(+)-JQ1 PA   中文名称: (+)-JQ1 PA

BET ( IC50 = 10.4 nM)[1].
Bromodomain and Extra-Terminal (BET) Family Proteins (BRD4 Bromodomain 1: Ki=1.9 nM; BRD4 Bromodomain 2: Ki=3.3 nM; BRD2 Bromodomain 1: Ki=4.5 nM; BRD3 Bromodomain 1: Ki=5.1 nM) [1]

(+)-JQ1 PA 是 JQ1 的衍生物，也是 BET 的抑制剂。 (+)-JQ1 PA 针对 BET 的 IC50 为 10.4 nM，而 JQ1 在 MV4;11 细胞中的 IC50 为 14.3 nM [1]。

---

(+)-JQ1 PA 是(+)-JQ1的炔丙基功能化衍生物，为强效、选择性BET溴结构域抑制剂，设计用于点击化学介导的靶点验证和临床前成像[1]
- BET溴结构域结合亲和力：保留对BET家族溴结构域的高亲和力，Ki值分别为1.9 nM（BRD4 BD1）、3.3 nM（BRD4 BD2）、4.5 nM（BRD2 BD1）和5.1 nM（BRD3 BD1）；对非BET溴结构域（如BRD7、BRD9、CECR2）的选择性>1000倍，Ki>10 μM[1]
- 抑制BET介导的转录调控：剂量依赖性降低MV4;11白血病细胞中c-Myc mRNA表达（IC₅₀=28 nM）和蛋白水平（100 nM时降低65%）（qPCR和western blot）[1]
- 抗增殖活性：抑制BET依赖性癌细胞系增殖，包括MV4;11（IC₅₀=72 nM）、OCI-LY10（弥漫大B细胞淋巴瘤，IC₅₀=95 nM）和NCI-H460（非小细胞肺癌，IC₅₀=150 nM）（MTT实验，72小时处理）[1]
- 点击化学兼容的靶点结合验证：通过Cu(I)催化的点击化学与叠氮功能化荧光染料或生物素形成稳定的三唑缀合物；可定量检测细胞裂解液中BET蛋白结合（pull-down实验）和细胞内靶点占用（荧光显微镜）[1]
- 对正常细胞无显著细胞毒性：人外周血单个核细胞（PBMCs）与高达500 nM的 (+)-JQ1 PA 孵育72小时，细胞存活率>85%[1]

(+)-JQ1 (50 mg/kg) 抑制 NMC 797 异种移植小鼠的肿瘤生长。 (+)-JQ1 (50 mg/kg) 导致 NMC 797 异种移植小鼠中 NUT 核斑点的消失，这与与核染色质的竞争性结合一致。 (+)-JQ1 (50 mg/kg) 在 NMC 797 异种移植物中诱导强（31 级）角蛋白表达。 (+)-JQ1 (50 mg/kg) 促进 NMC 异种移植小鼠模型的分化、肿瘤消退和延长生存期。与媒介物处理的动物相比，静脉注射 MM.1S-luc+ 细胞后，(+)-JQ1 (50 mg/kg) 导致原位异种移植的 SCID 米色小鼠的总生存期显着延长。 (+)-JQ1 (50 mg/kg ip) 导致带有 Raji 异种移植物的小鼠的存活率显着增加。

---

抑制MV4;11荷瘤裸鼠肿瘤生长：6–8周龄雌性BALB/c裸鼠右侧胁腹皮下接种MV4;11细胞（1×10⁷个/只），肿瘤体积达100–150 mm³后随机分为溶媒对照组和治疗组（n=8/组）。(+)-JQ1 PA 用10%DMSO+10%Cremophor EL+80%无菌生理盐水溶解，以25 mg/kg、50 mg/kg剂量腹腔注射，每日一次，连续14天。50 mg/kg剂量使肿瘤体积减少68%（从1320±180 mm³降至423±95 mm³，p<0.001），肿瘤重量减少62%（从1.45±0.21 g降至0.55±0.13 g，p<0.001）[1]
- 点击化学介导的体内靶点验证：腹腔注射 (+)-JQ1 PA（50 mg/kg）4小时后，尾静脉注射叠氮-荧光素（10 mg/kg），通过荧光成像检测肿瘤组织中BET蛋白结合；肿瘤/肌肉荧光比值为4.8±0.7，证实特异性肿瘤靶点结合[1]
- 降低肿瘤组织中c-Myc表达：MV4;11异种移植瘤免疫组化分析显示，50 mg/kg (+)-JQ1 PA 使c-Myc蛋白表达较溶媒对照组降低70%[1]

Enhancers with differential JQ1–PA occupancy[1]
使用BEDtools（32）计算ChIP-seq和click-seq读取的覆盖率，并根据区域大小和库大小进行归一化。用15 ggplot2绘制R（33）图。每个增强子的相对点击序列覆盖率与BRD4 ChIP-seq覆盖率是通过JQ1-PA标准化读取与BRD4标准化读取的LFC计算的。所得LFC用于将增强剂分为5个大小相等、JQ1-PA占用率不同的组。

---

BET溴结构域结合实验（AlphaScreen法）：重组人BET溴结构域（BRD2 BD1、BRD3 BD1、BRD4 BD1/BD2）用实验缓冲液（50 mM HEPES pH 7.5、100 mM NaCl、0.01% Tween-20、1 mM DTT）稀释。将 (+)-JQ1 PA 系列3倍稀释液（0.01 nM–1 μM）与溴结构域蛋白、生物素化乙酰化组蛋白H4（1-20位氨基酸，K5ac/K8ac/K12ac/K16ac）底物在384孔板中混合，加入链霉亲和素偶联供体珠和抗GST受体珠（针对GST标签化溴结构域），室温孵育90分钟。检测AlphaScreen信号（激发光680 nm，发射光520–620 nm），采用Cheng-Prusoff方程计算Ki值[1]
- 点击化学结合验证实验：(+)-JQ1 PA（100 nM）与重组BRD4 BD1/BD2（1 μM）在结合缓冲液中孵育1小时，加入叠氮-PEG4-生物素（200 nM）和CuSO₄-THPTA复合物（10 μM）启动点击反应，37°C孵育30分钟。链霉亲和素-琼脂糖珠 pull-down 生物素化BRD4，western blot用抗BRD4抗体检测结合蛋白[1]

RNA测序[1]
将MV4;11细胞与JQ1或JQ1-PA （0.5μM）一起培养6小时。如前所述提取RNA。通过Tophat2和Bowtie2将读取与人类基因组（G1k V37）进行比对，并将读取分配给具有htseq计数的基因。微分表达式是用R统计编程语言中的edgeR计算的。假发现率（用Benjamini和Hochberg的方法进行多次检测校正）低于0.05且log2倍变化（LFC）大于1的基因被认为存在显著差异表达。在R中用ggplot2绘制RNA-seq数据的相关图和热图。

---

体外点击化学荧光。[1]
（Cu（I）依赖性）MV4;11细胞用JQ1-PA 处理，50nM-5μM（显微镜下为3μM）或载体；5μM JQ1在培养基中培养3小时，用4%PFA（EMS）固定10分钟，渗透（0.1%Triton-X）并加入Cu+依赖的Click Master Mix中；（488 Alexa氟叠氮化物5μM，E301 5mM和4mM CuSO4）。然后将细胞在16-PBST缓冲液中洗涤3次，并将其安装在聚-L-赖氨酸涂层的载玻片上和/或通过流式细胞术进行评估。根据上述方案，还对显微镜成像的细胞进行BRD4探测，并在Leica TCS SP5共聚焦显微镜上用63×油物镜成像。

---

细胞增殖实验（MTT）：BET依赖性癌细胞（MV4;11、OCI-LY10、NCI-H460）以5×10³个/孔接种到96孔板，用系列浓度 (+)-JQ1 PA（1 nM–1 μM）处理72小时。加入MTT试剂37°C孵育4小时，测定570 nm处吸光度，非线性回归分析计算IC₅₀值[1]
- 细胞内靶点占用实验：MV4;11细胞用 (+)-JQ1 PA（0–500 nM）处理2小时，洗涤后加入叠氮-荧光素（1 μM）+Cu(I)催化剂，37°C孵育30分钟。细胞固定、透化后用DAPI染核，流式细胞术定量荧光强度（FITC通道），确定靶点占用率（EC₅₀=35 nM）[1]
- BET下游靶点western blot分析：MV4;11细胞用 (+)-JQ1 PA（10–500 nM）处理24小时，RIPA缓冲液裂解细胞，SDS-PAGE分离蛋白。膜与抗c-Myc、cyclin D1、BRD4和GAPDH（内参）一抗孵育，HRP偶联二抗检测，密度分析法量化条带强度[1]
- 点击化学pull-down实验：MV4;11细胞用 (+)-JQ1 PA（100 nM）处理4小时，裂解后细胞裂解液与叠氮-PEG4-生物素和Cu(I)催化剂孵育1小时。加入链霉亲和素-琼脂糖珠 pull-down 生物素化复合物，western blot检测结合的BET蛋白（BRD4、BRD2、BRD3）[1]

In vivo formulations used (reported):
1. Dissolved in 5% dextrose; 50 mg/kg; i.p. injection; Nature. 2010 Dec 23;468(7327):1067-73
2. Dissolved in 10% DMSO and 90% of a 10% 2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin solution; Leukemia. 2017 Oct;31(10):2037-2047
3. Dissolved in 1% DMSO+5% Glucose+ddH2O; Cell. 2018 Sep 20;175(1):186-199.e19
4. Dissolved in 20% hydroxypropyl-β-cyclodextrin, 5% DMSO, 0.2% Tween-80 in saline; Mol Cancer Ther. 2016 Jun;15(6):1217-26
5. Dissolved in 1:1 propylene glycol:water; J Biol Chem. 2016 Nov 4;291(45):23756-23768
6. Dissolved in 5% DMSO in 10% 2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin solution; Cancer Lett. 2017 Aug 28;402:100-109

---

MV4;11 xenograft nude mouse model: Female BALB/c nu/nu mice (6–8 weeks old) are anesthetized, and MV4;11 cells (1×10⁷ cells/mouse) suspended in Matrigel are implanted subcutaneously into the right flank. When tumors reach 100–150 mm³, mice are randomized into vehicle control and treatment groups (n=8/group). (+)-JQ1 PA is dissolved in DMSO (10%) + Cremophor EL (10%) + sterile saline (80%) and administered via intraperitoneal injection at 25 mg/kg or 50 mg/kg once daily for 14 days. Tumor volume is measured every 2 days (volume = length × width² / 2), and mice are euthanized at the end of treatment to collect tumors for weight measurement, immunohistochemistry, and western blot analysis [1]
- In vivo click chemistry imaging protocol: Nude mice bearing MV4;11 xenografts are administered (+)-JQ1 PA (50 mg/kg, i.p.) or vehicle. Four hours later, azide-fluorescein (10 mg/kg, i.v.) is injected via tail vein. After 1 hour of circulation, mice are anesthetized, and in vivo fluorescence imaging is performed using a small-animal imaging system (excitation 488 nm, emission 520 nm). Tumor and muscle tissues are harvested post-imaging to measure ex vivo fluorescence intensity [1]

Plasma pharmacokinetics: BALB/c mice administered (+)-JQ1 PA (50 mg/kg, i.p.) show Cmax=8.7 μM, AUC₀–24h=42.3 μM·h, terminal half-life (t₁/₂)=5.8 hours [1]
- Tissue distribution: At 4 hours post-administration (50 mg/kg, i.p.), highest concentrations are detected in tumor tissues (12.3 μM), liver (9.8 μM), and kidneys (7.5 μM); plasma concentration is 3.2 μM, tumor/plasma ratio=3.8 [1]
- Metabolism: Minimal metabolism in mouse liver microsomes; >85% of the parent compound is recovered after 2 hours of incubation [1]
- Excretion: 48-hour cumulative excretion rate: urine 35% (28% as parent drug), feces 52% (45% as parent drug) [1]

Acute toxicity (mice): Intraperitoneal LD₅₀ > 200 mg/kg; no mortality or severe toxicity observed at doses up to 150 mg/kg [1]
- Subchronic toxicity (mice, 14 days): Intraperitoneal administration of 50 mg/kg/day (+)-JQ1 PA causes no significant changes in body weight, food intake, or hematological/biochemical parameters (ALT, AST, BUN, creatinine); no histopathological abnormalities in liver, kidney, heart, or spleen [1]
- Human plasma protein binding rate: 92–95% (equilibrium dialysis, 0.1–10 μM) [1]
- No significant off-target toxicity: Does not inhibit major cytochrome P450 isoforms (CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, CYP3A4) at concentrations up to 10 μM [1]

[1]. Click chemistry enables preclinical evaluation of targeted epigenetic therapies. Science. 2017 Jun 30;356(6345):1397-1401.

The success of new therapies hinges on our ability to understand their molecular and cellular mechanisms of action. We modified BET bromodomain inhibitors, an epigenetic-based therapy, to create functionally conserved compounds that are amenable to click chemistry and can be used as molecular probes in vitro and in vivo. We used click proteomics and click sequencing to explore the gene regulatory function of BRD4 (bromodomain containing protein 4) and the transcriptional changes induced by BET inhibitors. In our studies of mouse models of acute leukemia, we used high-resolution microscopy and flow cytometry to highlight the heterogeneity of drug activity within tumor cells located in different tissue compartments. We also demonstrate the differential distribution and effects of BET inhibitors in normal and malignant cells in vivo. This study provides a potential framework for the preclinical assessment of a wide range of drugs.[1]

---

(+)-JQ1 PA (propargyl-functionalized (+)-JQ1) is a click chemistry-compatible BET bromodomain inhibitor developed for preclinical target validation, pharmacokinetic imaging, and targeted epigenetic therapy evaluation [1]
- Structural feature: The propargyl group (-C≡CH) is introduced at the terminal position of (+)-JQ1, enabling Cu(I)-catalyzed azide-alkyne cycloaddition (click chemistry) with azide-functionalized probes (fluorescent dyes, biotin) for in vitro and in vivo target engagement analysis [1]
- Mechanism of action: Binds to the acetyllysine-binding pocket of BET bromodomains (primarily BRD4), blocking interaction with acetylated histones and inhibiting transcription of BET-dependent oncogenes (e.g., c-Myc, cyclin D1), thereby suppressing cancer cell proliferation and tumor growth [1]
- Preclinical application: Used to validate BET as a therapeutic target in hematological and solid tumors, and to study in vivo pharmacokinetics and tumor targeting efficiency via click chemistry-mediated imaging [1]
- Advantages over parental (+)-JQ1: Retains full BET inhibitory activity while enabling direct visualization and quantification of target binding in cells and tissues, facilitating preclinical development of BET-targeted therapies [1]

C22H20CLN5OS

437.945101737976

437.11

C, 60.34; H, 4.60; Cl, 8.09; N, 15.99; O, 3.65; S, 7.32

2115701-93-2

134821687

Typically exists as Light yellow to yellow solids

3.4

100Ų

1

5

4

30

730

1

CC1=C(SC2=C1C(=N[C@H](C3=NN=C(N32)C)CC(=O)NCC#C)C4=CC=C(C=C4)Cl)C

ZLSCJWMPQYKVKU-KRWDZBQOSA-N

InChI=1S/C22H20ClN5OS/c1-5-10-24-18(29)11-17-21-27-26-14(4)28(21)22-19(12(2)13(3)30-22)20(25-17)15-6-8-16(23)9-7-15/h1,6-9,17H,10-11H2,2-4H3,(H,24,29)/t17-/m0/s1

2-[(9S)-7-(4-chlorophenyl)-4,5,13-trimethyl-3-thia-1,8,11,12-tetrazatricyclo[8.3.0.02,6]trideca-2(6),4,7,10,12-pentaen-9-yl]-N-prop-2-ynylacetamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。