- Luteinizing Hormone Receptor (LHR)-Mediated Signaling Pathway - Inhibits LH-induced progesterone production in rat luteal cells, with an EC₅₀ of 0.25 μM for progesterone synthesis suppression [1]
- Steroidogenic Acute Regulatory Protein (StAR) - Downregulates StAR expression in a concentration-dependent manner in rat luteal cells [1]
- Progesterone Receptor (PR) - Binds to PR in rat uterine tissues, modulating uterine growth and differentiation (no Ki value reported) [2]

1. 抑制大鼠黄体细胞中LH刺激的孕酮生成 - 细胞来源：妊娠10天大鼠的黄体细胞。 - 处理方案：细胞先用左炔诺孕酮（Levonorgestrel）（浓度：0.01 μM、0.1 μM、0.5 μM、1 μM）预孵育1小时，再与促黄体生成素（LH，10 ng/mL）共孵育24小时。 - 检测指标及结果： - 孕酮水平：通过放射免疫法（RIA）检测。0.01 μM时，Levonorgestrel 抑制LH诱导的孕酮生成约20%；0.1 μM时，抑制率升至约45%；1 μM时，达到最大抑制（约80%），EC₅₀为0.25 μM [1]
- cAMP积累量：通过竞争结合法检测。1 μM的Levonorgestrel 使LH诱导的cAMP水平较仅LH处理组降低约55% [1]
- StAR表达：通过Western blot分析。0.1–1 μM的Levonorgestrel 以浓度依赖性方式下调StAR蛋白水平30–60% [1]
2. 调节黄体细胞中类固醇生成酶活性 - 实验设计：大鼠黄体细胞用Levonorgestrel（1 μM）和LH（10 ng/mL）处理12小时，检测3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）和胆固醇侧链裂解酶（P450scc）的活性。 - 结果：对3β-HSD和P450scc的活性无显著影响，表明Levonorgestrel 的抑制作用特异性针对StAR介导的胆固醇转运 [1]

1. 调节去卵巢大鼠的子宫生长及激素水平 - 动物模型：8周龄雌性SD大鼠，实验前7天进行双侧卵巢切除，以消除内源性类固醇的干扰。 - 处理方案：大鼠分为4组（每组n=6）： - 对照组：经口灌胃溶媒（0.5%羧甲基纤维素，CMC）； - 低剂量组：Levonorgestrel（0.1 mg/kg/天）溶解于溶媒，经口灌胃； - 中剂量组：Levonorgestrel（0.5 mg/kg/天），经口灌胃； - 高剂量组：Levonorgestrel（1 mg/kg/天），经口灌胃。 - 处理时长：连续21天。 - 检测指标及结果： - 子宫重量：高剂量Levonorgestrel 使子宫湿重较对照组降低约35%；低、中剂量无显著影响 [2]
- 血浆孕酮水平：通过RIA检测。所有Levonorgestrel 处理组均呈剂量依赖性降低血浆孕酮水平，高剂量组降低约40% [2]
- 子宫组织学：高剂量Levonorgestrel 诱导子宫内膜萎缩，腺体密度降低，子宫内膜上皮变薄 [2]
2. 影响正常大鼠的卵巢卵泡发育 - 动物模型：10周龄雌性SD大鼠，发情周期规律（通过连续2个周期的阴道涂片确认）。 - 处理方案：Levonorgestrel（0.5 mg/kg/天）经口灌胃14天。 - 结果：成熟卵泡（直径≥2 mm）数量较对照组减少约50%；对原始卵泡和初级卵泡无显著影响 [2]

1. 检测LH信号通路的cAMP竞争结合实验 - 试剂：大鼠黄体细胞裂解液、[³H]-cAMP、未标记cAMP标准品、Levonorgestrel 处理组细胞上清液。 - 流程： 1. 收集经Levonorgestrel（1 μM）和LH（10 ng/mL）处理4小时的黄体细胞上清液； 2. 在96孔板中，将100 μL上清液与50 μL [³H]-cAMP（0.1 μCi/mL）和50 μL cAMP结合蛋白（来自牛肾上腺皮质）混合； 3. 4°C孵育18小时； 4. 加入100 μL预冷的活性炭-葡聚糖溶液（0.5%活性炭、0.05%葡聚糖），分离结合态与游离态[³H]-cAMP； 5. 4°C下3000×g离心10分钟； 6. 取150 μL上清液加入闪烁瓶，加入3 mL闪烁液，通过液体闪烁计数仪检测放射性。 - 分析：利用未标记cAMP制作标准曲线，计算样品中cAMP浓度；比较Levonorgestrel 处理组与对照组的cAMP水平 [1]
2. 检测孕酮的放射免疫法（RIA） - 试剂：抗孕酮抗体、[¹²⁵I]-标记孕酮、孕酮标准品、Levonorgestrel 处理组黄体细胞上清液。 - 流程： 1. 向试管中加入50 μL上清液（或孕酮标准品），随后加入50 μL抗孕酮抗体和50 μL [¹²⁵I]-孕酮； 2. 37°C孵育2小时，再4°C孵育16小时； 3. 加入1 mL预冷的二抗溶液（羊抗兔IgG），沉淀抗体结合的[¹²⁵I]-孕酮； 4. 4°C下2500×g离心15分钟，弃去上清液； 5. 用γ计数仪检测沉淀的放射性。 - 分析：利用标准曲线确定样品中孕酮浓度；计算Levonorgestrel 对LH诱导的孕酮生成的抑制率 [1]

1. 大鼠黄体细胞的分离与培养 - 流程： 1. 颈椎脱臼法处死妊娠10天的大鼠；取出卵巢，置于预冷的Hank’s平衡盐溶液（HBSS）中； 2. 将卵巢剪碎为1 mm³的组织块，加入0.2% I型胶原酶，37°C温和振荡孵育30分钟； 3. 用70 μm细胞筛过滤细胞悬液，去除组织碎片； 4. 4°C下800×g离心5分钟，弃去上清液；用含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素的DMEM重悬细胞； 5. 调整细胞密度至1×10⁶ cells/mL，接种于24孔板（每孔500 μL），37°C、5% CO₂培养箱中孵育24小时，待细胞贴壁； 6. 更换为无血清DMEM，按需加入Levonorgestrel（0.01–1 μM）和LH（10 ng/mL），继续孵育24小时； 7. 收集上清液用于孕酮和cAMP检测；裂解细胞用于StAR蛋白的Western blot分析 [1]
2. 检测StAR蛋白表达的Western blot实验 - 流程： 1. 用含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解处理后的黄体细胞，冰上孵育30分钟； 2. 4°C下12000×g离心15分钟，收集上清液（总蛋白）； 3. 通过BCA法测定蛋白浓度，将所有样品调整至相同蛋白浓度（20 μg/孔）； 4. 将蛋白样品与5×SDS上样缓冲液混合，95°C加热5分钟使蛋白变性； 5. 将样品上样至12% SDS-PAGE凝胶，80 V电泳30分钟，再120 V电泳90分钟； 6. 300 mA恒流转膜90分钟，将蛋白从凝胶转移至PVDF膜； 7. 用5%脱脂牛奶-TBST封闭膜，室温孵育1小时； 8. 加入StAR一抗（1:1000稀释），4°C孵育过夜； 9. TBST洗涤膜3次（每次10分钟）；加入HRP标记的二抗（1:5000稀释），室温孵育1小时； 10. TBST洗涤膜3次（每次10分钟）；用ECL化学发光试剂显影；ImageJ软件定量条带灰度值 [1]

1. Uterine Growth Regulation Experiment in Ovariectomized Rats - Protocol: 1. Animal Preparation: 8-week-old female SD rats were anesthetized with pentobarbital sodium (40 mg/kg, intraperitoneal injection); perform bilateral ovariectomy via dorsal incision; suture incision and monitor for 7 days to ensure recovery; 2. Grouping and Treatment: Randomly divide rats into 4 groups (n=6): - Control: 0.5% CMC (1 mL/kg) via oral gavage, once daily for 21 days; - Low-dose Levonorgestrel: 0.1 mg/kg/day, dissolved in 0.5% CMC, oral gavage, once daily for 21 days; - Medium-dose Levonorgestrel: 0.5 mg/kg/day, same solvent and route as above; - High-dose Levonorgestrel: 1 mg/kg/day, same solvent and route as above; 3. Sample Collection: On day 22, sacrifice rats by cervical dislocation; collect blood via abdominal aorta, centrifuge at 3000×g for 15 minutes to separate plasma (store at -80°C for hormone detection); remove uterus, blot dry with filter paper, weigh (record wet weight), and fix 1/3 of uterine tissue in 4% paraformaldehyde for histological analysis; 4. Detection: Measure plasma progesterone via RIA; prepare paraffin sections of uterine tissue, stain with hematoxylin-eosin (HE), and observe endometrial morphology under a light microscope [2]
2. Ovarian Follicular Development Experiment in Intact Rats - Protocol: 1. Animal Selection: 10-week-old female SD rats with regular 4-day estrous cycles (confirmed via vaginal smear for 2 consecutive cycles); 2. Treatment: Rats in the experimental group received Levonorgestrel (0.5 mg/kg/day, dissolved in 0.5% CMC) via oral gavage for 14 days; control group received vehicle only; 3. Sample Collection: On day 15, sacrifice rats, remove ovaries, fix in 4% paraformaldehyde for 24 hours; 4. Histological Analysis: Prepare 5 μm serial paraffin sections of ovaries, stain with HE; count the number of primordial follicles (<50 μm), primary follicles (50–100 μm), secondary follicles (100–200 μm), and mature follicles (>200 μm) in each ovary under a light microscope (count 5 non-overlapping fields per section) [2]

1. General Toxicity in Rats - In the 21-day oral administration experiment (0.1–1 mg/kg/day) in ovariectomized rats, Levonorgestrel did not cause significant changes in body weight, food intake, or organ weights (liver, kidney, spleen) compared to the control group [2]
2. Biochemical Indicators - No significant differences in serum alanine transaminase (ALT), aspartate transaminase (AST), blood urea nitrogen (BUN), or creatinine (Cr) levels were observed between Levonorgestrel-treated groups and the control group [2]
3. Plasma Protein Binding No data on plasma protein binding rate of Levonorgestrel were reported in [1] or [2]

[1]. J Steroid Biochem Mol Biol. 1994 Aug;50(3-4):161-6. hyperlink: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/8049144/
[2]. Exp Anim. 2011;60(4):363-71. hyperlink: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21791876/

1. Mechanism of Action - In rat luteal cells, Levonorgestrel inhibits LH-stimulated progesterone production primarily by suppressing cAMP accumulation and downregulating StAR expression, which blocks cholesterol transport into mitochondria (the rate-limiting step of steroidogenesis) [1]
- In ovariectomized rats, Levonorgestrel exerts anti-estrogenic effects on the uterus by binding to PR, leading to reduced uterine weight and endometrial atrophy; this effect is dose-dependent, with high doses (1 mg/kg/day) showing the most significant activity [2]
2. Research Background - Literature [1] aimed to investigate the effect of progestins (including Levonorgestrel) on LH-mediated steroidogenesis in luteal cells, providing a basis for understanding the role of progestins in regulating ovarian function [1]
- Literature [2] focused on evaluating the impact of Levonorgestrel on reproductive organs (uterus and ovaries) in rats, which is relevant to the development of progestin-based contraceptives or hormone replacement therapies [2]

C27H38O3

410.58882856369

410.282

C, 78.98; H, 9.33; O, 11.69

13635-16-0

797-63-7 (free);13635-16-0 (hexanoate);86679-33-6 (butyrate);

10431710

Typically exists as solid at room temperature

6.013

43.37

0

3

8

30

770

6

CCCCCC(=O)O[C@]1(CC[C@@H]2[C@@]1(CC[C@H]3[C@H]2CCC4=CC(=O)CC[C@H]34)CC)C#C

MQEMIBNIYXQPDK-WOSSHHRXSA-N

InChI=1S/C27H38O3/c1-4-7-8-9-25(29)30-27(6-3)17-15-24-23-12-10-19-18-20(28)11-13-21(19)22(23)14-16-26(24,27)5-2/h3,18,21-24H,4-5,7-17H2,1-2H3/t21-,22+,23+,24-,26-,27-/m0/s1

[(8R,9S,10R,13S,14S,17R)-13-ethyl-17-ethynyl-3-oxo-1,2,6,7,8,9,10,11,12,14,15,16-dodecahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl] hexanoate

Levonorgestrel hexanoate; 13635-16-0; 13-Ethyl-17-((1-oxohexyl)oxy)-18,19-dinorpregn-4-en-20-yn-3-one (17alpha)-; 18,19-Dinorpregn-4-en-20-yn-3-one, 13-ethyl-17-((1-oxohexyl)oxy)-, (17alpha)-; [(8R,9S,10R,13S,14S,17R)-13-ethyl-17-ethynyl-3-oxo-1,2,6,7,8,9,10,11,12,14,15,16-dodecahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl] hexanoate; orb1696497; SCHEMBL11694584;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。