCRT-3或iCRT-5的100µl培养基中接种于96孔板中，一式三次，并用1% DMSO处理的细胞作为对照。处理48h后，使用MTS试剂盒进行细胞增殖分析。在490nm处使用96孔板读取吸光度。用GSK3β抑制剂LiCl（20µM）预处理细胞，作为Wnt激活的对照。与DMSO处理的细胞相比，通过490 nm处光密度的平均相对减少或增加来计算细胞生长；根据三次重复实验的平均值计算细胞增殖抑制率。
跨界迁移试验[2] 使用孔径为8µM的24孔BD FluoroBlok Transwell Inserts评估MM细胞的迁移率。简单地说，用icrt -3和iCRT-5（15µM）预处理的MM细胞（50,000个），用含有0.25%血清的RPMI培养基（200µl）播种到插入物中。底部井含有含有10% FBS的RPMI。孵育48 h后，在底孔中填入500µl按厂家说明配制的钙黄蛋白荧光染料。钙黄蛋白AM具有较低的细胞毒性，是最适合用于活细胞染色的指示剂。利用Max-M2-平板阅读器测量迁移细胞在540nm处发出的荧光强度。实验重复了三次。 Western blot分析[2] 未加或加iCRT-5（15µM）处理48h的MM细胞总蛋白裂解液（30µg/lane）在含有前面描述的蛋白酶抑制剂鸡尾酒的RIPA缓冲液（50 MM Tris, pH 7.4, 150 MM NaCl, 1 MM EDTA, 1% Triton X-100, 1%脱氧胆酸钠和0.1% SDS）中制备。使用抗β-catenin和DKK1的抗体，采用标准SDS-PAGE（12%）进行免疫印迹。此外，HEK 293细胞的蛋白样本被用来证实β-cat在非骨髓瘤细胞中的作用。使用增强型ECL化学发光检测试剂盒开发β-cat的反应蛋白条带。所有的印迹都被剥离，用α-微管蛋白重新探针，使蛋白负载正常化。每个实验使用同一组样品重复三次。用密度分析定量反应蛋白条带，用α-微管蛋白归一化计算折叠变化。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
许多肿瘤的特征是β-catenin的突变诱导性组成型激活，从而促进肿瘤生长和存活。因此，开发用于肿瘤治疗的特异性β-catenin抑制剂已成为药物研发的重点。β-catenin也被证实有助于未受刺激的树突状细胞（DC）发挥免疫耐受促进功能。激活后，DC获得强大的T细胞刺激能力，并诱导强烈的肿瘤抗原特异性免疫应答。本研究探讨了临床前已建立的β-catenin抑制剂（CCT-031374、iCRT-5和PNU-75654）对小鼠骨髓来源（BM）DC的影响。这三种抑制剂均能适度增加未受刺激DC表面MHCII、CD80和CD86的表达，但对其刺激卵清蛋白（OVA）特异性CD4+ T细胞增殖的能力没有增强作用。 CCT-031374干扰了LPS刺激的DC细胞中共刺激分子（CD40、CD86）和细胞因子（IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10、IL-12）的上调。因此，该DC细胞群的CD4+ T细胞刺激活性受损。iCRT-5和PNU-75654对刺激的DC细胞的免疫表型没有不利影响。因此，在刺激过程中用iCRT-5处理的DC细胞与对照组DC细胞一样，表现出相当强的T细胞增殖能力。相反，尽管PNU-75654增强了OVA的摄取和加工，但在PNU-75654存在下刺激的DC细胞诱导的T细胞增殖能力却低于对照组。我们的研究结果表明，β-catenin抑制剂对刺激的DC细胞的不同影响反映了脱靶效应。关于β-catenin抑制剂在肿瘤治疗中的潜在应用，iCRT-5可能最具优势，因为它对受刺激的树突状细胞（DC）没有产生有害影响。[1]
背景：多发性骨髓瘤的发生发展依赖于骨髓（BM）微环境，骨髓中会分泌多种因子，包括Wnt配体。骨髓基质细胞（BMSC）分泌的Wnt配体可激活多发性骨髓瘤中的Wnt信号通路。经典的Wnt通路由转录效应因子β-catenin（β-cat）介导，在多种癌症中普遍存在失调。具有活跃的β-cat调控转录（CRT）的细胞可免于凋亡；相反，抑制CRT可能阻止细胞增殖。材料与方法：本研究测试了近期报道的CRT抑制剂（iCRTs；恶唑类和噻唑类）对MM细胞系MM.1、U266、骨髓间充质干细胞（BMSC）以及从患者样本（n=16）中分离的原代骨髓单核细胞（BMMC）中Wnt-β-cat信号通路的选择性拮抗作用。结果：我们证实，所使用的iCRTs能够阻断Wnt/β-cat报告基因活性，下调β-cat表达，并以剂量依赖的方式抑制细胞增殖，最佳剂量接近15 μM。我们的数据进一步表明，在最佳剂量下，iCRTs不影响Wnt通路上游组分DKK1的表达，提示iCRTs可能特异性靶向MM细胞中的β-cat。此外，iCRT处理与BMSC共培养的MM细胞后，显示出对血管内皮生长因子（VEGF）和细胞迁移的抑制作用。结论：本研究首次提供了新发现的 iCRT 作为多发性骨髓瘤中潜在的 Wnt-β-cat/VEGF 通路拮抗剂的体外数据评估。[2] |
| 分子式 |
C16H17NO5S2
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|---|---|
| 分子量 |
367.43
|
| 精确质量 |
367.055
|
| 元素分析 |
C, 52.30; H, 4.66; N, 3.81; O, 21.77; S, 17.45
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| CAS号 |
18623-44-4
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| PubChem CID |
1416325
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
2.707
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| tPSA |
133.46
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
24
|
| 分子复杂度/Complexity |
537
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
COC1=C(C=C(C=C1)/C=C\2/C(=O)N(C(=S)S2)CCCC(=O)O)OC
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| InChi Key |
IJWKSBPTJQMUHJ-LCYFTJDESA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C16H17NO5S2/c1-21-11-6-5-10(8-12(11)22-2)9-13-15(20)17(16(23)24-13)7-3-4-14(18)19/h5-6,8-9H,3-4,7H2,1-2H3,(H,18,19)/b13-9-
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| 化学名 |
4-[(5Z)-5-[(3,4-dimethoxyphenyl)methylidene]-4-oxo-2-sulfanylidene-1,3-thiazolidin-3-yl]butanoic acid
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| 别名 |
iCRT 5; iCRT-5; iCRT5; 18623-44-4; iCRT-5; 4-[5-(3,4-Dimethoxy-benzylidene)-4-oxo-2-thioxo-thiazolidin-3-yl]-butyric acid; 4-(5-(3,4-Dimethoxybenzylidene)-4-oxo-2-thioxothiazolidin-3-yl)butanoic acid; 4-[(5Z)-5-[(3,4-dimethoxyphenyl)methylidene]-4-oxo-2-sulfanylidene-1,3-thiazolidin-3-yl]butanoic acid; (Z)-4-(5-(3,4-dimethoxybenzylidene)-4-oxo-2-thioxothiazolidin-3-yl)butanoic acid; CRT Inhibitor iCRT5; iCRT5
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~36 mg/mL (~97.98 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7216 mL | 13.6080 mL | 27.2161 mL | |
| 5 mM | 0.5443 mL | 2.7216 mL | 5.4432 mL | |
| 10 mM | 0.2722 mL | 1.3608 mL | 2.7216 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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