MB-07344

Thyroid hormone beta receptor/(TR)-β
Thyroid hormone receptor β (TR-β) with high affinity and selectivity over TR-α. Activation of TR-β in the liver upregulates LDL receptor expression, increases bile acid synthesis (via CYP7A1), and reduces plasma lipoprotein(a) levels. These actions lead to significant reductions in total cholesterol, LDL-C, and triglycerides. The selectivity reduces the risk of cardiac hypertrophy and tachycardia seen with non-selective thyromimetics.

MB07811 是新型 TR 激动剂 3,5-二甲基-4-(4′-羟基-3′-异丙基苄基)-苯氧基甲基膦酸 (MB07344) 的肝脏靶向前药，已在多种动物模型中显示出口服降胆固醇活性 (Erion 等，2007)。MB07344 对 TRβ 的结合亲和力 Ki 为 2.17 ± 0.03 nmol·L−1，Ki TRα/Ki TRβ 比值为 15.8，而 MB07811 对 TR 的亲和力较低 (>12 µmol·L−1)。我们发现，在所有三种动物模型中，MB07811/MB07344 与阿托伐他汀联合用药均具有辅助治疗作用。这些结果支持了TR激动剂（例如MB07811）在临床上作为治疗手段的潜力，用于进一步降低那些仅使用他汀类药物治疗未能成功达到胆固醇目标的患者[1]。
体外实验表明，MB-07344与人TR-β的结合亲和力Ki值为2.17 nM，并且对TR-α的选择性比TR-β高10倍以上。在用转染了TR-β反应性荧光素酶报告基因的HepG2细胞进行的转录激活实验中，MB-07344诱导转录，EC50值约为1 nM。它能增加参与胆固醇代谢的基因（CYP7A1、ABCA1、LDLR）的表达，而对心率相关基因（例如MHC-α）的影响极小。浓度高达10 µM时未观察到明显的细胞毒性。

本研究评估了新型甲状腺激素受体β激动剂MB07344的肝脏靶向前药MB07811在兔、犬和猴体内的单药治疗及与阿托伐他汀联合治疗的活性。
主要结果：在兔中，静脉注射MB07344可降低总血浆胆固醇（TPC），其效果与口服最大有效剂量阿托伐他汀相当。阿托伐他汀联合MB07344可进一步降低TPC。同样，口服MB07811可使阿托伐他汀治疗组的TPC降低幅度超过单药治疗组。在犬和猴中，阿托伐他汀和MB07811分别以单药或联合治疗的方式给药。与兔研究结果一致，联合治疗比单独使用MB07811或阿托伐他汀更能显著降低总胆固醇（TPC）。

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MB07344单药治疗及与阿托伐他汀联合治疗在正常兔中的活性[1]
本兔研究旨在确定MB07344是否能增强最大有效剂量阿托伐他汀的疗效。图2A展示了四个实验组（载体对照组、阿托伐他汀单药组、MB07344单药组和MB07344+阿托伐他汀联合组）及给药时间。如图2B所示，模型中的胆固醇水平相当稳定，载体对照组动物的TPC在5周的实验方案期间始终保持在基线水平的10%以内。如前所述，单独使用阿托伐他汀治疗的动物，其总胆固醇（TPC）水平较基线水平显著降低（P < 0.05），且降幅稳定在30%至35%之间。联合用药组的动物在给予MB07344之前（第1-2周），胆固醇水平也出现类似的下降。重要的是，在联合用药组中，从第2周开始，将MB07344作为阿托伐他汀的辅助治疗，可使TPC水平进一步显著降低至基线水平的55 ± 8%。如图 2C 所示，在 MB07344 单药治疗组中，从第 2 周开始单药治疗，与基线相比，MB07344 水平下降了 33%–36%，与阿托伐他汀单药治疗的效果相当（图 2B）。
体内实验表明，对高脂饮食喂养的兔子口服 MB-07344（0.1–1 mg/kg）可在 2 周内使血浆总胆固醇降低 30%–40%。与阿托伐他汀（5 mg/kg）联合用药时，胆固醇降低效果更佳，达到 55%–60%，优于任何一种药物的单药治疗效果。在犬和食蟹猴中也观察到了类似的效果。重要的是，心率和心脏功能参数保持不变，证实了 MB-07344 对 TR-β 受体的选择性。体重和食物摄入量也未受到影响。

体外代谢。[2]
MB07811 可被雄性 Sprague-Dawley (SD) 大鼠肝微粒体高效转化为 MB07344 和谷胱甘肽结合物 2。Vmax、Km 和 CLint（固有清除率 = Vmax/Km）值分别为 2.74 ± 0.12 nmol·min−1·mg−1、18.8 ± 3.06 μM 和 145 ± 24.5 μl·min−1·mg−1。克霉唑可抑制该转化（1 μM 时抑制率为 100%，Ki = 24 nM），表明 CYP3A 是负责前药转化的主要 CYP 酶。MB07811 和 MB07344 在 10 μM 时均不抑制 CYP3A。

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LC-MS/MS 分析[1]
将 10 µL 血浆提取物等分试样注入装有 Gemini C18 保护柱（5 µm，4.0 × 3.0 mm）的 Gemini C18 色谱柱（5 µm，2 × 50 mm，Phenomenex），并用由流动相 A（20 mmol·L−1 N,N-二甲基己胺和 10 mmol·L−1 丙酸的 20% 甲醇溶液）和流动相 B（20 mmol·L−1 N,N-二甲基己胺和 10 mmol·L−1 丙酸的 80% 甲醇溶液）组成的梯度进行洗脱，流速为 0.4 mL·min−1（0 min，60% B；0–0.5 min，60–100% B；0.5–6 min，100% B；6–6.1 min，100–60% B； 6.1–9 分钟，60% B）。进样器温度设置为 10°C。MB07344、MB07811、阿托伐他汀和羟基阿托伐他汀的洗脱时间分别约为 2.7、4.9、2.3 和 2.2 分钟。采用 MS/MS 模式检测 MB07811、MB07344、AT 和羟基阿托伐他汀（MB07811 的质谱联用频率为 513/63.1，MB07344 为 363.3/63.1，AT 为 557.5/278.4，羟基阿托伐他汀为 573.5/278.4），并通过将峰面积与标准曲线进行比较进行定量，标准曲线是通过向空白猴血浆中添加已知浓度的分析物而获得的。 MB07344 和 MB07811 的校准曲线浓度范围为 1 至 3000 ng·mL⁻¹（定量限为 1 ng·mL⁻¹），阿托伐他汀的校准曲线浓度范围为 0.1 至 3000 ng·mL⁻¹（定量限为 0.1 ng·mL⁻¹）。尽管羟基阿托伐他汀存在多种异构体，但本检测方法无法区分它们。由于没有羟基阿托伐他汀标准品，因此使用阿托伐他汀校准曲线估算了该分析物的血浆浓度。
无细胞结合试验使用重组人 TR-α 和 TR-β 配体结合域。将[125I]T3 (0.1 nM) 和不同浓度的MB-07344加入含有50 mM Tris、100 mM NaCl、2 mM EDTA、5 mM DTT和0.1% BSA的缓冲液中孵育。4°C过夜孵育后，通过活性炭-葡聚糖沉淀分离结合态和游离态配体，并计数放射性。Ki值采用非线性回归计算。功能分析采用SRC-1肽的荧光偏振法测定辅激活因子募集情况。

在用 MB07811 孵育的新鲜分离的大鼠肝细胞中检测到了高水平的细胞内 MB07344（图 2A），表明 MB07811 很容易分布到肝细胞中并转化为 MB07344（Cmax = 1.03 ± 0.00 nmol 每 106 个细胞；tmax = 1.5 小时）。用 MB07344 孵育的肝细胞也表现出较高的细胞内 MB07344 水平（1.77 ± 0.05 nmol/10⁶ 个细胞；tmax = 1 小时）（图 2A），表明 MB07344 与其他带负电荷的膦酸酯一样，可能通过有机阴离子转运蛋白进入肝细胞[2]。
将 HepG2 细胞转染 TR-β 依赖性荧光素酶报告基因（例如，(DR4)-tk-Luc），并用 MB-07344（0.001–10 µM）处理 24 小时。测定荧光素酶活性。对于 mRNA 分析，将细胞处理 48 小时，提取 RNA 进行 LDLR、CYP7A1 和 ABCA1 的 qPCR 分析。通过 caspase-3/7 活性测定和 LDH 释放评估细胞凋亡和细胞毒性。使用表达 TRα 报告基因的 HEK-293 细胞证实了对 TR-α 的选择性。

MB07344 单药治疗及与阿托伐他汀联合治疗在正常兔中的活性[1]
本实验旨在确定肠外给药活性 TR 激动剂 MB07344 是否能增强阿托伐他汀在正常兔模型中的辅助治疗作用。本研究中，32 只兔子（2.6–3.7 kg）在进入实验方案前适应环境 29 天。监测每日食物摄入量，并于第 -7 天和第 0 天分别通过耳浅静脉采集血样至含 EDTA 钾的采血管中，以获得两个用于测量基线 TPC 的血样点。兔子被随机分为四个治疗组（每组 n = 8），以确保各组的平均 TPC 值相近。实验分为四组：非药物对照组、阿托伐他汀单药组、阿托伐他汀+MB07344组和MB07344单药组。实验持续5周，每周采集每只动物的血样。对照组动物在整个5周内饲喂普通饲料，并在最后3周按照与MB07344处理组相同的方案给予赋形剂（生理盐水）。阿托伐他汀单药组动物于第0天开始饲喂含阿托伐他汀的饲料，并在整个5周内保持该饲料。这些动物在最后3周给予赋形剂。阿托伐他汀+MB07344组的动物从第0天开始饲喂阿托伐他汀饲料，持续5周，但在最后3周每周3次经耳静脉注射MB07344（0.05 mg·kg⁻¹）。MB07344单药组的动物在整个5周期间饲喂普通饲料，但在最后3周每周3次注射MB07344（0.05 mg·kg⁻¹）。每日监测所有动物的体重和食物摄入量。各实验组的体重或食物摄入量（每日测量）均未受到显著影响。

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MB07811 与阿托伐他汀联合用于正常胆固醇血症兔的辅助活性[1]
为了评估 MB07811 作为阿托伐他汀辅助治疗药物的口服活性，我们采用了与上述 MB07344 ± 阿托伐他汀研究类似的实验设计。实验组（每组 n = 6）包括：非药物对照组、单独使用阿托伐他汀组（3 mg·kg−1·day−1）、单独使用 MB07811 组（10 mg·kg−1·day−1）以及阿托伐他汀（3 mg·kg−1·day−1）+ MB07811（10 mg·kg−1·day−1）。在开始 MB07811 治疗前，阿托伐他汀的暴露时间延长至 3 周，以确保在给予 MB07811 前 TPC 水平稳定。方案的其他所有方面均与 MB07344 ± 阿托伐他汀研究相同。与第一个联合用药研究一样，各实验组的体重或食物摄入量均未受到显著影响。

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大鼠药代动力学。[2]
采用 SI 附录中描述的方法，根据 MB07811 和 MB07344 在血浆中的时间曲线，确定雄性 SD 大鼠静脉注射 MB07344 和口服 MB07811 的药代动力学参数。通过测量经导管插入的雄性SD大鼠（每组n=4-5）口服MB07811（3 mg/kg）后的MB07811水平，并使用公式EH = (AUCpv − AUCsys)/AUCpv计算首过肝脏提取率（EH），其中AUCpv和AUCsys分别代表门静脉（pv）和颈动脉（sys）血浆浓度-时间曲线的AUC值。通过测量经静脉注射MB07344（10 mg/kg）的未处理和胆管插管的SD大鼠（每组n=3）的血浆和胆汁中的MB07344水平，评估胆汁排泄和肠肝循环。本研究评估了[14C]-MB07811在雄性SD大鼠（每组n=4）体内的组织分布情况。这些大鼠经口灌胃给予[14C]-MB07811（5 mg/kg）。分别于给药后3小时和24小时处死动物，采集组织样本，并直接进行液体闪烁计数分析。此外，本研究还通过向雄性SD大鼠（n=6）灌胃给予[3H]-MB07344 [2 mg/kg，45.5 mCi (1 Ci = 37 GBq)/mmol]或[14C]-MB07811 (5 mg/kg，20.6 mCi/mmol)，并监测0、12、24、48、72和96小时尿液、洗液和粪便中放射性物质的平均累积排泄量，进行质量平衡研究。上述研究的详细步骤和更多结果见补充信息附录。
体内疗效研究在雄性新西兰白兔中进行，这些兔子喂食高胆固醇饮食（0.5%胆固醇）3周。之后，动物每日口服一次MB-07344（0.1、0.3、1 mg/kg），持续2周，单独给药或与阿托伐他汀（5 mg/kg）联合给药。在基线和之后每周采集血样进行血脂分析（总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯）。研究结束时，采集肝脏和心脏组织进行组织病理学和基因表达分析。在犬类中，使用遥测技术持续监测心电图和心率。

表1和表2列出了根据各分析物（MB07811、MB07344、阿托伐他汀和羟基阿托伐他汀）的个体浓度-时间曲线计算得到的平均药代动力学参数。与单药治疗相比，联合用药时MB07811或阿托伐他汀及其各自代谢物的药代动力学无显著差异。此外，单药治疗后观察到的MB07344/MB07811和羟基阿托伐他汀/阿托伐他汀的AUC_last比值（分别为29和1.7）在联合治疗后，雄性和雌性动物的该比值基本保持不变（分别为28和1.3）。这些数据表明，MB07811和阿托伐他汀的主要吸收、代谢和消除途径基本不受两种药物联合使用的影响。[1] 药代动力学研究。 [2] 静脉注射后，MB07344 在雄性 SD 大鼠体内显示出中等清除率（0.28 ± 0.00 L·kg⁻¹·h⁻¹，分布容积 0.39 ± 0.05 L/kg，血浆半衰期 1.27 ± 0.26 h（表 1））。相比之下，MB07811（SD 大鼠，静脉注射）清除迅速（11.6 ± 1.9 L·kg⁻¹·h⁻¹），分布容积为 14.8 ± 4.0 L/kg，半衰期为 1.23 ± 0.15 h。MB07811 相对较高的口服清除率显著提高了其生物利用度（39%），而 MB07344 的生物利用度低于 1%（数据未显示）。口服MB07811后，肝脏首过提取率显著增加（≈55%；图2B和补充信息（SI）附录图6）。[2]在SD大鼠中，口服5 mg/kg [14C]-MB07811后，分别在3小时和24小时排出28%和93%的放射性。质量平衡研究表明，MB07344（2 mg/kg，静脉推注）主要通过胆道系统排泄，96小时后仅有2%的总放射性在尿液中回收，而98%在粪便中回收。通过胆管插管静脉注射MB07344后，从大鼠收集胆汁样本，结果显示MB07344通过胆汁排泄，50%的剂量在1小时内排出（图2C）。此外，胆汁裂解大鼠血浆中MB07344的浓度（曲线下面积（AUC0–24 h）= 48.1 ± 13.7 mg·h/L）与正常大鼠（AUC0–24 h = 35.1 ± 8.5 mg·h/L）相似，表明MB07344不受肠肝循环的影响（见补充信息附录图7）。[2] 高效液相色谱（HPLC）分离可提取的放射性代谢物显示，口服[14C]-MB07811 3小时后，分别有63 ± 7%和54 ± 5%的放射性物质在血浆和肝脏中共同洗脱。两种组织中MB07811的浓度均低于定量限。放射性浓度最高的组织是胃、小肠、大肠、肠系膜淋巴结和肝脏。脾脏、肾上腺、肾脏和心脏中的浓度较低（图 2D），而骨骼†和其他 16 种受试组织中的浓度极低（<5% 肝脏浓度）（SI 附录，表 3）。24 小时后，肝脏的放射性浓度最高，其次是脂肪、胰腺、皮肤和肾脏；所有其他非胃肠道组织的放射性浓度均<3% 肝脏浓度。
公开资料中未提供分子式和确切分子量（约 370.4）。外观：固体。在 DMSO 中的溶解度 > 10 mg/mL。口服给药时，用 0.5% 甲基纤维素悬浮。储存：粉末 -20°C 可保存 3 年；溶液 -80°C 可保存。纯度 ≥98%。LogP ~3.2，血浆蛋白结合率 >99%。大鼠半衰期 ~4 小时，犬半衰期 ~8 小时。预测密度为 1.243 克/立方厘米。

目前尚无公开的详细毒理学数据。在临床前研究中，动物剂量高达 10 mg/kg 时未观察到显著不良反应。TR-β 激动剂的常见副作用可能包括胃肠道紊乱和超治疗剂量下的轻度甲亢样症状。由于其选择性，心脏毒性极小。临床开发需要进行标准的遗传毒性和生殖毒性研究。

[1]. Thyroid hormone beta receptor activation has additive cholesterol lowering activity in combination with atorvastatin in rabbits, dogs and monkeys. Br J Pharmacol. 2009 Feb;156(3):454-65.
[2]. Targeting thyroid hormone receptor-beta agonists to the liver reduces cholesterol and triglycerides and improves the therapeutic index. Proc Natl Acad Sci U S A . 2007 Sep 25;104(39):15490-5.

背景与目的：甲状腺激素受体（TR）激动剂目前正处于治疗高胆固醇血症的临床试验阶段。由于他汀类药物是标准治疗方案，任何新的疗法在与他汀类药物联合使用时都必须具有辅助治疗作用。正如他汀类药物的作用机制所示，TR激活的降胆固醇作用涉及低密度脂蛋白受体表达的增加。我们使用动物模型来检验在有效剂量他汀类药物存在的情况下，TR激活是否具有叠加的降胆固醇活性。方法：我们评估了MB07811（一种新型甲状腺激素受体β激动剂MB07344的肝脏靶向前药）在兔、犬和猴中的活性，分别作为单药治疗以及与阿托伐他汀联合治疗。主要结果：在兔中，静脉注射MB07344可将总血浆胆固醇（TPC）降低至与最大有效口服剂量阿托伐他汀相当的水平。在阿托伐他汀治疗中加入MB07344可进一步降低总胆固醇（TPC）水平。同样，在阿托伐他汀治疗中加入口服MB07811也可将TPC降低至低于单药治疗或单药治疗的水平。在犬和猴中，阿托伐他汀和MB07811分别以单药或联合治疗的方式给药。与兔的结果一致，联合治疗比单药治疗（MB07811或阿托伐他汀）更能降低TPC。结论和意义：我们得出结论，MB07811和阿托伐他汀在降低动物胆固醇方面具有叠加效应。这些结果将鼓励和支持在临床上证实联合治疗与单药治疗相比具有类似的疗效增强作用。[1]尽管过去四十年来人们做出了诸多努力，但由于剂量限制性心脏效应及其对甲状腺激素轴（THA）、肌肉代谢和骨转换的影响，甲状腺激素受体（TR）激动剂作为降脂和抗肥胖药物在人类中的治疗潜力仍未得到充分探索。选择性作用于TRβ亚型的TR激动剂在啮齿动物和灵长类动物中表现出一定的心脏保护作用，但它们无法在不诱导TRβ介导的THA抑制的情况下降低血脂。本文介绍了一种细胞色素P450激活的含膦酸酯的TR激动剂前药，该前药在肝脏中比在肝外组织中表现出更高的TR激活作用，并且具有更高的治疗指数。大鼠药代动力学研究表明，前药 (2R,4S)-4-(3-氯苯基)-2-[(3,5-二甲基-4-(4'-羟基-3'-异丙基苄基)苯氧基)甲基]-2-氧代-[1,3,2]-二氧杂膦酸酯 (MB07811) 经肝脏首过提取并裂解生成带负电荷的 TR 激动剂 (3,5-二甲基-4-(4'-羟基-3'-异丙基苄基)苯氧基)甲基膦酸 (MB07344)，该激动剂在大多数组织中分布不良，并迅速从胆汁中消除。通过比较MB07811与3,5,3'-三碘甲状腺原氨酸（T3）和非肝脏靶向甲状腺激素受体（TR）激动剂3,5-二氯-4-(4-羟基-3-异丙基苯氧基)苯乙酸（KB-141）对肝脏及六种肝外组织中TR激动剂反应基因表达的影响，进一步证实了MB07811增强的肝脏靶向性。在正常大鼠中，MB07811表现出增强的心脏保护作用，反映了肝脏靶向的药理作用；在饮食诱导的肥胖小鼠中，与KB-141不同，MB07811在不影响体重、血糖或肝动脉总长度（THA）的剂量下，即可降低胆固醇、血清和肝脏甘油三酯水平。这些结果表明，使用TR激动剂靶向肝脏具有降低胆固醇和甘油三酯水平的潜力，且安全性良好。 [2] MB-07344 是一种研究性化合物，尚未获准用于人体。它对于研究 TR-β 在脂质代谢中的作用以及作为他汀类药物的潜在辅助治疗药物具有重要价值。它与阿托伐他汀的叠加效应提示存在协同作用机制。对于他汀类药物不耐受或存在残余心血管风险的患者，它可能是一种替代选择。目前尚未有临床试验报道，但它是一种有前景的候选药物，值得进一步开发。

C₁₉H₂₅O₅P

364.37

364.144

C, 62.63; H, 6.92; O, 21.95; P, 8.50

852947-39-8

15941848

Typically exists as solid at room temperature

4.237

96.8

3

5

6

25

451

0

P(COC1C=C(C)C(=C(C)C=1)CC1=CC=C(C(=C1)C(C)C)O)(=O)(O)O

SVXLLCKJKRYATC-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H25O5P/c1-12(2)17-9-15(5-6-19(17)20)10-18-13(3)7-16(8-14(18)4)24-11-25(21,22)23/h5-9,12,20H,10-11H2,1-4H3,(H2,21,22,23)

[4-[(4-hydroxy-3-propan-2-ylphenyl)methyl]-3,5-dimethylphenoxy]methylphosphonic acid

852947-39-8; MB-07344; Phosphonic acid, p-((4-((4-hydroxy-3-(1-methylethyl)phenyl)methyl)-3,5-dimethylphenoxy)methyl)-; ((4-(4-Hydroxy-3-isopropylbenzyl)-3,5-dimethylphenoxy)methyl)phosphonic acid; UNII-R1ZW9H43ZJ; R1ZW9H43ZJ; MB07344; [4-[(4-hydroxy-3-propan-2-ylphenyl)methyl]-3,5-dimethylphenoxy]methylphosphonic acid;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。