cdk2/cyclin A (IC50 = 1.5 μM); CDK2/cyclinE (IC50 = 3.6 μM); Cdk4/cyclin D1 (IC50 = 1 nM); cdk6/cyclin D3 (IC50 = 2 nM); CDK9/Cyclin T (IC50 = 28 nM); CDK5/p35 (IC50 = 0.832 μM); CDK1/cyclinB1 (IC50 = 2.4 μM); CDK7/Cyclin H/MAT1 (IC50 = 2.4 nM); Cdk5/p25 (IC50 = 1.2 nM)
CDK4/cyclin D1 (IC50 = 0.001 μM)
CDK6/cyclin D3 (IC50 = 0.002 μM)
CDK9/cyclin T (IC50 = 0.028 μM)
CDK5/p35 (IC50 = 0.832 μM)
CDK5/p25 (IC50 = 1.2 μM)
CDK2/cyclin A (IC50 = 1.5 μM)
CDK1/cyclin B1 (IC50 = 2.4 μM)
CDK7/cyclin H/Mat1 (IC50 = 2.4 μM)
CDK2/cyclin E (IC50 = 3.6 μM)
FLT3 (D835V) and FLT3 (ITD, D835V) (high potency, no wild-type inhibition)
ULK2 and NEK10 (low Kd/IC50 values) [1]

Lerociclib 是 CDK 家族中针对 CDK9/细胞周期蛋白 T 选择性最低的成员，其生化 IC50 比 CDK4/细胞周期蛋白 D1 低约 30 倍。 lerociclib 的 EC50 小于 20 nM，可在 CDK4/6 依赖性细胞中引起强烈且持久的 G1 期阻滞。当用 Lerociclib 处理 CDK4/6 依赖性 WM2664 细胞 24 小时时，可以看到处于细胞周期 G1 期的细胞呈剂量依赖性增加。在 300 nM 的浓度下，生化 IC50 保持了 300 多倍，从而维持了这种抑制。与载体对照相比，用 30-1000 nM Lerociclib 处理 24 小时的 WM2664 细胞显示出 RB 磷酸化的完全抑制。 Lerociclib 治疗导致治疗后 16 小时几乎完全抑制 RB 磷酸化，治疗后 1 小时内 RB 磷酸化降低。 lerociclib 的 EC50 浓度低至 23 nM，可有效抑制多种肿瘤细胞系的增殖，包括乳腺癌、黑色素瘤、白血病和淋巴瘤[1]。

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G1T38 在 CDK4/6 依赖的细胞系 (HS68, WM2664) 中引起强烈且持续的 G1 期阻滞，EC50 约为 20 nM。该阻滞在 300 nM (>300 倍生化 IC50) 时仍能维持。在 CDK4/6 非依赖的细胞 (A2058) 中，该化合物对细胞周期没有影响。
在 WM2664 细胞中，用 30-1000 nM 的 G1T38 处理 24 小时，与溶剂对照组相比，能完全抑制 RB 蛋白 Ser807/811 位点的磷酸化。
用 300 nM G1T38 处理 WM2664 细胞，1 小时内即可降低 RB 磷酸化，处理后 16 小时几乎完全抑制。
G1T38 抑制一系列 CDK4/6 依赖的肿瘤细胞系（乳腺癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤）的增殖，EC50 值低至 23 nM (例如：MV4-11: 23 nM， MCF7: 52 nM)。在 CDK4/6 非依赖的细胞系 (例如：A2058: 2691 nM) 中，抑制活性 >2.5 μM，表明功能性 RB 通路对其活性至关重要。
在 100 nM 和 1 μM 浓度下对 468 种蛋白激酶进行的激酶组筛选显示，G1T38 具有高度选择性，脱靶活性极低。
通过测量 RNA 聚合酶 II CTD (SER2) 磷酸化未见缺失，G1T38 未显示出对 CDK9/cyclin T 功能的生物抑制效应。

在该 HER²⁺ 乳腺癌模型中，接受 Lerociclib 治疗的小鼠在治疗 21 天后显示出 8% 的肿瘤消退，而对照动物在同一时间段内显示出 577% 的肿瘤负荷增加。与用赋形剂治疗的小鼠相比，每天用 100 mg/kg 的 Lerocyclib 或 Palbociclib 进行治疗时，MCF7 异种移植模型在 10 天内表现出肿瘤消退。治疗 27 天后，10、50 和 100 mg/kg Lerociclib 组中观察到肿瘤生长抑制（分别约为 12%、74% 和 90% 抑制）。在 10、50 和 100 mg/kg 剂量组中，每日口服 palbociclib 治疗可分别抑制肿瘤生长 18%、66% 和 87%。有趣的是，50 mg/kg 的 lerociclib 比 palbociclib 更有效。在 ER⁺ZR-75-1 乳腺癌异种移植模型中比较 50 mg/kg 剂量的 Lerocyclib 和 Palbociclib 得出相似的结果。用 lerociclib 治疗的小鼠的总体肿瘤生长延迟为 60% 和 77% TGI，表明单独使用 lerociclib 对于治疗这种 NSCLC 肿瘤模型非常有效。

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在 ER+ MCF7 异种移植模型中，单次口服 100 mg/kg 的 G1T38 导致肿瘤中的药物浓度比血浆中高 17 倍。肿瘤 pRB 水平在治疗后 1 小时和 24 小时分别降低了 30% 和 98%，且抑制作用与肿瘤药物浓度平行，而非血浆浓度。
在 MMTV-Neu GEMM (HER2+ 乳腺癌) 模型中，给予饮食中添加 100 mg/kg G1T38 28 天的小鼠，肿瘤消退达 38%，而对照组动物肿瘤负荷增加了 577%。
在 ER+ MCF7 异种移植模型中，每日口服 10、50 和 100 mg/kg 的 G1T38 28 天，肿瘤生长抑制 (TGI) 率分别约为 12%、74% 和 90%。在 50 mg/kg 剂量下，G1T38 的疗效显著优于帕博西林 (palbociclib)。
在 ER+ MCF7 异种移植模型中，G1T38 (50 mg/kg) 与他莫昔芬 (20 mg/kg 皮下注射) 或氟维司群 (5 mg/只/周 皮下注射) 联用，疗效显著优于任何单药，导致近乎完全、持续的肿瘤消退。
在 MCF7 模型中，G1T38 (25 或 50 mg/kg) 与口服 SERD GW5638 (25 mg/kg) 联用，可导致持续的肿瘤消退，效果优于任一单药。
在 MCF7 模型中，G1T38 (25 或 50 mg/kg) 与 PI3K 抑制剂 GDC0941 (100 mg/kg) 联用，疗效优于任何单药治疗。
在 NSCLC PDX 模型 (CTG-0159, EGFR 野生型) 中，每日口服 100 mg/kg G1T38 28 天，导致 77% 的 TGI 和 60% 的肿瘤生长延迟。
在 EGFR 突变 H1975 NSCLC 异种移植模型中，G1T38 单药 (50 和 100 mg/kg) 引起剂量依赖性 TGI (第 18 天时分别为 33.3% 和 60.7%)。G1T38 (100 mg/kg) 与厄洛替尼 (70 mg/kg) 联用，导致 80% 的 TGI，逆转了厄洛替尼耐药。与阿法替尼 (20 mg/kg) 联用，延长了耐药出现的时间。

使用微流控激酶检测技术对 G1T38 进行了针对 CDK 家族激酶的生化分析。化合物在 ATP 的 Km 浓度下，以单次测定的 12 点剂量反应形式进行测试。使用的磷酸受体底物肽浓度为 1 μM。星形孢菌素被用作所有检测的参考化合物。

Costar 3903 96 孔板中的细胞每孔接种 1000 个细胞，用于 SupT1、Daudi、MCF7、ZR-75-1、A2058、WM2664 和 H69； MV-4-11 和 BV173 以每孔 4000 个细胞铺板； Tom-1 以每孔 8,000 个细胞铺板；并以每孔 20,000 个细胞接种 NALM-1。 24 小时后，以 10 μM 至 1 nM 范围内的九点剂量浓度对板进行 Lerociclib (G1T38) 给药。四或六天后，评估细胞活力。在 BioTek Synergy2 多模式读板机上处理平板后，使用 GraphPad Prism 5 统计软件进行数据分析[1]。

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为了评估细胞周期效应，用 G1T38 处理 HS68、WM2664 (CDK4/6 依赖) 和 A2058 (CDK4/6 非依赖) 细胞系。处理后，分析细胞的周期分布。
为了评估对 RB 磷酸化的影响，用不同剂量的 G1T38 处理 WM2664 细胞 24 小时，或用 300 nM G1T38 处理不同时间点。处理后，收集细胞并制备全细胞裂解物。测定总蛋白浓度。蛋白质样品热变性，通过 SDS-PAGE 分离，并转印至硝酸纤维素膜。封闭膜后，与抗磷酸化 RB (Ser807/811)、总 RB 和 α-微管蛋白（上样对照）的一抗孵育过夜。与荧光二抗孵育后，对印迹进行成像。
为了评估抗增殖活性，将各种肿瘤细胞系接种到 96 孔板中。24 小时后，用从 10 μM 到 1 nM 的九点剂量浓度系列的 G1T38 处理板。根据制造商建议，在四天或六天后使用发光细胞活力测定法测定细胞活力。在多模式酶标仪上读取板并分析数据。

Mice: Lerocyclib (G1T38) (100 mpk, medicated diet) is tested in female MMTV-NEU mice. Body composition is evaluated at the start of treatment, and weight measurements (in grams) are kept track of and used to calculate gross toxicity. NSCLC PDX CTG0159 tumors are implanted in female naked mice. After tumors reach a volume between 150 and 300 mm³, mice are randomly assigned to treatment groups, and dosing is started. Lerociclib (G1T38) at a dose of 100 mg/kg or the vehicle is taken orally for 28 days in a row. A lung adenocarcinoma model of H1975 NSC is implanted into female NCI Ath/nu mice. When tumors are 100–150 mm³ in size on average, mice are randomly assigned to treatment groups. For the duration of the study, mice are given oral doses of afatinib (20 mg/kg), erlotinib (70 mg/kg), or Lerociclib (50 or 100 mg/kg) either alone or in combination (Lerociclib+erlotinib or Lerociclib+afatinib). Up until the mice reach a tumor burden of 1500 mm³, all tumors are measured twice a week.

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MCF-7 Breast Cancer Xenograft Model: MCF-7 cells were injected into immunodeficient mice. When mean tumor volume reached approximately 150-250 mm³, G1T38 was administered orally daily at 10, 25, 50, or 100 mg/kg for the study duration. In combination studies, tamoxifen (20 mg/kg) was administered subcutaneously daily, fulvestrant (5 mg per mouse) was administered subcutaneously once a week, GW5638 (25 mg/kg) was administered orally daily, and GDC0941 (100 mg/kg) was administered orally daily.
Her2Neu Breast Cancer GEMM: Female MMTV-NEU mice were fed a diet containing G1T38 (100 mg/kg), incorporated based on the parameters of a 25g mouse eating 3.2g of food per day, for 28 days. Mice were monitored for tumor development.
CTG0159 PDX NSCLC Model: Female nude mice were implanted with NSCLC PDX CTG0159 tumor fragments. When tumors reached 150-300 mm³, mice were orally administered 100 mg/kg G1T38 or vehicle daily for 28 consecutive days. Tumors were measured twice weekly.
H1975 NSCLC Xenograft Model: Female NCI Athymic nude mice were implanted with H1975 cells. When tumors reached 100-150 mm³, mice were orally administered G1T38 (50 or 100 mg/kg), erlotinib (70 mg/kg), or afatinib (20 mg/kg) daily, either as single agents or in combination, for the study duration. Tumors were measured twice weekly.
Murine PK/PD Study: For tumor/plasma concentration comparison, MCF7 tumor-bearing mice were given a single oral dose of 100 mg/kg G1T38. Blood and tumors were harvested at various time points post-dose. For continuous oral PK analysis, C57BL/6 mice were administered daily oral doses of 10, 50, or 100 mg/kg G1T38 or palbociclib for 7 consecutive days. Blood was collected 24 hours post last dose.
Bone Marrow Proliferation (EdU) Study: C57BL/6 mice were administered daily oral doses of 10, 50, or 100 mg/kg G1T38 or palbociclib for 7 days. Eleven hours after the last dose, mice were injected intraperitoneally with EdU. Femurs were harvested 1 hour later for bone marrow cell isolation and flow cytometry analysis of EdU incorporation in myeloid progenitors.
28-Day Toxicology Study in Beagle Dogs: Beagle dogs (5/sex per group) were dosed once daily via oral gavage with G1T38 at 1, 2.5, or 5 mg/kg/day for 28 consecutive days at a dose volume of 5 mL/kg. Hematology samples were collected pre-test and at various time points during dosing and recovery periods.

在荷瘤小鼠中，单次口服100 mg/kg的G1T38后，肿瘤中的药物浓度比血浆中的药物浓度高17倍。48小时后，肿瘤中可检测到药物（约65 ng/ml），而此时血浆中未检测到药物。G1T38在小鼠体内的血浆半衰期相对较短，重复给药后药物蓄积量极低。在连续7天每日给药的小鼠中，末次给药后24小时，血浆中G1T38的浓度约为11 ng/ml（约22 nM）。相比之下，相同条件下帕博西尼的浓度约为300 ng/ml（约600 nM）。在连续28天每日给药的比格犬中，药代动力学测定未发现G1T38的蓄积。

在连续28天每日给予C57BL/6小鼠的G1T38治疗中，中性粒细胞数量呈剂量依赖性下降，28天后，100 mg/kg剂量组观察到最大下降48%。该下降幅度与帕博西尼（palbociclib）引起的下降幅度相似。
在同一项小鼠研究中，无论剂量如何，G1T38在治疗7天后12小时均未引起髓系祖细胞（Mac1+ Gr1+）增殖（通过EdU掺入法测定）的减少，而帕博西尼在50和100 mg/kg剂量下导致髓系祖细胞增殖减少超过50%。
在一项为期28天的比格犬重复给药GLP毒理学研究中，口服G1T38导致造血功能呈剂量依赖性下降，包括骨髓细胞减少和淋巴细胞耗竭。然而，在临床相关剂量下，这些影响不足以将给药时间限制在 28 天以内。未报告感染或出血发生率增加。停药后，造血抑制作用可逆。
在比格犬接受G1T38治疗的前 14 天内，中性粒细胞计数呈剂量依赖性快速下降，但在第 14 至 25 天达到稳定状态，停药后即可迅速恢复。

[1]. Preclinical development of G1T38: A novel, potent and selective inhibitor of cyclin dependent kinases 4/6 for use as an oral antineoplastic in patients with CDK4/6 sensitive tumors. Oncotarget. 2017 Jun 27;8(26):42343-42358

勒罗西利（Lerociclib）正在临床试验NCT02983071中进行研究（G1T38，一种CDK 4/6抑制剂，与氟维司群联合用于治疗激素受体阳性、Her2阴性的局部晚期或转移性乳腺癌）。
勒罗西利是一种口服生物利用度高的细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）4型（CDK4）和6型（CDK6）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，勒罗西利选择性地抑制CDK4和CDK6，从而抑制G1期早期视网膜母细胞瘤蛋白（Rb）的磷酸化，阻止CDK介导的G1-S期转换，导致细胞周期阻滞。这可以抑制DNA复制并减少肿瘤细胞增殖。 CDK4 和 CDK6 是丝氨酸/苏氨酸激酶，在许多肿瘤细胞类型中上调，并在调节细胞周期从 G1 期到 S 期的进程以及肿瘤细胞增殖中发挥关键作用。

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G1T38 是一种新型、高效、选择性强且口服生物利用度高的 CDK4/6 小分子抑制剂。该药物旨在最大程度地减少靶向骨髓抑制，从而可能实现每日持续给药，而无需像帕博西尼那样需要治疗间歇期。
G1T38 在广泛的激酶组筛选中显示出高选择性，并在 CDK4/6 依赖性肿瘤模型（包括乳腺癌和非小细胞肺癌）中表现出强大的抗增殖活性。
该化合物已完成一项 1a 期健康志愿者研究 (NCT02821624)，目前正在一项 1b/2a 期临床试验中与氟维司群联合用于 ER+/HER2- 乳腺癌患者 (NCT02983071) 进行评估。

C26H34N8O

474.6012

474.29

C, 65.80; H, 7.22; N, 23.61; O, 3.37

1628256-23-4

Lerociclib dihydrochloride;2097938-59-3

86269224

Solid powder

3.4

91.2

2

7

4

35

750

0

YPJRHEKCFKOVRT-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C26H34N8O/c1-18(2)32-10-12-33(13-11-32)20-6-7-22(27-16-20)30-25-28-15-19-14-21-24(35)29-17-26(8-4-3-5-9-26)34(21)23(19)31-25/h6-7,14-16,18H,3-5,8-13,17H2,1-2H3,(H,29,35)(H,27,28,30,31)

4-[[5-(4-propan-2-ylpiperazin-1-yl)pyridin-2-yl]amino]spiro[1,3,5,11-tetrazatricyclo[7.4.0.02,7]trideca-2,4,6,8-tetraene-13,1'-cyclohexane]-10-one

Lerociclib; G1T38; G1T-38; G1T 38; G1-T38; G1 T-38; G1 T38

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。