| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
ADAM17:11.1 nM (IC50); ADAM10:748 nM (IC50); MMP2:717 nM (IC50); MMP13:930 nM (IC50); MMP14:2140 nM (IC50); MMP8:2200 nM (IC50); MMP9:5410 nM (IC50); MMP17:7100 nM (IC50); MMP3:9760 nM (IC50)
ADAM17 (IC50: 11.1 nM). ADAM10 (IC50: 748 nM). MMP1 (IC50: >100,000 nM). MMP2 (IC50: 717 nM). MMP3 (IC50: 9,760 nM). MMP8 (IC50: 2,200 nM). MMP9 (IC50: 5,410 nM). MMP13 (IC50: 930 nM). MMP14 (IC50: 2,140 nM). MMP17 (IC50: 7,100 nM). [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
KP-457 是一种选择性金属蛋白酶 17 (ADAM17) 抑制剂，对 ADAM17 的选择性高于其他 MMP 和 ADAM10，IC50 分别为 11.1 nM (ADAM17)、748 nM (ADAM10)、717 nM (MMP2)、9760 nM (MMP3) )、2200 nM (MMP8)、5410 nM (MMP9)、930 nM (MMP13)、2140 nM (MMP14) 和 7100 nM (MMP17)。 KP-457 阻断 ADAM17 催化结构域的 Zn2+ 螯合。 KP-457 (15 μM) 保留 iPSC 衍生血小板上的 GPIbα 表达[1]。
在无细胞酶活性实验中，KP-457 能有效抑制ADAM17催化切割基于TNF-α序列的底物，其IC50为11.1 nM，效力比广谱金属蛋白酶抑制剂GM-6001（IC50: 163 nM）强约10倍。KP-457 对ADAM17的选择性远高于其他MMP和ADAM10（与ADAM10和大多数MMP相比，选择性>50倍）。[1] 在使用洗涤人血小板的细胞实验中，KP-457 能剂量依赖性地抑制羰基氰化物间氯苯腙（CCCP，100 μM）诱导的血小板糖蛋白Iba（GPIba）脱落，其效力高于GM-6001。在15 μM浓度下，KP-457 完全阻断了GPIba的脱落，使GPIba水平维持在与新鲜血小板相当的程度，而p38 MAPK抑制剂SB203580和BIRB796仅提供部分抑制。[1] 在37°C下体外生成人诱导多能干细胞（iPSC）来源的血小板过程中，向培养基中添加KP-457（15 μM）能有效保护CD41a+血小板上的GPIba表达，且不显著影响巨核细胞（MK）的产量或血小板总数。相比之下，p38 MAPK抑制剂增加了MK和总血小板产量，但未能保护GPIba表达。KP-457 与p38 MAPK抑制剂BIRB796（10 μM）联合使用时，可累加性地增加GPIba+ iPSC来源血小板的产量。[1] KP-457（15 μM）对凝血酶或胶原蛋白诱导的人血小板聚集没有不利影响，而p38 MAPK抑制剂SB203580和BIRB796削弱了胶原蛋白诱导的血小板聚集。[1] 在存在KP-457 的条件下生成的iPSC来源血小板，在基于流式细胞术的实验中，对瑞斯托菌素诱导的血管性血友病因子（vWF）/GPIba依赖性聚集反应有所改善，其性能与来自外周血的新鲜人血小板相当。[1] 透射电子显微镜分析表明，用KP-457 生成的imMKCL（永生化巨核祖细胞系）来源血小板具有改善的结构特性。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在免疫缺陷小鼠输注血小板后的血栓形成模型中，KP-457 产生的诱导多能干细胞（iPSC）血小板发挥了良好的止血功能[1]。
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| 酶活实验 |
使用基于荧光的酶活性测定法来测量KP-457 和GM-6001对ADAM17的抑制作用。将重组人ADAM17酶与基于TNF-α切割位点的荧光底物肽（Nma-LAQAVRSSK(Dnp)-NH2）一起孵育。将不同浓度的抑制剂与酶进行预孵育。在规定的条件下进行酶促反应，并测量底物切割产生的荧光信号。根据剂量反应曲线计算半数抑制浓度（IC50）。[1]
此外，使用液相色谱-串联质谱法（LC/MS/MS）测定了KP-457 抑制ADAM17介导的GPIba底物肽切割的活性。该实验使用了合成的基于GPIba的底物肽（KKTIPELDQPPKLRGVLGGHLESSRNDPFLHPDF）、基于C端的标准肽（VLGGHLESSRNDPFLHPDF）和内标肽（VTTGKGQDHSPFWGF）。将含有ADAM17和底物的反应混合物与或不与抑制剂一起孵育。通过LC/MS/MS定量C端切割产物的形成，以确定抑制效力（IC50）。[1] |
| 细胞实验 |
简而言之，在存在 20 ng/mL 血管内皮生长因子的情况下，将来自 C3H10T1/2 饲养细胞上的 iPS 囊的 3 × 104 造血祖细胞 (HPC) 在培养第 14 天转移到分化培养基中的 C3H10T1/2 饲养细胞上在 24°C 或 37°C 下补充 50 ng/mL 干细胞因子、100 ng/mL 血小板生成素、25 U/mL 肝素钠和 KP-457。培养基每 3 天更新一次，并在第 22-24 天收集和分析非贴壁细胞[1]。
为评估在细胞环境中对GPIba脱落的抑制作用，制备洗涤的人血小板并悬浮于Tyrode-HEPES缓冲液中。在存在或不存在不同浓度的KP-457 或其他抑制剂的情况下，用100 μM羰基氰化物间氯苯腙（CCCP）处理血小板以诱导GPIba脱落。混合物在37°C下孵育过夜。孵育后，用针对CD41a和GPIba（CD42b）的荧光标记抗体染色血小板，并通过流式细胞术分析以确定保留GPIba表达的CD41a+血小板的百分比。[1] 为生成iPSC来源的血小板，将iPSC来源的造血祖细胞（HPC）在饲养层细胞上，于含有干细胞因子、血小板生成素和肝素的分化培养基中培养。在巨核细胞分化和血小板产生阶段（37°C），向培养基中添加KP-457（15 μM）或其他抑制剂。定期更换培养基。在第22-24天收集非贴壁细胞，并使用针对CD41a、GPIX（CD42a）和GPIba（CD42b）的抗体进行流式细胞术分析，以量化MK、总血小板和GPIba+血小板群体。[1] 进行基于流式细胞术的血小板聚集实验以评估vWF/GPIba依赖性功能。将等份的iPSC来源血小板或新鲜人血小板用不同的荧光标记物（抗CD9-APC或抗CD9-V450）染色。将用每种标记物染色的等量血小板混合，并悬浮于含有凝血酶抑制剂、人血浆和氯化钙的Tyrode-HEPES溶液中。混合的血小板悬浮液用瑞斯托菌素（2 mg/ml）刺激，以在37°C边旋转边诱导vWF/GPIba介导的聚集，持续10分钟。通过固定终止反应，并通过流式细胞术分析样品。通过计算双阳性事件（对两种荧光标记均呈阳性的血小板）占总血小板群体的百分比来量化血小板聚集。[1] |
| 动物实验 |
本研究利用免疫缺陷型NOD/SCID/IL-2Rg-null (NOG)小鼠血栓形成模型，评估了经KP-457处理的iPSC衍生血小板的体内止血功能。首先对小鼠进行照射以诱导血小板减少。将等量（1×10⁷个细胞）经四甲基罗丹明标记的CD41a⁺ iPSC衍生血小板（分别在培养过程中用或不用KP-457处理，浓度为15 μM）静脉输注至小鼠体内。为诱导血栓形成，在血卟啉（一种光敏剂，激光照射后可产生活性氧）存在下，暴露并损伤肠系膜毛细血管。同时，给小鼠注射FITC-葡聚糖（用于血管显像）和Hoechst33342（一种核染料）。利用共聚焦激光扫描显微镜实时观察并记录了肠系膜毛细血管损伤部位血小板黏附和血栓形成的动态过程。通过图像量化了每单位长度血管中参与血栓形成的输注iPSC血小板的数量。[1]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
使用KP-457进行的良好实验室规范 (GLP) 研究表明，在犬类中，静脉注射剂量高达 3 mg/kg，每日一次，持续 4 周（最大测试剂量），KP-457 既未表现出遗传毒性，也未表现出全身毒性。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
KP-457 是一种新型的选择性 ADAM17 抑制剂，具有反式羟肟酸结构，旨在抑制血小板糖蛋白 Iba (GPIba) 的脱落。其化学名称为 N-(2-((4-(丁-2-炔-1-氧基)苯基)磺酰基)-1-(4-(甲基磺酰胺甲基)苯基)乙基)-N-羟基甲酰胺。[1] 研究表明，使用 KP-457 选择性抑制 ADAM17（而非抑制 p38 MAPK 等上游调节因子）是一种有效且安全的策略，可在 37°C 下体外生成人 iPSC 来源血小板的过程中维持 GPIba 的表达，这对于高效的血小板生成至关重要。GPIba 的保留可改善血小板在体外的 vWF 依赖性聚集，并增强其在体内的止血功能。 [1]
KP-457因其选择性、效力和在动物毒性研究中已确立的安全性，被认为是临床规模生产用于输血的功能性iPSC衍生血小板浓缩物的理想工艺助剂。[1] |
| 分子式 |
C21H24N2O7S2
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|---|---|
| 分子量 |
480.554463386536
|
| 精确质量 |
480.102
|
| CAS号 |
1365803-52-6
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| PubChem CID |
56598918
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
1.2
|
| tPSA |
147
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
10
|
| 重原子数目 |
32
|
| 分子复杂度/Complexity |
865
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
CS(NCC1=CC=C(C(N(C=O)O)CS(C2=CC=C(OCC#CC)C=C2)(=O)=O)C=C1)(=O)=O
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| InChi Key |
VIWDSTUVCAZZDF-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H24N2O7S2/c1-3-4-13-30-19-9-11-20(12-10-19)32(28,29)15-21(23(25)16-24)18-7-5-17(6-8-18)14-22-31(2,26)27/h5-12,16,21-22,25H,13-15H2,1-2H3
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| 化学名 |
N-[2-(4-but-2-ynoxyphenyl)sulfonyl-1-[4-(methanesulfonamidomethyl)phenyl]ethyl]-N-hydroxyformamide
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| 别名 |
KP457 KP 457KP-457
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0809 mL | 10.4047 mL | 20.8095 mL | |
| 5 mM | 0.4162 mL | 2.0809 mL | 4.1619 mL | |
| 10 mM | 0.2081 mL | 1.0405 mL | 2.0809 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
奈莫雷生盐酸盐
E55888 HCL
FITC-Dextran (MW 110000)
FITC-Dextran (MW 2000000)
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