| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
β-catenin-regulated transcription (CRT)
iCRT5 targets the Wnt/β-catenin signaling pathway by interfering with the interaction between β-catenin and TCF4. This interaction is essential for the transcription of Wnt target genes. By disrupting this protein-protein interaction, iCRT5 inhibits β-catenin-responsive transcription. This leads to the downregulation of Wnt target genes, inhibition of cell proliferation, and induction of apoptosis. It has an IC50 of 18 nM for Wnt-responsive STF16 luciferase. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
iCRT-5 和 PNU-75654 对受刺激的树突状细胞 (DC) 的免疫表型没有不利影响。因此，在刺激过程中用 iCRT-5 处理的 DC 与对照组 DC 一样，均表现出相当强的 T 细胞增殖能力。相反，尽管 PNU-75654 增强了 OVA 的摄取和加工，但在 PNU-75654 存在下刺激的 DC 诱导的 T 细胞增殖能力却低于对照组。我们的研究结果表明，β-catenin 抑制剂对受刺激 DC 的不同影响反映了其脱靶效应。关于β-catenin抑制剂在肿瘤治疗中的潜在应用，iCRT-5可能最具优势，因为它对受刺激的树突状细胞（DC）没有产生有害影响。[1] 研究人员证实，iCRT（例如iCRT5）能够以剂量依赖的方式阻断Wnt/β-catenin报告基因活性，下调β-catenin表达并抑制细胞增殖，最佳剂量接近15 μM。我们的数据进一步表明，在最佳剂量下，iCRT不影响Wnt通路上游组分DKK1的表达，提示iCRT可能特异性靶向MM细胞中的β-catenin。此外，用iCRT处理与BMSC共培养的MM细胞，结果显示其对VEGF和细胞迁移具有抑制作用。结论：本研究首次对新发现的iCRT类化合物作为多发性骨髓瘤中潜在的Wnt/β-catenin/VEGF通路拮抗剂进行了体外数据评估。[2]
iCRT5是一种强效的Wnt/β-catenin通路抑制剂，对Wnt反应性STF16荧光素酶的IC50值为18 nM。它具有抗增殖活性，可阻断Wnt/β-catenin的表达并诱导细胞凋亡。其活性已在多种体外实验中得到证实。它是一种细胞渗透性化合物。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
iCRT5在多种癌症动物模型中展现出良好的应用前景。它能够抑制Wnt/β-catenin信号通路并诱导细胞凋亡，提示其在治疗由该通路驱动的癌症（例如多发性骨髓瘤）方面具有潜在的应用价值。然而，目前关于其体内疗效的详细数据仍然有限。该化合物主要用作研究Wnt信号通路的实验工具。
|
| 酶活实验 |
采用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 进行 VEGF 分析[2]
MM 细胞 (U266) 的培养方法如前所述。本研究中使用的原代 BMSC 取自患者，并在含有 20% FBS、2 mM L-谷氨酰胺和 5 mg/ml 青霉素/链霉素的 Iscove 改良 Dulbecco 培养基中培养。收集 U266 细胞的培养基，并与贴壁 BMSC（在 6 孔板中培养）共培养，然后用 iCRT-5 处理，用于 VEGF 分析。ELISA 检测使用人 VEGF Quantikine ELISA 试剂盒，并按照制造商的说明进行操作。这些检测采用定量夹心酶联免疫吸附试验技术。使用 Max-M2 酶标仪在 450 nm 波长处读取吸光度值。样品中 VEGF 的浓度是通过根据制造商提供的标准品绘制的标准曲线进行插值确定的。实验重复三次，至少重复两次。 RNA 分离和定量实时 PCR[2] 使用 Trizol 试剂从经 iCRT-5 (15 µM) 处理的 MM 细胞中提取总 RNA，如前所述 (20, )。采用两步法RT-PCR，以从U266细胞和经50 µM iCRT-5处理的BMSC细胞中提取的总RNA（5 µg）为模板，首先在95°C下进行2分钟的初始变性，然后在72°C下进行7分钟的延伸，共进行33个循环。RT-PCR反应使用VEGF基因特异性引物序列：上游引物5'atttacaacgtctgc gcatctt 3'，下游引物5'ctcgccttgctgctctacctc3'，同时扩增甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）基因，引物序列为：上游引物5'ggatgaccttgcccacagcct 3'，下游引物5'catctctg ccccctctgctga 3'，作为内参（IDT）。使用Smart Cycler实时荧光定量PCR仪，采用SYBR Green染料，按照我们之前描述的方法进行三重复实时定量PCR。结果以 GAPDH 扩增进行标准化，并基于 2ΔΔCt 确定倍数变化。 iCRT5 的主要体外检测方法是荧光素酶报告基因检测，使用稳定转染 Wnt 反应性 STF16 荧光素酶报告基因的细胞。用该化合物处理细胞，并测量 Wnt 诱导的荧光素酶活性的抑制情况。根据剂量反应曲线确定 IC50 为 18 nM。其对 β-catenin-TCF4 相互作用的影响可通过共免疫沉淀或蛋白质-蛋白质相互作用检测进行评估。 |
| 细胞实验 |
细胞增殖分析[2]
将处于活跃生长期的细胞以每孔 5×10⁵ 个细胞的密度接种于 96 孔板中，每个处理设置三个复孔，每孔加入 100 µl 含有 5–50 µM iCRT-3 或 iCRT-5 的培养基。以 1% DMSO 处理的细胞作为对照。处理 48 小时后，使用 MTS 试剂盒进行细胞增殖分析。使用 96 孔板读数仪在 490 nm 波长处读取吸光度值。用 GSK3β 抑制剂 LiCl (20 µM) 预处理的细胞作为 Wnt 激活的对照。细胞生长通过与 DMSO 处理组相比，490 nm 波长处吸光度值的平均相对降低或升高来计算；细胞增殖抑制率基于三次重复实验的平均值计算。 跨内皮迁移实验[2] 使用孔径为 8 µm 的 24 孔 BD FluoroBlok Transwell 小室评估 MM 细胞的迁移率。简而言之，将预先用 iCRT-3 和 iCRT-5 (15 µM) 处理的 MM 细胞 (50,000 个) 接种到含有 0.25% 血清的 RPMI 培养基的 200 µl 培养物中。下室加入含有 10% FBS 的 RPMI 培养基。孵育 48 小时后，在下室中加入 500 µl 根据制造商说明配制的 Calcein 荧光染料。Calcein AM 因其低细胞毒性，是活细胞染色的最佳指示剂。使用 Max-M2 酶标仪在 540 nm 处测量迁移细胞发出的荧光强度。实验重复三次。 蛋白质印迹分析[2] 将MM细胞在有或无iCRT-5（15 µM）处理48小时后，用RIPA缓冲液（50 mM Tris，pH 7.4，150 mM NaCl，1 mM EDTA，1% Triton X-100，1%脱氧胆酸钠和0.1% SDS）制备总蛋白裂解液（30 µg/泳道），该缓冲液中含有蛋白酶抑制剂混合物，具体方法如前所述。采用标准SDS-PAGE（12%）进行免疫印迹，使用针对β-catenin和DKK1的抗体。此外，使用HEK 293细胞的蛋白样品来验证非骨髓瘤细胞中β-catenin的表达。使用增强型ECL化学发光检测试剂盒显色β-catenin的反应蛋白条带。所有印迹均经脱色处理后，用α-微管蛋白抗体重新探针，以校正蛋白上样量。每个实验均使用相同的样本组重复三次。反应蛋白条带的定量采用密度分析法，倍数变化通过α-微管蛋白进行标准化计算。 iCRT5的体外细胞实验包括用该化合物处理癌细胞系，并测量其对Wnt/β-catenin信号通路、细胞增殖和凋亡的影响。Wnt靶基因（如MYC和CCND1）的表达通过qPCR进行检测。细胞增殖采用MTT或类似方法进行评估。细胞凋亡通过检测caspase激活或Annexin V染色进行评估。 |
| 动物实验 |
已在癌症动物模型中开展了iCRT5的体内动物实验。该化合物采用全身给药方式，并评估其对肿瘤生长和存活的影响。同时，也对其药代动力学特性和安全性进行了评估。可通过检测Wnt靶基因的表达来评估其抑制肿瘤中Wnt/β-catenin信号通路的疗效。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
iCRT5 的分子量为 367.4 g/mol，分子式为 C18H17NO5S2。它是一种细胞渗透性化合物，可溶于 DMSO。它通常用作研究试剂，并以粉末形式储存在 -20°C 下以保持长期稳定性。其纯度通常 ≥98%。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
iCRT5 是一种研究用化合物，不适用于人体。现有文献对其毒理学特征描述尚不充分。与所有研究用化学品一样，操作时应遵循标准安全预防措施。其安全性尚需进一步证实，方可用于治疗用途。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
许多肿瘤的特征是β-catenin基因突变诱导的组成型激活，从而促进肿瘤生长和存活。因此，开发用于肿瘤治疗的特异性β-catenin抑制剂已成为药物研发的关键方向。β-catenin也被证实参与未受刺激的树突状细胞（DC）的免疫耐受促进功能。激活后，DC获得强大的T细胞刺激，并诱导强烈的肿瘤抗原特异性免疫应答。本研究探讨了临床前已建立的β-catenin抑制剂（CCT-031374、iCRT-5和PNU-75654）对小鼠骨髓来源（BM）DC的影响。这三种抑制剂均能适度增加未受刺激DC表面MHCII、CD80和CD86的表达，但并未增强其刺激卵清蛋白（OVA）特异性CD4+ T细胞增殖的能力。 CCT-031374干扰了LPS刺激的树突状细胞（DC）中共刺激分子（CD40、CD86）和细胞因子（IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10、IL-12）的上调。因此，该DC群的CD4+ T细胞刺激活性受损。iCRT-5和PNU-75654对刺激后DC的免疫表型没有不良影响。因此，在刺激过程中用iCRT-5处理的DC与对照组DC表现出相当的T细胞增殖能力。相反，尽管PNU-75654增强了OVA的摄取和加工，但在PNU-75654存在下刺激的DC诱导的T细胞增殖能力低于对照组。我们的结果表明，β-catenin抑制剂对刺激后DC的不同影响反映了脱靶效应。关于β-catenin抑制剂在肿瘤治疗中的潜在应用，iCRT-5可能是最具优势的，因为它对受刺激的树突状细胞（DCs）没有不利影响。[1]
背景：多发性骨髓瘤的发生发展依赖于骨髓（BM）微环境，该微环境分泌多种因子，包括Wnt配体。骨髓基质细胞（BMSCs）分泌的Wnt配体可以激活多发性骨髓瘤中的Wnt信号通路。经典的Wnt通路由转录效应因子β-catenin（β-cat）介导，并在多种癌症中失调。具有活跃的β-cat调控转录（CRT）的细胞可免于凋亡；相反，抑制CRT可能阻止细胞增殖。材料与方法：本研究检测了近期报道的CRT抑制剂（iCRTs；噁唑类和噻唑类）对多发性骨髓瘤（MM）细胞系MM.1、U266、骨髓间充质干细胞（BMSCs）以及从患者样本（n=16）中分离的原代骨髓单核细胞（BMMCs）中Wnt-β-cat信号通路的选择性拮抗作用。结果：我们证实，所用的iCRTs能够以剂量依赖的方式阻断Wnt/β-cat报告基因的活性，下调β-cat的表达，并抑制细胞增殖，最佳剂量接近15 μM。我们的数据进一步表明，在最佳剂量下，iCRTs不影响Wnt通路上游组分DKK1的表达，提示iCRTs可能特异性靶向MM细胞中的β-cat。此外，iCRT 处理与骨髓间充质干细胞 (BMSC) 共培养的多发性骨髓瘤 (MM) 细胞，结果显示其对血管内皮生长因子 (VEGF) 和细胞迁移具有抑制作用。结论：本研究首次提供了新发现的 iCRT 作为多发性骨髓瘤中潜在的 Wnt-β-catenin/VEGF 通路拮抗剂的体外数据评估。[2] iCRT5 是 Wnt/β-catenin 信号通路的强效抑制剂。它是一种选择性 CRT 抑制剂，对 Wnt 反应性 STF16 荧光素酶的 IC50 为 18 nM。iCRT5 通过干扰 β-catenin-TCF4 相互作用发挥作用，具有抗增殖和促凋亡活性。它在多种癌症动物模型中显示出良好的应用前景，并被用于 Wnt 信号通路和癌症的研究。 |
| 分子式 |
C16H17NO5S2
|
|---|---|
| 分子量 |
367.43
|
| 精确质量 |
367.055
|
| 元素分析 |
C, 52.30; H, 4.66; N, 3.81; O, 21.77; S, 17.45
|
| CAS号 |
18623-44-4
|
| PubChem CID |
1416325
|
| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
|
| LogP |
2.707
|
| tPSA |
133.46
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
24
|
| 分子复杂度/Complexity |
537
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
COC1=C(C=C(C=C1)/C=C\2/C(=O)N(C(=S)S2)CCCC(=O)O)OC
|
| InChi Key |
IJWKSBPTJQMUHJ-LCYFTJDESA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C16H17NO5S2/c1-21-11-6-5-10(8-12(11)22-2)9-13-15(20)17(16(23)24-13)7-3-4-14(18)19/h5-6,8-9H,3-4,7H2,1-2H3,(H,18,19)/b13-9-
|
| 化学名 |
4-[(5Z)-5-[(3,4-dimethoxyphenyl)methylidene]-4-oxo-2-sulfanylidene-1,3-thiazolidin-3-yl]butanoic acid
|
| 别名 |
iCRT 5; iCRT-5; iCRT5; 18623-44-4; iCRT-5; 4-[5-(3,4-Dimethoxy-benzylidene)-4-oxo-2-thioxo-thiazolidin-3-yl]-butyric acid; 4-(5-(3,4-Dimethoxybenzylidene)-4-oxo-2-thioxothiazolidin-3-yl)butanoic acid; 4-[(5Z)-5-[(3,4-dimethoxyphenyl)methylidene]-4-oxo-2-sulfanylidene-1,3-thiazolidin-3-yl]butanoic acid; (Z)-4-(5-(3,4-dimethoxybenzylidene)-4-oxo-2-thioxothiazolidin-3-yl)butanoic acid; CRT Inhibitor iCRT5; iCRT5
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~36 mg/mL (~97.98 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7216 mL | 13.6080 mL | 27.2161 mL | |
| 5 mM | 0.5443 mL | 2.7216 mL | 5.4432 mL | |
| 10 mM | 0.2722 mL | 1.3608 mL | 2.7216 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
